Name: מדידת קוטר כלי הדם ברשתית מתמונות אנגיוגרפיה פלואורסצנטית של עכבר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-05-19T13:20:00.000+00:00
Duration: 4 min 4 s
Description: למד שיטה אוטומטית למדידת קוטר כלי הדם ברשתית בעכברים מושתקים באמצעות תוכנת MATLAB מותאמת אישית. הטכניקה משתמשת באנגיוגרפיה פלואורסצנטית ומספקת כלי אמין למחקר מחלות רשתית ויעילות טיפולים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מענק פוסט-דוקטורט מקרן המחקר האיסלנדית (217796-052) (A.G.L.) ומקרן הזיכרון Helga Jónsdóttir and Sigurlidi Kristjánsson Memorial Fund (A.G.L ו-T.E). המחברים מודים לפרופ' Eiríkur Steingrímsson על אספקת העכברים.

כל הניסויים אושרו על ידי רשות המזון והווטרינריה האיסלנדית (רישיון MAST מס '2108002). כל המחקרים בבעלי חיים נערכו על פי הצהרת האגודה לחקר הראייה והעיניים (ARVO) לשימוש בבעלי חיים בחקר העיניים והראייה. במחקר זה נעשה שימוש בעכברים זכרים ונקבות C57BL/6J ו-Mitfmi-vga9/+ . עכברי C57BL/6J (n = 7) שימשו כבקרה. סוגי הבר הושגו באופן מסחרי (ראו טבלת חומרים), אך כל העכברים המוטנטים (n = 7) גודלו וגודלו במתקנים לבעלי חיים במרכז הביו-רפואי באוניברסיטת איסלנד. במחקר הנוכחי נעשה שימוש בבעלי חיים בני 3 חודשים; עם זאת, הפרוטוקול חל גם על בעלי חיים בני חודש ומעלה.
1. הכנה ניסיונית
<ol><li>הכינו את תערובת ההרדמה. יש ליטול אמפולה אחת של תמיסת מלאי קטמין במינון 2 מ"ל (25 מ"ג/מ"ל) ותמיסת מלאי קסילזין בנפח 250 מ"ל (2%) להכנת תמיסת עבודה של תערובת קטמין/קסילזין (25 מ"ג/מ"ל קטמין ו-20 מ"ג/מ"ל קסילזין) (ראו טבלת חומרים).</li>
	<li>להרדים את העכבר בהזרקה תוך צפקית של תערובת קטמין/קסילזין, עם נפח נוזל הגדול פי ארבעה ממשקל גופו של העכבר; לדוגמה, עכבר במשקל 20 גרם זקוק ל-35 מיקרוליטר של תמיסת עבודה של קסילזין/קטמין כדי לקבל מנת עבודה של תערובת קסילזין (4 מ"ג/ק"ג משקל גוף) וקטמין (40 מ"ג/ק"ג משקל גוף).</li>
	<li>להרחיב את האישונים עם טיפת עיניים של 10% phenylephrine hydrochloride ו 1% tropicamide מיד לאחר ההרדמה.</li>
	<li>חכו עד שבעל החיים מורדם לחלוטין ואישוניו מורחבים באופן נרחב.</li>
	<li>הכינו תמיסת מלח פלואורסצאין. הוסף 9 מ"ל של מלוחים חוצצי פוספט (PBS; 1x) ל- 1 מ"ל של תמיסת פלואורסצאין (ריכוז מלאי של 100 מ"ג/מ"ל) (ראה טבלת חומרים). פתרון העבודה בריכוז הסופי הוא 10 מ"ג / מ"ל.</li>
</ol>2. הדמיית In vivo של כלי דם ברשתית באמצעות מערכת הדמיית רשתית מכרסמים
