Name: אפיון מורפולוגיה וסקולרית של ניוון מקולרי נאו-וסקולרי הקשור לגיל על ידי אינדוציאנין אנגיוגרפיה ירוקה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-08-11T14:20:00.000+00:00
Duration: 5 min 14 s
Description: חקור אפיון מורפולוגיה וסקולרית של ניוון מקולרי נאו-וסקולרי בדגמי עכברים באמצעות אנגיוגרפיה ירוקה. השיטה מאפשרת לזהות הבדלי תגובה לטיפול בין עכברים צעירים ומבוגרים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מקרן BrightFocus, קרן מחקר הרשתית, קרן Mullen וקרן שרה קמפבל בלאפר ברפואת עיניים ל- YF, מענק ליבה של NIH 2P30EY002520 למכללת ביילור לרפואה, ומענק בלתי מוגבל למחלקה לרפואת עיניים במכללת ביילור לרפואה ממחקר למניעת עיוורון.

הניסויים בבעלי חיים שנערכו במחקר זה קיבלו אישור מהוועדות המוסדיות לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC) במכללת ביילור לרפואה. כל ההליכים בוצעו בהתאם להנחיות המפורטות בהצהרת האגודה לחקר הראייה והעיניים (ARVO) לשימוש בבעלי חיים בחקר העיניים והראייה. במחקר הנוכחי נעשה שימוש בעכברים זכרים ונקבות C57BL/6J צעירים (7-9 שבועות) וזקנים (12-16 חודשים). בעלי החיים התקבלו ממקור מסחרי (ראו טבלת חומרים).
1. הכנת מערכת ההדמיה
<ol><li>מקם כרית חימום על פלטפורמת ההדמיה (ראה טבלת חומרים) כדי להבטיח שטמפרטורת הגוף של העכבר תישמר במהלך ההדמיה. הפעל את כרית החימום וכוונן את הטמפרטורה ל -35 מעלות צלזיוס.</li>
	<li>הסר את כיסוי האבק והפעל את אופטלמוסקופ סריקת הלייזר. הניחו עדשת 55° על המכשיר.</li>
	<li>הגדר את תוכנת ההדמיה (ראה טבלת חומרים) והזן מידע חיוני, כולל גנוטיפ, מין, גיל וכו '. כאשר הפעלת ההדמיה מתחילה, בחר את IR (ערוץ אינפרא אדום) ללכידת תמונות ICGA.</li>
</ol>2. הכנת בעלי חיים לפני ICGA ו-FA
<ol><li>שקול את העכבר כדי לקבוע את כמות ההרדמה (קטמין/קסילזין 70-100/2.5-10 מ"ג/ק"ג, ראה טבלת חומרים) הדרושה. הערה: מיטוב המינון הוא חיוני מכיוון שהפרופיל המטבולי משתנה בין זני עכברים שונים. חיוני לקבוע את המינון המתאים כדי למנוע מהעכבר להתעורר לפני השלמת ההדמיה או הסיכון למנת יתר ולתמותה פוטנציאלית של בעלי חיים.</li>
	<li>השתמש מזרק סטרילי 1 מ"ל עם מחט 30-32 G כדי לספק הרדמה על ידי הזרקה intraperitoneal. צבוט בעדינות את אחת מכפות העכבר כדי לבדוק אם העכבר מורדם כראוי. אם בעל החיים מפגין תגובה או תנועה כלשהי, מומלץ להמתין זמן נוסף לפני שתמשיך לשלב הבא. זה מאפשר לחיה להתיישב ומבטיח תנאים אופטימליים עבור ההליכים הבאים.</li>
	<li>יש לתת טיפות תמיסה אופתלמית טרופיקמיד 1% כדי להרחיב את שתי העיניים של העכבר. יש להמתין לפחות 30 שניות לפני השימוש בטיפות הידרוכלוריד של 0.5% פרופרקאין (ראו טבלת חומרים) על שתי העיניים כדי להפחית את תנועת העיניים ואת המצמוץ. לאחר מכן יש להשתמש בטיפות ג'ל עיניים עם חומר סיכה. הערה: לאורך כל תקופת ההרדמה חשוב לטפל בבעיית היובש הקיצוני בעיני העכבר, שעלול להוביל לאטימות הקרנית. אטימות זו הופכת את ההדמיה הבאה למאתגרת בשל הראות הלקויה. כדי למנוע זאת, חשוב למרוח טיפות ג'ל עיניים סיכה ברציפות כדי לשמור על לחות עיני העכבר.</li>
	<li>הנח את העכבר על כרית מים מחוממת. הערה: עכברים הם בעלי יחס שטח פנים לנפח גבוה, וכתוצאה מכך אובדן חום מוגבר לסביבה. בשילוב עם ירידת הטמפרטורה הנגרמת על ידי הרדמה, זה יכול להוות סיכון משמעותי לעכבר, מה שעלול להוביל למוות עקב היפותרמיה. חשוב לנקוט באמצעי הזהירות הדרושים כדי למנוע היפותרמיה ולהבטיח את רווחתו של העכבר במהלך ההליך.</li>
	<li>הכינו תערובת בנפח 1:1 של ICG בנפח 2 מ"ג/מ"ל וצבע פלואורסצאין בנפח 20 מ"ג/מ"ל (ראו טבלת חומרים). יש לתת 250 μL של התערובת באמצעות הזרקה intraperitoneal באמצעות מזרק 1 מ"ל ומחט 32 גרם.<ol><li>הכנס את המחט ברביע השמאלי התחתון של בטן העכבר ליד הרגליים האחוריות בזווית מקבילה לעור העכבר כדי למנוע ניקוב איברים כלשהם.</li>
		<li>בזהירות למשוך את הבוכנה ולוודא כי שום דם לא נכנס כובע מזרק. המשיכו להזריק את הצבע לאט ובהתמדה, תוך שמירה על קצב עקבי. הערה: יש לסנן את צבע ה-ICG באמצעות מסנן מזרקים בגודל 0.22 מיקרומטר לפני השימוש.</li>
	</ol></li>
</ol>3. ICGA ו-FA
<ol><li>הנח את העכבר על כרית החימום של פלטפורמת ההדמיה כדי להתחיל בהדמיה.</li>
	<li>מקם את גוף העכבר בזווית של 45 מעלות למצלמה וסובב את ראשו מעט כלפי מטה. זה מאפשר לעצב הראייה להיות במרכז הפוקוס של המצלמה.</li>
	<li>בעזרת צמר גפן, נגבו בעדינות את העין כדי להסיר את שכבת טיפות העיניים או הג'לים של חומר הסיכה על העין המצולמת תחילה. הקפד למרוח את טיפות ג'ל הסיכה מיד לאחר השלמת הליך ההדמיה. הערה: לא מומלץ להשאיר את העין ללא שימון למשך יותר מדקה אחת בזמן הרדמה.</li>
