Name: תרבית ראשונית של תאי גזע במוך השן (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-05-05T13:50:00.000+00:00
Duration: 3 min 45 s
Description: למד שיטת תרבית אקספלנט לבידוד תאי גזע במוך השן לחקר מנגנוני התחדשות רקמות. שיטה זו מאפשרת בידוד אוכלוסייה הומוגנית ליישומים ברפואה רגנרטיבית וטיפולים בפגמי עצם.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מכירים בתמיכת המימון ל- AK מהמחלקה למחקר בריאות (DHR), ICMR, ממשלת הודו (מענק DHR-NRI # R.12015/01/2022-HR). SR קיבלה מימון מ- ICMR, ממשלת הודו (מענק # 2020-7593 / SCR-BMS) ו- PS קיבלה מלגה מ- CSIR, ממשלת הודו. אנו מודים גם לגב' סנדיה טוקי ולגב' בהופינדר קאור על הסיוע בציטומטריית זרימה, וליבת מכשור מתוחכמת מרכזית (CSIC) ו-PGIMER, צ'אנדיגאר על מתן תמיכה תשתיתית.

ביסוס התרבית הראשונית של תאי גזע במוך השן

<ol><li>Bhattacharyya, S., Kumar, A., Lal Khanduja, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+voyage+of+stem+cell+toward+terminal+differentiation%3A+a+brief+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biochimica+et+Biophysica+Sinica%22%5BJournal%5D)">The voyage of stem cell toward terminal differentiation: a brief overview.</a> Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 44 (6), 463-475 (2012).</li>
<li>Prentice, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Adult stem cells.</a> Circulation Research. 124 (6), 837-839 (2019).</li>
<li>Raik, S., Kumar, A., Bhattacharyya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+into+cell-free+therapeutic+approach%3A+Role+of+stem+cell+%26%2334%3Bsoup-ernatant%26%2334%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+and+Applied+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Insights into cell-free therapeutic approach: Role of stem cell &#34;soup-ernatant&#34.</a> Biotechnology and Applied Biochemistry. 65 (2), 104-118 (2018).</li>
<li>Rodriguez-Fuentes, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+current+clinical+applications%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Medical+Research%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells current clinical applications: a systematic review.</a> Archives of Medical Research. 52 (1), 93-101 (2021).</li>
<li>Yamazaki, K., Kawabori, M., Seki, T., Houkin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+trials+of+stem+cell+treatment+for+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Clinical trials of stem cell treatment for spinal cord injury.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (11), 3994(2020).</li>
<li>Kumar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+spectrum+of+secretome+regulates+the+relative+hepatogenic+potential+of+mesenchymal+stem+cells+from+bone+marrow+and+dental+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Molecular spectrum of secretome regulates the relative hepatogenic potential of mesenchymal stem cells from bone marrow and dental tissue.</a> Scientific Reports. 7 (1), 15015(2017).</li>
<li>Kumar, A., Kumar, V., Rattan, V., Jha, V., Bhattacharyya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secretome+cues+modulate+the+neurogenic+potential+of+bone+marrow+and+dental+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Secretome cues modulate the neurogenic potential of bone marrow and dental stem cells.</a> Molecular Neurobiology. 54 (6), 4672-4682 (2017).</li>
<li>Kumar, A., Kumar, V., Rattan, V., Jha, V., Bhattacharyya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secretome+proteins+regulate+comparative+osteogenic+and+adipogenic+potential+in+bone+marrow+and+dental+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimie%22%5BJournal%5D)">Secretome proteins regulate comparative osteogenic and adipogenic potential in bone marrow and dental stem cells.</a> Biochimie. 155, 129-139 (2018).</li>
<li>Kumar, A., Bhattacharyya, S., Rattan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+uncontrolled+freezing+on+biological+characteristics+of+human+dental+pulp+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Bank%22%5BJournal%5D)">Effect of uncontrolled freezing on biological characteristics of human dental pulp stem cells.</a> Cell Tissue Bank. 16 (4), 513-522 (2015).</li>
<li>Raik, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+post-thaw+quality+of+dental+mesenchymal+stromal+cells+after+long-term+cryopreservation+by+uncontrolled+freezing%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Biochemistry+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Assessment of post-thaw quality of dental mesenchymal stromal cells after long-term cryopreservation by uncontrolled freezing.</a> Applied Biochemistry and Biotechnology. 191 (2), 728-743 (2020).</li>
<li>Gronthos, S., Mankani, M., Brahim, J., Robey, P. G., Shi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+human+dental+pulp+stem+cells+%28DPSCs%29+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) in vitro and in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 97 (25), 13625-13630 (2000).</li>
<li>Tsutsui, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+pulp+stem+cells%3A+advances+to+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+and+Cloning%22%5BJournal%5D)">Dental pulp stem cells: advances to applications.</a> Stem Cells and Cloning. 13, 33-42 (2020).</li>
