Name: פקקת עורקים המושרה על ידי ברזל כלוריד ואיסוף דגימות לניתוח מיקרוסקופ אלקטרונים תלת ממדי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-03-17T13:45:00.000+00:00
Duration: 3 min 57 s
Description: למד שיטה ליצירת פקקת עורקים באמצעות ברזל כלוריד ואיסוף דגימות למיקרוסקופ אלקטרונים תלת ממדי. פרוטוקול זה מאפשר חקר מבני של גידול הקריש וארכיטקטורתו בשלבים שונים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מודים לחברי מעבדת לב לבן על העיון המדוקדק בכתב היד הזה. העבודה נתמכה על ידי מענקים מה-NIH, NHLBI (HL56652, HL138179 ו-HL150818), ופרס הצטיינות של המחלקה לענייני חיילים משוחררים ל-S.W.W., R01 HL 155519 ל-B.S., ומענק תוכנית NIBIB ל-R.D.L.

<ol><li>Lozano, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+and+regional+mortality+from+235+causes+of+death+for+20+age+groups+in+1990+and+2010%3A+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study+2010%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Global and regional mortality from 235 causes of death for 20 age groups in 1990 and 2010: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2010.</a> Lancet. 380 (9859), 2095-2128 (2012).</li>
<li>Raskob, G. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombosis%3A+a+major+contributor+to+global+disease+burden%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%2C+Thrombosis%2C+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">Thrombosis: a major contributor to global disease burden.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 34 (11), 2363-2371 (2014).</li>
<li>Walton, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lead+aspartate%2C+an+en+bloc+contrast+stain+particularly+useful+for+ultrastructural+enzymology%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Histochemistry+and+Cytochemistry%22%5BJournal%5D)">Lead aspartate, an en bloc contrast stain particularly useful for ultrastructural enzymology.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 27 (10), 1337-1342 (1979).</li>
<li>Palta, S., Saroa, R., Palta, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+the+coagulation+system%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+Journal+of+Anaesthesia%22%5BJournal%5D)">Overview of the coagulation system.</a> Indian Journal of Anaesthesia. 58 (5), 515-523 (2014).</li>
<li>Joshi, S., Whiteheart, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+nuts+and+bolts+of+the+platelet+release+reaction%5BTitle%5D)+AND+%22Platelets%22%5BJournal%5D)">The nuts and bolts of the platelet release reaction.</a> Platelets. 28 (2), 129-137 (2017).</li>
<li>Periayah, M. H., Halim, A. S., Mat Saad, A. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+action+of+platelets+and+crucial+blood+coagulation+pathways+in+hemostasis%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Hematology-Oncology+and+Stem+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Mechanism action of platelets and crucial blood coagulation pathways in hemostasis.</a> International Journal of Hematology-Oncology and Stem Cell Research. 11 (4), 319-327 (2017).</li>
<li>Alexopoulos, D., Katogiannis, K., Sfantou, D., Lekakis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combination+antiplatelet+treatment+in+coronary+artery+disease+patients%3A+A+necessary+evil+or+an+overzealous+practice%5BTitle%5D)+AND+%22Platelets%22%5BJournal%5D)">Combination antiplatelet treatment in coronary artery disease patients: A necessary evil or an overzealous practice.</a> Platelets. 29 (3), 228-237 (2018).</li>
<li>Kurz, K. D., Main, B. W., Sandusky, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+model+of+arterial+thrombosis+induced+by+ferric+chloride%5BTitle%5D)+AND+%22Thrombosis+Research%22%5BJournal%5D)">Rat model of arterial thrombosis induced by ferric chloride.</a> Thrombosis Research. 60 (4), 269-280 (1990).</li>
<li>Denis, C. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+standardization+of+in+vivo+thrombosis+studies+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thrombosis+and+Haemostasis%22%5BJournal%5D)">Towards standardization of in vivo thrombosis studies in mice.</a> Journal of Thrombosis and Haemostasis. 9 (8), 1641-1644 (2011).</li>
<li>Marsh Lyle, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+thrombin+inhibitor+efficacy+in+a+novel+rabbit+model+of+simultaneous+arterial+and+venous+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Thrombosis+and+Haemostasis%22%5BJournal%5D)">Assessment of thrombin inhibitor efficacy in a novel rabbit model of simultaneous arterial and venous thrombosis.</a> Thrombosis and Haemostasis. 79 (3), 656-662 (1998).</li>
<li>Kato, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+arterial+thrombosis+by+a+protease-activated+receptor+1+antagonist%2C+FR171113%2C+in+the+guinea+pig%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Inhibition of arterial thrombosis by a protease-activated receptor 1 antagonist, FR171113, in the guinea pig.</a> European Journal of Pharmacology. 473 (2-3), 163-169 (2003).</li>
<li>Huttinger, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ferric+chloride-induced+canine+carotid+artery+thrombosis%3A+a+large+animal+model+of+vascular+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Ferric chloride-induced canine carotid artery thrombosis: a large animal model of vascular injury.</a> Journal of Visualized Experiments. (139), e57981(2018).</li>
<li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antithrombotic+therapy+by+regulating+the+ROS-mediated+thrombosis+microenvironment+and+specific+nonpharmaceutical+thrombolysis+Using+Prussian+blue+nanodroplets%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Antithrombotic therapy by regulating the ROS-mediated thrombosis microenvironment and specific nonpharmaceutical thrombolysis Using Prussian blue nanodroplets.</a> Small. 18 (15), 2106252(2022).</li>
<li>Liu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+membrane+cloaked+nanotubes+to+accelerate+thrombolysis+by+thrombus+clot-targeting+and+penetration%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Platelet membrane cloaked nanotubes to accelerate thrombolysis by thrombus clot-targeting and penetration.</a> Small. , 2205260(2022).</li>
<li>Refaat, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near-infrared+light-responsive+liposomes+for+protein+delivery%3A+Towards+bleeding-free+photothermally-assisted+thrombolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Near-infrared light-responsive liposomes for protein delivery: Towards bleeding-free photothermally-assisted thrombolysis.</a> Journal of Controlled Release. 337, 212-223 (2021).</li>
<li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomimetic+nanoplatelets+to+target+delivery+hirudin+for+site-specific+photothermal%2Fphotodynamic+thrombolysis+and+preventing+venous+thrombus+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Biomimetic nanoplatelets to target delivery hirudin for site-specific photothermal/photodynamic thrombolysis and preventing venous thrombus formation.</a> Small. 18 (51), 2203184(2022).</li>
<li>Subramaniam, S., Kanse, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ferric+chloride-induced+arterial+thrombosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Mouse+Biology%22%5BJournal%5D)">Ferric chloride-induced arterial thrombosis in mice.</a> Current Protocols in Mouse Biology. 4 (4), 151-164 (2014).</li>
<li>Cocchiaro, J. L., Kumar, Y., Fischer, E. R., Hackstadt, T., Valdivia, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytoplasmic+lipid+droplets+are+translocated+into+the+lumen+of+the+Chlamydia+trachomatis+parasitophorous+vacuole%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Cytoplasmic lipid droplets are translocated into the lumen of the Chlamydia trachomatis parasitophorous vacuole.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105 (27), 9379-9384 (2008).</li>