	<li>הזז את המצלמה לכיוון עין העכבר. בחר את ערוץ FA ממודול הרכישה. ניתן להשתמש בלומינסנציה הנפלטת מתעלת FA כדי למקם במרכז קרנית העכבר למיקום מהיר יותר.</li>
	<li>מקם את ראש העכבר באופן שעצב הראייה ממורכז על המסך, תוך הימנעות מהצורך להטות את אופטלמוסקופ סריקת הלייזר בזווית. בצע התאמות קלות במיקום ראש העכבר כדי להשיג את היישור הרצוי.</li>
	<li>במודול הרכישה, בחר את ערוץ ICGA. ודא שעוצמת הלייזר מוגדרת ל- 100% ובחר באפשרות 55° כדי להתאים לעדשה המתאימה. זה מבטיח הגדרות אופטימליות עבור אופטלמוסקופ סריקת לייזר. הערה: כדי למנוע רוויית יתר, ייתכן שיהיה צורך להשתמש בעוצמת לייזר נמוכה יותר, בדרך כלל סביב 25%-50%, בעת הדמיה בשלב המוקדם. התאמת עוצמת הלייזר בטווח זה יכולה לסייע בצילום תמונות ברורות ומדויקות מבלי לגרום לרוויית יתר.</li>
	<li>כאשר העין תופסת את כל המסך בתוכנת ההדמיה, בצע התאמות להגדרות הרגישות והמיקוד כדי לקבל את התמונה הברורה ביותר של קרום CNV.<ol><li>סובב את הלחצן השחור העגול במודול הרכישה כדי להתאים את רגישות התמונה.</li>
		<li>סובב את הידית על האופטלמוסקופ כדי להתאים את המיקוד. המיקוד האופטימלי להדמיה של כלי הדם ברשתית באמצעות FA הוא בדרך כלל בטווח של 35-45 D (דיופטרים). מצד שני, המוקד האידיאלי להדמיה של הכורואיד באמצעות ICGA הוא בדרך כלל בין 10-15 D. הערה: בשל הגדלים השונים של קרום CNV, ייתכן שיהיה צורך להתאים את המיקוד ב 10-30 D כדי לקבל הדמיה אופטימלית של המורפולוגיה של כלי הדם.</li>
	</ol></li>
	<li>לאחר התאמת המיקוד והרגישות להשגת התמונה הטובה ביותר האפשרית, לחץ על הלחצן השחור העגול במודול הרכישה כדי לנרמל את התמונה. לאחר השלמת הנורמליזציה (כל המסגרות שנלכדו), לחץ על כפתור הרכישה בלוח מסך המגע כדי לשמור את התמונה. ייתכן שיהיה צורך להזיז את המצלמה כדי לצלם CNV מזוויות שונות. העכבר יכול גם להיות מכוון בתנוחות שונות כדי לספק את התמונה הטובה ביותר של נגע CNV. הערה: ייתכן שיהיה צורך להתאים מחדש את המיקוד או המיקום של אופטלמוסקופ סריקת לייזר בעת צפייה בכלי הדם רחוק יותר לעצב הראייה.</li>
	<li>חזור לערוץ FA באמצעות מודול הרכישה. בצע את אותם השלבים המפורטים בשלבים 3.6-3.7 כדי להתאים את הרגישות והמיקוד של כל תמונה כדי ללכוד את הדליפה של נגע CNV. הערה: ודא שנבחרה הרגישות הנכונה כדי למנוע רוויית יתר של דליפת CNV ולהגדיל באופן מלאכותי את אזור הדליפה.</li>
	<li>דמיינו את "השלב המוקדם" של ICGA ו-FA 3-4 דקות לאחר ההזרקה. הערה: "השלב המוקדם" הוא הזמן שבו ניתן לראות את כלי הדם הכורואידיים בצורה ברורה וברורה. במהלך השלב האמצעי, המתרחש בדרך כלל בין 4-8 דקות, כלי הדם ברשתית ובכורואידים, דהויים ומפוזרים הרבה יותר. כאשר השלב המאוחר (>8-10 דקות) נכנס, הן כלי הדם הכורואידליים והן כלי הרשתית הופכים לבלתי ניתנים להבחנה. נגעי CNV היפרפלואורסצנטיים, לעומת זאת, מפגינים ניגודיות מקסימלית על רקע מופחת. תזמונים אלה שהוזכרו משתנים ותלויים בריכוז ובכמות של צבע ICG המוזרק. כמות גדולה יותר של צבע ICG נוטה להגדיל את ציר הזמן של כל שלב ולספק כלי דם מובחנים יותר. יש להגדיר שלב בהתבסס על תכונות המפתח המפורטות לעיל ולא על זמן מוחלט.</li>
	<li>לאחר שכל התמונות נרכשו, החל חומר סיכה ג'ל או משחה על עין העכבר בזהירות לפקח על העכבר על כרית החימום להתאוששות. זה בדרך כלל לוקח 1.5 שעות עבור העכבר כדי להתאושש באופן מלא.</li>
	<li>החזירו את העכברים לכלובים ולאזור ההחזקה המיועד לאחר שהתאוששו לחלוטין מההרדמה והיו ערים.</li>
	<li>לפני כיבוי מערכת ההדמיה והלייזר, יצאו את התמונות כקובצי TIFF או JPEG לצורך ניתוח בהמשך.</li>
</ol>4. RPE/כורואיד להרכבה שטוחה וצביעה
<ol><li>קבע את העיניים ב-4% פרפורמלדהיד למשך הלילה. לשטוף את העיניים עם PBS שלוש פעמים. הסירו את העדשה והקרנית.</li>
	<li>יש לדגור על העיניים בתמיסה חוסמת (10% אלבומין בסרום בקר, 0.6% טריטון X-100 ב-PBS) למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר. יש לחזור על שטיפת PBS שלוש פעמים.</li>
	<li>יש לדגור על העיניים עם נוגדן אקטין GS-IB4 Alexa-flour 568 מצומד ונוגדן אקטין שריר חלק נגד α (ראו טבלת חומרים) למשך הלילה בתמיסת החסימה.</li>
	<li>יש לשטוף שלוש פעמים עם PBS. דגרו על הדגימות עם נוגדן משני נגד ארנב עז Alexa Fluor 488 (ראו טבלת חומרים) למשך שעתיים בטמפרטורת החדר.</li>
	<li>בצע 4 חיתוכים רדיאליים מהקצה לקו המשווה. בזהירות להסיר את הרשתית17. הערה: יש להקפיד על מנת להבטיח שהקרום הניאו-וסקולרי אינו מנותק בטעות.</li>
	<li>הרכיבו את הכורואיד השטוח על מגלשת זכוכית. דמיינו את ה- CNV באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי.</li>
</ol>

