מודל עכברוש של השתלת לב הטרוטופית נורמומית לשעבר

פיתחנו מודל להפחתת סיבוכים הקשורים לזילוח נורמותרמי ex-situ והגדלת זמן השימור הבטוח של לבבות תורמים. בהשוואה למודלים החלופיים של בעלי חיים, מודל זה הוא פשוט וחסכוני, וניתן לבצעו על ידי נסיין יחיד. מודל זה יכול להיות שימושי בבדיקת היעילות ארוכת הטווח של התערבויות פרמקולוגיות וגנטיות על לב התורם לאחר השתלות.

ההליך הכירורגי דורש מיומנות מיקרוכירורגית. גורם המפתח להשגת הצלחה במודל זה הוא תרגול והתמקדות בשלבים הקריטיים המתוארים בכתב היד. כדי להתחיל, להרכיב את מנגנון לנגנדורף, כולל מחמצן, משאבה, וקווי זילוח.

ממלאים את מעגל הזילוח עם 20 מיליליטר של תמיסת מלח, ומפיצים אותו עד שהוא דרוך עם דם אוטולוגי. בחולדה התורמת המורדמת, יש לבצע חתך בטני בקו האמצע בקוטר 7 ס"מ, ולאחר מכן חתכים דו-צדדיים בגודל 3 ס"מ מתהליך הקסיפואיד ועד אמצע עצם הבריח. הסר את הפרוות מאזור בית החזה.

הזריקו 1, 000 יחידה בינלאומית הפרין מומס ב 0.3 מיליליטר של מלח איזוטוני דרך הווריד הנבוב התחתון באמצעות מזרק 1 מיליליטר עצור כל דימום מחור המחט על ידי דחיסתו בעדינות עם צמר גפן. החדרת קטטר פמורלי 5 צרפתי לאבי העורקים הבטני. ודא שקצה הצנתר מגיע לקשת אבי העורקים, ואשר את מיקום הצנתר על ידי הערכת האורך המשוער של החלק המוחדר של הצנתר.

אספו כ-10 מיליליטר דם באמצעות הצנתר המוחדר לאבי העורקים הבטני. חברו את קו הזלוף של התמיסה הקרדיופלגית לצנתר הבטן, והתחילו את מתן התמיסה הקרדיופלגית עם משאבת המזרק בקצב של 800 מיליליטר לשעה. פתח את חלל בית החזה מהסרעפת, וחתך את הווריד הנבוב התחתון קרוב לסרעפת כדי למנוע התנפחות חדרית.

חותכים את הצלעות באופן דו צדדי לאורך עמוד השדרה החזי עד פתח בית החזה. שקפו את דופן החזה הגחוני המגויס בצורה מעולה בעזרת מלקחיים נגד יתושים. לאחר מתן כל הפתרון cardioplegic, לבודד את קשת אבי העורקים מן הרקמות שמסביב, בזהירות לנתח אותו ממש מתחת לעורק subclavian שמאל.

חצו את עורקי התרדמה הברכיוצפליים והשמאליים המשותפים במיקום מרוחק, והותירו את הגדם הארוך יותר של קשת אבי העורקים לטיפול קל במהלך קנולציה של אבי העורקים. לאחר מכן לעבור את עורק הריאה הראשי קרוב ככל האפשר bifurcation. בזהירות לסדר את הווריד קאווה העליון ואת הווריד קאווה התחתון עם 5-0 תפרים משי, מניעת חסימה של אטריום ימין וסינוס כלילי.

כסו את השוליים השמאליים של בית החזה בגזה רטובה, הניחו עליו את הלב, ומשכו בעדינות את הווריד הנבוב העליון ואת ליגטורות הווריד הנבוב הנחותות כדי לחשוף את ההילום. קשרו את ורידים ריאתיים ואזיגוס יחד עם תפר משי 5-0. חותכים את הרקמה הגבית לליגטורה ומחלצים את הלב.

לשקול את הלב לאחר בדיקתו עבור כל פציעה. החלף את המעגל המוכן במי מלח בהקדמת דם, והתחל את הזלוף בקצב זרימה של שניים עד שלושה מיליליטר לדקה, המאפשר לפרבוסט לדלוף מאתר הקנולציה כדי להסיר בועות אוויר. לאחר הצבת הליגטורה הקבועה, ודא שהלב מתחיל להתכווץ תוך מספר שניות, ומגיע לקצב רגיל תוך 60 שניות.

לחץ זילוח ממוצע של 55 עד 65 מילימטרים של כספית עם קצב זרימה כלילי של שלושה עד ארבעה מיליליטר ב 37 מעלות צלזיוס מצביע על זילוח נאות. לאסוף 0.15 מיליליטר של דם מן המאגר, ולבדוק את ניתוח גז הדם בתחילת זילוח וכל 20 דקות לאחר מכן. לאחר 120 דקות של זילוח, יש לתת שלושה מיליליטר של קוסטודיול דרך משאבת המזרק בקצב של 250 מיליליטר לשעה כדי לעצור את הלב.