<li>Kaplan, E. L., Meier, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonparametric-estimation+from+incomplete+observations%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Statistical+Association%22%5BJournal%5D)">Nonparametric-estimation from incomplete observations.</a> Journal of the American Statistical Association. 53 (282), 457-481 (1958).</li>
<li>Chauhan, A. K., Kisucka, J., Lamb, C. B., Bergmeier, W., Wagner, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((von+Willebrand+factor+and+factor+VIII+are+independently+required+to+form+stable+occlusive+thrombi+in+injured+veins%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">von Willebrand factor and factor VIII are independently required to form stable occlusive thrombi in injured veins.</a> Blood. 109 (6), 2424-2429 (2007).</li>
<li>Andre, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD40L+stabilizes+arterial+thrombi+by+a+beta3+integrin--dependent+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">CD40L stabilizes arterial thrombi by a beta3 integrin--dependent mechanism.</a> Nature Medicine. 8 (3), 247-252 (2002).</li>
<li>Ni, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistence+of+platelet+thrombus+formation+in+arterioles+of+mice+lacking+both+von+Willebrand+factor+and+fibrinogen%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Persistence of platelet thrombus formation in arterioles of mice lacking both von Willebrand factor and fibrinogen.</a> Journal of Clinical Investigation. 106 (3), 385-392 (2000).</li>
<li>Bergmeier, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+platelet+adhesion+receptor+GPIbalpha+far+exceeds+that+of+its+main+ligand%2C+von+Willebrand+factor%2C+in+arterial+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">The role of platelet adhesion receptor GPIbalpha far exceeds that of its main ligand, von Willebrand factor, in arterial thrombosis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 103 (45), 16900-16905 (2006).</li>
<li>Ciciliano, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resolving+the+multifaceted+mechanisms+of+the+ferric+chloride+thrombosis+model+using+an+interdisciplinary+microfluidic+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Resolving the multifaceted mechanisms of the ferric chloride thrombosis model using an interdisciplinary microfluidic approach.</a> Blood. 126 (6), 817-824 (2015).</li>
<li>Eckly, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+underlying+FeCl3-induced+arterial+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thrombosis+and+Haemostasis%22%5BJournal%5D)">Mechanisms underlying FeCl3-induced arterial thrombosis.</a> Journal of Thrombosis and Haemostasis. 9 (4), 779-789 (2011).</li>
<li>Woollard, K. J., Sturgeon, S., Chin-Dusting, J. P. F., Salem, H. H., Jackson, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Erythrocyte+hemolysis+and+hemoglobin+oxidation+promote+ferric+chloride-induced+vascular+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Erythrocyte hemolysis and hemoglobin oxidation promote ferric chloride-induced vascular injury.</a> Journal of Biological Chemistry. 284 (19), 13110-13118 (2009).</li>
<li>Shim, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+ferric+chloride-induced+arterial+thrombosis+model+of+mice+and+the+role+of+red+blood+cells+in+thrombosis+acceleration%5BTitle%5D)+AND+%22Yonsei+Medical+Journal%22%5BJournal%5D)">Characterization of ferric chloride-induced arterial thrombosis model of mice and the role of red blood cells in thrombosis acceleration.</a> Yonsei Medical Journal. 62 (11), 1032-1041 (2021).</li>
<li>Ghosh, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+prothrombotic+potential+of+four-factor+prothrombin+complex+concentrate+%284F-PCC%29+in+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the prothrombotic potential of four-factor prothrombin complex concentrate (4F-PCC) in animal models.</a> PLoS One. 16 (10), 0258192(2021).</li>
<li>Wilbs, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cyclic+peptide+FXII+inhibitor+provides+safe+anticoagulation+in+a+thrombosis+model+and+in+artificial+lungs%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Cyclic peptide FXII inhibitor provides safe anticoagulation in a thrombosis model and in artificial lungs.</a> Nature Communications. 11 (1), 3890(2020).</li>
<li>Wei, Y., Deng, X., Sheng, G., Guo, X. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rabbit+model+of+cerebral+venous+sinus+thrombosis+established+by+ferric+chloride+and+thrombin+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">A rabbit model of cerebral venous sinus thrombosis established by ferric chloride and thrombin injection.</a> Neuroscience Letters. 662, 205-212 (2018).</li>
<li>Jacob-Ferreira, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antithrombotic+activity+of+Batroxase%2C+a+metalloprotease+from+Bothrops+atrox+venom%2C+in+a+model+of+venous+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Biological+Macromolecules%22%5BJournal%5D)">Antithrombotic activity of Batroxase, a metalloprotease from Bothrops atrox venom, in a model of venous thrombosis.</a> International Journal of Biological Macromolecules. 95, 263-267 (2017).</li>
<li>Zhou, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rabbit+model+of+cerebral+microembolic+signals+for+translational+research%3A+preclinical+validation+for+aspirin+and+clopidogrel%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thrombosis+and+Haemostasis%22%5BJournal%5D)">A rabbit model of cerebral microembolic signals for translational research: preclinical validation for aspirin and clopidogrel.</a> Journal of Thrombosis and Haemostasis. 14 (9), 1855-1866 (2016).</li>
<li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+evodiamine+on+collagen-induced+platelet+activation+and+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">Effect of evodiamine on collagen-induced platelet activation and thrombosis.</a> BioMed Research International. 2022, 4893859(2022).</li>
<li>Li, W., McIntyre, T. M., Silverstein, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ferric+chloride-induced+murine+carotid+arterial+injury%3A+A+model+of+redox+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Redox+Biology%22%5BJournal%5D)">Ferric chloride-induced murine carotid arterial injury: A model of redox pathology.</a> Redox Biology. 1 (1), 50-55 (2013).</li>
<li>Li, W., Nieman, M., Sen Gupta, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ferric+chloride-induced+murine+thrombosis+models%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Ferric chloride-induced murine thrombosis models.</a> Journal of Visualized Experiments. (115), e54479(2016).</li>
<li>Holly, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ether+lipid+metabolism+by+AADACL1+regulates+platelet+function+and+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Advances%22%5BJournal%5D)">Ether lipid metabolism by AADACL1 regulates platelet function and thrombosis.</a> Blood Advances. 3 (22), 3818-3828 (2019).</li>
<li>Bird, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prediction+of+the+therapeutic+index+of+marketed+anti-coagulants+and+anti-platelet+agents+by+guinea+pig+models+of+thrombosis+and+hemostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Thrombosis+Research%22%5BJournal%5D)">Prediction of the therapeutic index of marketed anti-coagulants and anti-platelet agents by guinea pig models of thrombosis and hemostasis.</a> Thrombosis Research. 123 (1), 146-158 (2008).</li>
</ol>

