Name: אבלציה של דיבור עיניים להגברת התבגרות השחלות בסרטני בוץ (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-03-31T13:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 28 s
Description: למדו את שיטת האבלציה של דיבור עיניים בסרטני בוץ לשיפור התבגרות השחלות. טכניקות הלחימה והניתוח מגבירות משמעותית את קצב הבשלת הביציות תוך שמירה על שרידות הגביות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה נתמך על ידי משרד החינוך, מלזיה, במסגרת תוכנית מרכז המצוינות של המוסד הגבוה (HICoE), מלזיה, מוכר למכון לחקלאות ימית טרופית ודיג, אוניברסיטת מלזיה טרנגאנו (הצבעה מס '63933 והצבעה מס '56048). אנו מכירים בתמיכתם של Universiti Malaysia Terengganu ו- Sayap Jaya Sdn. Bhd. באמצעות מענק המחקר לשותפות פרטית (הצבעה מס '55377). כמו כן מוכרת משרת עמית אקדמי נספח מאוניברסיטת סאיינס מלזיה לח'ור וואיהו וחנפיה פאז'אן.

פרוטוקול זה עוקב אחר קוד העיסוק המלזי לטיפול ושימוש בבעלי חיים למטרות מדעיות שנקבע על ידי האגודה למדעי חיות מעבדה של מלזיה. הקרבת דגימות הניסוי נעשתה על פי מדריך המכונים הלאומיים לבריאות לטיפול ושימוש בחיות מעבדה (פרסומי NIH מס '8023, מתוקן 1978). סרטני בוץ נקביים פגים מינית (סרטן בוץ כתום S. olivacea) נאספו מהשוק המקומי (5°66′62′′N, 102°72′33′′E) בביצות סטיו במלזיה. מין סרטני הבוץ זוהה על סמך מאפיינים מורפולוגיים1.
1. איסוף דגימות וחיטוי
<ol><li>אספו סרטני בוץ בריאים, פעילים ופגים (איור 1). הערה: לנקבות סרטנים פגות יש דשי בטן משולשים ובהירים יחד עם טווח CW של 80-85 מ"מ.</li>
	<li>שטפו את הסרטנים במי ברז עם כלור (מים מתוקים) כדי להסיר פסולת וטפילים אוסמופיליים.</li>
	<li>משרים את הסרטנים בפורמלדהיד של 150 ppm עם מליחות של 20 ppt למשך 30 דקות.</li>
	<li>יש לשמור על אוורור רציף ועדין עם אבני אוויר במהלך הטיפול בפורמלדהיד. מקור האוורור יכול להיות מקו אוורור מרכזי או משאבת אוורור אקווריום.</li>
	<li>שטפו את הסרטנים במי ים זורמים כדי להסיר שאריות פורמלדהיד.</li>
</ol><img alt="השוואה מורפולוגית של סרטנים בוגרים לעומת נקבות בוגרות; התייחסות לסולם הגודל כלולה; ביולוגיה ימית." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65039/65039fig01.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> איור 1: מורפולוגיה בטנית של נקבות סרטני בוץ המשמשת לזיהוי שלבי ההתבגרות המינית. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65039/65039fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
2. התאקלמות
<ol><li>מעבירים כל נקבה שעברה חיטוי למיכל עגול נפרד בנפח 32 ליטר.</li>
	<li>מגדלים את הנקבות במשך 3 ימים במליחות של 20 ppt וממשיכות להאכיל פעמיים ביום (בוקר 09:00 בבוקר וערב 20:00) עם דגי ים קצוצים בכ-4%-5% ממשקל הגוף של הסרטנים.</li>
	<li>הסר מזון עודף ולא נאכל על ידי siphoning לפני האכלת הבוקר.</li>
	<li>החליפו 10% ממי הים המגדלים סרטנים (20 ppt) מדי יום.</li>
</ol>3. השראת התכה לבגרות מינית
<ol><li>חותכים את כל הרגליים למעט רגלי השחייה באמצעות מספריים מעוקרים.<ol><li>תפסו את הסרטן עם רשת סקופ, והחזיקו את הסרטן בזהירות. חותכים תחילה את שתי הרגליים ההולכות במפרק השני באמצעות מספריים. הסרטן יבצע אוטוטומיזציה אוטומטית של התוספתן הפגוע. הרדמה אינה נדרשת עבור אוטוטומיה של הגפיים.</li>
	</ol></li>