אפיון סוגי נגעים שונים של CNV המושרה בלייזר בעכבר

<ol><li>Fleckenstein, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Disease+Primers%22%5BJournal%5D)">Age-related macular degeneration.</a> Nature Reviews Disease Primers. 7 (1), 1-25 (2021).</li>
<li>Wong, W. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+prevalence+of+age-related+macular+degeneration+and+disease+burden+projection+for+2020+and+2040%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Global+Health%22%5BJournal%5D)">Global prevalence of age-related macular degeneration and disease burden projection for 2020 and 2040: a systematic review and meta-analysis.</a> The Lancet Global Health. 2 (2), e106-e116 (2014).</li>
<li>Maguire, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Five-Year+outcomes+with+anti-vascular+endothelial+growth+factor+treatment+of+neovascular+age-related+macular+degeneration%3A+the+comparison+of+age-related+macular+degeneration+treatments+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Five-Year outcomes with anti-vascular endothelial growth factor treatment of neovascular age-related macular degeneration: the comparison of age-related macular degeneration treatments trials.</a> Ophthalmology. 123 (8), 1751-1761 (2016).</li>
<li>Yang, S., Zhao, J., Sun, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resistance+to+anti-VEGF+therapy+in+neovascular+age-related+macular+degeneration%3A+a+comprehensive+review%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Design%2C+Development+and+Therapy%22%5BJournal%5D)">Resistance to anti-VEGF therapy in neovascular age-related macular degeneration: a comprehensive review.</a> Drug Design, Development and Therapy. 10, 1857-1867 (2016).</li>
<li>Ehlken, C., Jungmann, S., Böhringer, D., Agostini, H. T., Junker, B., Pielen, A. Switch of anti-VEGF agents is an option for nonresponders in the treatment of AMD. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aEhlken%2C+C+%22Eye%22">Eye</a>. 28 (5), London, England. 538-545 (2014).</li>
<li>Heier, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravitreal+aflibercept+%28VEGF+trap-eye%29+in+wet+age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Intravitreal aflibercept (VEGF trap-eye) in wet age-related macular degeneration.</a> Ophthalmology. 119 (12), 2537-2548 (2012).</li>
<li>Rofagha, S., Bhisitkul, R. B., Boyer, D. S., Sadda, S. R., Zhang, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SEVEN-UP+Study+Group+Seven-year+outcomes+in+ranibizumab-treated+patients+in+ANCHOR%2C+MARINA%2C+and+HORIZON%3A+a+multicenter+cohort+study+%28SEVEN-UP%29%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">SEVEN-UP Study Group Seven-year outcomes in ranibizumab-treated patients in ANCHOR, MARINA, and HORIZON: a multicenter cohort study (SEVEN-UP).</a> Ophthalmology. 120 (11), 2292-2299 (2013).</li>
<li>Krebs, I., Glittenberg, C., Ansari-Shahrezaei, S., Hagen, S., Steiner, I., Binder, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-responders+to+treatment+with+antagonists+of+vascular+endothelial+growth+factor+in+age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Non-responders to treatment with antagonists of vascular endothelial growth factor in age-related macular degeneration.</a> British Journal of Ophthalmology. 97 (11), 1443-1446 (2013).</li>
<li>Mettu, P. S., Allingham, M. J., Cousins, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incomplete+response+to+Anti-VEGF+therapy+in+neovascular+AMD%3A+Exploring+disease+mechanisms+and+therapeutic+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Incomplete response to Anti-VEGF therapy in neovascular AMD: Exploring disease mechanisms and therapeutic opportunities.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 82, 100906(2021).</li>
<li>Otsuji, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initial+non-responders+to+ranibizumab+in+the+treatment+of+age-related+macular+degeneration+%28AMD%29%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Ophthalmology+%28Auckland%2C+N.Z%29%22%5BJournal%5D)">Initial non-responders to ranibizumab in the treatment of age-related macular degeneration (AMD).</a> Clinical Ophthalmology (Auckland, N.Z). 7, 1487-1490 (2013).</li>
<li>Cobos, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+between+CFH%2C+CFB%2C+ARMS2%2C+SERPINF1%2C+VEGFR1+and+VEGF+polymorphisms+and+anatomical+and+functional+response+to+ranibizumab+treatment+in+neovascular+age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">Association between CFH, CFB, ARMS2, SERPINF1, VEGFR1 and VEGF polymorphisms and anatomical and functional response to ranibizumab treatment in neovascular age-related macular degeneration.</a> Acta Ophthalmologica. 96 (2), e201-e212 (2018).</li>