<ol><li>יש לתת תמיסת עבודה פלואורסצאין תוך צפקית (5 מיקרוליטר/גרם משקל גוף) לחיה המורדמת.</li>
	<li>יש למרוח טיפה של ג'ל מתילצלולוז 2% על פני הקרנית ולאחר מכן להניח את בעל החיים על שלב המיקום של מערכת ההדמיה (ראה טבלת חומרים).</li>
	<li>מקם את עדשת מצלמת ההדמיה של הרשתית כדי לגעת בקרנית העכבר באופן ישיר ועדין. כדי למקם את ראש עצב הראייה באמצע שדה הראייה, כוונן מעט את היישור.</li>
	<li>עברו לערוץ הפלואורסצנטי הירוק במצלמת הפונדוס.</li>
	<li>התמקדו בכלי הרשתית כדי לצלם תמונות.</li>
	<li>כדי למצוא את נקודת הזמן האידיאלית, צלם מספר תמונות ב- 1, 3, 5 ו- 10 דקות (אך לא יותר מ -10 דקות) לאחר הזרקת פלואורסצאין. הערה: יש להשלים את טיפול FA תוך 10 דקות, מכיוון שלאחר זמן זה הפלואורסצאין עלול להיות מפוזר מדי, וכלי הדם הופכים לבלתי ניתנים לגילוי.</li>
	<li>עם השלמת ההדמיה, כאשר העכבר עדיין מורדם, להרדים אותו על ידי נקע צוואר הרחם.</li>
</ol>3. ניתוח קוטר כלי הדם ברשתית
<ol><li>פתחו את תוכנית MATLAB (ראו טבלת חומרים).</li>
	<li>הורד ושמור את הקוד "fundusDiameter.m" (ראה קובץ קידוד משלים 1, קובץ קידוד משלים 2 וקובץ קידוד משלים 3).</li>
	<li>פתח את התיקיה שבה נשמר הקוד. גררו את הקוד ושחררו אותו מעל התיקייה הנוכחית ב-MATLAB.</li>
	<li>גררו ושחררו את תמונת ה-FFA (תמונת אנגיוגרפיה פלואורסצנטית פונדוס) או תמונות שברצונכם לנתח בתיקייה הנוכחית ב-MATLAB .</li>
	<li>לחצו על הכלי הפעלה מסרגל הכלים MATLAB.</li>
	<li>יופיע חלון מוקפץ. כתוב את שם הקובץ של התמונה המעניינת בתיבה הזן שם קובץ ולחץ על אישור. הערה: אל תשנה או תשנה את שאר הפרמטרים.</li>
	<li>בחר את מרכז הדיסק האופטי ולאחר מכן בחר את קצה הדיסק האופטי. התוכנה מחשבת כעת את עוצמת הפיקסלים בתמונות פונדוס העכבר במעגל עם רדיוס כפול מזה של הדיסק האופטי, בכיוון השעון ממרכז הדיסק האופטי (איור 1).</li>
	<li>לאחר מכן, ודא שהתוכנה משרטטת את הקוטר הממוצע של כלי השיט (בפיקסלים) של כל כלי בפונדוס כפונקציה של מספר כלי השיט (איור 2).</li>
	<li>לאחר מכן, ודא שהתוכנה מעבירה את נתוני המדידה עבור כל כלי למסמך Excel, שבו מחושבים הממוצע, החציון וסטיית התקן של ערכים אלה (טבלה 1 וטבלה 2).</li>
	<li>העבר את הערכים מטבלת התוצאות לתוכנית גיליון אלקטרוני על-ידי בחירת כל הערכים בטבלה. הדבק את הערכים בגיליון האלקטרוני.</li>
	<li>שרטט את הגרפים ובצע ניתוח סטטיסטי באמצעות הנתונים שהודבקו בתוכנית גיליון אלקטרוני לפי בחירתך (ראה טבלת חומרים).</li>
</ol>