למחברים אין ניגודי אינטרסים הקשורים למחקר זה.
פרופילי ORCID: S.J.: 0000-0001-6925-2116; ש.ו.ו: 00000-0001-5577-0473.

היישום המקומי של FeCl3 בכלי הדם כדי לגרום לפקקת הוא טכניקה נפוצה, והיא סייעה בקביעת תפקידים עבור קולטני טסיות שונים, מסלולי איתות ליגנד, ומעכביהם20,21,22,23. המנגנון שבאמצעותו FeCl3 גורם פקקת הוא רב פנים; בעבר, דנודציה של האנדותל נחשבה לגורם לפקקת, אולם בשנים האחרונות, דיווחים רבים הציעו את תפקידם של תאי הדם האדומים וחלבוני הפלזמה בתהליך זה24,25,26,27</su...

פקקת היא היווצרות של קריש דם שחוסם באופן חלקי או מלא כלי דם, ומעכב את הזרימה הטבעית של הדם. זה מוביל לאירועים קרדיווסקולריים חמורים וקטלניים, כגון מחלת לב איסכמית ושבץ. מחלות לב וכלי דם הן הגורם המוביל לתחלואה ולתמותה, וגורמות לאחד מכל ארבעה מקרי מוות ברחבי העולם 1,2,3. למרות פקקת מתבטאת כתפקוד לקוי של מערכת כלי הדם, זה יכול להיות תוצאה של זיהום מיקרוביאלי או ויראלי הבסיסי, הפרעה חיסונית, ממאירות, או מצב מטבולי. זרימת הדם נשמרת על ידי אינטראקציה מורכבת בין מרכיבים שונים של מערכת כלי הדם, כולל תאי אנדותל, תאי דם אדומים/לבנים, טסיות דם וגורמי קרישה4. במקרה של פגיעה בכלי הדם, טסיות הדם מתקשרות עם חלבוני הדבק על המטריצה התת-אנדותלית ומשחררות את תכולתן הגרגירית, אשר מגייסת יותר טסיות5. במקביל, מפל הקרישה מופעל, המוביל להיווצרות פיברין ותצהירו. בסופו של דבר, נוצר קריש דם, המכיל טסיות דם ותאי דם אדומים הכלואים בתוך רשת פיברין6. למרות שתרופות נוגדות טסיות ונוגדות קרישה זמינות כדי לווסת פקקת, דימום מזויף נותר דאגה מרכזית בטיפולים אלה, הדורשים כוונון עדין של המינונים והשילובים של תרופות אלה. לכן, יש עדיין צורך דחוף לגלות תרופות אנטי טרומבוטיות חדשות7.
פקקת נחקרת במספר שיטות לגרימת פגיעה בכלי הדם: מכנית (קשירת כלי דם), תרמית (פגיעה בלייזר) ופגיעה כימית (FeCl3/Rose Bengal application). אופי הפקקת משתנה בהתאם למיקום (עורקי לעומת ורידי), שיטה או היקף הפגיעה. בין כל הסוגים הללו, FeCl 3-induced vascular injury היא השיטה הנפוצה ביותר. הוא שימש בעכברים, חולדות, ארנבות, שרקנים וכלבים 8,9,10,11,12. השיטה פשוטה יחסית, קלה לשימוש, ואם הפרמטרים העיקריים מתוקננים, היא רגישה וניתנת לשחזור במערכות כלי דם שונות (למשל, עורקים [קרוטיד ועצם הירך], ורידים [jugular] ועורקים [cremaster ו mesenteric]) (טבלה משלימה 1).
מודל זה יכול לשמש גם כדי לקדם את הבנתנו את המכניקה והמורפולוגיה של היווצרות קרישי דם. טכניקה זו מציעה באופן ייחודי את היתרון של עצירת פקקת בנקודות קצב זרימה שונות, כדי ללמוד את שלבי הביניים של התהליך לפני שהוא הופך להיות חוסם. ההתקדמות האחרונה במחקר פקקת השתמשה במודל זה כדי למקד את תשומת הלב בשיטות לא פרמקולוגיות של טרומבוליזה13 או משלוח לא פולשני של חומרים אנטי טרומבוטיים ו / או פיברינוליטיים14,15. מספר קבוצות הראו כי כאשר קרומי טסיות הדם מצופות בטיפולים אלה, ניתן להפעיל את התרופות בגירוי תרמי כדי להתמקד בקרישי דם16. הטכניקות המתוארות כאן יכולות להיות שימושיות למחקרים כגון אימות ממצאיהם ברמת טסיות הדם היחידה. בכתב יד זה, פרוטוקול 1 מתאר את ההליך הבסיסי של פגיעה בכלי דם בתיווך FeCl3, ואילו פרוטוקול 2 מתאר את השיטה לאסוף ולתקן את דגימת הפגיעה בכלי הדם לניתוח נוסף במיקרוסקופ אלקטרונים.