<li>Kitchens, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pharmacogenetics+study+to+predict+outcome+in+patients+receiving+anti-VEGF+therapy+in+age+related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Ophthalmology+%28Auckland%2C+N.Z.%29%22%5BJournal%5D)">A pharmacogenetics study to predict outcome in patients receiving anti-VEGF therapy in age related macular degeneration.</a> Clinical Ophthalmology (Auckland, N.Z.). 7, 1987-1993 (2013).</li>
<li>Rosenfeld, P. J., Shapiro, H., Tuomi, L., Webster, M., Elledge, J., Blodi, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristics+of+patients+losing+vision+after+2+Years+of+monthly+dosing+in+the+phase+III+Ranibizumab+clinical+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Characteristics of patients losing vision after 2 Years of monthly dosing in the phase III Ranibizumab clinical trials.</a> Ophthalmology. 118 (3), 523-530 (2011).</li>
<li>Spaide, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography+angiography+signs+of+vascular+abnormalization+with+antiangiogenic+therapy+for+choroidal+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography angiography signs of vascular abnormalization with antiangiogenic therapy for choroidal neovascularization.</a> American Journal of Ophthalmology. 160 (1), 6-16 (2015).</li>
<li>Lumbroso, B., Rispoli, M., Savastano, M. C., Jia, Y., Tan, O., Huang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography+angiography+study+of+choroidal+neovascularization+early+response+after+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Developments+in+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography angiography study of choroidal neovascularization early response after treatment.</a> Developments in Ophthalmology. 56, 77-85 (2016).</li>
<li>Zhu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combination+of+apolipoprotein-A-I%2Fapolipoprotein-A-I+binding+protein+and+anti-VEGF+treatment+overcomes+anti-VEGF+resistance+in+choroidal+neovascularization+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Communications+Biology%22%5BJournal%5D)">Combination of apolipoprotein-A-I/apolipoprotein-A-I binding protein and anti-VEGF treatment overcomes anti-VEGF resistance in choroidal neovascularization in mice.</a> Communications Biology. 3 (1), 386(2020).</li>
<li>Zhang, Z., Shen, M. M., Fu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combination+of+AIBP%2C+apoA-I%2C+and+Aflibercept+overcomes+anti-VEGF+resistance+in+neovascular+AMD+by+inhibiting+arteriolar+choroidal+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Combination of AIBP, apoA-I, and Aflibercept overcomes anti-VEGF resistance in neovascular AMD by inhibiting arteriolar choroidal neovascularization.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 63 (12), 2(2022).</li>
<li>Koehn, D., Meyer, K. J., Syed, N. A., Anderson, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ketamine%2FXylazine-induced+corneal+damage+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Ketamine/Xylazine-induced corneal damage in mice.</a> PloS One. 10 (7), e0132804(2015).</li>
<li>Li, X. -T., Qin, Y., Zhao, J. -Y., Zhang, J. -S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+lens+opacity+induced+by+different+kinds+of+anesthetic+drugs+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Acute lens opacity induced by different kinds of anesthetic drugs in mice.</a> International Journal of Ophthalmology. 12 (6), 904-908 (2019).</li>
<li>Zhou, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preventing+corneal+calcification+associated+with+xylazine+for+longitudinal+optical+coherence+tomography+in+young+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Preventing corneal calcification associated with xylazine for longitudinal optical coherence tomography in young rodents.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 58 (1), 461-469 (2017).</li>
<li>Ikeda, W., Nakatani, T., Uemura, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cataract-preventing+contact+lens+for+in+vivo+imaging+of+mouse+retina%5BTitle%5D)+AND+%22BioTechniques%22%5BJournal%5D)">Cataract-preventing contact lens for in vivo imaging of mouse retina.</a> BioTechniques. 65 (2), 101-104 (2018).</li>
<li>Kumar, S., Berriochoa, Z., Jones, A. D., Fu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detecting+abnormalities+in+choroidal+vasculature+in+a+mouse+model+of+age-related+macular+degeneration+by+time-course+indocyanine+green+angiography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Detecting abnormalities in choroidal vasculature in a mouse model of age-related macular degeneration by time-course indocyanine green angiography.</a> Journal of Visualized Experiments. 84, e51061(2014).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