<ol><li>Cheung, C. Y., Ikram, M. K., Chen, C., Wong, T. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+retina+to+study+dementia+and+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Imaging retina to study dementia and stroke.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 57, 89-107 (2017).</li>
<li>Selvam, S., Kumar, T., Fruttiger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+vasculature+development+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Retinal vasculature development in health and disease.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 63, 1-19 (2018).</li>
<li>Ma, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+retinal+vessel+attenuation+in+eyes+with+retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of retinal vessel attenuation in eyes with retinitis pigmentosa.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 53 (7), 4306-4314 (2012).</li>
<li>Eysteinsson, T., Hardarson, S. H., Bragason, D., Stefansson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+vessel+oxygen+saturation+and+vessel+diameter+in+retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">Retinal vessel oxygen saturation and vessel diameter in retinitis pigmentosa.</a> Acta Ophthalmologica. 92 (5), 449-453 (2014).</li>
<li>Al-Latayfeh, M., Silva, P. S., Sun, J. K., Aiello, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiangiogenic+therapy+for+ischemic+retinopathies%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Perspectives+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">Antiangiogenic therapy for ischemic retinopathies.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 2 (6), 006411(2012).</li>
<li>Wang, S., Villegas-Perez, M. P., Vidal-Sanz, M., Lund, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+optic+axon+dystrophy+and+vacuslar+changes+in+rd+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Progressive optic axon dystrophy and vacuslar changes in rd mice.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 41 (2), 537-545 (2000).</li>
<li>Liu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoreceptor+cells+influence+retinal+vascular+degeneration+in+mouse+models+of+retinal+degeneration+and+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Photoreceptor cells influence retinal vascular degeneration in mouse models of retinal degeneration and diabetes.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 57 (10), 4272-4281 (2016).</li>
<li>Steingrimsson, E., Copeland, N. G., Jenkins, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melanocytes+and+the+microphthalmia+transcription+factor+network%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Genetics%22%5BJournal%5D)">Melanocytes and the microphthalmia transcription factor network.</a> Annual Review of Genetics. 38, 365-411 (2004).</li>
<li>Arnheiter, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+discovery+of+the+microphthalmia+locus+and+its+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Mitf.+Pigment+Cell+%26+Melanoma+Research%22%5BJournal%5D)">The discovery of the microphthalmia locus and its gene.</a> Mitf. Pigment Cell & Melanoma Research. 23 (6), 729-735 (2010).</li>
<li>Garcia-Llorca, A., Aspelund, S. G., Ogmundsdottir, M. H., Steingrimsson, E., Eysteinsson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microphthalmia-associated+transcription+factor+%28Mitf%29+gene+and+its+role+in+regulating+eye+function%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">The microphthalmia-associated transcription factor (Mitf) gene and its role in regulating eye function.</a> Scientific Reports. 9 (1), 15386(2019).</li>
<li>Bharti, K., Liu, W., Csermely, T., Bertuzzi, S., Arnheiter, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+promoter+use+in+eye+development%3A+the+complex+role+and+regulation+of+the+transcription+factor+MITF%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Alternative promoter use in eye development: the complex role and regulation of the transcription factor MITF.</a> Development. 135 (6), 1169-1178 (2008).</li>
<li>Lu, S. Y., Li, M., Lin, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitf+induction+by+RANKL+is+critical+for+osteoclastogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+of+the+Cell%22%5BJournal%5D)">Mitf induction by RANKL is critical for osteoclastogenesis.</a> Molecular Biology of the Cell. 21 (10), 1763-1771 (2010).</li>
<li>Pillaiyar, T., Manickam, M., Jung, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+development+of+signaling+pathways+inhibitors+of+melanogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Signalling%22%5BJournal%5D)">Recent development of signaling pathways inhibitors of melanogenesis.</a> Cellular Signalling. 40, 99-115 (2017).</li>
<li>Danielsson, S. B., Garcia-Llorca, A., Reynisson, H., Eysteinsson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+microphthalmia-associated+transcription+factor+%28Mitf%29+mutations+affect+the+structure+of+the+retinal+vasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">Mouse microphthalmia-associated transcription factor (Mitf) mutations affect the structure of the retinal vasculature.</a> Acta Ophthalmologica. 100 (8), 911-918 (2022).</li>
<li>Burns, S. A., Elsner, A. E., Gast, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+the+retinal+vasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Vision+Science%22%5BJournal%5D)">Imaging the retinal vasculature.</a> Annual Review of Vision Science. 7, 129-153 (2021).</li>
<li>Wei, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+vessel+diameter+quantification+and+vessel+tracing+for+OCT+angiography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biophotonics%22%5BJournal%5D)">Automated vessel diameter quantification and vessel tracing for OCT angiography.</a> Journal of Biophotonics. 13 (12), e202000248(2020).</li>
<li>Salas, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compact+akinetic+swept+source+optical+coherence+tomography+angiography+at+1060+nm+supporting+a+wide+field+of+view+and+adaptive+optics+imaging+modes+of+the+posterior+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Compact akinetic swept source optical coherence tomography angiography at 1060 nm supporting a wide field of view and adaptive optics imaging modes of the posterior eye.</a> Biomedical Optics Express. 9 (4), 1871-1892 (2018).</li>
<li>Albanna, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+evaluation+of+neurovascular+coupling+in+the+murine+retina+by+dynamic+retinal+vessel+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Non-invasive evaluation of neurovascular coupling in the murine retina by dynamic retinal vessel analysis.</a> PLoS One. 13 (10), e0204689(2018).</li>
<li>Moult, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+anesthetic+protocols+for+functional+blood+flow+imaging+in+the+rat+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Optics%22%5BJournal%5D)">Evaluating anesthetic protocols for functional blood flow imaging in the rat eye.</a> Journal of Biomedical Optics. 22 (1), 16005(2017).</li>
</ol>

