Name: חקר השפעות עצמאיות של הורמון מגרה זקיקים in vivo במודל עכבר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-08-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 32 s
Description: חקור את השפעות הורמון מגרה הזקיקים מחוץ לרבייה בדגם עכבר OVF. למד כיצד FSH משפיע על רמות כולסטרול בדם ומסיכון קרדיווסקולרי בגיל המעבר.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו רוצים להודות למעבדת בעלי החיים של בית החולים המחוזי שאנדונג על התמיכה הטכנית. עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (NSFC 82101645), הקרן למדעי הטבע של מחוז שאנדונג, סין (ZR2020QH088), ותוכנית התמיכה במדע וטכנולוגיה לחדשנות נוער של מכללות במחוז שאנדונג (2021KJ051).

הפרוטוקול הבא עמד בכל ההנחיות האתיות המוסדיות בנוגע לשימוש בחיות מחקר ואושר על ידי ועדת האתיקה של בעלי חיים בבית החולים המחוזי שאנדונג, סין. כל המניפולציות הכירורגיות בוצעו בהרדמה עמוקה, ובעלי החיים לא חוו כאב בשום שלב במהלך ההליך.
1. הכנה לפני הניתוח
<ol><li>עיקור מכשירים<ol><li>יש לעקר בקיטור כלי ניתוח באוטוקלאבה (121°C למשך 15 דקות) לפני הניתוח. הכינו מספיק תפרים ומחטים חד פעמיים.</li>
	</ol></li>
	<li>הגדרת פלטפורמת ניתוח<ol><li>בצע את הניתוח בחדר המוקדש להליכים כירורגיים. הקצה שטח ספסל של לפחות 60 ס"מ x 60 ס"מ לניתוח. נקו את פני השטח של האזור ב-75% אלכוהול וכסו במגבת רפואית חד-פעמית, ולאחר מכן חטאו אותו בקרינה אולטרה-סגולה 30 דקות מראש (איור 1A).</li>
	</ol></li>
	<li>הכנת בעלי חיים<ol><li>שכן את כל בעלי החיים בחדר מבוקר טמפרטורה (20-25 מעלות צלזיוס) עם מחזור אור של 12 שעות, 12 שעות חושך. הסתגלות נקבת עכברי C57BL/6 בת 8 שבועות למתקן הדיור למשך שבוע לפני הניתוח.</li>
		<li>שוקלים עכברים לפני הניתוח. יש לתת את כל נקבות העכברים בנות 9 שבועות בהרדמה כללית על ידי הזרקה תוך צפקית של טריברומואתנול (280 מ"ג/ק"ג), כדי להשיג חוסר כאב בכל שלב במהלך ההליך. להזריק meloxicam (2 מ"ג / ק"ג) תת עורית, כ 1 שעה לפני ניתוח כדי להקל על הכאב.</li>
		<li>יש למרוח משחת עיניים למניעת יובש בקרנית במהלך הניתוח.</li>
		<li>יש למרוח תחליב להסרת שיער על הגב באמצעות צמר גפן נקי. תן את קרם לשבת על העכבר במשך 3-5 דקות, ולאחר מכן להסיר את השיער באמצעות גזה צמר גפן. חזור על שלב זה עד שכל השיער יוסר מגב העכבר.</li>
		<li>השתמש גזה צמר גפן כדי לנקות את העור עם 75% אלכוהול. קבעו את העכבר על משטח הניתוח בחזרה באמצעות רצועת גומי או חבל כותנה (איור 1B) ומרחו תמיסת יודופור כדי לנקות את הגב. הערה: יש לאשר את עומק ההרדמה באמצעות צביטת בוהן לפני כריתת השחלות.</li>
	</ol></li>
</ol>2. כריתת שחלות
הערה: ניתן לשמור על טריברומואתנול למשך כ-30 דקות, ולהבטיח שהניתוח יושלם ככל האפשר.
<ol><li>בצע חתך גבי ~ 1.0 ס"מ לאורך מבסיס הירך כלפי מעלה באמצעות אזמל חד פעמי, ודא שרק העור והפאשיה התת עורית חתוכים והימנע מחיתוך לתוך הצפק האחורי בשלב זה.</li>