מחקר זה הדגים את השימוש באנגיוגרפיה ירוקה אינדוציאנינית (ICGA) כדי לזהות את המורפולוגיה של כלי הדם של ניאו-וסקולריזציה כורואידית עורקית ונימי (CNV) במודלים של עכברים עם CNV המושרה בלייזר. תכונות האור הקשור להמוגלובין והאינפרא אדום של צבע ירוק אינדוציאנין (ICG) אפשרו זיהוי של מורפולוגיה CNV, דבר מאתגר להשגה באמצעות אנגיוגרפיה פלואורסצאין (FA), השיטה הנוכחית המשמשת את קהילת המחקר.
השלב הקריטי הראשון בפרוטוקול הוא לוודא שהצבע מוזרק לחלל התוך צפקי מבלי לחדור לאיברים. מיקום הזרקה נכון ברביע השמאלי ...

ניוון מקולרי הקשור לגיל (AMD) הוא מצב שכיח המוביל לאובדן ראייה חמור אצל אנשים מבוגרים1. בארצות הברית לבדה, מספר חולי AMD צפוי להכפיל את עצמו, ולהגיע לכמעט 22 מיליון עד 2050, לעומת 11 מיליון כיום. ברחבי העולם, המספר המשוער של מקרי AMD צפוי להגיע ל -288 מיליון מדהים עד 20402.
Choroidal neovascularization (CNV), הידוע גם בשם AMD "רטוב" או neovascular, יכול להיות השפעות הרסניות על הראייה עקב היווצרות של כלי דם חריגים מתחת הרשתית המרכזית. זה מוביל לדימום, הפרשה ברשתית ואובדן ראייה משמעותי. הכנסת טיפולים אנטי-וסקולריים בגורם גדילה אנדותל (VEGF), המכוונים ל-VEGF חוץ-תאי, חוללה מהפכה בטיפול ב-CNV. עם זאת, למרות התקדמות זו, עד 50% מהחולים מפגינים תגובות תת-אופטימליות לטיפולים אלה, עם פעילות מחלה מתמשכת כגון הצטברות נוזלים ודימומים לא פתורים או חדשים 3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14.
מחקרים קליניים הצביעו על כך שעמידות נגד VEGF בחולי CNV תואמת לעתים קרובות לנוכחות של CNV עורקי, המאופיינת בעורקים מסתעפים בקליבר גדול, לולאות כלי דם וקשרים אנסטומטיים9. טיפול חוזר נגד VEGF יכול לתרום לנורמליזציה של כלי הדם, להתפתחות CNV עורקי, ובסופו של דבר, עמידות לטיפולים נגד VEGF14,15. במקרים של CNV עורקי, דליפת נוזלים מתמשכת נובעת ככל הנראה מהפרשה מוגברת הנגרמת על ידי צמתים הדוקים שלא נוצרו כראוי בלולאות אנסטומוטיות עורקיות, במיוחד בתנאים של זרימת דם גבוהה9. לעומת זאת, אנשים שמגיבים היטב לטיפול נגד VEGF נוטים להציג CNV נימי.
במחקרים שלנו המשתמשים במודלים של בעלי חיים, הראינו כי CNV המושרה בלייזר בעכברים מבוגרים מפתח CNV עורקי ומראה עמידות לטיפול נגד VEGF16,17. לעומת זאת, CNV המושרה בלייזר בעכברים צעירים מוביל להתפתחות של CNV נימי והיענות גבוהה לטיפול נגד VEGF. לכן, חיוני להבדיל בין סוגי כלי דם CNV הן לחקירות מכניסטיות והן טיפוליות.
במסגרות קליניות, CNV מסווג בדרך כלל בהתבסס על דפוסי דליפת אנגיוגרפיה פלואורסצאין (FA) (למשל, סוג 1, סוג 2), המשתמשים בצבע פלואורסצאין כדי לעקוב אחר הפרשה ולזהות אזורים של דליפה פתולוגית. במחקר AMD, CNV נחקר בעיקר באמצעות FA במודלים של בעלי חיים. עם זאת, FA אינו חושף את המורפולוגיה של כלי הדם של CNV. יתר על כן, FA לוכד רק תמונות בספקטרום האור הנראה ואינו יכול לדמיין את כלי הדם הכורואידיים מתחת לאפיתל פיגמנט הרשתית (RPE). לעומת זאת, אינדוציאנין ירוק (ICG), המציג זיקה חזקה לחלבוני פלזמה, מאפשר שימור תוך כלי דם דומיננטי ומאפשר הדמיה של מבנה כלי הדם וזרימת הדם9. על ידי ניצול התכונה הפלואורסצנטית התת-אדומה הקרובה של ICG, ניתן לצלם את הפיגמנט הרשתית והכורואידי באמצעות אנגיוגרפיה של ICG (ICGA). בהקשר זה, מוצג פרוטוקול המשלב FA ו- ICGA כדי לחקור את הדליפה ואת המורפולוגיה של כלי הדם של ניאו-וסקולריזציה כורואידית הנגרמת על ידי לייזר (CNV) בעכברים צעירים ומבוגרים, שם נצפה CNV נימי ועורקי.