	<li>לשטוף את הסרטן במים מתוקים מיד לאחר אוטוטומיה הגפיים.</li>
	<li>מעבירים בנפרד את הסרטנים האוטוטומיים לגפיים לסלי פלסטיק מחוררים (רוחב 28 ס"מ x 22 ס"מ רוחב x 7 ס"מ גובה), ומניחים אותם במיכל פיברגלס (אורך 305 ס"מ x רוחב 120 ס"מ x גובה 60 ס"מ). הערה: ניתן לקשור ולחתוך שני סלים זה לזה. הסל העליון משמש ככיסוי כך שהסרטן לא יכול לברוח מהסל.</li>
	<li>השתמש במערכת חקלאות ימית מחזורית (RAS) עם מליחות של 20 ppt ועומק מים של לפחות 10 ס"מ כדי להבטיח שכל סל הפלסטיק שקוע.</li>
	<li>המשיכו להאכיל את נקבת הסרטן בדג ימי קצוץ פעמיים ביום ב-5%-7% ממשקל גופו של הסרטן.</li>
	<li>מגדלים את הסרטנים עד לבגרות מינית באמצעות התכה (35 יום). הערה: ניתן לדלג על התכה מושרית לצורך הבשלה מסחרית של השחלות וייצור זרעים עם נקבות סרטני בוץ בוגרות בטבע. נקבות בוגרות שנקטפו מהטבע חייבות להתאקלם ולהיות חשופות ישירות להלם קר ולהלציה של דיבור עיניים לאחר מכן.</li>
</ol>4. הרדמה
<ol><li>בחרו נקבות בוגרות מינית עם דש בטן בצורת אליפסה בצבע כהה עם CW &gt;86 מ"מ (איור 1).</li>
	<li>תפסו את הסרטנים עם רשת סקופ, ושמרו אותם בנפרד באקווריומים קטנים להרדמה.</li>
	<li>לאחר 5 דקות של תקופת התאקלמות, הוסף 2-פנוקסיאתנול (2-PE) ב 2 מ"ל / ליטר לכל אקווריום ולאפשר 15 דקות של טיפול הרדמה.</li>
	<li>ודא שהסרטנים מורדמים לחלוטין על ידי חוסר תנועה ספונטנית.</li>
</ol>5. אבלציה של דיבור עיניים
<ol><li>טכניקת צריבה<ol><li>בצע את כל ההליכים על גבי שולחן ובשטח פתוח.</li>
		<li>קחו מוט מתכת מפלדת ניקל עם ראש שטוח (למשל, מברג) עם ידית עץ או פלסטיק, וכסו את הידית במגבת כותנה רטובה.</li>
		<li>לעקר שני מלקחיים כירורגיים מנירוסטה באוטוקלאב.</li>
		<li>הכינו אתנול 70% בבקבוק תרסיס והרחיקו אותו מכל מקור הקשור לאש, כגון לפיד ניפוח ומברג חם אדום. הכינו נייר טישו לשימוש. הערה: אתנול דליק מאוד. יש לשמור על מרחק בטוח ממקורות האש.</li>
		<li>חבר פנס נשיפה לבלון גז (בוטאן) בצורה מאובטחת. התראה: בצע את ההוראות המופיעות על לפיד הנשיפה ובלון הגז. ודא כי הלפיד כבוי בעת חיבור עם בלון הגז. קרא ופעל לפי כל אמצעי בטיחות האש המוזכרים על בלון הגז.</li>
		<li>לבשו כפפות כותנה עבות כדי למנוע פציעה מחפצים חמים.</li>
		<li>יש להכפיף את קצה מוט המתכת לאש הלפיד עד שמוט המתכת יהיה אדום בוהק.</li>
		<li>מכסים את הסרטן המורדם במגבת כותנה רטובה. הערה: כסו את האנטנות של הסרטן כדי למנוע נזק מיותר.</li>
		<li>החזיקו עין אחת של הסרטן במלקחיים מעוקרות. הערה: יש לעקר את המלקחיים באוטוקלאבה לשימוש ראשון, ולחטא באמצעות 70% אתנול לשימוש עתידי על סרטנים אחרים.</li>
		<li>החזיקו את קצה המתכת האדום-חם על עין הסרטן ולחצו מעט במשך כ-10-15 שניות עד שצבע העיניים יהפוך לכתום או אדמדם-כתום. היזהר בעת ביצוע צעד זה כדי למנוע נזק למבנים סמוכים. הערה: שני אנשים נדרשים לבצע אבלציה של דיבור עיניים בשיטת הצריבה: אחד להחזיק את הסרטן והשני לבצע את הליך האבלציה.</li>
		<li>יש לחטא את המלקחיים בתרסיס אתנול 70% כדי להבטיח שאין זיהום צולב בין סרטנים. הערה: בצע שלב זה רק לפחות 5 דקות לאחר הליך אבלציה של דיבור עיניים כדי להבטיח קירור המלקחיים לפני החיטוי באמצעות אתנול 70% כדי למנוע סיכוני אש פוטנציאליים.</li>
		<li>לאחר ביצוע אבלציה של דיבור העיניים על כל הסרטנים, טבלו את מוט המתכת החם מפלדת ניקל (מברג) במי ברז.</li>