	<li>משוך את החתך שמאלה, וניתן לראות כרית שומן לבנה. חתכו ~0.5 ס"מ לאורך כרית השומן הלבן כדי לחשוף את חלל הצפק באמצעות מיקרו-מלקחיים ומספריים.</li>
	<li>לאחר חיתוך הצפק האחורי, לאט ובעדינות להסיר את כרית השומן הלבן מחלל intraperitoneal עם מיקרו מלקחיים. מיד להרטיב את רקמת השומן הלבן עם 0.9% מלוחים סטריליים מחוץ לגזה ספוג. שמור על רקמה חשופה תמיד לחה מחוץ לחלל הבטן.</li>
	<li>חומר גרגירי ורוד, כלומר השחלה, מחובר לחלק התחתון של כרית השומן הלבנה (איור 2A). השחלות מחוברות לצינור דק, כלומר הרחם. השתמשו בתפרים נספגים 5-0 כדי לקשור את קצה השחלה של הרחם ולהסיר את השחלה השמאלית (איור 2B).</li>
	<li>בעת הסרת שחלה, לשמר את רקמת השומן שמסביב ככל האפשר. יש להימנע ממגע ישיר בין כלי הניתוח לשחלות ולמנוע השתלה תוך צפקית של רקמת השחלה.</li>
	<li>מניחים בזהירות את כרית השומן הלבן בחזרה בחלל intraperitoneal. בצעו תפר פשוט לסירוגין בצפק האחורי עם תפר נספג 5-0 (איור 2C). לאחר השלמת התפר, נקו כל דימום עם גזה סטרילית ספוגה במי מלח 0.9%.</li>
	<li>משוך את חתך העור ימינה והסר את השחלה הימנית באותה שיטה.</li>
	<li>בצעו תפר לסירוגין עם 4-0 תפרים שאינם נספגים ונקו כל דימום עם גזה סטרילית ספוגה במי מלח 0.9% (איור 2D).</li>
	<li>נקו את הפצע בתמיסת יודופור לאחר השלמת שני התפרים. הזרקה תוך צפקית של אנטיביוטיקה רחבת טווח.</li>
</ol>3. תצפית לאחר הניתוח
<ol><li>העבירו את העכברים לשמיכה בטמפרטורה קבועה של 37 מעלות צלזיוס לאחר הניתוח. עד שהעכברים יוכלו לנוע בחופשיות, החזיקו את החיות בכלוב האישי שלהן. אין להשאיר את בעל החיים ללא השגחה עד שהוא חזר להכרה מספקת כדי לשמור על שכיבת עצם החזה.</li>
	<li>יש להזריק מלוקסיקם (2 מ"ג/ק"ג) תת עורית 24 שעות לאחר הניתוח כדי להקל על הכאב.</li>
	<li>עקוב אחר העכברים מדי יום כדי לוודא שהפצע הניתוחי מחלים כראוי ללא כל סימנים של סיבוכים (dehiscence).</li>
</ol>4. תוספי אסטרדיול
<ol><li>הכינו הזנה בתוספת אסטרדיול valerate. יש להשתמש במינון 2.6 מ"ג בטא-אסטרדיול 17-valerate לכל 1 ק"ג מזון.</li>
	<li>ב 3 ימים לאחר השלמת הניתוח, להאכיל את העכברים עם אסטרדיול valerate.</li>
</ol>5. הזרקת FSH
<ol><li>הכן פתרון FSH אנושי רקומביננטי. יש להמיס אבקת FSH אנושית רקומביננטית להזרקה עם 0.9% מלח סטרילי ל-100IU/mL.</li>
	<li>קבץ עכברים על פי תוכניות ניסוי ותן ממס או מינונים שונים של FSH רקומביננטי באמצעות הזרקה תוך צפקית למשך שבועיים. על פי הפעילות הביולוגית של FSH רקומביננטי, השתמש במינון הזרקה של FSH בעכברים שווה ערך לרמת FSH בסרום אצל נשים בתקופת המעבר לגיל המעבר. הערה: בהתבסס על טיפולים שונים, עכברות שעברו כריתת אסטרוגן חולקו באופן אקראי לשלוש קבוצות, קבוצת הממס (N.S.) שקיבלה ממס של 100 מיקרוליטר ליום, קבוצת FSH במינון נמוך (L-FSH) שקיבלה 15 IU/kg משקל גוף ליום וקבוצת FSH (H-FSH) במינון גבוה שקיבלה 30 IU/kg משקל גוף ליום.</li>
</ol>