<table><tbody><tr><td>מזרק אינסולין 32-G</td><td>MHC מוצרים רפואיים</td><td>NDC 08496-3015-01</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 נוגדן משני נגד ארנב עזים</td><td>Invitrogen</td><td>&nbsp; A11008</td><td></td></tr><tr><td>אנטי ואלפא; נוגדן אקטין שריר חלק</td><td>Abcam</td><td>ab5694</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר אלבומין</td><td>סנטה קרוז ביוטכנולוגיה, בע"מ</td><td>SC-2323&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>עכברי C57BL/6J (7-9 שבועות)</td>זן <td>מעבדת ג'קסון</td><td>#:000664</td><td></td></tr><tr><td>פלואורסצאין נתרן מלח</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>MFCD00167039</td><td></td></tr><tr><td>Gaymar T משאבת חום מערכת טיפול בחום</td><td>Gaymar</td><td>TP-500</td><td>משאבת חום במחזור מים להתאוששות עכבר לאחר הדמיה</td></tr><tr><td>GenTeal Gel</td><td>Genteal</td><td>NDC 58768-791-15</td><td>ג'ל</td></tr> <tr><td>עיניים חומר סיכה שקוףGS-IB4 Alexa-Flour 568 מצומד</td><td>Invitrogen</td><td>&nbsp; I21412</td><td></td></tr><tr><td>היידלברג Eye Explorerer</td><td>היידלברג הנדסה, גרמניה</td><td>HEYEX2</td><td></td></tr><tr><td>Indocyanine Green</td><td>Pfaultz & באואר</td><td>I01250</td><td></td></tr><tr><td>קטמין</td><td>ודקו בע"מ</td><td>NDC 50989-996-06</td><td></td></tr><tr><td>פרפורמלדהיד</td><td>אקרוס אורגני&nbsp;</td><td></td><td></td>416785000</tr><tr><td>תמיסת עיניים פרופרקאין הידרוכלוריד (0.5%)</td><td>Sandoz</td><td>NDC 61314-016-01</td><td></td></tr><tr><td>Spectralis Multi-Modality Imaging</td> System <td>היידלברג הנדסה, גרמניה</td><td>SPECTRALIS HRA+OCT</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100&nbsp;</td><td>תמיסת עיניים Sigma-Aldrich</td><td>X100-1L</td><td></td></tr><tr><td>Tropicamide (1%)</td><td>Bausch & Lomb</td><td>NDC 24208-585-64</td><td>להרחבת אישונים</td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Lloyd Laboratories</td><td>NADA 139-236</td><td></td></tr></tbody></table>

אפיון מורפולוגיה וסקולרית של ניוון מקולרי נאו-וסקולרי הקשור לגיל על ידי אינדוציאנין אנגיוגרפיה ירוקה

Characterization of Vascular Morphology of Neovascular Age-Related Macular Degeneration by Indocyanine Green Angiography

