Name: שיטות לחקר תרומות הרחם לביסוס הריון במודל עכבר לכריתת שחלות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-04-07T12:50:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: חקור את תרומת הרחם לביסוס הריון במודל עכבר לכריתת שחלות. שיטות אלה מאפשרות לחוקרים חדשים לחקור את מערכת ההורמונים והרגולציה של ציר HPG בביולוגיה רפרודוקטיבית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו התאפשרה באמצעות תמיכת התשתיות התפעוליות של ממשלת מדינת ויקטוריה והמועצה הלאומית לבריאות ומחקר רפואי של ממשלת אוסטרליה (NHMRC) IRIISS. עבודה זו נתמכה על ידי הפקולטה לרפואה, סיעוד ומדעי הבריאות באוניברסיטת מונאש מענק גישה ל- A.L.W. (Winship-PAG18-0343) כדי לגשת לפלטפורמת שירותי הרבייה של מונאש. א.ל.ו. נתמכת על ידי DECRA מימון DE21010037 ממועצת המחקר האוסטרלית (ARC). J.N.H. ו- L.R.A. נתמכים על ידי מלגת תוכנית הכשרת המחקר של ממשלת אוסטרליה. L.R.A. נתמכת על ידי מלגת הצטיינות בוגרי מונש. K.J.H. נתמך על ידי ARC Future Fellowship FT190100265.