<table><tbody><tr><td>0.9% מי מלח&nbsp;</td><td>פישר סיינטיפיק&nbsp;</td><td>BP358-212</td><td>NaCl משמש לייצור תמיסה של 0.9% מי מלח&nbsp;</td></tr><tr><td>מזרק 1 מ"ל&nbsp;</td><td>בקטון, דיקינסון ושות'&nbsp;</td><td></td><td></td>309659</tr><tr><td>190 אתנול הוכחה&nbsp;</td><td>קופטק</td><td>V1101&nbsp;</td><td>משמש להכנת תמיסת אתנול 70% לשימוש להכנת העכבר לניתוח&nbsp;</td></tr><tr><td>2,2,2 Tribromoethanol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>48402</td><td></td></tr><tr><td>תפר משי קלוע שחור 25 יארד (5-0)</td><td>DEKNATEL</td><td>136082-1204</td><td></td></tr><tr><td>26G x 3/8 מחט&nbsp;</td><td>בקטון, דיקינסון ושות'&nbsp;</td><td>305110</td><td></td></tr><tr><td>2-מתיל-2-בוטנול</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>240486</td><td></td></tr><tr><td>פיפט העברה של 7.5 מ"ל, בוגר ל-3 מ"ל</td><td>גלובוס סיינטיפיק בע"מ.</td><td>135010</td><td></td></tr><tr><td>רפידות הכנה לאלכוהול (70% אלכוהול איזופרופיל</td>)<td>מדליין</td><td>MDS090735</td><td></td></tr><tr><td>Araldite GY 502&nbsp;</td><td>שירותי מיקרוסקופיה אלקטרונית&nbsp;</td><td>10900</td><td></td></tr><tr><td>צלחת תרבית תאים 35 מ"מ X 10 מ"מ&nbsp;</td><td>קורנינג אינקורפורייטד&nbsp;</td><td></td><td></td>430165</tr><tr><td>משקל קומפקטי&nbsp;</td><td>המדע של וורד&nbsp;</td><td>470314-390</td><td></td></tr><tr>מספריים לניתוח, <td>מכשיר דיוק עולמי</td><td>באורך 12.5 ס"מ</td><td>15922-G</td><td></td></tr><tr><td>DMP-30 מפעיל&nbsp;</td><td>שירותי מיקרוסקופיה אלקטרונית&nbsp;</td><td>13600</td><td></td></tr><tr><td>דודניל סוקסיניק אנהידריד / שירותי</td><td>מיקרוסקופיה אלקטרונית DDSA&nbsp;</td><td>13700</td><td></td></tr><tr><td>שקיות קקי כלבים/שקית סילוק פגר בעלי חיים</td><td>מוצרי כתר&nbsp;</td><td>PP-RB-200</td><td></td></tr><tr><td>דופלר FlowProbe</td><td>Transonic Systems Inc.</td><td>MA0.5PSB</td><td></td></tr><tr><td>EMBED 812 שרף&nbsp;</td><td>שירותי מיקרוסקופיה אלקטרונית&nbsp;</td><td>14900</td><td></td></tr><tr><td>אלכוהול אתילי, נטול מים 200 הוכחה&nbsp;</td><td>שירותי מיקרוסקופיה אלקטרונית&nbsp;</td><td>15055</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים להלבשת עיניים, 4 אינץ' מעוקל מלא, סטנדרטי, 0.8 מ"מ טיפים רחבים</td><td>Integra Miltex</td><td>18-784</td><td></td></tr><tr><td>נייר סינון&nbsp;</td><td>VWR</td><td>28310-106</td><td></td></tr><tr><td>מספריים עדינים - כלים מדעיים עדינים חדים-בוטים</td><td>&nbsp;</td><td>14028-10</td><td></td></tr><tr><td>אגרוף אוזניים לולאת אצבע&nbsp;</td><td>כלים מדעיים&nbsp;</td><td>24212-01</td><td></td></tr><tr><td>ספוגי גזה 2 "x 2" &ndash; 12 שכבות&nbsp;</td><td>Dukal Corporation</td><td>2128</td><td></td></tr><tr><td>Glutaraldehyde (תמיסה 10%)</td><td>שירותי מיקרוסקופיה אלקטרונית&nbsp;</td><td>16120</td><td></td></tr><tr><td>Integra Miltex פלדת פחמן להב כירורגי #10</td><td>Integra&reg; Miltex&reg;</td><td>4110</td><td></td></tr><tr><td>ברזל (III) כלוריד&nbsp;</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>157740-100G</td><td></td></tr><tr><td>ידית סכין Miltex&reg; פלדת