<li>Huang, G. T. -J., Gronthos, S., Shi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+derived+from+dental+tissues+vs.+those+from+other+sources%3A+their+biology+and+role+in+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells derived from dental tissues vs. those from other sources: their biology and role in regenerative medicine.</a> Journal of Dental Research. 88 (9), 792-806 (2009).</li>
<li>La Noce, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+pulp+stem+cells%3A+state+of+the+art+and+suggestions+for+a+true+translation+of+research+into+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dentistry%22%5BJournal%5D)">Dental pulp stem cells: state of the art and suggestions for a true translation of research into therapy.</a> Journal of Dentistry. 42 (7), 761-768 (2014).</li>
<li>Xiao, L., Tsutsui, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+human+dental+pulp+cells-derived+spheroids+in+serum-free+medium%3A+stem+cells+in+the+core%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Characterization of human dental pulp cells-derived spheroids in serum-free medium: stem cells in the core.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 114 (11), 2624-2636 (2013).</li>
<li>Kumar, A., Yun, H., Funderburgh, M. L., Du, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerative+therapy+for+the+cornea%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Regenerative therapy for the cornea.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 87, 101011(2022).</li>
<li>Gandia, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+dental+pulp+stem+cells+improve+left+ventricular+function%2C+induce+angiogenesis%2C+and+reduce+infarct+size+in+rats+with+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Human dental pulp stem cells improve left ventricular function, induce angiogenesis, and reduce infarct size in rats with acute myocardial infarction.</a> Stem Cells. 26 (3), 638-645 (2008).</li>
<li>Yong, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+angiogenic+ability+between+SHED+and+DPSC+in+a+mice+model+with+critical+limb+ischemic%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+and+Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparison of the angiogenic ability between SHED and DPSC in a mice model with critical limb ischemic.</a> Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 19 (4), 861-870 (2022).</li>
<li>Zhang, X. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+potential+of+dental+pulp+stem+cell+transplantation+in+a+rat+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regeneration+Research%22%5BJournal%5D)">Therapeutic potential of dental pulp stem cell transplantation in a rat model of Alzheimer's disease.</a> Neural Regeneration Research. 16 (5), 893-898 (2021).</li>
<li>Kabir, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imperative+role+of+dental+pulp+stem+cells+in+regenerative+therapies%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Nigerian+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Imperative role of dental pulp stem cells in regenerative therapies: a systematic review.</a> Nigerian Journal of Surgery. 20 (1), 1-8 (2014).</li>
<li>Kumar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+pulp+stem+cell+secretome+ameliorates+d-galactose+induced+accelerated+aging+in+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biochemistry+and+Function%22%5BJournal%5D)">Dental pulp stem cell secretome ameliorates d-galactose induced accelerated aging in rat model.</a> Cell Biochemistry and Function. 40 (5), 535-545 (2022).</li>
<li>Hirata, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multifaceted+therapeutic+benefits+of+factors+derived+from+dental+pulp+stem+cells+for+mouse+liver+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Multifaceted therapeutic benefits of factors derived from dental pulp stem cells for mouse liver fibrosis.</a> Stem Cells Translational Medicine. 5 (10), 1416-1424 (2016).</li>
<li>Fujii, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((regeneration+by+human+dental+pulp+stem+cells+using+a+helioxanthin+derivative+and+cell-sheet+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">regeneration by human dental pulp stem cells using a helioxanthin derivative and cell-sheet technology.</a> Stem Cell Research & Therapy. 9 (1), 24(2018).</li>
<li>Ferrua, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+has+dental+pulp+stem+cells+isolation+been+conducted%3F+A+scoping+review%5BTitle%5D)+AND+%22Brazilian+Oral+Research%22%5BJournal%5D)">How has dental pulp stem cells isolation been conducted? A scoping review.</a> Brazilian Oral Research. 31, e87(2017).</li>
<li>Pilbauerova, N., Soukup, T., Suchankova Kleplova, T., Suchanek, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enzymatic+isolation%2C+amplification+and+characterization+of+dental+pulp+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Folia+Biologica%22%5BJournal%5D)">Enzymatic isolation, amplification and characterization of dental pulp stem cells.</a> Folia Biologica. 65 (3), 124-133 (2019).</li>