פיתוח מודל עכבר לכריתת שחלות עם רמת FSH גבוהה

<ol><li>Harlow, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Executive+summary+of+the+Stages+of+Reproductive+Aging+Workshop+%2B+10%3A+addressing+the+unfinished+agenda+of+staging+reproductive+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Endocrinology+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Executive summary of the Stages of Reproductive Aging Workshop + 10: addressing the unfinished agenda of staging reproductive aging.</a> Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism. 97 (4), 1159-1168 (2012).</li>
<li>Ulloa-Aguirre, A., Zariñán, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Follitropin+Receptor%3A+Matching+Structure+and+Function%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">The Follitropin Receptor: Matching Structure and Function.</a> Molecular Pharmacology. 90 (5), 596-608 (2016).</li>
<li>Franks, S., Stark, J., Hardy, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Follicle+dynamics+and+anovulation+in+polycystic+ovary+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction+Update%22%5BJournal%5D)">Follicle dynamics and anovulation in polycystic ovary syndrome.</a> Human Reproduction Update. 14 (4), 367-378 (2008).</li>
<li>Guo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blocking+FSH+inhibits+hepatic+cholesterol+biosynthesis+and+reduces+serum+cholesterol%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Blocking FSH inhibits hepatic cholesterol biosynthesis and reduces serum cholesterol.</a> Cell Research. 29 (2), 151-166 (2019).</li>
<li>Xiong, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FSH+blockade+improves+cognition+in+mice+with+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">FSH blockade improves cognition in mice with Alzheimer's disease.</a> Nature. 603 (7901), 470-476 (2022).</li>
<li>Sun, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FSH+Directly+Regulates+Bone+Mass%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">FSH Directly Regulates Bone Mass.</a> Cell. 125 (2), 247-260 (2006).</li>
<li>Liu, X. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FSH+regulates+fat+accumulation+and+redistribution+in+aging+through+the+G%CE%B1i%2FCa%282%2B%29%2FCREB+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">FSH regulates fat accumulation and redistribution in aging through the Gαi/Ca(2+)/CREB pathway.</a> Aging Cell. 14 (3), 409-420 (2015).</li>
<li>Maclellan, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+Follicle-Stimulating+Hormone+Receptor+in+Vascular+Anomalies%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Expression of Follicle-Stimulating Hormone Receptor in Vascular Anomalies.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 133 (3), 344e-351en (2014).</li>
<li>Liu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blocking+FSH+induces+thermogenic+adipose+tissue+and+reduces+body+fat%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Blocking FSH induces thermogenic adipose tissue and reduces body fat.</a> Nature. 546 (7656), 107-112 (2017).</li>
<li>Ji, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epitope-specific+monoclonal+antibodies+to+FSH%CE%B2+increase+bone+mass%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Epitope-specific monoclonal antibodies to FSHβ increase bone mass.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (9), 2192-2197 (2018).</li>
<li>El Khoudary, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trajectories+of+estradiol+and+follicle-stimulating+hormone+over+the+menopause+transition+and+early+markers+of+atherosclerosis+after+menopause%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Preventive+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Trajectories of estradiol and follicle-stimulating hormone over the menopause transition and early markers of atherosclerosis after menopause.</a> European Journal of Preventive Cardiology. 23 (7), 694-703 (2016).</li>
<li>Radu, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+Follicle-Stimulating+Hormone+Receptor+in+Tumor+Blood+Vessels%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Expression of Follicle-Stimulating Hormone Receptor in Tumor Blood Vessels.</a> The New England Journal of Medicine. 363 (17), 1621-1630 (2010).</li>
<li>Sowers, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endogenous+hormones+and+bone+turnover+markers+in+pre-+and+perimenopausal+women%3A+SWAN%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoporosis+International%22%5BJournal%5D)">Endogenous hormones and bone turnover markers in pre- and perimenopausal women: SWAN.</a> Osteoporosis International. 14 (3), 191-197 (2003).</li>
<li>Kristensen, V. N., Kure, E. H., Erikstein, B., Harada, N., Børresen-Dale, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+susceptibility+and+environmental+estrogen-like+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22Mutation+Research%2FFundamental+and+Molecular+Mechanisms+of+Mutagenesis%22%5BJournal%5D)">Genetic susceptibility and environmental estrogen-like compounds.</a> Mutation Research/Fundamental and Molecular Mechanisms of Mutagenesis. 482 (1), 77-82 (2001).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

