יישום של מערכת חכמה לבדיקת רגישות מיקרוביאלית בתפוקה גבוהה / בדיקת פאגים ומדד Lar של עמידות מיקרוביאלית

פרוטוקול זה מציג שיטה רב-שכבתית, הן לזיהוי EST והן לדמות הפאגים. היא גם הציגה אינדקס גדול לשמירות כדי להשוות רמות EMR של טכנולוגיית בקרה שונה. טכניקה חסכונית זו היא חכמה, בעלת תפוקה גבוהה ורב-תכליתית.

זה איפשר את הקמתה של VAMS, רשת ניטור וטרינרית שאספה 20, 000 גנים מגיפות ופאגים אנליטיים. שיטה זו יכולה לשמש גם לניטור ובקרה של חיידקים פתוגניים ברפואה, בחקלאות, בסוללת לב בעלי חיים ובדיג. פרוטוקול זה ונייר חברה זה צריכים לספק להיות.

אנחנו עם מדריך הדרכה טכנית. מעקב אחריו יעזור לכל אחד לשלוט בטכניקה בטווח זמן קצר. התחילו בדגירה של אורגניזם בקרת האיכות E.coli ו-93 זני סלמונלה לבדיקה על צלחות אגר מולר-הינטון.

לאחר מכן, לדלל את החיסון מוכן של כל זן 10 פעמים. העבר 200 מיקרוליטר של מלוחים רגילים סטריליים לבאר A-1 של צלחת באר 96 כבקרה שלילית. לאחר מכן פיפטה שני מתלים של E.coli לתוך בארות A-2 ו- A-3 כמו חיובי בקרת איכות בהתאמה.

ל -93 הבארות הנותרות, הוסף 200 מיקרוליטר של זן הבדיקה המדולל. להכנת צלחות אגר מיקרוביאלית. ראשית, הגדר את טווחי הריכוז עבור החומרים האנטיבקטריאליים השונים הנבדקים, בהתאם למדד LAR.

בצע תוכנית דילול הכפלה log-two לתמיסה האנטיביוטית בשיטת דילול אגר סטנדרטית CLSI. כעת הוסיפו שני מיליליטר של התמיסה האנטי-מיקרוביאלית לבקבוק זכוכית מעוקר המכיל 18 מיליליטר של אגר מולר-הינטון מותך. לאחר ערבוב יסודי, יוצקים לצלחות בתוך ארון בטיחות ביולוגי.

מניחים לאגר להתמצק בטמפרטורת החדר. הקפידו להשאיר רווח מתחת למכסה הצלחות כדי לאפשר ייבוש משטח האגר. תייגו את סוגי החומרים האנטי-מיקרוביאליים ואת הריכוזים שלהם בהתאמה בחלק התחתון של הצלחות המודגרות.

סדרו את לוחות הדגירה המרובים עבור כל סוכן אנטי-מיקרוביאלי בערימה המסודרת בסדר דילול כפול. לבסוף, הכינו שתי צלחות אגר ללא תרופות שישמשו כבקרות עבור כל סוכן. התקן צלחת סיכת חיסון מעוקרת על התמיכה של חיסון מטריצת 96 נקודות בתוך ארון בטיחות ביולוגי.

לאחר מכן, סדרו את בלוק הזרעים המוכן עם זנים בדוקים וצלחת דגירה אגר על המוביל הנייד. דחפו את המוביל הסלולרי עד שגוש הזרעים נמצא מתחת לצלחת סיכת החיסון. כעת לחץ על ידית ההפעלה והורד את צלחת סיכת החיסון, כשהוא מכוון את 96 הפינים לכיוון החיסון ב-96 הבארות של גוש הזרעים.

שחררו את ידית ההפעלה בצורה מבוקרת ואפסו אוטומטית את לוחית סיכת החיסון כדי לערבב היטב כל חיסון ולטבול, לדחוף את ידית ההפעלה פעמיים עד שלוש. לאחר מכן, הזיזו ומקמו את צלחת הנשיאה כך שצלחת הדגירה תהיה מתחת לצלחת סיכת החיסון. לחץ על ידית ההפעלה, הורד את לוחית סיכת החיסון ועזוב אותה למשך שנייה עד שתיים כדי להבטיח מגע מלא עם פני השטח של הצלחת המודגרת.

שחרר את ידית ההפעלה כדי להשלים סבב אחד של חיסון. החלף את הצלחת המודגרת וחזור על התהליך עד להשלמת אצווה של צלחות אגר מיקרוביאליות. עברו לצלחת סיכת חיסון חדשה ובלוק זרעים כדי לחסן קבוצה נוספת של זנים שנבדקו.

יש לדגור על צלחות האגר האנטי-מיקרוביאליות המחוסנות בטמפרטורת החדר עד שהלחות מכתמי החיסון נספגת לחלוטין באגר. לאחר הדגירה, להפוך את הלוחות ולהמשיך לדגור כדי לאפשר חיידקים חסרי עכבות ליצור מושבות. כדי לבצע רכישת תמונות וסטטיסטיקות נתונים, התחל בלחיצה על מערכת רכישת התמונות AST של מטריצת 96 נקודות כדי להפעיל את התוכנית.