		<li>יש לחטא את המגבת לפני שימוש חוזר. ניתן להשתמש במספר מגבות כדי לחסוך זמן. הערה: שטפו את המגבת במי ברז וטבלו אותה במי כלור של 30 ppm למשך 5 דקות. לאחר מכן, שטפו שוב את המגבת במי ברז וטבלו אותה בתמיסת נתרן תיוסולפט 1 גרם / ליטר.</li>
		<li>יש לשמור את הפנס במקום בטוח לאחר כיבויו, ולהמתין עד שהוא יחזור לטמפרטורת הסביבה (כ-30 דקות) לפני הניתוק.</li>
	</ol></li>
	<li>טכניקת ניתוח<ol><li>בצע את ההליך באזור מאוורר היטב.</li>
		<li>לעקר שני מספריים כירורגיים ומלקחיים באוטוקלאב.</li>
		<li>יוצקים 50 מ"ל של 70% אתנול לתוך זכוכית 100 מ"ל.</li>
		<li>יש ללבוש כפפות כותנה עבות.</li>
		<li>החזיקו את הסרטן המורדם, וכסו אותו במגבת כותנה רטובה.</li>
		<li>החזיקו עין אחת של הסרטן במלקחיים מעוקרות.</li>
		<li>חתכו במהירות את העיניים באמצעות מספריים כירורגיים מעוקרים. הערה: המולימפה עלולה ללכת לאיבוד מהחלק הפצוע של הסרטן.</li>
		<li>טובלים את המספריים והמלקחיים באתנול 70% לאחר כל שימוש, ומייבשים אותם באמצעות נייר טישו לפני שימוש חוזר.</li>
	</ol></li>
</ol>6. טיפול לאחר הרדמה
<ol><li>הכינו מי ים מסוננים של 20 ppt, ושמרו במיכל עילי עם אוורור רציף.</li>
	<li>חבר צינור גמיש עם המיכל העילי לזרימת מים כבידתית.</li>
	<li>מיד לאחר אבלציה של דיבור עיניים, הכניסו את הסרטן לסלסלה, וחשפו את הסרטן למי ים זורמים (טמפרטורת הסביבה: 28 מעלות צלזיוס) מהמיכל שמעליו.</li>
	<li>שמרו על זרימת מי הים, ועקבו אחר הסרטן עד שהוא יכול לנוע באופן ספונטני, מה שמעיד על התאוששות מההרדמה. הערה: ניתן להכין מי ים במיכל קרקע, וניתן להשתמש במשאבת מים טבולים לזרימת המים.</li>
	<li>שמור את הסרטנים בנפרד במי ים של 20 ppt עם אוורור באקווריום למשך 30 דקות לתצפית נוספת. הערה: הסרטנים שהתאוששו יתרבו בנפרד בתהליך תרבית הברודסטוק הבא.</li>
</ol>7. תצפית על התבגרות השחלות
<ol><li>גידול ברודסטוק<ol><li>מעבירים את הסרטנים הבוגרים למיכלים עגולים בודדים של 32 ליטר.</li>
		<li>המשיכו להאכיל עם דגים ימיים קצוצים (קפואים בטמפרטורה של 20°C-) פעמיים ביום (בבוקר 09:00 בבוקר ובערב 20:00 בערב), והוציאו מזון שלא נאכל לפני האכלת הבוקר.</li>
		<li>מחזירים את הברודסטוק בנפרד למשך 30 יום במליחות של 20 ppt.</li>
		<li>יש להסיר צואה ולהחליף 10% ממי הים (20 ppt) מדי יום.</li>
	</ol></li>
	<li>דיסקציה<ol><li>נקו מגש ניתוח, מספריים ומלקחיים עם 70% אתנול.</li>
		<li>מרדימים את הנקבות בנפרד בשיטת הרדמה טבילה 2-PE.</li>
		<li>בחרו באופן אקראי נקבות חדשות (לאחר התכה של נקבות פגות) שלא עברו אבלציה של דיבור עיניים כדי לאשר את שלבי הגונדל שלהן.</li>
		<li>הקריבו את כל נקבות הניסוי בעיניים בנפרד, וזהו את שלבי ההבשלה של הגונד. להרוס את גרעיני החזה של הסרטן באמצעות awl סטרילי חד. הסר תחילה את השריון העליון ולאחר מכן את hepatopancreas כדי להפוך את השחלה גלוי. התבוננו בצבע השחלה וזהו את שלב ההבשלה השחלתית (איור 2).</li>
	</ol></li>
	<li>זיהוי שלבי התבגרות השחלות<ol><li>שימו לב לצבע השחלה בעין בלתי או מתחת לסטריאומיקרוסקופ.</li>
		<li>זהה את שלבי ההבשלה השחלות על סמך צבע30: הלא בוגר (שלב -1) מראה צבע לבן שקוף או שמנת; ההתבגרות המוקדמת (שלב 2) מראה צבע צהבהב חיוור עד בהיר; (iii) טרום ההתבגרות (שלב 3) מראה צבע צהוב עד כתום בהיר; ו-(iv) הבשלה מלאה (שלב 4) מראה צבע כתום כהה עד אדמדם.</li>
	</ol></li>
</ol>

