מודלים משופרים של ליפופוסצין וכימות של יכולת פגוציטוזה של סגמנט חיצוני בתרביות אפיתל פיגמנט רשתית אנושיות מקוטבות מאוד

בעוד ליפופוסצין מצטבר באופן אוניברסלי ב-RPE עם ההזדקנות, קשה להבחין ברעילות שלו. כאן, אנו מפתחים פרוטוקולים המאפשרים לנו לפתח הצטברות דמוית ליפופוצין בתרביות RPE מאוד מקוטבות ובשלות כדי לעזור להבחין בהשפעות של ליפופוסצין על הפיזיולוגיה של RPE. חקר רעילות ליפופוסצין בבני אדם מבולבל על ידי העובדה כי lipofuscin פוחת ככל RPE מת.

מודלים של בעלי חיים של רעילות ליפופוסצין השיגו תוצאות שונות מאוד. יצרנו בקפידה מודלים במבחנה של הצטברות חומר דמוי ליפופוסצין כדי להקל על המחקר של רעילות ליפופוסצין. המפתח להצלחת המודלים שלנו הוא שמירה על תרבויות מובחנות מאוד תוך גרימת היווצרות ליפופוסצין באמצעות אותו תהליך שמפעיל ליפופוסצין in vivo, כלומר פגוציטוזה של מקטעים חיצוניים של קולטני אור.

פרוטוקול המבחנה שלנו ייחודי בכך שחומר דמוי ליפופוצין מצטבר בתרביות RPE המובחנות מאוד כדי לחקות נאמנה RPE in vivo. בנסיבות אלה, מצאנו כי תרבית RPE עמידה מאוד להצטברות ליפופוסצין ולהשפעה רעילה מליפופוצין. בנוסף, בתהליך הבדיקה לפנוטיפים הנגרמים על ידי הצטברות דמוית ליפופוסצין בתרביות RPE שלנו, יצרנו סוג חדש של בדיקת פאגוציטוזה הנקראת Total Consumptive Capacity.

בדיקה זו מאפשרת לנו לקבוע את כל היכולת של RPE למקטעים חיצוניים של פגוציטוזה תוך הימנעות מכמה מהפרשנויות המבלבלות שמגיעות עם מבחני פגוציטוזה קלאסיים של מרדף דופק. אנו נרגשים להשתמש במודל זה של הצטברות חומר דמוי ליפופוצין כדי להבין טוב יותר אילו גורמי לחץ RPE עשויים לקחת ליפופוסצין אינרטי בדרך כלל לתפקיד פתולוגי יותר במוות של תאי RPE.