<ol><li>Szamatowicz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assisted+reproductive+technology+in+reproductive+medicine+-+Possibilities+and+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22Ginekologia+Polska%22%5BJournal%5D)">Assisted reproductive technology in reproductive medicine - Possibilities and limitations.</a> Ginekologia Polska. 87 (12), 820-823 (2016).</li>
<li>Evans, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fertile+ground%3A+Human+endometrial+programming+and+lessons+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Fertile ground: Human endometrial programming and lessons in health and disease.</a> Nature Reviews. Endocrinology. 12 (11), 654-667 (2016).</li>
<li>Norwitz, E. R., Schust, D. J., Fisher, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implantation+and+the+survival+of+early+pregnancy%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Implantation and the survival of early pregnancy.</a> The New England Journal of Medicine. 345 (19), 1400-1408 (2001).</li>
<li>Zinaman, M. J., Clegg, E. D., Brown, C. C., O'Connor, J., Selevan, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimates+of+human+fertility+and+pregnancy+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Fertility+%26+Sterility%22%5BJournal%5D)">Estimates of human fertility and pregnancy loss.</a> Fertility & Sterility. 65 (3), 503-509 (1996).</li>
<li>Kupka, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assisted+reproductive+technology+in+Europe%2C+2010%3A+Results+generated+from+European+registers+by+ESHRE%E2%80%A0%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Assisted reproductive technology in Europe, 2010: Results generated from European registers by ESHRE†.</a> Human Reproduction. 29 (10), 2099-2113 (2014).</li>
<li>Gleicher, N., Kushnir, V. A., Barad, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Worldwide+decline+of+IVF+birth+rates+and+its+probable+causes%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction+Open%22%5BJournal%5D)">Worldwide decline of IVF birth rates and its probable causes.</a> Human Reproduction Open. 2019 (3), (2019).</li>
<li>Diaz-Gimeno, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genomic+diagnostic+tool+for+human+endometrial+receptivity+based+on+the+transcriptomic+signature%5BTitle%5D)+AND+%22Fertility+%26+Sterility%22%5BJournal%5D)">A genomic diagnostic tool for human endometrial receptivity based on the transcriptomic signature.</a> Fertility & Sterility. 95 (1), 50-60 (2011).</li>
<li>Amin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Personalized+embryo+transfer+outcomes+in+recurrent+implantation+failure+patients+following+endometrial+receptivity+array+with+pre-implantation+genetic+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Cureus%22%5BJournal%5D)">Personalized embryo transfer outcomes in recurrent implantation failure patients following endometrial receptivity array with pre-implantation genetic testing.</a> Cureus. 14 (6), e26248(2022).</li>
<li>Patel, J. A., Patel, A. J., Banker, J. M., Shah, S. I., Banker, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Personalized+embryo+transfer+helps+in+improving+in+vitro+fertilization%2FICSI+outcomes+in+patients+with+recurrent+implantation+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Human+Reproductive+Sciences%22%5BJournal%5D)">Personalized embryo transfer helps in improving in vitro fertilization/ICSI outcomes in patients with recurrent implantation failure.</a> Journal of Human Reproductive Sciences. 12 (1), 59-66 (2019).</li>
<li>Khan, K. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+differences+between+functionalis+and+basalis+endometria+in+women+with+and+without+adenomyosis%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Obstetrics%2C+Gynecology%2C+and+Reproductive+Biology%22%5BJournal%5D)">Biological differences between functionalis and basalis endometria in women with and without adenomyosis.</a> European Journal of Obstetrics, Gynecology, and Reproductive Biology. 203, 49-55 (2016).</li>
<li>Richards, J. S., Ren, Y. A., Candelaria, N., Adams, J. E., Rajkovic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+follicular+theca+cell+recruitment%2C+differentiation%2C+and+impact+on+fertility%3A+2017+update%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrine+Reviews%22%5BJournal%5D)">Ovarian follicular theca cell recruitment, differentiation, and impact on fertility: 2017 update.</a> Endocrine Reviews. 39 (1), 1-20 (2018).</li>
<li>Corciulo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulsed+administration+for+physiological+estrogen+replacement+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22F1000Research%22%5BJournal%5D)">Pulsed administration for physiological estrogen replacement in mice.</a> F1000Research. 10, 809(2021).</li>
<li>Greaves, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+mouse+model+of+endometriosis+mimics+human+phenotype+and+reveals+insights+into+the+inflammatory+contribution+of+shed+endometrium%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">A novel mouse model of endometriosis mimics human phenotype and reveals insights into the inflammatory contribution of shed endometrium.</a> The American Journal of Pathology. 184 (7), 1930-1939 (2014).</li>
<li>Griffiths, M. J., Alesi, L. R., Winship, A. L., Hutt, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+embryo+transfer+model+to+study+uterine+contributions+to+pregnancy+in+vivo+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction+%26+Fertility%22%5BJournal%5D)">Development of an embryo transfer model to study uterine contributions to pregnancy in vivo in mice.</a> Reproduction & Fertility. 3 (1), 10-18 (2022).</li>
<li>Cousins, F. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+from+a+mouse+model+that+epithelial+cell+migration+and+mesenchymal-epithelial+transition+contribute+to+rapid+restoration+of+uterine+tissue+integrity+during+menstruation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Evidence from a mouse model that epithelial cell migration and mesenchymal-epithelial transition contribute to rapid restoration of uterine tissue integrity during menstruation.</a> PLoS One. 9 (1), e86378(2014).</li>
<li>Cousins, F. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Androgens+regulate+scarless+repair+of+the+endometrial+%26%2334%3Bwound%26%2334%3B+in+a+mouse+model+of+menstruation%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Androgens regulate scarless repair of the endometrial &#34;wound&#34; in a mouse model of menstruation.</a> FASEB Journal. 30 (8), 2802-2811 (2016).</li>
<li>Fullerton, P. T., Monsivais, D., Kommagani, R., Matzuk, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Follistatin+is+critical+for+mouse+uterine+receptivity+and+decidualization%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Follistatin is critical for mouse uterine receptivity and decidualization.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (24), E4772-E4781 (2017).</li>
<li>Rowland, R. R., Reyes, E., Chukwuocha, R., Tokuda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corticosteroid+and+immune+responses+of+mice+following+mini-osmotic+pump+implantation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunopharmacology%22%5BJournal%5D)">Corticosteroid and immune responses of mice following mini-osmotic pump implantation.</a> Immunopharmacology. 20 (3), 187-190 (1990).</li>
<li>Barton, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+steroid+hormones+in+oviductal+function%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction%22%5BJournal%5D)">Roles of steroid hormones in oviductal function.</a> Reproduction. 159 (3), R125-R137 (2020).</li>
<li>Lee, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+regulates+embryonic+survival+during+delayed+implantation%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Autophagy regulates embryonic survival during delayed implantation.</a> Endocrinology. 152 (5), 2067-2075 (2011).</li>
<li>Hamatani, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+gene+expression+analysis+identifies+molecular+pathways+distinguishing+blastocyst+dormancy+and+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Global gene expression analysis identifies molecular pathways distinguishing blastocyst dormancy and activation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 101 (28), 10326-10331 (2004).</li>
<li>Cui, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcervical+embryo+transfer+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Association+for+Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Transcervical embryo transfer in mice.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 53 (3), 228-231 (2014).</li>
</ol>

המחברים מצהירים כי אין אינטרסים כלכליים או אחרים מתחרים.