לאף אחד מהכותבים אין ניגודי עניינים.

פרוטוקול זה פותח עבור אבלציה של סרטן הבוץ, Scylla spp., וניתן ליישם אותו כשיטה יעילה לגרימת התבגרות הגונד. פרוטוקול זה ניתן לשכפול בקלות להבשלה מסחרית של סרטני בוץ וניתן ליישם אותו כדי להפחית את התקופה הסמויה (הזמן מהשרצה אחת לאחרת) בייצור זרעי סרטני בוץ.
אבלציה של סרטנים (כלומר, סרטני מים מתוקים, שרימפס ימי) נעשית בדרך כלל כדי לגרום להבשלת גונאד והשרצה מחוץ לעונה11,12,13. אבלציה של דיבור עינ...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/65039">Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs</a>. The Introduction, Protocol, Discussion and References were&#160;updated.

Erratum: Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs

כל ארבעת מיני סרטני הבוץ השייכים לסוג Scylla הם מיני סרטנים בעלי חשיבות מסחרית בחקלאות ימית 1,2. גדילתם של סרטנים, כולל סרטני בוץ, והפיכתם משלב הפג (תת-בוגר או התבגרות מינית) לשלב הבוגר מינית (בוגר) מתרחשים בתהליך התכה הכולל נשירה תקופתית של שלד חיצוני ישן וקטן יותר. רוחב קרפצ'ה (CW), כלפידים ומורפולוגיה של דש הבטן נמצאים בשימוש נרחב כדי לקבוע את הבגרות המינית של Scylla spp. 3,4,5. תהליך ההתכה מוסדר על ידי פעולה של הורמונים שונים ודורש כמות עצומה של אנרגיה6. בנוסף לתהליך ההתכה הרגיל, אובדן הגפיים, בין אם מרצון או על ידי גורמים חיצוניים, מזרז את ההתכה של סרטנים מבלי להשפיע על שיעור ההישרדות שלהם 7,8,9. לכן, אוטוטומיה של הגפיים משמשת בדרך כלל להשראת מותך בתעשיית גידול סרטני הבוץ הרכים 7,9.
אבלציה חד צדדית או דו-צדדית פופולרית בעיקר בסרטני מים מתוקים ושרימפס ימיים להבשלת גונאד וייצור זרעים10,11,12,13. טכניקות אבלציה נפוצות בסרטנים כוללות את הדברים הבאים: (i) קשירה בבסיס העין באמצעות מחרוזת14,15; (2) צריבת העיניים באמצעות מלקחיים חמים או מכשירים חשמליים16; (3) הסרה או צביטה ישירה של העיניים כדי להשאיר פצע פתוח12; ו-(4) הסרת תוכן העיניים דרך חתך לאחר חיתוך החלק הדיסטלי של העין בתער17. איברי X הם איברים אנדוקריניים חשובים בסרטנים, שכן הם מווסתים הורמונים היפרגליקמיים סרטניים (CHH), הורמונים מעכבי מותך (MIH) והורמונים מעכבי ויטלוגנזה (VIH)6,18,19,20,21,22. איברי X של Eyestalk (או קומפלקס בלוטת הסינוס) מסנתזים ומשחררים הורמונים מעכבי גונאד (GIH), הידועים גם בשם הורמונים מעכבי ויטלוגנזה (VIH), השייכים למשפחת ההורמונים הנוירופפטידים6. אבלציה חד צדדית או דו-צדדית מפחיתה את סינתזת GIH, וכתוצאה מכך דומיננטיות של הורמונים מעוררים (כלומר, הורמונים מעוררי גונאד, GSH) והאצת תהליך ההתבגרות השחלתית בסרטנים23,24,25,26. ללא השפעת GIH לאחר אבלציה של דיבור עיניים, נקבות סרטנים מקדישות את האנרגיה שלהן להתפתחות השחלה27. נמצא כי אבלציה חד צדדית בעיניים מספיקה להשראת הבשלה שחלתית בסרטנים11 וכי העיניים האבלטיות של שרימפס וסרטנים יכולות להתחדש לאחר מספר התכות28. ישנם ארבעה שלבי התפתחות שחלות שתועדו ב- Scylla spp.: i) לא בשלים (שלב 1), ii) הבשלה מוקדמת (שלב -2), iii) טרום הבשלה (שלב -3), ו- iv) הבשלה מלאה (שלב 4)29,30. השלב השחלתי הלא בשל נמצא אצל נקבות לא בוגרות. לאחר ההתכה המינית וההזדווגות, השחלה הלא בשלה מתחילה להתפתח ולבסוף מבשילה (שלב 4) לפני ההשרצה31.
פרוטוקול אבלציה של Eyestalk חיוני להתפתחות סרטני בוץ ולייצור זרעים. בשוק המזון העולמי, סרטני בוץ בוגרים עם שחלות בשלות לחלוטין (שלב 4) על פני סרטנים עם תכולת שרירים גבוהה יותר מועדפים על ידי הצרכנים, ולכן יש להם ערך מסחרי גבוה יותר, אפילו גבוה יותר מאשר זכרים גדולים. אין פרוטוקול מלא לאבלציה של סרטני בוץ בעיניים. פרוטוקול אבלציה של דיבור עיניים בעבודה זו ממזער מתח על ידי שימוש בסרטנים מורדמים לחלוטין וממזער את הפגיעה הפיזית באנשי צוות מעקיצות סרטנים. פרוטוקול זה קל וחסכוני. כאן, אנו מציגים פרוטוקול עבור אבלציה עיניים של Scylla spp. שיכול לגרום להבשלה של הגונדה. נבדקו שתי טכניקות של אבלציה של דיבור עיניים (צריבה וניתוח) ויעילותן הושוותה בהתבסס על קצב התפתחות הגונדל של נקבות סרטני הבוץ.