<li>Tatullo, M., Marrelli, M., Shakesheff, K. M., White, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+pulp+stem+cells%3A+function%2C+isolation+and+applications+in+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Tissue+Engineering+and+Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Dental pulp stem cells: function, isolation and applications in regenerative medicine.</a> Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 9 (11), 1205-1216 (2015).</li>
<li>Hilkens, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+isolation+methodology+on+stem+cell+properties+and+multilineage+differentiation+potential+of+human+dental+pulp+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Effect of isolation methodology on stem cell properties and multilineage differentiation potential of human dental pulp stem cells.</a> Cell and Tissue Research. 353 (1), 65-78 (2013).</li>
<li>Hendijani, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Explant+culture%3A+An+advantageous+method+for+isolation+of+mesenchymal+stem+cells+from+human+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Proliferation%22%5BJournal%5D)">Explant culture: An advantageous method for isolation of mesenchymal stem cells from human tissues.</a> Cell Proliferation. 50 (2), e12334(2017).</li>
<li>Aryal Ac, S., Islam, M. S., Samsudin, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigation+of+the+effect+of+a+time+delay+on+the+characteristics+and+survival+of+dental+pulp+stem+cells+from+extracted+teeth%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Oral+Biology%22%5BJournal%5D)">Investigation of the effect of a time delay on the characteristics and survival of dental pulp stem cells from extracted teeth.</a> Archives of Oral Biology. 119, 104896(2020).</li>
<li>Langenbach, F., Handschel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+dexamethasone%2C+ascorbic+acid+and+%CE%B2-glycerophosphate+on+the+osteogenic+differentiation+of+stem+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">Effects of dexamethasone, ascorbic acid and β-glycerophosphate on the osteogenic differentiation of stem cells in vitro.</a> Stem Cell Research & Therapy. 4, 117(2013).</li>
<li>Jaiswal, N., Haynesworth, S. E., Caplan, A. I., Bruder, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteogenic+differentiation+of+purified%2C+culture-expanded+human+mesenchymal+stem+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Osteogenic differentiation of purified, culture-expanded human mesenchymal stem cells in vitro.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 64 (2), 295-312 (1997).</li>
<li>Bernar, A., Gebetsberger, J. V., Bauer, M., Streif, W., Schirmer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+the+alizarin+red+S+assay+by+enhancing+mineralization+of+osteoblasts%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Optimization of the alizarin red S assay by enhancing mineralization of osteoblasts.</a> International Journal of Molecular Sciences. 24 (1), 723(2022).</li>
<li>Coe, C. L., Lubach, G. R., Schneider, M. L., Dierschke, D. J., Ershler, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+rearing+conditions+alter+immune+responses+in+the+developing+infant+primate%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Early rearing conditions alter immune responses in the developing infant primate.</a> Pediatrics. 90, 505-509 (1992).</li>
<li>Bakopoulou, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+impact+of+two+different+isolation+methods+on+the+osteo%2Fodontogenic+differentiation+potential+of+human+dental+stem+cells+derived+from+deciduous+teeth%5BTitle%5D)+AND+%22Calcified+Tissue+International%22%5BJournal%5D)">Assessment of the impact of two different isolation methods on the osteo/odontogenic differentiation potential of human dental stem cells derived from deciduous teeth.</a> Calcified Tissue International. 88 (2), 130-141 (2011).</li>
<li>Arthur, A., Rychkov, G., Shi, S., Koblar, S. A., Gronthos, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+human+dental+pulp+stem+cells+differentiate+toward+functionally+active+neurons+under+appropriate+environmental+cues%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Adult human dental pulp stem cells differentiate toward functionally active neurons under appropriate environmental cues.</a> Stem Cells. 26 (7), 1787-1795 (2008).</li>
<li>Kim, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoblastic%2Fcementoblastic+and+neural+differentiation+of+dental+stem+cells+and+their+applications+to+tissue+engineering+and+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+B%2C+Reviews%22%5BJournal%5D)">Osteoblastic/cementoblastic and neural differentiation of dental stem cells and their applications to tissue engineering and regenerative medicine.</a> Tissue Engineering. Part B, Reviews. 18 (3), 235-244 (2012).</li>
<li>Ge, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distal+C+terminus+of+CaV1.2+channels+plays+a+crucial+role+in+the+neural+differentiation+of+dental+pulp+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Distal C terminus of CaV1.2 channels plays a crucial role in the neural differentiation of dental pulp stem cells.</a> PLoS One. 8 (11), e81332(2013).</li>
</ol>