מאמר זה מספק הוראות שלב אחר שלב כיצד לבצע OVX ולספק הורמונים אקסוגניים למחקרים המתמקדים בהבנת תרומת הרחם להריון ולפוריות. שני פרוטוקולים מפורטים מסופקים על שני יישומים ניסיוניים של שיטות אלה, כולל ביצוע החזרת עוברים וגרימת דצידואליזציה באופן מלאכותי.
בעוד שביצוע OVX יכול להיות מאתגר בהתחלה - במיוחד עבור חוקרים חדשים למודלים של מכרסמים - זהו הליך פשוט יחסית לאחר שאומן ותורגל כראוי. השלבים העיקריים בהליכים כוללים מעקב צמוד אחר בעלי החיים בזמן שהם תחת הרדמה ולוודא שלא נותרה רקמת שחלה מאחור. בדגמי...

עם השימוש הגובר בטכנולוגיות רבייה בסיוע בעשורים האחרונים, התגברו על מחסומים רבים להתעברות, המאפשרים לזוגות רבים להקים משפחות למרות בעיות פוריות1. לעתים קרובות ניתן לעקוף ביציות או גירעונות זרע באמצעות הפריה חוץ גופית או הזרקת זרע intracytoplasmic; עם זאת, נושאים הקשורים לרחם וקליטת רירית הרחם נותרו "קופסה שחורה" חמקמקה של פוטנציאל רבייה2.
הריון נוצר כאשר עובר באיכות גבוהה בהצלחה אינטראקציה עם אנדומטריום פתוח (רירית הרחם). הסיכויים להריון מוצלח בכל מחזור חודשי נתון נמוכים, בסביבות 30%3,4. מבין אלה שמצליחים, רק 50%-60% מתקדמים מעבר לשבוע 20 להריון, כאשר כישלון ההשתלה אחראי ל-75% מההריונות שאינם מגיעים לשבוע 203. למרות נתונים אלה מסוף שנות התשעים, התחום עדיין לא התגבר על המגבלות הנגרמות על ידי רירית הרחם שאינה קולטת כראוי. זה הביא לקיפאון - ולפעמים לירידה - בשיעורי ההצלחה של הפריה חוץ גופית בשנים האחרונות 5,6.
לנשים עם אי פוריות בלתי מוסברת יש לעתים קרובות חלון פתוח שנעקר או שאינן מסוגלות להשיג פתיחות מסיבות לא ידועות. לאחרונה פותח מערך קליטת רירית הרחם, המעריך ביטוי של מאות גנים במטרה להתאים את עיתוי החזרת העוברים לחלון הקבלה של הפרט 7,8,9. עם זאת, בתחום עדיין חסרה הבנה של הפתוגנזה של סיבוכי הריון הבאים לידי ביטוי לאחר השלמת תהליך ההשתלה.
מערכת הרבייה הנשית דינמית מאוד ונמצאת תחת בקרה הורמונלית הדוקה. ציר ההיפותלמוס-יותרת המוח-גונדל (HPG) שולט בשחרור הורמון מחלמן והורמון מגרה זקיקים, המווסתים היבטים של מחזור השחלות, כולל הבשלת זקיקים ופעילות אסטרוגן ופרוגסטרון. בתורו, מחזור הווסת הרחם מוסדר על ידי אסטרוגנים ופרוגסטרון10,11. לפיכך, חקר מנגנונים ביולוגיים של הרחם מסובך על ידי השפעה השחלות. לדוגמה, כאשר חוקרים כיצד טיפולים בסרטן עשויים להשפיע על הרחם, זה יכול להיות קשה להבחין אם כל פנוטיפ הרחם שנצפה (כגון אובדן הריון או acyclicity הווסת) הוא תוצאה של עלבון ישיר לרחם או תוצאה של נזק לשחלות.
כדי להבין באופן מקיף את הפוריות, יש לאפיין את תרומת הרחם להריון. חשוב לציין, הבנה זו חייבת להתרחב מעבר לתפקוד הרחם תחת שליטה שחלתית. לא ניתן לחקור זאת בבני אדם; לכן, מודלים של בעלי חיים משמשים לעתים קרובות. ככזה, כריתת שחלות (OVX) משמשת בדרך כלל כדי לאפשר לחוקרים לווסת את מחזורי הייחום של מכרסמים (בדומה למחזור החודשי) על ידי אספקת הורמונים באופן אקסוגני. בנוסף, OVX מאפשר לחקור את תגובות הרחם ללא תלות בהשפעה השחלתית12. עם זאת, אם הורמונים אינם מסופקים באופן מיידי לאחר OVX, פנוטיפ גיל המעבר יהיה בסופו של דבר, אשר צריך להישקל בזהירות על ידי החוקרים.
OVX משמש לעתים קרובות בדגמי מכרסמים 13,14,15,16,17 וקל יחסית לבצע אותו לאחר אימון מתאים. השיטות משתנות בהתאם להסרת השחלה לבדה או השחלה והאובידוקט, כמו גם בהתאם לגיל החיה (לבעלי חיים בוגרים, רוכבי אופניים יש שחלות גדולות יותר עם קורפוס לוטאום גלוי על פני השטח שלהם, כלומר השחלות שלהם קל יותר לדמיין). באופן דומה, קיימות שיטות רבות לתוספי הורמונים, כולל זריקות תת עוריות14, כדורים בשחרור איטי 15, משאבות מיני אוסמוטיות18 והשתלת שחלות.
במאמר זה, הוראות מפורטות ניתנות כיצד לבצע כריתת שחלות ולהכין שלושה סוגים של תוספי הורמונים, כולל זריקות תת עוריות, כדורים בשחרור איטי, משאבות מיני אוסמוטיות. שני פרוטוקולים מפורטים מסופקים עבור נקודות קצה ניסיוניות הנהנות מ- OVX ואחריו תוספת הורמונים אקסוגנית (החזרת עוברים ודצידואליזציה מלאכותית). מאמר זה דן בחוזקות ובחולשות של כל גישה במטרה להנחות חוקרים כיצד לבצע מחקרים לבידוד ההשפעות על הרחם, במיוחד בתחומי המחקר הריון ופוריות.