המחברים מצהירים כי לא קיימים אינטרסים מתחרים.

המאמר הנוכחי הוא הראשון שמציג שיטה לניתוח קוטר כלי הדם ברשתית וכלי הדם ברשתית מתמונות FA של עכברים. מכיוון שנעשה שימוש רק בהדמיית פונדוס כדי ללכוד תמונות של כלי הדם ברשתית, לשיטה יש מספר חסרונות, אחד מהם הוא שניתן להסיק רק שינויים בשכבות השטחיות של כלי הדם ברשתית בעכברים שנבדקו במחקר זה; עדיין לא ידוע על הבדלים בשכבות העמוקות יותר. 
שיטת ניתוח תמונה ייחודית של טומוגרפיה קוהרנטית אופטית (OCTA) באמצעות מעקב כלי דם אוטומטי וקוטר כלי דם הוצגה16. עם זאת, שיטה זו דורשת מדידת ...

ייתכן שמיטת כלי הדם הנחקרת ביותר בגוף היא כלי הדם ברשתית. עם תחכום טכני הולך ומשתפר, כלי דם ברשתית מצולמים בקלות בחולים חיים ומשמשים בתחומי מחקר רבים1. בנוסף, כלי הדם ברשתית העכבר במהלך הפיתוח הוכיחו את עצמם כמערכת מודל יעילה מאוד למחקר בביולוגיה הבסיסית של צמיחת כלי הדם. המטרה העיקרית של כלי הדם ברשתית היא לספק לחלק הפנימי של הרשתית תמיכה מטבולית באמצעות רשת נימים למינרית המחלחלת לרקמה העצבית2. עם זאת, מצב הרשתית, וכתוצאה מכך כל תפקוד לקוי או ניוון, יכול להיות בעל השפעות משמעותיות הן על התפצלויות כלי הדם ברשתית והן על קוטר העורקים, מה שמדגים יחסי גומלין בין תאי הרשתית לבין כלי הדם 3,4. ידוע כי מחלות עיניים רבות, כולל רטינופתיה של פגות (ROP), רטינופתיה סוכרתית (DR), ניוון מקולרי תלוי גיל (AMD), גלאוקומה, וניאווסקולריזציה של הקרנית, יכולים לגרום לאנגיוגנזה עינית לא תקינה5. במקרה של כלי הדם ברשתית, מודלים עכבריים של ניוון רשתית מציגים לעתים קרובות שינויים דומים לאלה שנצפו במחלות כלי דם אנושיות 6,7. משפחת הסופרגנים Myc של גורמי שעתוק סליל-לולאה-סליל-רוכסן כוללת את הגן גורם שעתוק הקשור למיקרופתלמיה (Mitf) המתבטא באפיתל פיגמנט הרשתית (RPE)8,9,10.
איברים רבים, כולל העין, האוזן, מערכת החיסון, מערכת העצבים המרכזית, הכליות, העצם והעור, הוכחו כמוסדרים על ידי Mitf 9,11,12,13.גילינו כי המבנה והתפקוד של RPE מושפעים בעכברים הנושאים מוטציות שונות בגן Mitf, וכתוצאה מכך במקרים מסוימים של ניוון רשתית, ובסופו של דבר, אובדן ראייה10. לאחרונה הוכח כי מספר כלי הדם וקוטר כלי הדם שונים באופן משמעותי בין מוטנט Mitf לבין עכברי ברמסוג 14. חוקרים ורופאים יכולים כעת לכמת במדויק את כלי הדם ברשתית in vivo עקב התפתחויות הדמיה ברשתית. מאז 1800, חוקרים ורופאים ניצלו את היתרון של הדמיה של כלי הדם ברשתית, ואנגיוגרפיה פלואורסצאין (FA) הראתה הן זרימת דם ברשתית והן השפלה של מחסום הדם-רשתית15.
מאמר זה מדגים כיצד לנתח את קוטר כלי הדם ברשתית מתמונות FA של עכבר באמצעות קוד שנכתב בהתאמה אישית בתוכנת MATLAB.