בצע את laparotomy קו האמצע ולהכניס retractor כדי להרחיב את חלל הבטן. גייס את איברי הבטן לצד שמאל של הנמען באמצעות צמר גפן כדי לפנות מקום להליך. באמצעות מיקרוסקופ כירורגי בהגדלה של פי 10, גייסו את התריסריון ואת הג'ג'ונום הפרוקסימלי על ידי דיסקציה קהה עם צמר גפן.

לחשוף את אבי העורקים הבטני ואת הווריד הנבוב הנחות. מניחים 5-0 ליגטורות משי על הענפים mesenteric של שני הצדדים הגולגולתיים והקאודליים של הכלים העיקריים. מרימים את כלי הבטן ומקרישים, או קושרים את הענפים המותניים עם 5-0 תפרי משי.

זכור לחסוך את עורקי האשכים וורידים, ולא להדק אותם. השתמש בליגטורות כדי להרים את כלי הדם ולמקם את המיקרו-מלחציים לענפים המזנטריים, הצדדים הקאודליים והגולגולתיים של כלי הדם העיקריים כדי לעצור את זרימת הדם באתר האנסטומוזיס. נקבו את אבי העורקים באמצעות מחט של 27 מד, והאריכו את החתך במספריים זעירים לאורך שווה או מעט גדול יותר מפתח אבי העורקים העולה של התורם.

בצע חתך אורכי של הווריד הנבוב התחתון באותו אופן כמו אבי העורקים, אך הפוך אותו קרוב יותר בשלושה מילימטרים לצד הקאודלי בהשוואה לחתך אבי העורקים. התחלת האנסטומוזות, הניחו את לב התורם בצד ימין של בטנו של הנתרם, וחברו את אבי העורקים העולה של התורם לאבי העורקים הבטני של המקבל בתפר אחד פשוט וקטוע בפינת הגולגולת של החתך האורכי. הזיזו את הלב לצד שמאל של בטנו של הנתרם, ובצעו אנסטומוזה של אבי העורקים העולה של התורם עם אבי העורקים הבטני של הנתרם, באמצעות תפר פוליפרופילן רץ 9-0.

קבע את עורק הריאה התורם לווריד הנבוב התחתון עם שני תפרים קטועים בפינות הקאודליות והגולגולתיות של החתך האורכי. לאחר השלמת האנסטומוזיס, הסר את המהדק הקאודלי ואת מהדק הגולגולת. הבטחת המוסטאזיס נאותה, החלפת איברי הבטן בצורה מתפתלת, וסגירת שכבות חתך הבטן באמצעות תפרים רציפים מפוליפרופילן 5-0.

הפרמטרים המשמשים להערכת הכדאיות של הלב במהלך זילוח ex-situ, כגון לקטט, אשלגן ולחץ אבי העורקים הממוצע מוצגים באיור זה. כאן, השימוש בשימור נורמותרמי ex-situ הפחית את הזמן האיסכמי הכולל של שישה מקרים מוצלחים ל 46.2 פלוס-מינוס 4.7 דקות, בעוד הזמן החוץ-גופי הכולל היה 166.2 פלוס-מינוס 4.7 דקות. הוצאת הלב מהתורם וההכנה לזילוח אקס-סיטו והשתלה הטרוטופית נדרשה הייתה 5.8 פלוס-מינוס 1.3 דקות.

שיעור ההצלחה הכולל של הניתוח היה 70% וזמן האנסטומוזה הממוצע של ששת המקרים המוצלחים היה 38.4 פלוס-מינוס 3.4 דקות. הביצועים האלקטרופיזיולוגיים של הלב התורם לפני הרכישה ולאחר ההשתלה מוצגים באיור זה. בכל הניסויים, קצב הלב ירד משמעותית מיד לאחר ההשתלה, אך בסופו של דבר התאושש עם הזמן.

המראה המקרוסקופי והמיקרוסקופי של לב התורם לפני שימור נורמותרמי ex-situ, לאחר שימור נורמותרמי ex-situ ולאחר שעתיים של השתלה הטרוטופית מוצגים כאן. בעת ביצוע הליך זה, חשוב לקחת מספיק דם לזילוח, לחתוך בזהירות את אבי העורקים מבלי לפגוע בחלק העולה, ולעקוב מקרוב אחר הפרמטרים הפיזיולוגיים במהלך השימור. לאחר הליך זה, אנו יכולים לבדוק את יעילותם של פתרונות שימור חדשניים ואת התגובה החיסונית של המקבל לשיטות שימור חדשות.

עם השילוב של זילוח ex-situ והשתלה הטרוטופית, אנו מסוגלים לחקור טכניקות חדשניות באמצעות זמן שימור ממושך, ולבחון את ההשפעה ארוכת הטווח על התגובה החיסונית של הנמען.