אל-חלד עדינה במיוחד מידה 3</td><td>Integra Lifesciences&nbsp;</td><td>157510</td><td></td></tr><tr><td>חומצה L-אספרטית</td><td>סיגמא&nbsp; פישר</td><td>&nbsp; A93100</td><td></td></tr><tr><td>חומצה L-אספרטית</td><td>פישר סיינטיפיק&nbsp;</td><td>BP374-100</td><td></td></tr><tr><td>עופרת חנקתית&nbsp;</td><td>פישר סיינטיפיק&nbsp;</td><td>מיקרוסקופ L-62</td><td></td></tr><tr><td>LEICA S8AP0</td><td>LEICA</td><td>אינו זמין עוד</td><td>לא זמין עוד מחברת</td></tr><tr><td>LEICA S8AP0 מעמד מיקרוסקופ&nbsp;</td><td>LEICA</td><td>10447255</td><td>כבר לא זמין מהחברה</td></tr><tr><td>מגבי טישו קלים&nbsp;</td><td>VWR</td><td>82003-822</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים מיקרו ניתוח; שיניים 1x2, עקומה מלאה; רוחב קצה 0.8 מ"מ; חברת</td><td>מכשירים כירורגיים באורך</td> 4 אינץ' <td>RS-5157</td><td></td></tr><tr><td>אוסמיום טטרוקסיד 4% תמיסה מימית&nbsp;</td><td>שירותי מיקרוסקופיה אלקטרונית&nbsp;</td><td>19150</td><td></td></tr><tr><td>פרפורמלדהיד (תמיסה של 16%)</td> <td>שירותי מיקרוסקופיה אלקטרונית&nbsp;</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>אשלגן פריציאניד</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>P-8131</td><td></td></tr><tr><td>תחמוצת פרופילן, מגיב ACS&nbsp;</td><td>שירותי מיקרוסקופיה אלקטרונית&nbsp;</td><td>20401</td><td></td></tr><tr><td>Rainin Classic Pipette PR-10</td><td>Rainin</td><td>17008649</td><td></td></tr><tr><td>מד זרימה למחקר&nbsp;</td><td>טרנסוניק סיסטמס בע"מ</td><td>דגם T402B01481</td><td>: T402</td></tr><tr><td>סקוטש מג'יק בלתי נראה, 3/4 אינץ' x 1000 אינץ',</td><td>סקוטש שקוף&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>305289 כרית מחוממת לבעלי חיים קטנים</td><td>K& H ייצור בע"מ</td><td>דגם: HM10</td><td></td></tr><tr><td>מאגר נתרן קקודילאט 0.2M, שירותי</td><td>מיקרוסקופיה אלקטרונית</td> pH7.4&nbsp;<td>11623</td><td></td></tr><tr><td>אפליקטורים סטריליים עם קצה כותנה&nbsp;</td><td>מוצרים רפואיים פוריטניים&nbsp;</td><td>25-806 1WC</td><td></td></tr><tr><td>Steromaster Illuminator&nbsp;</td><td>פישר סיינטיפיק&nbsp;</td><td>12-562-21</td><td>כבר לא זמין מחברת</td></tr><tr><td>Surgical Dumont #7 מלקחיים&nbsp;</td><td>כלים מדעיים&nbsp;</td><td>11271-30</td><td></td></tr><tr><td>Thiocarbohydrazide (TCH)</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>88535</td><td></td></tr><tr><td>טעינה מחדש של קצה פיפטה אוניברסלי עם שמירה נמוכה (0.1-10 ומיקרו; L)</td> <td>VWR</td><td>76323-394</td><td></td></tr><tr><td>שירותי מיקרוסקופיה אלקטרונית</td> <td>אורניל אצטט&</td>nbsp;<td>22400</td><td></td></tr><tr><td>Veet ג'ל קרם מסיר שיער</td><td>Reckitt Benckiser</td><td>3116875</td><td></td></tr><tr><td>לבן אנטי סטטי משושה שוקל, בינוני, 64 x 15 x 19 מ"מ</td><td>פישר סיינטיפיק&nbsp;</td><td>תוכנת S38975</td><td></td></tr><tr><td>WinDAQ/100 עבור Windows</td><td>DATAQ Instruments, Inc.</td><td>גרסה 3.38</td><td>זמינה להורדה בחינם. https://www.dataq.com/products/windaq/</td></tr> <tr><td>ZEISS AxioCam ICC 1</td><td>ZEISS</td><td>57615</td><td></td></tr></tbody></table>