<table><tbody><tr><td>1% טרופיקמיד (Mydriacyl)</td><td>Alcon Inc Laboratories</td><td></td><td>סוכן Mydriatic</td></tr><tr><td>2% Methocel</td><td>OmniVision Eye Care</td><td></td><td>הידרוקסיפרופריל מתיל צלולוז ג'ל</td></tr><tr><td>C57BL/6J</td><td>Jackson Laboratory</td><td>000664</td><td>עכברים מסוג פרא</td></tr><tr><td>Excel עבור Microsoft 365</td><td>Microsoft Inc</td><td></td><td>חבילת תוכנה</td></tr><tr><td>פלואורסצאין נתרן מלח</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>28803-100G</td><td>אנגיוגרפיה פלואורסצנטית</td></tr><tr><td>Matlab 8.0</td><td>The MathWorks, Inc.</td><td></td><td>חבילת תוכנה</td></tr><tr><td>Micron IV מצלמת פונדוס מכרסמים</td><td>Phoenix-Micron</td><td>40-2200</td><td>צילום פונדוס</td></tr><tr><td>פנילפרין 10% w/v</td><td>Bausch & Lomb</td><td></td><td>Mydriatic agent</td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline - 100 טבליות</td><td>Gibco</td><td>18912-014</td><td>דילול</td></tr><tr><td>Sigmaplot 13</td><td>Jandel חבילת תוכנה מדעית</td><td></td><td></td></tr><tr><td>S-קטמין, 25 מ"ג/מ"ל</td><td>פייזר בע"מ.</td><td>PAA104470</td><td>הרדמה IP</td></tr></tbody></table>