<table><tbody><tr><td>ALZET 1002 מיני משאבות אוסמוטיות</td><td>BioScientific</td><td>1002</td><td>מספק 0.25 ומיקרו; ליטר לשעה למשך 14 ימים. השתמש בסעיף 7 (הליך ניסיוני - העברת עוברים).</td></tr><tr><td>ALZET 1003D מיני משאבות אוסמוטיות BioScientific</td><td></td><td>1003D</td><td>מספק 1 ומיקרו; ליטר לשעה למשך 14 ימים. השתמש בסעיף 8 (נוהל ניסוי - דצידואליזציה מלאכותית).</td></tr><tr><td>קליפס ALZET רפלקס 7 מ"מ</td><td>BioScientific</td><td>0009971</td><td>ניתן להשתמש בקליפס רפלקס או בקליפס מישל לסגירת פצעים, בהתאם להעדפה</td></tr><tr><td>מוליך קליפ רפלקס ALZET</td><td>BioScientific</td><td>0009974</td><td>ניתן להשתמש בקליפס רפלקס או בקליפס מישל לסגירת פצעים, בהתאם להעדפה</td></tr><tr><td>מסיר קליפ רפלקס ALZET</td><td>BioScientific</td><td>0009976</td><td>ניתן להשתמש בקליפס רפלקס או בקליפס מישל לסגירת פצעים, בהתאם להעדפה</td></tr><tr><td>הזרקת Bupivicaine</td><td>Pfizer</td><td>NA</td><td>Stock 0.5%. יש להשתמש ב-0.05% במי מלח</td></tr><tr><td>אסטרדיול</td><td>סיגמא</td><td>E8875</td><td></td></tr><tr><td>מלוקסיקם</td><td>איליום</td><td>NA</td><td>מרכיב פעיל 0.5 מ"ג/מ"ל. השתמש ב-3.5 מ"ל לכל בקבוק מים בכלוב של 400 מ"ל, או כפי שהווטרינר של המוסד שלך רושם.</td></tr><tr><td>מישל קליפס</td><td>דניאלס</td><td>NS-000242</td><td></td></tr><tr><td>איטום רב תכליתי</td><td>Dow Corning</td><td>732</td><td></td></tr><tr><td>מכשיר העברת עוברים לא כירורגי (NSET)</td><td>ParaTechs</td><td>60010</td><td>מכיל ספקולום 6 מ"מ. לשימוש חד פעמי בלבד.</td></tr><tr><td>פרוגסטרון</td><td>סיגמא</td><td>P0130</td><td>מסיס באתנול. השתמש עבור&nbsp; סעיף 3 (הכנת הורמונים - הזרקה תת עורית) ו&nbsp; סעיף 4 (הכנת הורמונים - כדורים בשחרור איטי)</td></tr><tr><td>פרוגסטרון</td><td>סיגמא</td><td>P7556</td><td>מסיס במים. לשימוש בסעיף 5 (הכנת הורמונים - מיני משאבות אוסמוטיות)משחת</td></tr> <tr><td>עיניים מרעננת</td><td>אלרגן</td><td>NA</td><td>42.5% משקל/נפח פרפין נוזלי, 57.3% משקל/נפח פרפין לבן רך,</td></tr><tr><td>רימדיל קרפרופן</td>, <td>Zoetis</td><td>NA</td><td>מלאי 50 מ"ג/מ"ל. השתמש ב-1 מ"ג/מ"ל (במינון של 5 מ"ג/ק"ג)</td></tr> <tr><td>צינורות גומי</td><td>Dow Corning</td><td>508-008</td><td>נשטף ב-100% אתנול וחתוך לחתיכות של 1 ס"מ. קוטר פנימי 1.57 מ"מ & &nbsp; 0.23 מ"מ; קוטר חיצוני 3.18 מ"מ &Plusmn; 0.23 מ"מ; קיר 0.81 מ"מ.</td></tr><tr><td>שמן שומשום</td><td>Sigma</td><td>S3547</td><td></td></tr><tr><td>תפרי משי Sofsilk גודל 3-0</td><td>Covidien</td><td>GS-832</td><td></td></tr></tbody></table>