המחברים מצהירים כי אין ניגוד עניינים כספי או לא כספי.

תאי גזע תלו את התקוות לרפא מחלות רבות, בשל הפלסטיות שלהם, חוסנם, תכונותיהם האימונומודולטוריות, המנגנונים הפרקריניים ויעילות הביות שלהם. רקמת מוך השן נחשבת למקור החזק והיקר ביותר של תאי גזע, עם פלסטיות בולטת ויכולת התחדשות. כאן, אנו מדגימים את הבידוד של DPSCs, תוך שימוש בשיטת תרבית explant שאומצה באופן נרחב, שבה התאים נודדים מחתיכות של רקמת מוך השן או צמחים כדי לגדול לתרבית תאים הומוגנית הדומה מורפולוגית לתאים דמויי פיברובלסטים בצורת ציר. שיטת explant מניבה תרביות אחידות יותר של DPSCs, נטולות סוגי תאים אחרים כגון תאי אנדו...

תאי גזע בוגרים הפכו לכלי טיפולי רב עוצמה לטיפולים וטיפולים מכווני תאים בשל הפלסטיות שלהם, המנגנונים הפרקריניים והתכונות האימונומודולטוריותשלהם 1,2,3. הנתונים המעודדים ממחקרים פרה-קליניים מבוססי תאי גזע נתנו השראה לחוקרים לעבוד עבור תרגום מהספסל למיטה. סוג תאי הגזע המשמשים לטיפול בתאי גזע ממלא תפקיד משמעותי בתוצאות מוצלחות. במחקרים פרה-קליניים וקליניים, המקור המדווח ביותר לתאי גזע מזנכימליים (MSC) נותר מח עצם 4,5. עם זאת, חסרונות עיקריים לשימוש בתאי גזע שמקורם במח עצם (BMSCs) כוללים את האוכלוסייה הנדירה שלהם, הליכים פולשניים מאוד לבידוד, ויכולתם המוגבלת להתרחב. לכן, מקורות חלופיים של MSCs נבדקים. בהקשר זה, רקמות שיניים, עם קלות הנגישות שלהן, פלסטיות עצומה, פוטנציאל התחדשות גבוה, ויכולת שגשוג גבוהה, נחשבו כעת כמקור חלופי עשיר ופוטנציאלי של תאי גזע 6,7,8,9,10.
תאי גזע מוך השן (DPSCs) היו הסוג הראשון של תאי גזע דנטליים שבודדו ואופיינו על ידי גרונתוס בשנת 200011. DPSCs משכו את תשומת הלב עבור יישומי הנדסת רקמות בגלל שיעור ההתרבות הגבוה שלהם, פוטנציאל בידול משמעותי, קלות הנגישות עם תרבית ללא מאמץ, והכי חשוב, היכולת שלהם להתקבל משן שהושלכה ללא כל חשש אתי12. המגבלות שמציבים מקורות תאי גזע אחרים, כגון BMSCs ותאי גזע שמקורם בשומן (ADSCs), בבידודם וביכולות ההתחדשות העצמית הלא מספקות שלהם נעקפות על ידי DPSCs13. ניתן להשיג DPSCs אנושיים משיניים ראשוניות אנושיות, שיניים קבועות, שיני בינה, שיניים נשירות מתקלפות (SHEDs) ופפילות אפיות. יתר על כן, DPSCs ניתן גם לבודד שיניים supernumerary, אשר בדרך כלל מושלכים14. DPSCs מבטאים סמנים הקשורים לסמל עצבי ויש להם פוטנציאל להתמיין לתאים עצביים הן במבחנה והן in vivo15. בנוסף לפוטנציאל הנוירוגני שלהם, DPSCs יכולים להתמיין לשושלות תאים אחרות, כגון אוסטאוגניים, כונדרוגנים, אדיפוגניים, כבדיים ומיוגניים, כאשר ניתנים להם תנאי התמיינות ספציפיים13. לפיכך, תאים רב-פוטנטיים אלה טומנים בחובם פוטנציאל רב לטיפול מבוסס תאים וניתן להשתמש בהם להתחדשות רקמות שונות. מחקרים דיווחו גם על התפקיד הפוטנציאלי של DPSCs בשחזור הקרנית16, תיקון אוטם שריר הלב17, ותפקידם הטיפולי הפוטנציאלי במחלות כמו איסכמיה של הגפיים18, אלצהיימר 19, פרקינסון 20 והזדקנות21. לכן, תאי גזע שמקורם ברקמת שיניים יכולים לשמש לא רק להתחדשות שיניים, אלא גם לתיקון והתחדשות של איברים שאינם דנטליים כמו עיניים16, לבבות17, כבדים22, עצמות23 וכו '.
ישנן שתי שיטות מיוחדות לבידוד אוכלוסיית MSC מרקמת מוך השן - עיכול אנזימטי ותרבית צמחים24,25. ביסוס מוצלח של תרבויות ראשוניות ללא הבדל משמעותי בכמות ובמאפיינים של DPSCs דווח בשתי שיטות אלה26. במחקר זה, התמקדנו בבידוד של DPSCs על ידי שיטת explant27, שכן שיטה זו מייצרת DPSCs ללא זיהום של תאים hematopoietic ואנדותל, לעומת עיכול אנזימטי אשר יכול לגרום זיהום פיברובלסט28.