מדידת קוטר כלי הדם ברשתית מתמונות אנגיוגרפיה פלואורסצנטית של עכבר

Measuring Retinal Vessel Diameter from Mouse Fluorescent Angiography Images

חשוב ללמוד את התפתחות כלי הדם ברשתית ברטינופתיות שבהן צמיחת כלי דם חריגה יכולה בסופו של דבר להוביל לאובדן ראייה. מוטציות בגן גורם השעתוק הקשור למיקרופתלמיה (Mitf) מראות היפופיגמנטציה, מיקרופתלמיה, ניוון רשתית ובמקרים מסוימים עיוורון. הדמיה In vivo של רשתית העכבר באמצעים לא פולשניים חיונית לחקר העיניים. עם זאת, בהתחשב בגודלו הקטן, הדמיית פונדוס עכבר היא קשה ועשויה לדרוש כלים מיוחדים, תחזוקה והכשרה. במחקר זה פיתחנו תוכנה ייחודית המאפשרת ניתוח של קוטר כלי הדם ברשתית בעכברים באמצעות תוכנה אוטומטית הכתובה ב-MATLAB. צילומי פונדוס התקבלו באמצעות מערכת מצלמות פונדוס מסחרית לאחר הזרקה תוך צפקית של תמיסת מלח פלואורסצאין. התמונות שונו כדי לשפר את הניגודיות, ותוכנת MATLAB אפשרה לחלץ את קוטר כלי הדם הממוצע באופן אוטומטי במרחק מוגדר מראש מהדיסק האופטי. השינויים בכלי הדם נבדקו בעכברי בר ובעכברים עם מוטציות שונות בגן Mitf על ידי ניתוח קוטר כלי הדם ברשתית. תוכנת MATLAB הכתובה בהתאמה אישית שפותחה כאן היא מעשית, קלה לשימוש, ומאפשרת לחוקרים לנתח את הקוטר הממוצע ואת הקוטר הכולל הממוצע, כמו גם את מספר כלי הדם מכלי הדם ברשתית העכבר, בנוחות ובאמינות.

איור 1 מראה את התהליך המשמש לניתוח כלי הדם ברשתית, אשר מוחל על תמונות FFA של עכברים מכל העכברים שנבדקו. רדיוס גדול פי שניים מהדיסק האופטי משמש למדידת עוצמת פיקסלים בכיוון מעגלי בכיוון השעון ממרכז הדיסק האופטי. הוא מסמן פיקסלים עם נקודת התחלה או סיום כאשר הוא נתקל בנקודות מעל ומתחת לסף שצוין על-ידי המשתמש, בהתאמה. זה חוזר על עצמו 30 פעמים, בכל פעם הולך קצת יותר רחוק ממרכז הדיסק האופטי. תמונות FFA מצולמות 5 דקות לאחר הזרקת פלואורסצאין (איור 1A <strong class="xfig"...

כלי דם ברשתית עכבר מעניינים במיוחד בהבנת המנגנונים של היווצרות תבניות כלי דם. פרוטוקול זה מודד באופן אוטומטי את הקוטר של כלי הדם ברשתית העכבר מתמונות פונדוס אנגיוגרפיה פלואורסצנטית במרחק קבוע מהדיסק האופטי.

It is important to study the development of retinal vasculature in retinopathies in which abnormal vessel growth can ultimately lead to vision loss. ...