שיטות לחקר תרומות הרחם לביסוס הריון במודל עכבר לכריתת שחלות

Methods for Studying Uterine Contributions to Pregnancy Establishment in an Ovariectomized Mouse Model

כדי לבסס הריון, בלסטוציסט בר קיימא חייב לקיים אינטראקציה מוצלחת עם רירית הרחם (רירית הרחם) כדי להקל על ההשתלה והיווצרות השליה ולאפשר הריון מתמשך. המגבלות להצלחת הריון הנגרמות על ידי מומים עובריים ידועות היטב והתגברו במידה רבה בעשורים האחרונים עם עליית הפריה חוץ גופית (IVF) וטכנולוגיות רבייה מסייעות. עם זאת, עד כה, התחום לא התגבר על המגבלות הנגרמות על ידי אנדומטריום שאינו פתוח כראוי, ובכך הביא לקיפאון בשיעורי ההצלחה של הפריה חוץ גופית. תפקודי השחלות ורירית הרחם שלובים זה בזה באופן הדוק, שכן הורמונים המיוצרים על ידי השחלה אחראים למחזוריות הווסת של רירית הרחם. לכן, בעת שימוש במודלים מכרסמים של הריון, זה יכול להיות קשה לקבוע אם תוצאה שנצפתה נובעת מגירעון בשחלות או ברחם. כדי להתגבר על כך, פותח מודל עכבר שחלתי עם החזרת עוברים או דצידואליזציה מלאכותית כדי לאפשר מחקר של תרומות ספציפיות לרחם להריון. מאמר זה יספק הוראות כיצד לבצע כריתת שחלות ויציע תובנות לגבי טכניקות שונות לאספקת הורמונים אקסוגניים לתמיכה בדצידואליזציה מלאכותית מוצלחת או בהריון לאחר החזרת עוברים מתורמים בריאים. טכניקות אלה כוללות הזרקה תת עורית, כדוריות שחרור איטי ומשאבות מיני אוסמוטיות. יידונו היתרונות והחסרונות העיקריים של כל שיטה, המאפשרים לחוקרים לבחור את עיצוב המחקר הטוב ביותר לשאלת המחקר הספציפית שלהם.