<table><tbody><tr><td>צלחת תרבית תאים 6 באר</td><td>Costar</td><td>3516</td><td>לתרבית תאים</td></tr><tr><td>כתם כחול אלצ'יאני</td><td>ערכת צביעת כונדרוציטים, HiMedia</td><td>CCK029</td><td></td></tr><tr><td>אליזרין אדום S כתם</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>TMS-008</td> קוקטייל אנטיביוטיקה <td>כתם אוסטאוגני</td></tr><tr><td></td><td>Himedia</td><td>A002-5X50ML</td><td>למניעת זיהום תרבית</td></tr><tr><td>חומצה אסקורבית</td><td>Himedia</td><td>TC094-25G</td><td>אינדוקציה כונדרוגנית</td></tr><tr><td>B27 תוסף</td><td>Gibco</td><td>17504044</td><td>עבור אינדוקציה עצבית</td></tr><tr><td>bFGF (גורם גדילה פיברובלסטים בסיסי)</td> <td>Gibco</td><td>PHG0024</td><td>עבור אינדוקציה עצבית</td></tr><tr><td>CD 105</td><td>BD-Pharmingen</td><td>560839</td><td></td></tr><tr><td>CD 35</td><td>Biolegend</td><td>343604</td><td></td></tr><tr><td>CD 45</td><td>Biolegend</td><td>304006</td><td></td></tr><tr><td>CD 73</td><td>Biolegend</td><td>344016</td><td></td></tr><tr><td>CD 90</td><td>Biolegend</td><td>328107</td><td>אפיון</td></tr><tr><td>צטיל פירידיניום כלוריד (CPC)</td> <td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>1104006</td><td>למיצוי אדום אליזרין</td></tr><tr><td>דקסמתזון 21-פוספט דיסודיום</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>D1159-100MG</td><td></td></tr><tr><td>פוספט של Dulbecco חוצץ</td><td>מלח Himedia</td><td>TS1006-5L</td><td>למטרת כביסה</td></tr><tr><td>EGF (גורם גדילה אפידרמלי)</td><td>Gibco</td><td>PHG0311</td><td>לכבד ועצבים&nbsp; אינדוקציה</td></tr><tr><td>EVOS LED מיקרוסקופ</td><td>Invitrogen</td><td></td><td>עבור&nbsp; הדמיה פלואורסצנטית</td></tr><tr><td>כתם EZ ערכת צביעת כונדרוציטים</td><td>Himedia</td><td>CCK029-1KT</td><td>ערכת כתמי צ'ונדרו</td></tr><tr><td>FACS Canto זרימה ציטומטר</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td>לתא אפיון</td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>Gibco</td><td>16000044</td><td>לתרבית ראשונית</td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F2442</td><td>לתרבית תאים</td></tr><tr><td>תוסף G5</td><td>Gibco</td><td>17503012</td><td>לאינדוקציה עצבית</td></tr><tr><td>HGF (גורם גדילה הפטוציטים)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>H1404</td><td>לאינדוקציה