במהלך המעבר משלב הרבייה לשלב שאינו רבייה (גיל המעבר), נשים רבות חוות שינויים פיזיולוגיים ופתולוגיים משמעותיים. רמות FSH עולות במהלך המעבר לגיל המעבר1. מחקרים חדשים גילו כי FSH ברקמות ואיברים חוץ-גונדליים שונים הוא קריטי בפתוגנזה של מחלות רבות, כולל דיסליפידמיה4, מחלת אלצהיימר5, אוסטאופורוזיס 9,10, טרשת עורקים11, השמנת יתר9 וסרטן12. לכן, בניית מודל בעלי חיים שיכול לעזור לחקור את ההשפעות הבלתי תלויות של FSH in vivo חשוב במיוחד. מודל העכבר OVF מחקה את השלב המוקדם של המעבר לגיל המעבר עם אסטרוגן יציב יחסית ורמות FSH עולות, והוא מתאים במיוחד למחקרים לחקור את הפעולות החוץ-גונדליות של FSH.
בשיטה זו, כריתת השחלה בוצעה באמצעות חתך גב גבי יחיד, בערך 1 ס"מ מבסיס הירך כלפי מעלה (איור 1B). העור נחתך כמעט יחד עם שרירי הגב באמצעות מספריים חדים לניתוח, וכך נוצרה גישה לחלל הצפק. לאחר הניתוח, חתך השריר לא דרש תפירה, והפצע בעור נסגר דו-צדדית בתפר חתולי אחד (איור 2). הניתוח קל יותר מבחינה טכנית, גוזל פחות זמן ופחות מזיק לנקבות עכברים בהשוואה לשיטות אחרות בהן נעשה שימוש.
כמה פרטים שיש לשים לב אליהם במהלך הניתוח. ראשית, כל ההליכים הכירורגיים צריכים להישמר נקיים וסטריליים ככל האפשר כדי להפחית את הסיכון לזיהום לאחר הניתוח. שנית, מכיוון שרקמת השחלה שברירית מאוד, כלי ניתוח אינם יכולים ליצור קשר ישיר עם השחלות במהלך כריתת השחלות, כדי למנוע השתלה תוך צפקית. שלישית, לאחר הניתוח, העכברים הועברו לשמיכת טמפרטורה קבועה של 37 מעלות צלזיוס במהלך ההחלמה כדי למנוע היפותרמיה לאחר הניתוח שהובילה למוות.
מחקר קודם הוכיח כי אסטרוגן אנדוגני מסונתז בתאי תקה בשחלות של נשים לפני גיל המעבר או תאי סטרומה שומן של השד של נשים לאחר גיל המעבר ובכמויות מינוריות ברקמה היקפית14. האסטרוגן בסרום ירד בחדות עבור עכברות שעברו כריתת שחלות, אך לא ניתן לסלק אותו (איור 3B). אולם אסטרוגן אנדוגני המסונתז ברקמה חוץ-גונדלית אינו משפיע על יציבות רמות האסטרוגן במודל OVF (איור 4B).
יש כמה מגבלות במודל ה-OVF. ברגע שהניתוח אינו זהיר ומוביל להשתלה תוך צפקית בשחלות, הוא עלול להוביל לכשל מודל. במקרה זה, האסטרוגן בסרום אינו יורד בחדות ומשתנה בשלבים שונים של מחזור הייחום. לאחר מתן אקסוגני של אסטרוגן ו- FSH, לוקח כשבוע לגוף להגיע לשיווי משקל. לפיכך, שינויים פתולוגיים של מודל OVF המתרחשים בתוך 1 שבוע לא יכול להצביע על ההשפעות של FSH.
לסיכום, למודל OVF יש את היתרונות של היותו יציב, זול וקל לתפעול. ההשפעות המערכתיות של FSH ברמה גבוהה ניתן לראות לאחר הזרקה intraperitoneal של FSH; כלומר, מודל OVF מתאים למחקרים החוקרים את הפעולות החוץ-גונדליות של FSH. עם זאת, הדרישות לניתוח מודל והליכי הזרקה intraperitoneal הם גבוהים למדי. אם המימון מספיק, מודלים ספציפיים של נוקאאוט הם הבחירה הטובה ביותר.