<table><tbody><tr><td>צינור אוורור&nbsp;</td><td>Ming Yu Three</td><td>N/A</td><td>אקווריום וחנות חיות</td></tr><tr><td>איירסטון</td><td>מינג יו Three</td><td>N/A</td><td>אקווריום וחנות חיות מכונת</td></tr><tr><td>חיטוי</td><td>HIRAYAMA MANUFACTURING CORPORATION</td><td>N/A</td><td>תוצרת יפן</td></tr><tr><td>אבקת הלבנה (Hi-Chlon 70%)</td><td>Nippon Soda Co.Ltd, יפן</td><td>N/A</td><td>N/</td></tr><tr><td>A לפיד מכה&nbsp;</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>מיכל עגול (32L)</td><td>תעשיית הפלסטיק הטובה ביותר SDN. BHD.&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/</td></tr><tr><td>A כפפות יד כותנה (עבות)&nbsp;</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/</td></tr><tr><td>A מגבת כותנה</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>מדחום דיגיטלי</td><td>Hanna</td><td>Instrument HI9814</td><td>Hanna&nbsp; כלי נגינה&nbsp; GroLine הידרופוניקה עמיד למים pH / EC / TDS / Temp. מד נייד HI9814</td></tr><tr><td>דיגיטלי ורניר קליפר</td><td>INSIZE ושות', בע"מ</td><td>מגש ניתוח N / A</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Hatcheri AKUATROP&nbsp;</td><td></td><td>מרכז המחקר N/A של אוניברסיטת מלזיה טרנגאנו</td></tr><tr><td>בקבוק טפטפת/טפטפת פיפטות פלסטיק</td><td>Shopee מלזיה</td><td>N</td><td>/A N/A</td></tr><tr><td>אתנול 70%</td> <td>Thermo Scientific Chemicals</td><td>033361.M1</td><td>מדולל ל-70% באמצעות מים מזוקקים</td></tr><tr><td>כפולים מיכל פיברגלס (1 טון)</td><td>Hatcheri AKUATROP&nbsp;</td><td></td><td>מרכז המחקר של אוניברסיטת מלזיה Terengganu</td></tr><tr><td>חול דק</td><td>N/A</td><td>N/</td><td>A נאסף מחוף הים של אוניברסיטת מלזיה ערכות</td></tr><tr><td>עזרה ראשונה</td><td>Watsons Malaysia</td><td>N/A</td><td>N/</td></tr><tr><td>A מוט מתכת פלדת ניקל עם ראש שטוח (מברג)</td> <td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/</td></tr><tr><td>A פורמלדהיד</td><td>כימיקלים תרמו מדעיים</td><td>119690010</td><td></td></tr><tr><td>בלון גז (גז בוטאן) לנשיפה&nbsp; לפיד</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/</td></tr><tr><td>A אקדח מצית גז (ראש ארוך)</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/</td></tr><tr><td>A זכוכית (100 מ"ל))</td><td>Corning Life Sciences</td><td>1000-100</td><td></td></tr><tr><td>שקית קרח&nbsp;</td><td>Watsons Malaysia</td><td>N/A</td><td>N/</td></tr><tr><td>A סלי פלסטיק מחוררים&nbsp;</td><td>שיווק אקו-שופ Sdn. Bhd.</td><td>N / A</td><td>N / A</td></tr><tr><td>PVC צינור 15 מ"מ</td><td>בינה תעשיות פלסטיק Sdn Bhd (HQ)</td> <td>N / A</td><td>N /</td></tr><tr><td>A רפרקטומטר</td><td>ATAGO CO., LTD.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מקרר</td><td>שארפ קורפוריישן</td><td>יפן</td><td>מקפיא חזה 110 ליטר - דגם Sharp Corporation 118</td></tr><tr><td>Scoop net</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td></td><td>N/A</td></tr><tr>מדגרת<td>מי ים</td><td>AKUATROP&nbsp;</td><td></td><td>מרכז המחקר של אוניברסיטת מלזיה Terengganu</td></tr><tr><td>צינור סיפון</td><td>MR D.I.Y. קבוצת Berhad</td><td>N/A</td><td>N/</td></tr><tr><td>A בקבוק ריסוס</td><td>Mr. DIY Sdn Bhd</td><td>N/A</td><td>N/</td></tr><tr><td>A מלקחיים כירורגיים אל חלד&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>N/</td></tr><tr><td>A מספריים כירורגיים אל חלד&nbsp;</td><td>N/</td><td>A N/A</td><td>N/</td></tr><tr><td>A משאבת מים טבולה&nbsp;</td><td>דגם</td><td>AS N/A</td><td>: Astro 4000</td></tr><tr><td>תמיסת תמיסת יוד&nbsp; (פובידון יוד)</td><td>Farmasi Fajr Sdn Bhd</td><td>N/A</td><td>N/</td></tr><tr><td>A נייר טישו&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>אקווריום פלסטיק שקוף</td><td>Ming Yu Three</td><td>N/A</td><td>אקווריום וחנות חיות</td></tr><tr><td>שולחן עמיד למים</td><td>Hatcheri AKUATROP&nbsp;</td><td></td><td>מרכז המחקר של אוניברסיטת מלזיה טרנגאנו</td></tr></tbody></table>