בכבד</td></tr><tr><td>HLA-DR</td><td>Biolegend</td><td>307605</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; TGF ובטא אנושיים; 3</td><td>Peprotech</td><td>#100-36E-10U</td><td></td></tr><tr><td>אינסולין-טרנספרין-חומצה סלנית premix</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I3146</td><td>לאינדוקציה בכבד</td></tr><tr><td>ITS premix</td><td>corning</td><td>354350</td><td></td></tr><tr><td>ערכת בדיקת ספיגת LDL</td><td>Abcam</td><td>ab133127</td><td>לאפיון</td></tr><tr><td>כבד גלוקוז נמוך DMEM</td><td>Gibco</td><td>11885-084</td><td>לאינדוקציה</td></tr> <tr><td>בכבדנוגדן MAP2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M4403</td><td>לאפיון עצבי</td></tr><tr><td>תוסף</td><td>N2 Gibco</td><td>17502048</td><td>לאינדוקציה עצבית</td></tr><tr><td>מדיה בזאלית עצבית</td><td>Gibco</td><td>21103049</td><td>לאינדוקציה עצבית</td></tr><tr><td>נוגדן NFM</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>N4142</td><td>לאפיון עצבי</td></tr><tr><td>Nikon Elipse TS100 מיקרוסקופ</td><td>Nikon</td><td></td><td>For&nbsp; הדמיה פלואורסצנטית</td></tr><tr><td>שמן אדום O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>01391-250Ml</td><td>כתם אדיפוגני</td></tr><tr><td>Oncostatin M</td><td>R& D Systems</td><td>295-OM-010/CF</td><td>לאינדוקציה בכבד</td></tr><tr><td>Petridish</td><td>Tarson</td><td>460090-90MM</td><td>לחיתוך רקמות</td></tr><tr><td>אשלגן פוספט מונו-בסיסי</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>15655-100G</td><td>אינדוקציה אוסטאוגנית</td></tr><tr><td>Propan-2-ol</td><td>Thermo Fisher</td><td>Q13827</td><td>לשמן אדום O מיצוי</td></tr><tr><td>נתרן פירובט תמיסת נתרן פירובט</td><td>סיגמא מדעי החיים</td><td>S8636-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T4049</td><td>למעבר תאים</td></tr><tr><td>נייר סינון Whatman נייר</td><td>סינון WHA1001325</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>אלפא;- מדיה חיונית מינימלית (&alpha;-MEM)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M0643-10X 1L</td><td>מדיה לתרבית ראשונית</td></tr><tr><td>&בטא;-גליצרופוספט מלח דיסודיום הידרט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G9422-50G</td><td></td></tr></tbody></table>