רמות ההורמון מגרה הזקיקים (FSH) עולות במהלך המעבר לגיל המעבר (המונח מעבר לגיל המעבר הוגדר בשנת 2011 בשלבי סדנת הזדקנות הרבייה (STRAW) + מערכת 10)1. במהלך המעבר לגיל המעבר, תקופה המאופיינת בעלייה ברמות FSH ואסטרוגן1 יציב יחסית, נשים חוות שינויים במחזור החודשי ושינויים פיזיולוגיים משמעותיים המערבים תאים ורקמות שונות. שינויים אלה יכולים להשפיע באופן חמור על איכות החיים והבריאות של נשים. חקר ההשפעות של FSH עשוי לשפר את איכות החיים והבריאות של נשים.
FSH מופרש מתאי גונדוטרופ בבלוטת יותרת המוח הקדמית והוא קריטי לשליטה בתפקוד הגונדל וברבייה2. הפונקציה של FSH מתווכת באמצעות קולטן FSH (FSHR), השייך לקולטן מצומד חלבון G (GPCR)3. FSHR מתבטא בדרך כלל בגונדות, כלומר, השחלה והאשכים. הוכח כי FSHR מתבטא באופן אוניברסלי במספר תאים ורקמות חוץ-גונדליים, כולל כבד4, היפוקמפוס5, אוסטאוקלסטים6, אדיפוציטים7 ותאי אנדותל8. מחקרים חדשים חשפו פעולות גונדל נוספות של FSH ואת הרלוונטיות הקלינית הפוטנציאלית שלו בדיסליפידמיה4, מחלת אלצהיימר5, אוסטאופורוזיס 9,10, טרשת עורקים11, השמנת יתר9 וסרטן12. לכן, בניית מודל של בעלי חיים שיכול לעזור לחקור את ההשפעות הבלתי תלויות של FSH in vivo חשובה במיוחד בחקר הפעולות של FSH בלבד.
בפרוטוקול הצגנו את הנוהל להקמת מודל עכבר עם אסטרוגן יציב יחסית ורמות FSH עולות13. מודל העכבר מחקה את המעבר לגיל המעבר על ידי ניתוח לכריתת השחלות ולאחר מכן בתוספת אסטרדיול ואלרט ו- FSH רקומביננטי. כאשר לעכברות שעברו כריתת שחלות נוסף אסטרוגן אקסוגני כדי לשמור על רמות אסטרוגן דומות עם העכברים המופעלים על ידי דמה, רמות FSH אנדוגני היו יציבות עקב משוב אסטרוגן בבלוטת יותרת המוח. במצב זה, הוא יכול לשלוט ברמות FSH על ידי מתן FSH אקסוגני מבלי לשנות את רמות האסטרוגן. לפיכך, מודל העכבר OVF יכול להוציא את השפעת האסטרוגן ולבחון את ההשפעות הפיזיולוגיות והפתולוגיות של FSH. אנו מאמינים כי ההליך המפורט והחזותי שימושי לחוקרים לבסס את מודל עכבר OVF במעבדה שלהם וליישם אותו כדי לחקור שינויים פיזיולוגיים ופתולוגיים במהלך המעבר לגיל המעבר לפי הצורך.