ניוון מקולרי תלוי גיל (AMD) הוא גורם מוביל לעיוורון בקרב אנשים מבוגרים, ושכיחותו עולה במהירות עקב הזדקנות האוכלוסייה. ניאו-וסקולריזציה כורואידית (CNV) או AMD רטוב, המהווה 10%-20% מכלל מקרי AMD, אחראית ל-80%-90% מדאיגים של עיוורון הקשור ל-AMD. הטיפולים הנוכחיים נגד VEGF מראים תגובות תת-אופטימליות בכ-50% מהמטופלים. עמידות לטיפול נגד VEGF בחולי CNV קשורה לעיתים קרובות ל- CNV עורקי, בעוד שהמגיבים נוטים להיות CNV נימי. בעוד אנגיוגרפיה פלואורסצאין (FA) משמשת בדרך כלל להערכת דפוסי דליפה בחולי AMD רטובים ובמודלים של בעלי חיים, היא אינה מספקת מידע על מורפולוגיה וסקולרית של CNV (CNV עורקי לעומת CNV נימי). פרוטוקול זה מציג את השימוש באנגיוגרפיה ירוקה אינדוציאנינית (ICGA) כדי לאפיין סוגי נגעים במודלים של עכברי CNV המושרים בלייזר. שיטה זו חיונית לחקר המנגנונים ואסטרטגיות הטיפול בעמידות נגד VEGF ב- AMD רטוב. מומלץ לשלב ICGA לצד FA להערכה מקיפה של דליפה ותכונות כלי דם של CNV במחקרים מכניסטיים וטיפוליים.

בעקבות הפרוטוקול, ICGA ו-FA בוצעו על CNV המושרה בלייזר בעכברים צעירים (7-9 שבועות) וזקנים (12-16 חודשים) C57BL/6J. FA מספק מידע על המיקום והדליפה של נגעי CNV (איור 1, פאנלים שמאליים), בעוד ICGA חושף את המורפולוגיה של כלי הדם של נגעי CNV (איור 1, פאנלים ימניים). בעכברים צעירים, CNV נימי שולט בנגעי CNV. לעומת זאת, עכברים זקנים מציגים CNV עורקי המאופיין בכלי דם גדולים, לולאות כלי דם וקשרים אנסטומוטיים. עכברים צעירים ומבוגרים כאחד מראים ראות ברורה של כלי הדם ברשתית ...

נכון לעכשיו, אנגיוגרפיה פלואורסצאין (FA) היא השיטה המועדפת לזיהוי דפוסי דליפה במודלים של בעלי חיים של ניאו-וסקולריזציה כורואידית (CNV). עם זאת, FA אינו מספק מידע על מורפולוגיה של כלי הדם. פרוטוקול זה מתאר את השימוש באנגיוגרפיה ירוקה אינדוציאנינית (ICGA) כדי לאפיין סוגים שונים של נגעים של CNV המושרה בלייזר במודלים של עכברים.

Age-related macular degeneration (AMD) is a leading cause of blindness among older individuals, and its prevalence is rapidly increasing due to the aging ...

אנו עובדים על המנגנון ואסטרטגיות הטיפול בניוון מקולרי הקשור לגיל, מצב שכיח הגורם לאובדן ראייה חמור אצל אנשים מבוגרים. בפרט, אנו מפתחים טיפולים חדשים כדי להתמודד עם נושא עמידות התרופות לטיפול הנוכחי של neovascularization הקרנית, שהוא סוג רטוב של AMD. המעבדה שלנו פיתחה לאחרונה טיפול חדש לשיפור עמידות נגד VEGF ב- CNV.זה מושג באמצעות מודל CNV עכבר. המחקר שלנו הראה כי עכברים זקנים עם CNV המושרה בלייזר מפתחים CNV עורקי, אשר עמיד לטיפול נגד VEGF. לעומת זאת, עכברים צעירים עם CNV נימי מגיבים לטיפול.במחקר AMD, CNV נחקר כמעט אך ורק על ידי אנגיוגרפיה פלואורסצאין כדי לחשוף דפוסי דליפה במודלים של בעלי חיים. עם זאת, FA אינו מראה מורפולוגיה וסקולרית CNV, ולכן הוא אינו מתאים לחקור עמידות נגד VEGF ב- AMD. שיטת FA הנוכחית המשמשת להדמיית CNV חסרה מידע חיוני לגבי המורפולוגיה של כלי הדם של נגעי CNV, כגון CNV נימי או עורקי.עם זאת, על ידי שילוב ICGA ו- FA, פרוטוקול זה יכול להעריך הן דליפת CNV והן מורפולוגיה של כלי הדם. על ידי הערכת הן דליפה והן מורפולוגיה של נגע CNV, ניתן לחקור את מנגנון המולקולה הבסיסית הקשור ל- CNV עורקי, ולכן לספק הזדמנויות למצוא מטרות חדשות לטיפול בעמידות נגד VEGF עבור חולי AMD.

characterization-vascular-morphology-neovascular-age-related-macular

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

Indocyanine הירוק אנגיוגרפיה (או ICGA) המבוצעת על ידי הזרקה לוריד זנב מספקת תמונות כמובן זמן ICGA באיכות גבוהה כדי לאפיין חריגות בדמו עין עכבר.