מודל מאופיין היטב של דצידואליזציה מלאכותית מתואר במאמר פרוטוקול זה (איור 1A). כאן, נקבות עכברות צעירות (בנות 8 שבועות) עברו כריתת שחלות כירורגית כמתואר בסעיף 1 ובסעיף 2. לאחר מכן העכברות נחו במשך שבועיים כדי להבטיח שהורמוני השחלות האנדוגניים יתפוגגו לפני שנתמכו בהורמונים אקסוגניים כמתואר בסעיפים 3-7 וסעיף 9. דצידואליזציה מלאכותית נגרמה על ידי הזרקה תוך נרתיקית של שמן שומשום, ולאחר מכן החיות נחו עד לאיסוף רקמות, כמתואר בסעיף 9. במחקר זה, דצידואליזציה מלאכותית בוצעה בעכבר...

ביסוס הריון הוא תהליך דינמי הכולל הצלבה מורכבת של עוברים ורחם. התרומות המדויקות של סביבת הרחם האימהית לתהליכים אלה נותרו תחום מחקר פעיל. כאן, פרוטוקולים מפורטים מסופקים כדי לסייע בעיצוב מודלים של בעלי חיים in vivo כדי לענות על שאלות מחקר אלה.

For pregnancy to be established, a viable blastocyst must successfully interact with a receptive uterine lining (endometrium) to facilitate implantation ...