אבלציה של דיבור עיניים להגברת התבגרות השחלות בסרטני בוץ

Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs

סרטני בוץ (Scylla spp.) הם מיני סרטנים בעלי חשיבות מסחרית שניתן למצוא בכל אזור הודו-מערב האוקיינוס השקט. במהלך התרבות, השראת הבשלת השחלות חשובה כדי לענות על הביקוש הצרכני לסרטני בוץ בוגרים ולהאיץ את ייצור הזרעים. אבלציה של Eyestalk היא כלי יעיל לשיפור התבגרות השחלות בסרטני בוץ. עם זאת, אין פרוטוקול סטנדרטי לאבלציה של סרטני בוץ. במחקר זה מתוארות שתי טכניקות אבלציה של דיבור עיניים: צריבה (שימוש במתכת חמה כדי לעבד את העיניים של סרטן מורדם) וניתוח (הסרת העיניים באמצעות מספריים כירורגיים). לפני אבלציה של דיבור עיניים, נקבות בוגרות מינית (CW > 86 מ"מ) הורדמו באמצעות שקית קרח (-20 מעלות צלזיוס) עם מי ים. כאשר טמפרטורת המים הגיעה ל -4 מעלות צלזיוס, שקית הקרח הוסרה מהמים. מי ים זורמים (טמפרטורת סביבה: 28 מעלות צלזיוס) שימשו להתאוששות מההרדמה מיד לאחר אבלציה של דיבור עיניים. התמותה לא התרחשה במהלך או אחרי תהליך אבלציה של דיבור עיניים. פרוטוקול האבלציה של שיחות העיניים שהוצג כאן האיץ את ההבשלה השחלתית של סרטני הבוץ.

התבגרות גונאד רקמות שחלה לבנות וקרמיות (שחלות לא בשלות, שלב 1) נמצאו ב-100% מהנקבות שנותחו (n = 6) לפני ביצוע אבלציה של דיבור עיניים (איור 2). שיעור ההבשלה של נקבות סרטנים עם דיבור עיניים (n = 63; 31 נקבות עם טכניקת הצריבה ו-32 נקבות עם טכניקת הניתוח) היה גבוה יותר בהשוואה לנקבות סרטנים שלא עברו אבלציה של דיבור עיניים (n = 31) לאחר 30 יום של גידול אינדיבידואלי (איור 3). האחוזים הגבוהים ביותר של שחלות טרום הבשלה (שלב 3) נמצאו אצל נקבות סרטנים ...

שני פרוטוקולי אבלציה של דיבור עיניים (כלומר, גישות צריבה וניתוח) בוצעו על נקבות סרטנים מורדמות. אבלציה של סרטני בוץ זירזה את הבשלת השחלות מבלי להפחית את שיעור ההישרדות.

Mud crabs (Scylla spp.) are commercially important crustacean species that can be found throughout the Indo-West Pacific region. During culture, the ...

