החדרת ליפופוליסכריד תוך טרכאלי לא פולשני בעכברים

הפרוטוקול שלנו מציע שיטת העברה לא פולשנית חדשה של LPS מקנה הנשימה לריאה, בצורה מדויקת יותר. אנשים שמנסים שיטה זו בפעם הראשונה צריכים להשקיע מאמץ רב במציאת המיקום של קנה הנשימה. כדי להכין את משטח האינטובציה, מעבירים את החוט דרך שני החורים וקושרים את קצותיו לבליטות הקטנות בחלק העליון של ההגבהה.

לאחר מכן, חברו שתי גומיות לכל קצה של האטב והדביקו אותן לגבו של ההגבהה. לבסוף, מקבעים את ההגבהה לבסיס בזווית של 90 מעלות. הרכיבו את הצינורית על עט צינורית, והדליקו את אור העט.

לאחר מכן, יש לחטא מלקחיים כירורגיים קטנים ופיפטה של פסטר באמצעות 70% אלכוהול. כדי להכין את תמיסת תרכובת הבדיקה, הוסף שלושה מיליגרם של lipopolysaccharide, או LPS, במיליליטר אחד של pH 7.2 PBS. לאחר מכן, להמיס 10 מיליגרם של נתרן pentobarbital במיליליטר אחד של מלוחים רגילים, ולסנן את הפתרון באמצעות מסנן מזרק 0.45 מיקרומטר.

הניחו את העכבר המורדם על משטח האינטובציה. לאחר מכן תקן את השיניים הקדמיות העליונות עם החוט, ואת שתי הרגליים הקדמיות עם הגומיות. בעזרת פינצטה, משוך את הלשון החוצה ומחזיק אותה.

דוחפים את הצינורית באיטיות לאורך הפה אל האפיגלוטיס המנדיבולרי. אתרו את קנה הנשימה בעזרת האור של עט הצינורית והכניסו לאט לאט את הצינורית לתוכו. לאחר מכן למשוך את עט אינטובציה, משאיר את הצינורית בפנים.

הכנס את פיפטת פסטר למפרק הצינורית ולחץ על הראש. לאחר אינטובציה אנדוטרכאלית מוצלחת, באמצעות מיקרומזרק בעל ראש שטוח, להחדיר את תמיסת LPS מוכן במינון של שלושה מיליגרם לקילוגרם דרך הצינורית. לאחר שסיימתם, הוציאו את המזרק והצינורית.

הסר את העכבר מפלטפורמת האינטובציה והנח אותו בכלוב נפרד כדי להתאושש. שימו לב למצב הנשימה של העכבר עד שהוא מתאושש וחוזר להכרה. לאחר 12 שעות לאחר החדרת קנה הנשימה LPS, הוערך הביטוי של ציטוקין דלקתי, TNF-אלפא, ויחס משקל יבש-רטוב בריאה והושוו לשיטות החדרה אחרות.

רמות TNF-אלפא בסרום בקבוצת האינטובציה הלא פולשנית של הלוע היו גבוהות משמעותית בהשוואה לקבוצת הביקורת הריקה. יחס המשקל היבש-רטוב של הריאה עלה גם הוא, והגיע לרמה זהה לזו שבקבוצת אינטובציית קנה הנשימה הניתוחית. חשוב לא לגרד את קנה הנשימה בתהליך של מציאת המיקום של קנה הנשימה.

הטכניקה יכולה לשמש גם כדי לספק תרופות אחרות שצריכות להגיע לריאה בצורה לא פולשנית.