ב Vivo העברת גנים לתאי אפיתל חלב עכבר באמצעות הזרקה intraductal חלב

שיטה זו מעבירה את החומר הגנטי לתאי האפיתל של בלוטת החלב באופן מיוחד, זמני וניתן לשליטה כמותית. מכיוון שהעברת החומר הגנטי לתאי אפיתל החלב היא מיוחדת, מבוקרת באופן זמני וכמותי, מודלים של חלב שנוצרו בשיטה זו מחקים טוב יותר את היווצרות הגידול הטבעי. התחל בהכנת מזרקים על ידי חיתוך מחטי רכזת מתכת 33 מד לאורך של כסנטימטר אחד ואחסונם באלכוהול.

הסר מזרקים ומחטים מהאלכוהול ודחף את שארית האלכוהול מתוך המזרק והמחטים. לאחר מכן לפרק את המזרק לייבוש אוויר. לאחר הייבוש, להרכיב את המזרק.

הוציאו את צינורות הציר הנגיפיים מהמקפיא של מינוס 80 מעלות צלזיוס והפשירו אותם על קרח. כדי להוסיף ברומופנול כחול, טבלו את קצה פיפטה לעומק של סנטימטר אחד באבקת ברומופנול כחולה. לאחר מכן הביאו את כמות העקבות המצורפת של ברומופנול כחול לתרחיף הנגיף.

מערבבים את הברומופנול הכחול עם תמיסת הנגיף על ידי פיפטינג למעלה ולמטה 10 פעמים, לפני הנחת הנגיף על קרח. בדוק את עומק ההרדמה על ידי צביטת הבוהן של עכבר נקבה מורדמת. החל משחה על העיניים כדי למנוע יובש בזמן החיה תחת הרדמה.

הניחו את העכבר במצב שכיבה על כרית חמה וחברו את כל ארבעת הגפיים לספסל באמצעות סרט הדבקה. זהו את הפטמה שיש להזריק וחשפו אותה על ידי גזיזת השיער שמסביב באמצעות מספריים. יש למרוח 70% אלכוהול וארבעה מטושים בשלושה סבבים לסירוגין על אזור הפטמה כדי לנקות ולחשוף את הפטמה.

חצו את הקצה הדיסטלי של פטמה באמצעות זוג מספריים קפיציים מעוקרים מיקרו דיסקציה, עד שניתן לראות פתח צינור מרכזי קטן מתחת למנורת זכוכית מגדלת. לאחר מכן לטעון 10 מיקרוליטר של תערובת כחול ברומופנול וירוס לתוך מזרק בזהירות להכניס את המחט לתוך פתח הפטמה בעזרת מנורת זכוכית מגדלת. הזריקו את כל 10 המיקרוליטרים של הנגיף לעץ הצינור והניחו את העכבר על מגלשה חמה יותר שנקבעה בטמפרטורה של 45 מעלות צלזיוס עד שהעכבר יתעורר לחלוטין.

פתח את חלל בית החזה שלושה עד חמישה ימים לאחר הזרקת הנגיף. חותכים את העור לאורך קו האמצע הגחוני ואת הגפיים העליונות והתחתונות באמצעות מספריים. להרים את העור ולחשוף את בלוטות החלב.

הסר את בלוטת החלב המוזרקת מהעור ובלוטה unnjected כבקרה באמצעות מלקחיים ומספריים. לאחר שתסיים, הניחו את בלוטת החלב על מגלשת זכוכית ופרשו את הבלוטה לצורתה המקורית לפני התבוננות והדמיה תחת מיקרוסקופ סטריאו פלואורסצנטי. ההצלחה של הזרקה intraductal אושרה על ידי חשיפת בלוטת החלב והתבוננות עץ ductal כחול.

לאחר יומיים עד חמישה ימים של הזרקת וירוס lenti-EGFPFUCGW, זיהום תאי אפיתל החלב הוערך על ידי התבוננות בהכנת הר שלם תחת מיקרוסקופ סטריאו פלואורסצנטי. לצורך ניתוח ציטומטריית זרימה של החלבונים הפלואורסצנטיים או סמני פני התא המיוצרים על ידי הנגיף, הבלוטות הלא נגועות והבלוטות הנגועות נאספו ועובדו לתרחיף תא יחיד כדי להעריך את קצב הזיהום הנגיפי. ERBBB2 פעיל הוביל לנגעים טרום סרטניים תוך מספר שבועות ולגידולים תוך מספר חודשים.

גודל הפטמות יכול להשתנות באופן משמעותי בשל ההבדלים במסה, גיל, משקל גוף וכוח בקרב עכברים בודדים. חיתוך נכון של קצה הפטמה כדי לחשוף את פתיחת צינור החלב ואת התאמת המחט הוא צעד חשוב להזרקה מוצלחת של הנגיף.