הפרוטוקול המתואר ממזער את הלחץ במהלך אבלציה של סרטני בוץ, ובכך מפחית את התרחשות התמותה כתוצאה מאבלציה של דיבור עיניים. יעילות בזמן היא המפתח למזעור הלחץ לבעלי החיים. ודא שהכל מוכן לפני ביצוע ההליך.התחילו בשטיפת סרטני הבוץ הבריאים, הפעילים והפגים במי ברז עם כלור כדי להסיר פסולת וטפילים. משרים את הסרטנים בפורמלדהיד למשך 30 דקות. יש להקפיד על אוורור רציף ועדין עם אבני אוויר במהלך הטיפול בפורמלדהיד.לאחר מכן, השתמשו במי ים זורמים כדי לשטוף את הסרטנים כדי להסיר שאריות פורמלדהיד. כדי לבצע צריבה של עיני הסרטן, התחל על ידי חימום קצה של מוט מתכת עם blowtorch עד המוט הוא אדום בוהק. מכסים סרטן מורדם במגבת כותנה רטובה ומחזיקים עין אחת של הסרטן במלקחיים מעוקרים.לחצו על קצה המתכת האדום והחם על עין הסרטן למשך כ-10 עד 15 שניות עד שצבע העיניים יהפוך לכתום או כתום אדמדם. יש לחטא את המלקחיים באתנול 70% ולנקות אותם בנייר טישו סטרילי כדי להבטיח שאין זיהום צולב בין סרטנים. לאחר ביצוע אבלציה על כל הסרטנים, טובלים את מוט המתכת במי ברז.לביצוע אבלציה כירורגית, החזיקו את הסרטן המורדם באמצעות כפפות כותנה עבות וכסו אותו במגבת כותנה רטובה. השתמשו במלקחיים סטריליים כדי להחזיק עין אחת של הסרטן וגזרו במהירות את העיניים עם מספריים כירורגיים. לאחר הניתוח, להכין מיכל תקורה עם 20 חלקים לאלף מי ים מסוננים עם אוורור רציף.חבר צינור גמיש עם המיכל לזרימת מים כבידתית. הכניסו את הסרטן לסלסלה וחשפו אותו למי ים זורמים מהמיכל שמעליו. עקבו אחר הסרטן תחת מי ים זורמים עד שהוא יכול לנוע באופן ספונטני.הניחו את הסרטנים בנפרד באקווריום אחר עם מי ים למשך 30 דקות לתצפית נוספת. בחר באופן אקראי נקבות בוגרות חדשות שלא עברו אבלציה של דיבור עיניים. לאחר הסרת השריון העליון ואת hepatopancreas, להתבונן ולזהות את שלב ההתבגרות של השחלה סרטנים.ניתן לזהות את שלבי ההבשלה של השחלות על פי צבען, כאשר השלב הראשון הלא בוגר הוא לבן שקוף או שמנת, שלב ההבשלה המוקדמת השני הוא חיוור עד צהוב בהיר, שלב שלוש לפני ההבשלה הוא צהוב עד כתום בהיר, והשלב הרביעי הבוגר לחלוטין הוא בצבע כתום כהה עד אדמדם. שיעור ההבשלה של הגונד היה גבוה יותר אצל הנקבות בעלות ה-ablated בעיניים בהשוואה לאלו שלא היו ablated. האחוז הגבוה ביותר של שחלות שלב שלוש נמצא אצל נקבות סרטנים עם דיבור עיניים.ניתוח חד-כיווני של השונות הראה הבדלים משמעותיים בין שלבי ההבשלה השחלתיים של נקבות הסרטנים הניסיוניות. בקבוצת הביקורת הייתה שכיחות גבוהה יותר של נקבות סרטנים לא בוגרות ביחס לקבוצות האבלטיות. רק הקבוצות שעברו אבלאט הצליחו לייצר נקבות סרטנים בשלב ארבע משלב לא בוגר 30 יום לאחר הטיפול.חשוב לוודא כי העיניים של סרטן הבוץ כבר ablated מלא לאחר צריבה או טכניקת ניתוח. אבלציה של Eyestalk מאפשרת לחקלאים סרטנים לגרום להבשלת השחלות ולהתכה בקלות. זה גם מאפשר לחוקרים לחקור עוד יותר את התפקיד של דיבור העיניים בוויסות רבייה של סרטני בוץ.

eyestalk-ablation-to-increase-ovarian-maturation-in-mud-crabs

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

הפריה של Xenopus ביציות באמצעות שיטת העברה מארח

Hawaiensis amphipod Parhyale הוא אורגניזם מודל מבטיח ללימודים של אמבריולוגיה הסרטנים ופיתוח arthropod השוואתי ואבולוציה. פרוטוקול זה מתאר שיטה להסרה ידנית של לסטומרים אחד מעוברים בשלב המוקדמים של מחשוף Parhyale.