פרוטוקול זה מספק שיטה קלה ואמינה למדידה אוטומטית של קוטר כלי הדם ברשתית בעכברים מורדמים עקב מוטציות גנטיות או מחלת רשתית. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא כי תוכנית MATLAB כתוב מותאם אישית כאן הוא מעשי, קל לשימוש, נוח ואמין. שינויים בקוטר כלי הרשתית מתרחשים בדרך כלל במחלות ניווניות כמו RP ומצבים אחרים של כלי דם ברשתית.מודלים של עכברים מציעים תובנות לגבי יעילות הטיפול והשפעתם על כלי הדם ברשתית. השיטה עשויה להיות שימושית כסמנים קליניים הניתנים לכימות בעקבות התקדמות הפרעות כלי דם בעין, ולמעקב אחר טיפולים פוטנציאליים. כדי להתחיל, להכין מזרק עם פתרון עבודה fluorescein ולנהל אותו intra-peritoneally לחיה מורדמת ולהחיל טיפה של 2% ג'ל תאית מתיל על פני הקרנית.לאחר מכן הניחו את החיה על שלב המיקום של מערכת ההדמיה. מקם את עדשת מצלמת ההדמיית הרשתית כך שתיגע ישירות ובעדינות בקרנית העכבר, וכוונן מעט את היישור כך שימקם את ראש עצב הראייה במרכז שדה הראייה. לאחר מכן עברו לתעלה הפלואורסצנטית הירוקה במצלמת הפונדוס והתמקדו בכלי הדם ברשתית כדי לצלם את התמונות.צלם תמונות בנקודות הזמן הרצויות לאחר הזרקת הפלואורסצאין כדי לקבוע את נקודת הזמן האידיאלית ולדמיין את תמונת הפונדוס הפלואורסצאין. ראשית, פתח את תוכנית MATLAB. לאחר מכן להוריד ולשמור את קוטר פונדוס.M קוד. לאחר מכן, פתח את תיקיית ניתוח התמונה fundus וגרור ושחרר את קוטר fundus. קוד M לתיקיית הניתוח.גרור ושחרר תמונת FFA לתיקיית ניתוח התמונות. בתוכנית MATLAB, לחץ פעמיים על קובץ הקוד כדי להפעיל אותו. בחר באפשרות הפעלה.יופיע תפריט קופץ לבחירת התמונה. בחר את התמונה, ותפריט קופץ עבור פרמטרים ניתוח יופיע על המסך. הגדר את פרמטרי הניתוח בתפריט הנפתח ולחץ על אישור. בחר את מרכז הדיסק האופטי ולאחר מכן בחר את קצה הדיסק האופטי.הניתוח יבוצע ברקע ותוצאות הניתוח יופיעו על המסך. הטבלה מכילה את הערכים של ממוצע, סטיית תקן ושגיאת תקן עבור כל כלי שיט. שמור את הטבלה.ולאחר מכן לשמור את הדמות עם עובי ממוצע להגדיר. פתח את תיקיית הניתוח עם הקבצים שנשמרו ולאחר מכן פתח את האיור שנשמר. פתח את הטבלה השמורה, העתק את הערכים והדבק אותם בקובץ Excel.לאחר הזרקת הפלואורסצאין התקבלו תמונות מעכבר בקרה ועכבר מוטנטי מסוג MITFMI-VGA9, שהמרחק הקצר ביותר שלהן נמדד ממרכז הדיסק האופטי לנקודות הקצה בכלי הדם בכיוון השעון. קוטר הכלי הממוצע התקבל כפונקציה של מספר כלי השיט עבור סוג הבר ועכברי המוטציה. הדברים החשובים ביותר שיש לזכור הם מיקום מצלמת הפונדוס ומרכוז הדיסק האופטי בתמונת הפונדוס.בנוסף לטכניקה זו, ניתן לבצע טכניקות מולקולריות על מנת לחקור תרופות חדשות, לאבחן מצבי כלי דם שונים בעין, ולהבין טוב יותר את תפקוד כלי הדם ברשתית.

measuring-retinal-vessel-diameter-from-mouse-fluorescent-angiography

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

ניתן להשתמש במיקרוסקופיה תוך-חיונית בבעלי חיים כדי להמחיש ולמדוד את קוטר כלי הדם ברשתית, מהירויות זרם הדם וזרימת הדם הכוללת ברשתית.

מדידות מיקרוסקופ וידאו תוך-חיוני של זרימת הדם ברשתית בעכברים

הפרוטוקול מתאר את assay micropocket הקרנית כפי שפותח בעכברים.

קרנית Micropocket Assay: דגם של אנגיוגנזה בעין העכבר

כדי לחקור את חדירות מחסום הדם-רשתית ואת שלמות הממברנה המגבילה הפנימית במודלים של מחלות רשתית בבעלי חיים, השתמשנו במספר גרסאות של נגיף הקשור לאדנו-(AAV) ככלים לתיוג נוירונים ברשתית וגליה. ביטוי גן מדווח בתיווך וירוס משמש לאחר מכן כאינדיקטור לחדירות מחסום הרשתית.

שימוש בנגיף Adeno הקשורים ככלי לחקר חסמי רשתית במחלה

הרשתית מניות דמיון בולט עם המוח, ובכך מייצג חלון ייחודי ללמוד להערכת ומבנה עצביים במוח לא פולשני. פרוטוקול זה מתאר שיטה ללמוד דמנציה באמצעות טכניקות הדמיה ברשתית. שיטה זו יכולה לסייע פוטנציאל הערכת הסיכון ואבחון של דמנציה.