לכן קשה להפריד בין תפקידן של ההשפעות ההורמונליות של הרחם והשחלות על התבססות ההריון מכיוון ששניהם קשורים זה לזה באופן הדוק. אז פרוטוקול זה מאפשר לנו לבחון ישירות את תרומת הרחם. בעוד שחלק מהטכניקות הללו כמו כריתת שחלות הן פולשניות למדי, הן פשוטות יחסית לביצוע לאחר תרגול ואימון, מה שהופך אותן למתאימות לחוקרים חדשים במודלים של עכברים.לכן ניתן להשתמש בשיטה זו כדי להבין את הוויסות הרחב יותר של ציר HPG שכן הן השחלות והן הרחם ממלאים תפקיד חשוב בוויסות ציר זה. אם מעולם לא ביצעת טכניקות אלה בעבר, התייעץ עם הצוות הווטרינרי של המכון שלך לקבלת הדרכה ותמיכה. כדי להתחיל, יש למרוח חומר סיכה לעיניים בנדיבות על עכבר מורדם על ידי טפיחה עדינה על העין לאחר גילוח אזור קטן בשקע מתחת לתחושת עמוד השדרה.להזריק 0.1 מיליליטר של carprofen תת עורית לתוך קשקוש הצוואר. בדוק אם בעל החיים מורדם על ידי צביטת הבוהן האחורית שלו ובדיקת רפלקס. לאחר מכן, להחיל Betadine על אתר הניתוח.לאחר מכן לכסות אותו עם drape כירורגי. בעזרת מלקחיים עם שיני חולדה, משכו את העור בבטן כלפי מעלה, ובצעו חתך אורכי של חמישה מילימטרים. לאחר מכן, באמצעות מלקחיים קהים, נתחו את העור הרחק משכבת השריר שמתחתיה לצד אחד לכיוון הכליה.זהה את כרית השומן בכליות, בשחלות ובשחלות דרך דופן השריר. תפוס והרים את שכבת השריר עם המלקחיים. לאחר מכן, באמצעות מספריים, לבצע חתך באורך 0.5 עד 1 סנטימטר, ולמשוך את כרית השחלה דרך החתך עם זוג מלקחיים קהה.לאחר מכן, באמצעות מחזיק מחט מעוקל, מהדקים מתחת לשחלה ואת oviduct בקצה הדיסטלי של קרן הרחם ואת הבלו עם מספריים. לאחר 30 שניות, להסיר את המהדק לטפוח עם גזה סטרילית. כדי לסגור את החתך בדופן השריר, הרימו את החלק העליון של החתך באמצעות מלקחיים.לאחר מכן קשרו את החתך עם קשר מנתח באמצעות תפרי משי. באופן מקומי להחיל כמה טיפות של bupivacaine באמצעות מזרק של מיליליטר אחד ללא חיבור מחט, ולטפוח את עודף עם גזה סטרילית. לאחר ביצוע דומה של כריתת השחלה בצד השני, סגור את חתך העור על ידי לחיצה על שני צידי העור יחד ומריחת כמה קליפסים כירורגיים של שבעה מילימטר, מה שמשאיר מקום לנפיחות בפצע.הניחו את כל הציוד הדרוש על רדיד אלומיניום בתוך מכסה מנוע למינרי או בטיחות ביולוגית Class II וחיקרו UV למשך 20 דקות. שטפו את הצינורית הסילסטית ב-100% דסינול והניחו לה להתייבש באוויר בתוך מכסה המנוע. לאחר הייבוש, חתכו את הצינור למקטעים באורך סנטימטר אחד באמצעות אזמל.לאחר מכן, לסחוט כ 200 מיקרוליטר של חומר איטום לתוך מזרק ללא בוכנה. החליפו את הבוכנה ודחפו החוצה כמות קטנה של חומר איטום. יש למרוח את חומר האיטום על קצה אחד של הצינור, ולהחליק אותו עם אצבע בכפפה.ולאפשר לחומר האיטום להתייבש למשך הלילה או תחת אור UV למשך 30 דקות במכסה המנוע. לאחר מכן, יוצקים אבקת פרוגסטרון לתוך צלחת פטרי מעוקר. גרפו את האבקה לכדוריות בעזרת מלקחיים.יש לטפוח על הקצה האטום של הגלולה במורד משטח מכסה המנוע כדי לעבות את האבקה. לאחר מכן אוטמים את הקצה הפתוח עם חומר האיטום. עטפו את צלחת הפטרי המכילה את הכדוריות בנייר כסף כדי להגן עליהן מפני אור.כ-72 שעות לפני החדרה תת עורית, יש להפעיל את הכדוריות על ידי דגירה שלהן ב-FCS עם פחמים. מי שתדגים הליך זה תהיה ד"ר פיונה קאזינס, מדענית מחקר בתחילת הקריירה ממכון הדסון למחקר רפואי. לאחר מתן זריקות אסטרדיול תת-עוריות לבעלי החיים, יש לתת לבעלי החיים כדורי פרוגסטרון תת-עוריים יומיים לפני ההעשרה.לפני הניתוח, יש להרדים את העכבר ולבדוק את עומק ההרדמה על ידי בדיקת רפלקס צביטת הבוהן. לאחר מכן הניחו את העכבר במצב נוטה, הרימו את זנבו והכניסו לאט ספקולום של שישה מילימטר לנרתיק. מקם את פלג הגוף התחתון של העכבר בין שתי האצבעות הראשונות של היד הלא דומיננטית.לאחר מכן, באמצעות האצבע המורה, דחפו בעדינות את הזנב כלפי מעלה כדי לאפשר נגישות נרתיקית טובה יותר. מעבירים 20 מיקרוליטר שמן שומשום לחוד החזרת עוברים לא ניתוחי, ומחדירים את החוד דרך הנרתיק וצוואר הרחם לקרן הרחם. מוציאים לאט את השמן.לאחר שתסיים, הסר את הספקולום מהנרתיק. במחקר זה, 80% מהעכברים עברו דצידואליזציה מוצלחת, בעוד 20% לא. לכן חשוב לשמור על כל הציוד הכירורגי ואזורי העבודה סטריליים ומטופלים בעת החדרת מכשיר NSAID דרך צוואר הרחם לקרן הרחם של העכבר.לאחר גרימת דצידואליזציה מלאכותית, ניתן להסיר את חיך הפרוגסטרון כדי לחקות את הווסת ולחקור פירוק רירית הרחם. באמצעות שיטה זו, אנו יכולים לחקור ביולוגיה של הרחם וויסות ללא תלות בהשפעת השחלות. זה ממש מרגש בתחום הפוריות ובריאות האישה בכלל.

methods-for-studying-uterine-contributions-to-pregnancy-establishment

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

תיאור אינדוקציה הניתוח של אנדומטריוזיס בעכברים וחולדות על ידי השתלת אוטומטית של רקמת הרחם אל מפל העורקים של mesentery המעי.

עכבר דגם של אנדומטריוזיס בניתוח המושרה על ידי השתלת אוטומטי של רקמות הרחם

בסרטון זה, אנו מתארים הליך כירורגי לקצירת שחלה שלמה ממודל עכבר.

קציר שחלות שלם מעכבר: הליך כירורגי לבידוד שחלה מלאה ממודל מורין

פרוטוקול זה מתאר טכניקה להערכת שינויים בכלי הדם האימהיים במהלך ההריון בעכברים. באמצעות שיטות סטריאולוגיות, שיפוץ העורקים הספירליים העשרוניים מוערך כמותית והתוצאות מאושרות איכותית באמצעות אימונוהיסטוכימיה.