תרבית ראשונית של תאי גזע במוך השן

Primary Culture of Dental Pulp Stem Cells

מוך השן האנושי מייצג מאגר תאי גזע רב-פוטנטי מבטיח עם יכולת התחדשות בולטת שניתן לקצור משן שנעקרה. המקור האקטו-מזנכימלי הנגזר מסמל עצבי של תאי גזע במוך השן (DPSCs) מעניק רמה גבוהה של פלסטיות הנובעת מיתרונותיו הרב-גוניים בתיקון רקמות והתחדשותן. ישנן דרכים מעשיות שונות לקציר, תחזוקה והתרבות של תאי גזע בוגרים הנחקרות לשימוש בהם ברפואה רגנרטיבית. בעבודה זו אנו מדגימים הקמת תרבית תאי גזע מזנכימלית ראשונית מרקמת השן בשיטת תרבית אקספלנט. התאים המבודדים היו בצורת ציר והודבקו למשטח הפלסטיק של צלחת התרבית. האפיון הפנוטיפי של תאי גזע אלה הראה ביטוי חיובי של האגודה הבינלאומית לתרפיה תאית (ISCT) - סמנים המומלצים על פני התא עבור MSC, כגון CD90, CD73 ו- CD105. יתר על כן, ביטוי זניח של סמני המטופויאט (CD45) ואנדותל (CD34), ופחות מ -2% ביטוי של סמני HLA-DR, אישרו את ההומוגניות והטוהר של תרביות DPSC. הדגמנו עוד יותר את הרב-עוצמה שלהם בהתבסס על התמיינות לשושלות אדיפוגניות, אוסטאוגניות וכונדרוגניות. כמו כן, גרמנו לתאים אלה להתמיין לתאים דמויי כבד ולתאים דמויי תאי עצב על-ידי הוספת אמצעי גירוי תואמים. פרוטוקול אופטימלי זה יסייע בטיפוח אוכלוסייה מתרחבת מאוד של תאי גזע מזנכימליים שישמשו במעבדה או למחקרים פרה-קליניים. פרוטוקולים דומים ניתן לשלב במערכים קליניים לתרגול טיפולים מבוססי DPSC.

כאן, אנו מתארים כיצד חוקרים יכולים לבסס תרבות טהורה של DPSCs באמצעות שיטת explant 6,7,8,9,10 ולגרום להם לעבר שושלות מרובות כדי לבסס את טוהר התרבות עבור יישומים במורד הזרם.
ביססנו תרבית ראשונית של DPSCs מרקמה קטנה של מוך השן שהוצאו מהשן הטוחנת השלישית של מטופלים, כפי שמוצג באיור 1A. בתחילה, מעט ...

מאמר זה מספק מדריך הדרגתי לביסוס תרבית ראשונית של תאי גזע במוך השן באמצעות שיטת תרבית explant ואפיון תאים אלה בהתבסס על הנחיות ICSCRT. התאים שבודדו על ידי פרוטוקול זה יכולים להיחשב כתאי גזע מזנכימליים ליישומים נוספים.

The human dental pulp represents a promising multipotent stem cell reservoir with pre-eminent regenerative competence that can be harvested from an ...

אנו חוקרים את הפוטנציאל של DPSCs ביישומים מבוססי תאים וללא תאים עבור מודלים של מחלות, תוך חקר המנגנונים התאיים והמולקולריים המעורבים בהתחדשות רקמות. בנוסף, אנו חוקרים את תפקידם של גורמי הפרשה שמקורם בתאי גזע בשליטה על גורל תאי גזע ובקידום התחדשות רקמות. ההתמקדות הנוכחית שלנו היא בשימוש בטכניקות תרבית תלת-ממדיות כדי להשיג הבנה עמוקה יותר של מנגנונים מולקולריים, שינויים גנטיים ואפיגנטיים הקשורים להתחדשות רקמות.אנו משלבים טכניקות מתקדמות כגון ריצוף הדור הבא, ריצוף RNA וריצוף שבבים כדי לפענח תחומי רגולציה השולטים בתהליכים תאיים שונים. באמצעות שיטות explant כדי לבודד DPSC, ניתן לקצור אוכלוסיית תאי גזע הומוגנית ביעילות, ללא תאים אחרים כמו אנדותל ופריציטים. סוגי תאים אלה נשארים בתרבית התא כאשר DPSCs נקבעים באמצעות הליכים אנזימטיים.המחקר שלנו המשתמש ב- DPSCs כמודל תאי לבדיקת תרופות והתחדשות רקמות יכול לפתח טיפולים חדשניים, רפואה מותאמת אישית מתקדמת, ויש להם השלכות מרחיקות לכת ברפואה רגנרטיבית, כולל שחזור קרניופציאלי והתחדשות עצם in vivo לאחר עקירת שיניים. אנו חוקרים כעת כיצד ניתן להשתמש ב- DPSCs לטיפול בפגמים בעצמות, כגון פגמים ארוכים בעצם וקלווריאלית. בנוסף, אנו בוחנים את ההשלכות הטיפוליות האפשריות של מולקולות הפרשה שמקורן ב- DPSCs במודלים שונים של מחלות, כולל ניוון עצבי וגלאוקומה.

primary-culture-of-dental-pulp-stem-cells

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

השיטה מתוארת בידוד ואפיון של תאי גזע אנושיים שיניים זולות (hDPSCs) באמצעות...