<table><tbody><tr><td>בטא-אסטרדיול 17-ואלרט</td><td>מקלין</td><td>E829824</td><td></td></tr><tr><td>רגיש לאסטרדיול ELISA</td><td>Demeditec</td><td>DE4399</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת צביעה המטוקסילין</td><td>Beyotime</td><td>C0107</td><td></td></tr><tr><td>מלוקסיקם</td><td>אלאדין</td><td>M129228</td><td></td></tr><tr><td>הורמון מגרה זקיק אנושי רקומביננטי</td><td>Merck Serono</td><td>N19Z8803G</td><td></td></tr><tr><td>Tribromoethanol</td><td>Sigma</td><td>T48402</td><td>שם אליפטי: 2,2,2-Tribromoethanol</td></tr></tbody></table>

חקר השפעות עצמאיות של הורמון מגרה זקיקים in vivo במודל עכבר

Exploring Independent Effects of Follicle-Stimulating Hormone In Vivo in a Mouse Model

במהלך המעבר משלב הרבייה לשלב שאינו רבייה (גיל המעבר), נשים רבות חוות שינויים פיזיולוגיים ופתולוגיים משמעותיים, כולל ירידה במסת העצם, עלייה בשומנים בדם ועלייה בשומן הקרביים. רמות ההורמון מגרה הזקיקים (FSH) עולות במהלך המעבר לגיל המעבר. מחקרים רבים הראו כי FSH ברקמות ואיברים חוץ-גונדליים שונים קשור לפתוגנזה של מחלות מרובות. לכן, בניית מודל בעלי חיים שיכול לעזור לחקור את ההשפעות הבלתי תלויות של FSH in vivo חשוב במיוחד. במחקר זה, נקבות עכברות C57BL/6 עברו כריתת שחלות ובתוספת אסטרדיול ואלרט (OVX + E2) כדי לחסל את ההשפעה של ציר ההיפותלמוס-יותרת המוח-גונדל. עכברי OVX + E2 קיבלו ממס (N.S.) או מינונים שונים של FSH רקומביננטי באמצעות הזרקה תוך צפקית ליצירת מודל עכברי (OVF) המאופיין באסטרוגן יציב יחסית ורמות FSH עולות. לכן, יצרנו בהצלחה מודל עכבר ניסיוני כדי לחקות את השלב המוקדם של המעבר לגיל המעבר, המאופיין ברמות FSH גבוהות בסרום. מודל OVF יש את היתרונות של להיות יציב, עלות נמוכה, וקל לתפעול, אשר מתאים למחקרים כדי לחקור את הפעולות extragonadal של FSH. כאן, אנו מתארים פרוטוקולים מפורטים עבור מודל OVF עכבר.