באמצעות הדמיה ברשתית ללמוד דמנציה

מחלות רבות סכנת חזון עינית משויכות לקוי microvessels ברשתית. לכן, המדידה של תגובות arteriole ברשתית הוא חשוב לחקור את המנגנונים הקשורים pathophysiological המשמש כבסיס. מאמר זה מתאר פרוטוקול מפורט עבור בידוד arteriole רשתית העכבר והכנות כדי להעריך את ההשפעות של חומרים vasoactive על קוטר כלי הדם.

שלבי הכנה מדידה של תגובתיות ב העכבר רבים ברשתית Vivo לשעבר

כאן, אנו נדון פרוטוקול השיטה אשר יאפשר ניתוח קל של להערכת רשתית דג זברה למבוגרים tg(fli:EGFP) כמו read-out מהירה בהגדרות של פתולוגיות וסקולרית לטווח ארוך קשורה neoangiogenesis ושינויים מבניים.

לומד סוכרת דרך העיניים של דג: Microdissection, ויזואליזציה, וניתוח tg(fli:EGFP) למבוגרים להערכת רשתית דג זברה

הדמיית in vivo היא כלי רב עוצמה לחקר הביולוגיה בבריאות ובמחלות. פרוטוקול זה מתאר הדמיה טרנס-אימונית של רשתית העכבר באמצעות מיקרוסקופ סטנדרטי של שני פוטונים. הוא גם מדגים שיטות שונות של הדמיה חיה כדי לתייג פלואורסצנטיות קבוצות תאים מרובות של הרשתית.

הדמיה טרנס-אימונית של שני פוטונים In vivo של רשתית העכבר

פרוטוקול זה מתאר שיטה מפורטת להכנה וצביעה אימונופלואורסצנטית של תושבות שטוחות רשתית של עכברים וניתוח. השימוש באנגיוגרפיה פלואורסצנטית פונדוס (FFA) עבור גורי עכברים ועיבוד תמונה מתוארים בפירוט גם כן.

ניטור צמיחה דינמית של כלי רשתית במודל עכבר רטינופתיה המושרה על ידי חמצן

מאמר זה מתאר בדיקת כתמי לציטין מבוססת וניתן לשחזור עבור כל ההכנות לרשתית ההר ואת הפרוטוקולים הנדרשים למדידה כמותית של פרמטרים וסקולריים משתנים לעתים קרובות ברטינופתיות שגשוג ולא מתרבות.

כימות של פרמטרי כלי דם ברשתיות הר שלמות של עכברים עם רטינופתיות שאינן מתרבות ושגשוגות

כאן אנו מציגים שלושה פרוטוקולי ניתוח נתונים עבור אנגיוגרפיה פלואורסצנטית (FA) וטומוגרפיה של קוהרנטיות אופטית (OCT) במחקר של חסימת ורידים ברשתית (RVO).

In vivo קריאות פגיעה בכלי דם ברשתית העכבר כדי לקדם את יכולת השחזור

הפריציטים בכלי הדם ברשתית נבדקו על ידי צביעה אימונו-פלואורסצנטית עם β קולטן גורם גדילה שמקורו בטסיות דם לאחר הזרקה רטרו-אורביטלית של לקטין עגבניות פלואורסצנטי. הרשתית המסומנת טופלה עוד בשיטת ניקוי הרקמות והותקנה בשלמותה להמחשת התצוגות התלת מימדיות של פריציטים המקיפים את כלי הדם ברשתית תחת מיקרוסקופ קונפוקלי.

הדמיה תלת מימדית של פריציטים וסקולריים ברשתית בעכברים על ידי צביעה חיסונית 

למד שיטה אוטומטית למדידת קוטר כלי הדם ברשתית בעכברים מושתקים באמצעות תוכנת MATLAB מותאמת אישית. הטכניקה משתמשת באנגיוגרפיה פלואורסצנטית ומספקת כלי אמין למחקר מחלות רשתית ויעילות טיפולים.

מדידת קוטר כלי הדם ברשתית מתמונות אנגיוגרפיה פלואורסצנטית של עכבר

גלה סרטונים נוספים