פקקת עורקים המושרה על ידי ברזל כלוריד ואיסוף דגימות לניתוח מיקרוסקופ אלקטרונים תלת ממדי

Ferric Chloride-Induced Arterial Thrombosis and Sample Collection for 3D Electron Microscopy Analysis

מחלות לב וכלי דם הן גורם מוביל לתמותה ותחלואה ברחבי העולם. פקקת חריגה היא תכונה נפוצה של מצבים סיסטמיים כמו סוכרת והשמנת יתר, ומחלות דלקתיות כרוניות כמו טרשת עורקים, סרטן ומחלות אוטואימוניות. בעת פגיעה בכלי הדם, בדרך כלל מערכת הקרישה, טסיות הדם והאנדותל פועלים באופן מתוזמר למניעת דימום על ידי יצירת קריש במקום הפגיעה. הפרעות בתהליך זה מובילות לדימום מוגזם או פקקת בלתי מבוקרת / פעילות אנטי-טרומבוטית לא מספקת, המתורגמת לחסימת כלי דם ולהמשך שלה. מודל פציעת התרדמה המושרה על ידי FeCl3 הוא כלי רב ערך בחקירת האופן שבו פקקת מתחילה ומתקדמת in vivo. מודל זה כולל נזק/דנודציה של אנדותל והיווצרות קריש דם לאחר מכן באתר הפגוע. הוא מספק בדיקה כמותית רגישה ביותר לניטור נזק לכלי דם והיווצרות קריש דם בתגובה לדרגות שונות של נזק לכלי הדם. לאחר אופטימיזציה של טכניקה סטנדרטית זו, ניתן להשתמש בה כדי לחקור את המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס פקקת, כמו גם את השינויים האולטרה-מבניים בטסיות הדם בפקקת הולכת וגדלה. בדיקה זו שימושית גם כדי ללמוד את היעילות של סוכני antithrombotic ו antiplatelet. מאמר זה מסביר כיצד ליזום ולנטר פקקת עורקים FeCl3 וכיצד לאסוף דגימות לניתוח במיקרוסקופ אלקטרונים.