מודל עכבר OVF מחקה את השלב המוקדם של המעבר לגיל המעבר עם אסטרוגן יציב יחסית ורמות FSH עולות13. ראשית, לצורך ניתוח להסרת שחלות, עכברות C57BL/6 בנות 9 שבועות עברו הרדמה כללית ועברו ניתוח דמה (Sham) או כריתת שחלות דו-צדדית (OVX). כאשר תמונות מריחה של תאים מוכתמים של פאפאניקולאו זיהו בבירור את שלבי הפרואסטרוס, הייחום, המטסטרוס והדיזטרוס של מחזור הייחום, עכברי OVX איבדו את מחזור הייחום (איור 3A), ושיטת ELISA הראתה ירידה משמעותית ברמות אסטרדיול בסרום (E2) (איור 3B). שנית, עכברי OVX קיבלו תוספת של בטא-אסטרדיול 17-valerate (OVX + E2) כדי לשמור על אסטרוגן בסרום באותה רמה כמו קבוצת Sham. שלישית, עכברי OVX + E2 קיבלו ממס (N.S.) או מינונים שונים של FSH רקומביננטי באמצעות הזרקה תוך צפקית כדי ליצור מודל עכברי (OVF) המאופיין באסטרוגן יציב יחסית וברמות FSH עולות (איור 4).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65665/65665fig01.jpg"> איור 1. סביבה כירורגית ותנוחת עכבר. (א) שטח ספסל של 60 ס"מ על 60 ס"מ לפחות לניתוח. נקו את פני השטח של האזור עם 75% אלכוהול וכסו אותו במגבת רפואית חד פעמית, ולאחר מכן חיטאו בקרינה אולטרה סגולה 30 דקות מראש. (B) קבע את העכבר על משטח הניתוח בחזרה באמצעות רצועת גומי או חבל כותנה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65665/65665fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65665/65665fig02.jpg"> איור 2. שלבים עיקריים של פעולה כירורגית. (A) מנח השחלות, (B) כריתת שחלות, (C) תפר הצפק, ו-(D) חתך בעור. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65665/65665fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65665/65665fig03.jpg"> איור 3. ציטולוגיה נרתיקית. ציטולוגיה נרתיקית מייצגת שלבים של מחזור הייחום והאסטרוגן האנדוגני בעכברים שעברו כריתת שחלות (OVX) ובעכברים המופעלים על ידי דמה (Sham; n = 12 עבור קבוצת Sham; n = 10 עבור קבוצות OVX). (A) ציטולוגיה נרתיקית מייצגת שלבים במחזור הייחום בהתאם לנוכחות היחסית של לויקוציטים, תאי אפיתל שעברו קרניזציה ותאי אפיתל בעלי גרעין. שלבי הייחום כוללים פרואסטרוס, הדומיננטיות של תאי אפיתל גרעיניים; ייחום, הדומיננטיות של תאים cornified enucleated; metestrus, נוכחות של לויקוציטים, ותאי אפיתל cornified ו nucleated; Diestros, הדומיננטיות של לויקוציטים. סרגל קנה מידה = 100 מיקרומטר. (B) אסטרוגן אנדוגני בעכברים שעברו כריתת שחלות (OVX) ובעכברים המופעלים על ידי דמה (Sham). הנתונים מוצגים כממוצע ± SEM. מבחן t של התלמיד משמש לניתוח סטטיסטי. עמ&lt; 0.001. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65665/65665fig03large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65665/65665fig04.jpg"> איור 4. מודל OVF ורמות הורמונים בסרום. (A) מודל OVF של תרשים זרימה. (B) ניתוח ELISA של ריכוזי אסטרוגן בסרום (E2) ו-FSH. הנתונים מיוצגים כממוצע ± SEM. ANOVA חד-כיווני שימש לניתוח סטטיסטי. * עמ&lt; 0.05 ו** עמ&lt; 0.01. נתון זה שונהמ-4. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65665/65665fig04large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>

הורמון מגרה זקיק (FSH) ברקמות ואיברים חוץ-גונדליים שונים קשור לפתוגנזה של מחלות מרובות. ניתן להשתמש במודל העכבר שעבר כריתת שחלות וטיפול ב- FSH (OVF) כדי לחקור את הפעולות החוץ-גונדליות של FSH.

During the transition from a reproductive to a nonreproductive phase (menopause), many women experience significant physiological and pathological ...

המחקר שלנו מתמקד בשינויים פיזיולוגיים ופתולוגיים אצל נשים לפני גיל המעבר. במחקר זה, אנו מנסים לקבוע אילו שינויים פתופיזיולוגיים קשורים ל- FHC. גיל המעבר קשור לדיסליפידמיה ולסיכון מוגבר למחלות לב וכלי דם.באמצעות מודל עכברי זה, מצאנו כי הורמון מגרה זקיקים, ללא תלות באספירין, מעלה את רמות הכולסטרול בסרום. יתר על כן, חסימת איתות FSH יכולה למנוע ביעילות היפוכולסטרולמיה. מודל עכבר זה מחקה את השלב המוקדם של המעבר לגיל המעבר, המאופיין ברמות FSH גבוהות בסרום ורמות אסטרוגן יציבות יחסית.למודל יש את היתרונות של היותו יציב, בעלות נמוכה וקלה לתפעול, המתאימה למחקרים כדי לחקור את פעולות הגונדל הנוספות של FSH.

exploring-independent-effects-follicle-stimulating-hormone-vivo-mouse

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

מאמר זה מתאר microinjection וelectroporation של אשך עכבר in vivo כטכניקת transfection לתאי עכבר אשכים ללמוד תהליכים ייחודיים של יצירת תאי זרע. הפרוטוקול המובא כרוך בצעדים של הכנת זכוכית נימים, microinjection באמצעות צינור efferent, וtransfection ידי electroporation.