בשורת המשימות, בחר מידע בדיקה. לחץ על חדש כדי ליצור משימת בדיקה חדשה ולמלא את הפרטים הנדרשים. לאחר מכן לחץ על איסוף נתונים ואחריו תמונה ופריט בדיקה כדי לבחור את המשימה החדשה שנוצרה.

בחר אנטיביוטיקה כדי לבחור את שם האנטיביוטיקה ואת שיפוע כדי לבחור את הריכוז הראשוני של האנטיביוטיקה. לבסוף, לחץ על התחבר כדי ליצור חיבור עם ממיר רכישת התמונות. לאחר מכן, מקם את הלוחות המודגרים על בסיס לוחית הזיהוי והכנס אותם לממיר רכישת התמונות.

לחץ על האוסף כדי לצלם תמונות של הצלחות. לחץ על אנטיביוטיקה ובחר את סט הצלחות הבא. בחרו 'מעבר צבע' כדי לזהות את מעבר הצבע הפותח, ולאחר מכן המשיכו לסבב הבא של אוסף התמונות.

סיים את ההליך על ידי לחיצה על שלח כדי לקבוע את היווצרות המושבה ולהמיר תמונות לריכוזים מעכבים מינימליים, כלומר ערכי MIC. לחץ על שאילתה כדי לגשת לכל תוצאות המיקרופון. התחל על ידי שימוש בשיטת אגר דו שכבתי כדי לייצר פאגים שונים.

מדללים את הפאגים לריכוז מקביל מתאים ומוסיפים 200 מיקרוליטר של חיסון הפאגים לגוש זרעי הקידוח 96. לאחר מכן, הכינו צלחת דגירה דו-שכבתית לכל זן שתיבדק. השאירו רווח מתחת למכסה של הצלחת הדו-שכבתית כדי לאפשר ייבוש.

מניחים את גוש זרעי הפאגים המוכן ואת צלחת השכבה הכפולה על המוביל הנייד של חיסון מטריצת 96 נקודות. מעבירים את כל הפאגים למשטח האגר למחצה. הניחו לצלחות להישאר בטמפרטורת החדר עד שכל הלחות החיסונית נספגה באגר למחצה.

כעת דוגרים על הצלחות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עבור הזנים שנבדקו במשך ארבע עד שש שעות. השתמש בממיר רכישת התמונות כדי להשיג ולשמור את התמונה של תוצאת הניסוי של כל לוח שכבה כפולה. רשום את המספר והמורפולוגיה של צורות הספוט השונות בגיליון אלקטרוני בהתבסס על התמונות שהתקבלו וחשב את הפרופורציות המתאימות של סוגי הפאגים השונים.

מחקר מורפולוגי של גידול סלמונלה על צלחות עם אמפיצילין הראה כי הבקרה השלילית ב- A-1 לא הראתה גידול. המיקרופון של זן הסלמונלה ב-A-4 היה 64 מיקרוגרם למיליליטר, ואילו זה של A-5 היה 16 מיקרוגרם למיליליטר. ערכי ההתנגדות באחוזים של אמפיצילין, ציפרופלוקסצין וחומצה אמוקסיצילין-קלאבולנית היו גבוהים מ-50%בעוד שערכי דוקסיציקלין, פלורפניקול, צפוטקסי ואנרופלוקסצין היו 30%עד 50% גנטמיצין, אמיקצין ומרופנם הראו ערכי התנגדות באחוזים של פחות מ-30%מדדי LAR של ציפרופלוקסצין וחומצה אמוקסיצילין-קלאבולנית נדחו באופן משמעותי.

ניתוחים מורפולוגיים של גידול סלמונלה על לוחות דו-שכבתיים הראו שנצפו ארבעה מורפולוגיה נקודתית עיקרית של פאגים. הכתם הליטי העגול והברור היה מפאג' שיכול להרוג באופן אמין את הפונדקאי שעל הצלחת, אך עשוי להשתכפל בהצלחה על חשבונו של אותו מארח. אוסף הלוחות נוצר על ידי לוחות אמיתיים.

הכתם הליטי העכור נוצר כתוצאה מפאג' שלא הרג באופן אמין את הפונדקאי שעל הצלחת, ואשר עשוי להשתכפל בהצלחה על חשבונו של אותו מארח. הנקודה הלא ליטית הצביעה על אופי לא ליטי. טכניקה זו מעבירה בקלות עדשת אגר 96 ביעילות בבת אחת והמכשירים מזהים תמונות באופן אוטומטי ולאחר מכן מחשבים את קוביות הקו.

טכנולוגיה זו צפויה לקדם את המחקר והתיעוש של פאגים ויישום פאגים הוא אחת הדרכים המדהימות להפחית ולפתור את בעיית AMR.