הנתונים מוצגים בדרך כלל כזמן לחסימה, או הזמן הדרוש ליצירת פקקת חסימה מלאה. ניתן לשרטט את הנתונים האלה כעקומת הישרדות קפלן-מאייר (איור 4A)19, תרשים נקודתי עם עמודות המראות את זרימת הדם הסופית בזמן הפסקת זרימת הדם או סיום ניסוי (איור 4B), או כגרף קווי (איור 4C). יציבות פקקת ניתן ללמוד באמצעות טכניקה זו. ברוב המקרים, עם פציעת FeCl3, פקקת נוצרת בהדרגה, וככל שהיא גדלה, זרימת הדם פוחתת בהדרגה, ומגיעה לאפ...

הפרוטוקול הנוכחי מתאר כיצד להשתמש בפציעה בתיווך FeCl3 כדי לגרום לפקקת עורקים, וכיצד לאסוף ולהכין דגימות פגיעה עורקית בשלבים שונים של פקקת לצורך ניתוח מיקרוסקופ אלקטרונים.

Cardiovascular diseases are a leading cause of mortality and morbidity worldwide. Aberrant thrombosis is a common feature of systemic conditions like ...

בשיטה זו ניתן לקבוע אילו מרכיבים של טסיות הדם והמערכת ההמוסטטית חשובים לפקקת. בנוסף, שיטה זו יכולה לקבוע כיצד צמיחת פקקת וארכיטקטורה מושפעים ברמה התאית. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מאפשרת דרך לשחזור ללמוד שלבים רבים של פקקת ברמה המבנית.אדם חדש בטכניקה זו צריך להימנע מטיפול יתר ברקמה באזור הניתוח. זה יכול להוביל לדימום והוא יכול לסבך יתר על המידה את זיהוי עורק התרדמה. יש להתחיל לסמן את מקום הפגיעה לאחר חשיפת עורק התרדמה על ידי הקפת האזור באופן רופף בין שני חוטים כירורגיים בגודל 0.1 מילימטר.הניחו את הבדיקה מתחת לעורק הדיסטלי מהחוט התחתון. הכנס את חתיכת הפלסטיק מתחת לעורק בין שני החוטים כדי לסמן את האתר לפגיעה בברזל כלורי. בצע מדידות זרימה לפני ביצוע פציעה כדי לציין את הזרימה הבסיסית.בצע את הפציעה על ידי הנחת נייר סינון ספוג ברזל כלורי על העורק במשך שלוש דקות. הסר את נייר הסינון לאחר שלוש דקות כדי למנוע את ההיקף המשתנה של הפציעה ולהקל על ספירת הזרימה על ידי הבדיקה. יש להוסיף מי מלח במקום הפציעה כדי להסיר עודפי ברזל כלורי.עקוב אחר קריאת הזרימה. כאשר הזרימה יורדת מתחת ל-50% מהערך ההתחלתי, הסר את הבדיקה. יבשו במהירות את האזור והוסיפו את הקיבוע כדי לתקן את אזור הפציעה חיצונית.לאחר מכן, מיד להחזיק את העורק ליד אזור הפציעה עם מלקחיים. חותכים במורד הזרם של החוט התחתון ובמעלה הזרם של החוט העליון. שים את הרקמה על צלחת תרבית רקמת פלסטיק באותו כיוון כפי שהוא נאסף ולהוסיף כמה טיפות של קיבוע.בעזרת אזמל, נקו את הרקמה הנוספת סביב העורק. הקפד לרשום את כיוון זרימת הדם על ידי חיתוך קצה אחד אופקי והשני מתחדד או אלכסוני. הניחו את הדגימה בקיבוע למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר, ולאחר מכן אחסנו את הדגימה ב-1% פרפורמלדהיד בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס עד לשליחתה בקרח רטוב לניתוח מיקרוסקופ אלקטרונים.הנתונים שורטטו כעקומת הישרדות קפלן-מאייר, תרשים נקודתי עם עמודות המראות את זרימת הדם הסופית בזמן הפסקת זרימת הדם או סיום ניסוי, או כגרף קווי. זרימת הדם התגברה באופן פתאומי בחלק מהמקרים בעקבות ירידה הדרגתית למשך מספר דקות המעידה על נשירה חלקית של פקקת הגידול ונחשבה לאירוע אמבוליזציה. מורפולוגיה של פקקת חסימה נחקרה גם בשיטה זו.איסוף מהיר של הדגימה במהלך תהליך פקקת הוא השלב החשוב ביותר שכן עיכוב בתהליך זה עלול להוביל לפרשנות שגויה של הניתוח המבני שלנו.

ferric-chloride-induced-arterial-thrombosis-sample-collection-for-3d

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

מודל הפקקת המושרה FeCl3 בעכברים מתואר כאן. מוצגת שיטה לניטור צמיחת פקקת על ידי תצפית מיקרוסקופיה תוך-חיונית על כלי מזנטרי ועל ידי מדידת זרימת דם בעורק הצוואר.