איתור ליקויים בChoroidal כלי דם במודל של עכברים של ניוון מקולרי הקשור בגיל בזמן הקורס Indocyanine הירוק אנגיוגרפיה

הרשתית מניות דמיון בולט עם המוח, ובכך מייצג חלון ייחודי ללמוד להערכת ומבנה עצביים במוח לא פולשני. פרוטוקול זה מתאר שיטה ללמוד דמנציה באמצעות טכניקות הדמיה ברשתית. שיטה זו יכולה לסייע פוטנציאל הערכת הסיכון ואבחון של דמנציה.

באמצעות הדמיה ברשתית ללמוד דמנציה

כאן, אנו מציגים את התועלת של האורך ויוו הדמיה מעקב אחר שינויים מורפולוגיים של לייזר המושרה neovascularization כורוידאלית בעכברים.

אין ויוו הדמיה עם מודאלים מרובים וניתוח של עכבר לייזר המושרה חיבור כורוידאלית דגם

אנו מציגים פרוטוקול כדי להעריך ביעילות את הפרזיה ומפרצת של כלי הקיבול של מפרצת sidewall בחולדות וארנבים, באמצעות fluorescein מבוססי וידאו אנגיוגרפיה וידיאו (FVA). עם ערך ניבוי חיובי של 92.6%, היא שיטה פשוטה אך יעילה מאוד וחסכונית ללא ציוד מיוחד נדרש.

אנגיוגרפיה פלואורסצנטית עבור הערכה של מפרצת Perfusion ועורק ההורה בתוך החולדה מפרצת הארנב במודלים

אנו מתארים את ההערכה של מקדם של קביעה בין כלי וצפיפות זלוף של מקלעת נימי שטחית parafoveal כדי לזהות את תרומתם של כלי גדול יותר נימים לצפיפות זלוף.

הערכה של נימי ותרומת כלי שיט אחרים לצפיפות זלוף מקולרית נמדדת עם טומוגרפיה של קוהרנטיות אופטית אנגיוגרפיה

מאמר זה מתאר בדיקת כתמי לציטין מבוססת וניתן לשחזור עבור כל ההכנות לרשתית ההר ואת הפרוטוקולים הנדרשים למדידה כמותית של פרמטרים וסקולריים משתנים לעתים קרובות ברטינופתיות שגשוג ולא מתרבות.

כימות של פרמטרי כלי דם ברשתיות הר שלמות של עכברים עם רטינופתיות שאינן מתרבות ושגשוגות

בדיקות מעבדה יכולות למנף את הערך הפרוגנוסטי מההדמיה הרב-מודאלית מבוססת טומוגרפיית קוהרנטיות אופטית אורכית (OCT) של ניוון מקולרי תלוי גיל (AMD). עיניים מתורם אנושי עם ובלי AMD מצולמות באמצעות OCT, צבע, סריקת השתקפות אינפרא אדום קרוב לייזר, אופטלמוסקופיה, ו autofluorescence בשני אורכי גל עירור לפני חתך רקמות.

אקס ויוו הדמיה מולטימודאלית מבוססת OCT של עיני תורם אנושיות למחקר על ניוון מקולרי תלוי גיל

המאמר הנוכחי מתאר את השיקולים המתודולוגיים למספר הערכות לא פולשניות של תפקוד כלי הדם והמורפולוגיה המשמשות בדרך כלל במחקר רפואי להערכת שלבים שונים של טרשת עורקים.

גישה המתודולוגית להערכות לא פולשני של תפקוד כלי דם ומורפולוגיה

אוסטיאוארתריטיס (OA), או מחלת מפרקים ניוונית, הוא מצב מתישה הקשורים כאב נשאר רק מבוקרת חלקית משככי כאבים זמינים. במודלים של בעלי חיים מפותחים כדי לשפר את ההבנה שלנו של מנגנוני הכאב הקשורות OA. כאן אנו מתארים את המתודולוגיה מודל monoiodoacetate כאב OA בתוך העכבר.

מודל Monoiodoacetate של אוסטיאוארתריטיס כאב העכבר

מטרת מחקר זה היא להעריך האם השתל suprachoroidal של שומן, נגזר תאי גזע הכלולים השבר בכלי הדם סטרומה, טסיות נגזר טסית דם עשיר פלזמה בטכניקת שיקום רשתית Limoli יכול לשפר את חדות הראייה, תגובות רגישות הרשתית בעיניים מושפע ניוון מקולרי הקשור לגיל יבש.

משובי טיפול על ידי תא Suprachoroidal בשתל ב ניוון מקולרי הקשור לגיל יבש: דוח ראשוני In Vivo

חקור אפיון מורפולוגיה וסקולרית של ניוון מקולרי נאו-וסקולרי בדגמי עכברים באמצעות אנגיוגרפיה ירוקה. השיטה מאפשרת לזהות הבדלי תגובה לטיפול בין עכברים צעירים ומבוגרים.

אפיון מורפולוגיה וסקולרית של ניוון מקולרי נאו-וסקולרי הקשור לגיל על ידי אינדוציאנין אנגיוגרפיה ירוקה

גלה סרטונים נוספים