סטנדרטיזציה של העברה בין מעבדות בין ציטומטרים של זרימה לאיתור לימפוציטים בדלקת המוח היפנית ילדים מחוסנים

שיטת הסטנדרטיזציה של ציטומטר הזרימה מספקת גישה ישימה להסמכה הדדית של תוצאות מעבדה ומבטיחה את עקביות התוצאות עם פרויקטי מחקר על פני מרכזים מרובים. השיטה למזער את צריכת הזמן קלה לביצוע, מצוידת לאוטומציה, מנתחת תבנית ויכולה להפחית באופן דרמטי את הדרישה לניתוח נתונים. התחל ליצור תצורה חדשה בתוכנה של ציטומטר A, מהמעבדה המעבירה, על ידי לחיצה על לחצן הציטומטר, ובחירת תצורות תצוגה.

לחץ באמצעות לחצן העכבר הימני על תיקיית תצורות הבסיס ברשימת התצורה, בחר תיקיה חדשה ושנה את שמה. לאחר מכן, צור תצורה חדשה על ידי לחיצה ימנית על תצורת הבסיס והעתקתה. לחץ לחיצה ימנית על התיקיה החדשה והדבק את תצורת הבסיס לפני שינוי שם התצורה החדשה, העברת שיטה מתוקננת"גרור את שם הפרמטר, כגון, FETC מרשימת הפרמטרים, אל הגלאי המתאים 530/30, גם לערוך פרמטרים נוספים לתצורה החדשה.

כדי לתקנן את הניסוי במעבדה המעבירה, הפעל בדיקת ביצועים באמצעות הגדרת ציטומטר A זה ועקוב אחר החרוזים כדי לוודא שהציטומטר A מתפקד היטב. לחץ באמצעות לחצן העכבר הימני על הגדרות ציטומטר A בחלון דפדפן התוכנה וצור גליון עבודה על-ידי בחירת הגדרות היישום. לאחר מכן השתמש בדגימה לא מוכתמת כדי להתאים את צינור מכפיל התמונה, או מתחי PMT, של אזור הפיזור הקדמי, או FSC, ואזור פיזור הצד, או SSC, וכל הפרמטרים הפלואורסצנטיים.

שמור את הגדרות היישום על-ידי לחיצה ימנית על הגדרות ציטומטר הניסוי ובחירת הגדרות יישום. כדי להוסיף בקרות פיצוי באופן אוטומטי, לחץ על כפתור הניסוי ובחר בתפריט הגדרת הפיצוי, לפני בחירת צור בקרות פיצוי. רשום נתונים עבור כל חרוזי בקרת הפיצוי.

לאחר שתסיים, לחץ על הניסוי ובחר הגדרת פיצוי, חשב את הפיצוי באופן אוטומטי, לפני הקלטת הנתונים עבור פקדים מוכתמים בתא בודד. השתמש ב- CD45 RAA APC כדי לשנות את ערך הפיצוי של R7-18 עד 15% APC, השתמש ב- CD19 BB700 כדי לשנות את ערך הפיצוי של APC H7 ל- 14% BB700, והשתמש ב- CD8 R7-18 כדי לשנות את ערך הפיצוי של APC H7 ל- 60% R7-18. לאחר הקלטת הנתונים עבור חרוזי CST, צור גליון עבודה גלובלי של תבנית ערך היעד עבור החרוזים הבהירים של CST, לאחר שתסיים, הפעל את הדגימות במערך ציטומטר הזרימה ואסוף 25, 000 לימפוציטים.

צור גליון עבודה כללי של תבנית הניתוח עבור הדגימות ושמור את תבנית הניסוי בציטומטר A.ייצוא תבנית הניסוי באמצעות התקליטור. כדי להעביר את תבנית הניסוי לציטומטר B במעבדת הבדיקה, בצע בדיקת ביצועים באמצעות חרוזי CST כדי לוודא שהציטומטר B מתפקד היטב. ייבא את תבנית הניסוי מציטומטר A וצור ניסוי עבור ציטומטר B באמצעות התבנית.

באמצעות אותה כמות של חרוזי CST, התאם את מתחי הפרמטר הפלואורסצנטי עבור כל ערוץ פלואורסצנטי כך שיתאים למכשיר MFI הקודם. במידת הצורך, כוונן את מתח FSC באמצעות הדגימה הלא מוכתמת. לחץ לחיצה ימנית על הגדרות הציטומטר הניסיוני ובחר הגדרות יישום כדי לשמור את הגדרות היישום.

לאחר מכן, שנה את ערך הפיצוי של R7-18 ל- 15% APC באמצעות CD45 RA APC. השתמש ב- CD19 BB700 כדי לשנות את ערך הפיצוי של APC H7 ל- 24% BB700. והשתמש ב- CD8 R7-18 כדי לשנות את ערך הפיצוי של APC H7 ל- 60% R7-18.

לאחר שינוי ערך פיצוי, הפעל את הדגימות על ציטומטר זרימה B ולאסוף 25, 000 לימפוציטים. בגליון עבודה גלובלי של תבנית ערך היעד עבור ההגדרה והמעקב אחר הציטומטר, או חרוזים בהירים של CST, התקבלו תרשימי ההיסטוגרמה של 10 ערוצי פלואורסצנטיות, ערך היעד עבור כל פרמטר הוצג על-ידי הצגת החציון בתוך שערי ההיסטוגרמה. תרשימי הנקודות של המדגם שהתקבלו באמצעות הציטומטר A ו- B לאחר סטנדרטיזציה של מכשירים, הדגימו את עקביות הנתונים בין מכשירים שונים באמצעות תבנית ניתוח אוטומטית.

לא נצפה הבדל משמעותי כאשר התוצאות משש דגימות הושוו בין שני דגמי מכשירים שונים. התוצאות של 15 תת-קבוצות לימפה שהתקבלו ממכשירים שונים בשיטה הסטנדרטית השיגו נתונים דומים מאוד. אותו שם תצורה, יצירת התבנית ויצירת ערכי האקוטק של חרוזי בטיחות במכשירים שונים הם שלבים קריטיים בפרוטוקול זה.