פקקת עכבר דגם על עורק ראשי וכלי לפדר מושרה כלוריד Ferric

המטרות שלנו היו לעצב, לייצר ולבדוק סטנטים פרומגנטי ללכידת תא האנדותל. עשרה סטנטים נבדקו לשברים ועוד 10 סטנטים נבדקו למגנטיות עודפים. לבסוף, 10 סטנטים נבדקו ב- מבחנה ו8 יותר סטנטים הושתלו ב -4 חזירים להראות ללכוד תאים ושמירה.

Bare Metal פרומגנטי סטנט ללכיד תא האנדותל ושייר

פרוטוקול זה מתאר את היישום של ניאון בשילוב האינפרה-אדום הקרוב (NIRF) הדמיה וטומוגרפיה-מחושב מיקרו (microCT) המאפשר הדמיה thromboemboli מוחין. טכניקה זו מאפשרת כימות של נטל פקיק ואבולוציה. טכניקת דימות NIRF מדמיינת שכותרתו fluorescently פקיק במוח הניכר, ואילו טכניקת microCT מדמיינת פקיק בתוך חיות בעלות באמצעות-חלקיקי זהב.

משולב האינפרה-אדום הקרוב הדמיה פלורסנט וטומוגרפיה-מחושב מיקרו ישירות חזותי מוחין Thromboemboli

אנו מדווחים הליך מעודן של כלוריד Ferric (FeCl 3) מודלים פקקת -induced על העורק הראשי ואת mesenteric וכן וריד, מאופיין באמצעות מיקרוסקופ intravital ביעילות לפקח הזמן Occlusive היווצרות thrombi.

מי כלוריד-induced Ferric מודלים פקקת Murine

כאן, אנו מציגים את השינויים הנחוצים למודל מאופיין היטב ונמצאים בשימוש נפוץ קטנים בעלי חיים הברזל ותחמוצת כלוריד-induced (FeCl3) העורק פציעה לשימוש במודל גדול פגיעה בכלי הדם בבעלי חיים. המודל המתקבל יכול להיות מנוצל עבור ניסויים פרה-קליניים משפט הערכה של התערבויות תרופתי ועל מכניים מניעתי והן thrombolytic.

פקקת הברזל ותחמוצת כלוריד-induced הכלבי העורק הראשי: דגם בעל חיים גדול של פגיעה בכלי הדם

להלן מוצגות שתי שיטות שבהן ניתן להשתמש בנפרד או במשולב כדי לנתח את השפעת בטא עמילואיד על מבנה קריש פיברין. כלול הוא פרוטוקול עבור יצירה של במבחנה clot פיברין, ואחריו קריש עכירות ואלקטרון סריקה שיטות.

ניתוח של β-עמילואיד-induced הפרעות על מבנה קריש פיברין על ידי ספקטרוסקופיה וסריקת מיקרוסקופ אלקטרונים

מחקר זה מתאר שיטה מהירה ויעילה לניתוח מרכיבי התא של קרישי דם מוחיים באמצעות המסת קרישי דם, צביעת תאים ובדיקת דם שגרתית.

גישה מקיפה לניתוח מרכיבי התא של קרישי דם מוחיים

הליך פצע ניקוב להיווצרות פקקת המוסטטית מוצג כאן. הטרומבי שנוצר גדול וקוטרו מאות מיקרונים. לפיכך, גישות הדמיית נפח מתאימות. אנו מציעים מונטאז' מיקרוסקופ אלקטרונים רחב שטח שידור כגישה ברזולוציה גבוהה הזמינה לרבים ומפרטים פרוטוקול הכנה.

מוסטזיס פצע ניקוב והכנת דגימות לניתוח מיקרוסקופ אלקטרונים רחב שטח מונטאז'

מחקר זה מציג פרוטוקול לקביעת מודל עכברוש שכפול וזעיר פולשני של קרישת סינוס סגיטלית עליונה שנגרמה על ידי כלוריד ברזל, תוך שימוש בשיטת תפר משי בשילוב עם הדמיית ניגודיות בלייזר ואולטרסאונד ברזולוציה גבוהה להערכה.

הקמת טרומבוזיס סינוס קשת עליון המושר על ידי כלוריד ברזל מותאם

אנו מתארים הליכים לכימות ואפיון נגעים טרשת עורקים במודלים של עכברים באמצעות חתך מדויק של סינוס אבי העורקים ואבי העורקים העולה בשילוב עם ניתוח היסטוכימי ואימונוהיסטוכימי.

ניתוח כמותי ואפיון של נגעים טרשת עורקים בסינוס אבי העורקים של העכברים

למד שיטה ליצירת פקקת עורקים באמצעות ברזל כלוריד ואיסוף דגימות למיקרוסקופ אלקטרונים תלת ממדי. פרוטוקול זה מאפשר חקר מבני של גידול הקריש וארכיטקטורתו בשלבים שונים.

פקקת עורקים המושרה על ידי ברזל כלוריד ואיסוף דגימות לניתוח מיקרוסקופ אלקטרונים תלת ממדי

גלה סרטונים נוספים