בVivo Microinjection וElectroporation של אשך העכבר

פרוטוקול זה מתאר את התרבות העיקרית / שיתוף התרבות של רקמת השחלה עכבר, באמצעות השחלות מעכברים בילוד וזקיקים בשחלות בודדות מעכברים לפני גיל בגרות מיניים. טכניקות התרבות לתמוך בפיתוח באופן פיסיולוגי מאוד, המאפשר חקירה של ההשפעה של סוכנים חיצוניים בשחלה, ושל יחסי גומלין בין זקיקים בשחלות.

תרבות ושיתוף התרבות של עכבר שחלות וזקיקים בשחלות

טכניקה מאוד מבטיח לייצר רקמות בונה בלי באמצעות מטריצת התרבות תאים במצב microgravity מדומה. באמצעות מערכת תרבות סיבוביים, בדקנו זקיק השחלות הצמיחה וההתבגרות oocyte במונחים של זקיק הישרדות, מורפולוגיה, צמיחה, הפונקציה oocyte תחת התנאי microgravity מדומה.

במבחנה צמיחה של העכבר זקיקים Preantral תחת Microgravity מדומה

בתרביות רקמה השחלות יכול לשמש דגמים של זקיק פיתוח, הביוץ זקיק בהכנת ולציין את מנגנוני הרגולציה של תהליכים דינאמיים השחלות.

תרביות רקמה השחלות כדי לחזות תופעות העכבר השחלה

אנו מתארים את התפתחות מודל העכבר PCOS דמוי רזה עם גלולה דיהידרוטסטוסטרון ללמוד הפתופיזיולוגיה של PCOS, הצאצא של סכרים PCOS דמוי אלה.

מודל Hyperandrogenic העכבר ללמוד תסמונת השחלות הפוליציסטיות

כאן, אנו מתארים, להשוות, ולהשוות שתי טכניקות שונות לספירת זקיק מדויקת של רקמות השחלות עכבר קבוע.

ספירה מדויקת של זקיקים בשחלות עכברים למבוגרים

מחקר זה מציג מודל עכבר חדש שתוכנן במיוחד כדי לדמות אנדומטריומה, תת-סוג משמעותי קלינית של אנדומטריוזיס. על ידי שימוש בעכברי C57BL/6J, המודל שואף להבהיר את המנגנונים הפתופיזיולוגיים העומדים בבסיס אי פוריות הקשורה לאנדומטריומה, ומציע כלי מעודן לגשר על פער הידע הנוכחי ברפואת הרבייה.

הקמת מודל עכברי ניסיוני של אנדומטריומה כדי לחקור את אי הפוריות הקשורה אליה

פרוטוקול זה מתאר מתודולוגיות לביסוס מודל פשוט ויעיל להשתלת עוברים במבחנה להערכת המולקולות הרלוונטיות המשפיעות על תהליך השתלת העוברים.

הקמת מודל השתלת עוברים במבחנה

במודלים של בעלי חיים orthotopic של סרטן השחלות לשכפל טוב יותר מחלות אנושיות, ולכן לשפר את ההבנה שלנו של התקדמות סרטן תגובת הגידול לטיפול. מודל העכבר מקבל זריקה intrabursal של בלוציפראז-להביע תאים סרטניים בשחלות. טיפול מנוהל באמצעות gavage הפה. הגידול מנוטרת על...

בשנת vivo ההדמיה לטיפולים במודל עכבר orthotopic של סרטן השחלות

כדי לחקור את הקשר בין הומאוסטזיס חלבון, מתח והזדקנות, עקבנו אחר שינויים בקיפול החלבון על ידי מעקב אחר תפקוד לקוי של חלבון, לוקליזציה של חלבון בתא ויציבות החלבון ברמת האורגניזם, התא והחלבון, תוך שימוש במטזואן Caenorhabditis elegans הניתן לטיפול גנטי כמערכת מודל.

שימוש ב-Caenorhabditis elegans כמערכת מודל לחקר הומאוסטזיס חלבון באורגניזם רב-תאי

חקור את השפעות הורמון מגרה הזקיקים מחוץ לרבייה בדגם עכבר OVF. למד כיצד FSH משפיע על רמות כולסטרול בדם ומסיכון קרדיווסקולרי בגיל המעבר.

חקר השפעות עצמאיות של הורמון מגרה זקיקים in vivo במודל עכבר

גלה סרטונים נוספים