אבלציה של תא בודד משמונה תאי עוברים של סרטנאים Amphipod<em&gt; Parhyale hawaiensis</em

אנו מתארים שיטות למניפולציה של ביציות לא בשלות Xenopus laevis, הבשלת ביציות במבחנה לביציות והזרקת זרע תוך ציטופלזמית. פרוטוקול זה מאפשר פירוק של כמה חלבונים אימהיים וביטוי יתר של גנים מעניינים בעת ההפריה, ולכן הוא בעל ערך לחקר תפקידים של גורמים ספציפיים בהתפתחות עוברית מוקדמת.

ומניפולציה<em&gt; במבחנה</em&gt; ההבשלה של<em&gt; Laevis Xenopus</em&gt; ביציות, ואחריו הזרקת Intracytoplasmic זרע, לחקר התפתחות העוברית

אנו מתארים מערכת ביצית Xenopus וכובע בעלי חיים לשיבוט ביטוי של גנים המסוגלים לעורר תגובה באקטודרם מוכשר, ודנים בטכניקות לניתוח מאוחר יותר של גנים כאלה. מערכת זו שימושית בזיהוי פונקציונלי של מגוון רחב של תוצרי גנים.

שיבוט פונקציונלי שימוש<em&gt; Xenopus</emמערכת ביטוי ביצית&gt;

המחקר של ביולוגיה אמפיבי מספק מידע רב ערך על תהליכים הרבייה, פיסיולוגיים, embryological והתפתחותיים הנוהגים אורגניזמים של קבוצות מטקתיות רבות. כאן, אנו מציגים מדריך מקיף על מתודולוגיות שונות, כי ניתן להשתמש כדי ללמוד שליטה בשחלות וניטור דו-חיים.

טכניקות הרבייה ניטור ובקרה של השחלות

פרוטוקול זה מתאר גישות לזיהוי וכמות של הבלטות גדולות של צבירה ו/או אורגנל (~4 μm) המיוצרות על ידי תאי C. elegans בצורה של exophers המאוגדים קרום. אנו מתארים זנים, תנאי גדילה, קריטריונים ניקוד, תזמון, ושיקולי מיקרוסקופ הדרושים כדי להקל על ניתוח של מנגנון גירוש פסולת זה.

גישות כמותיות לניקוד ב-vivo Neuronal Aggregate ו-Organelle הבלטה בוויקות Exopher גדולות ב C. elegans

פרוטוקול זה מתאר את בנייתה של מערכת מיקרו-הפעלה בעלות נמוכה, את ההשתלה הסטריאוטקסית שלה לתוך מבנים עמוקים במוח ואת ההליך למיקרו-נג'קציה מתוזמנות של טטרודוטוקסין בחולדות ערות וחסרות מעצורים. המטרה היא לחשוף את ההשתתפות של מבנים היפותלמיים ברגולציה של הביוץ על ידי עיכוב הפעילות העצבית שלהם.

חשיפת תפקידם של אזורים נפרדים במוח העכברוש בוויסות הביוץ באמצעות אי-פעילות הפיכה על ידי מיקרו-גניזמים של טטרודוטוקסין

מוצג פרוטוקול אופטימלי המאפשר דלדול של מרכזי ארגון מיקרוטובולים ציטופלסמיים בביציות עכבר במהלך מטאפאזה I באמצעות לייזר פמטו-שניות כמעט אינפרה-אדום.

אבלציה בלייזר רב-פוטונים של מרכזי ארגון מיקרוטובולים ציטופלסמיים בביציות עכבר

הפרוטוקול מדגים שיטת דיסקציה פשוטה וקלה, המתאימה לנקבות חרקים נודדות מסוג בר שנלכדו במלכודות זרקור. טכניקה זו יכולה להבהיר באופן משמעותי את אותו מין על ידי השוואת שתי רקמות הרבייה, כלומר שק ההזדווגות והתפתחות השחלות של חרקים נקבות מסוג בר.

דיסקציה ודירוג התפתחות השחלות בנקבות חרקים מסוג בר

פרוטוקול זה קובע שיטות לחילוץ וכימות תגובות לפרומון המין הנדיף ב- C. elegans, ומספק כלים לחקר תקשורת כימית ומסלול ניווט.

מיצוי פרומון מין נדיף ובדיקת כימותרפיה ב- Caenorhabditis elegans

כאן, אנו מציגים פרוטוקולים וכלים להמחשת סידן במהלך הפריה ועובריות מוקדמות באמצעות מדווח סידן מקודד גנטית המתבטא בקו הנבט של נמטודת המודל C. elegans.

הדמיה in vivo של מעברי סידן במהלך הפריה והתפתחות מוקדמת ב - C. elegans

למדו את שיטת האבלציה של דיבור עיניים בסרטני בוץ לשיפור התבגרות השחלות. טכניקות הלחימה והניתוח מגבירות משמעותית את קצב הבשלת הביציות תוך שמירה על שרידות הגביות.

אבלציה של דיבור עיניים להגברת התבגרות השחלות בסרטני בוץ

גלה סרטונים נוספים