בידוד, אפיון והשוואתי התמיינות של תאי גזע אנושיים שיניים זולות נגזרה שיניים קבועות על ידי שימוש בשתי שיטות שונות

אנו מספקים פרוטוקולים להערכה של גזע mesenchymal מבודד מן עיסת שיניים ואינטראקציות התא סרטן הערמונית המבוסס על שיטות תרבות שיתוף ישיר ועקיף. מצב בינוני וממברנות הטרנס-ובכן מתאימים לניתוח פעילות paracrine עקיף. זריעה באופן שונה מוכתמת. בתאים ביחד הוא מודל המתאים לאינטראקציה תא ישירה-cell.

בידוד תאי גזע mesenchymal זולה רקמות, תרבות משותפת עם תאים סרטניים ללמוד אינטראקציות שלהם

כאן אנו מציגים עבור בידוד תאי גזע זולה שיניים האנושי והתפשטות פרוטוקול על מנת להעריך את הביטוי חלבון פריאון בתהליך בידול עצביים.

בידוד, הפצת וביטוי חלבונים פריון במהלך עצביים התמיינות של תאי גזע אנושי זולה שיניים

פרוטוקול זה שם דגש על מיצוי, תרבית ושימור של תאי גזע רב-פוטנטיים ממוך השן באמצעות עיכול אנזימטי. בנוסף, הוא מדגים את הפוטנציאל שלהם להתמיין לאוסטאובלסטים, אדיפוציטים וכונדרוציטים, ומדגיש את חשיבות הדיוק והעקביות בתהליך.

בידוד, תרבית ואפיון תאי גזע במוך השן משיני אדם נשירים וקבועים

פרוטוקול זה מדגים כיצד לשמור על בריאות, מובחן האדם גזע עובריים (ES) התאים.

תרבות ותחזוקה של בתאי גזע עובריים אנושיים

Hepatocytes ראשיים מספקים כלי רב ערך כדי להעריך ביוכימיים, פונקציות מולקולרית, ואת חילוף החומרים במערכת ניסיונית רלוונטי מבחינה פיזיולוגית. אנו מתארים פרוטוקול אמין עכברוש זלוף הכבד באתרו, אשר באופן עקבי יוצר hepatocytes קיימא עד to1.0 ×...

בידוד תרבות ראשונית של תאים בכבד עכברוש

שיטה פשוטה מתוארת לאינדוקציה של אפיתל למעבר mesenchymal (EMT) במגוון רחב של סוגי תאים. שיטות לניתוח של תאים במדינות EMT ידי immunocytochemistry כלולים.

אינדוקציה וניתוח של אפיתל לmesenchymal מעבר

בפרסום זה, אנו מתארים הליך מהיר ונוח לבידוד ותאי לבלב acinar העיקריים culturing מהלבלב העכברי. שיטה זו מהווה גישה רבת ערך כדי ללמוד את הפיסיולוגיה של תאי לבלב אקסוקרינית רגילים / untransformed העיקריים טריים.

בידוד והתרבות של תאי לבלב הראשיים acinar עכבר

כאן אנו פירוט שיטה לחיידקים שן תרבות בפרוסות לסת תחתונה באמצעות מסוק רקמות. שיטה זו מאפשרת גישה ייחודית לשן במהלך פיתוח, מתן הזדמנות מצוינת למניפולציה ושושלת מעקב, אינו זמין בשיטות תרבות מסורתיות יותר.

פורסים תרבות השיטה למעקב אחר ההתפתחות של חיידקים בשיני explant תרבות

הבידוד והתרבות של אוכלוסייה טהורה של תאי לווין שקטים, אוכלוסיית תאי גזע שריר, הוא חיוני להבנה של ביולוגיה שרירים תאי גזע והתחדשות, כמו גם בתאי גזע להשתלה עבור טיפולים בניוון שרירים ומחלות ניווניות אחרות.

בידוד, תרבות והשתלה של תאי לווין שריר

למד שיטת תרבית אקספלנט לבידוד תאי גזע במוך השן לחקר מנגנוני התחדשות רקמות. שיטה זו מאפשרת בידוד אוכלוסייה הומוגנית ליישומים ברפואה רגנרטיבית וטיפולים בפגמי עצם.

תרבית ראשונית של תאי גזע במוך השן

גלה סרטונים נוספים