הערכה של כלי דם אימהי שיפוץ במהלך ההריון ברחם העכבר

התכווצויות הרחם חשובים לרווחתם של הנקבות. עם זאת, באופן פתולוגי הגדילה הפתולוגית עלולה לגרום לדיסנוריאה, במיוחד לנשים צעירות. כאן, אנו מתארים הכנה vivo ex פשוטה המאפשרת הערכה מהירה של היעילות של מרפה שרירים חלקה שניתן להשתמש בהם לטיפול בדינוריאה.

שיטה Vivo Ex להערכת בדרכי הרבייה של העכבר לתנועתיות ספונטנית מעקב הרחם MATLAB מבוסס על התנועה אלגוריתם לניתוח נתונים

מודלים מכרסמים רבים של אנדומטריוזיס מוגבלים על ידי מורכבות טכנית, רבייה, ו / או צורך בעלי חיים immunocompromised או עכברי כתב מיוחד. אנו מציגים מערכת פשוטה של אינדוקציה נגע באמצעות כל עכבר ניסיוני עם מערכת ניקוד אובייקטיבית הניתנת לאימות עצמאי וללא דרישה לכריתת שחלות או ניתוח הישרדות.

מודל מורין סינגני של אנדומטריוזיס באמצעות עכברי רכיבה טבעיים

במאמר זה נתאר את השיטה ליצירת מודל דצידואליזציה מלאכותית באמצעות עכבר השחלות, ניסוי נשירת רירית הרחם הקלאסי בתחום המחקר של נשירת רירית הרחם.

יצירת מודל דצידואליזציה מלאכותית של עכבר עם כריתת שחלות למחקר דצידואליזציה של רירית הרחם

שיטת מניפולציית צוואר הרחם המוצגת יכולה לגרום לפסאודו-הריון בעכברים ללא צורך בגידול נקבות עם זכרים שעברו כריתת כלי דם. השראת פסאודו-הריון נדרשת להצלחת החזרת עוברים לא כירורגית והזרעה מלאכותית לא ניתוחית, שניהם מוצגים גם.

גרימת פסאודו-הריון בעכברות נקבות ללא צורך בזכרים שעברו כריתת כלי דם לפני החזרת עוברים לא ניתוחיים או הזרעה מלאכותית

הורמון מגרה זקיק (FSH) ברקמות ואיברים חוץ-גונדליים שונים קשור לפתוגנזה של מחלות מרובות. ניתן להשתמש במודל העכבר שעבר כריתת שחלות וטיפול ב- FSH (OVF) כדי לחקור את הפעולות החוץ-גונדליות של FSH.

חקר השפעות עצמאיות של הורמון מגרה זקיקים in vivo במודל עכבר

מחקר זה מציג מודל עכבר חדש שתוכנן במיוחד כדי לדמות אנדומטריומה, תת-סוג משמעותי קלינית של אנדומטריוזיס. על ידי שימוש בעכברי C57BL/6J, המודל שואף להבהיר את המנגנונים הפתופיזיולוגיים העומדים בבסיס אי פוריות הקשורה לאנדומטריומה, ומציע כלי מעודן לגשר על פער הידע הנוכחי ברפואת הרבייה.

הקמת מודל עכברי ניסיוני של אנדומטריומה כדי לחקור את אי הפוריות הקשורה אליה

מאמר זה מתאר פרוטוקול מפורט לייצור רירית רחם דקה אמינה וניתנת לשחזור עם שיעור תמותה נמוך מאוד והידבקויות תוך רחמיות מינימליות על ידי הזרקת 95% אתנול לרחם העכבר תוך 1-3 דקות.

הקמת מודל עכבר של רירית רחם דקה

פרוטוקול זה מתאר הליך לגרימת פגיעה ברחם במודל עכבר, ואחריו ניתוחים במורד הזרם במהלך הריון עוקב.

מודל עכבר של פגיעה כירורגית ברחם ותוצאות הריון לאחר מכן

חקור את תרומת הרחם לביסוס הריון במודל עכבר לכריתת שחלות. שיטות אלה מאפשרות לחוקרים חדשים לחקור את מערכת ההורמונים והרגולציה של ציר HPG בביולוגיה רפרודוקטיבית.

שיטות לחקר תרומות הרחם לביסוס הריון במודל עכבר לכריתת שחלות

גלה סרטונים נוספים