30 ביוני 2023
כאן, אנו מספקים את הפרוטוקול המפורט של שיטת טרנספורמציה חד-שלבית בתיווך Agrobacterium tumefaciens לייצור צמחים מרוכבים.
הצוות שלנו מתמקד בטרנספורמציה של שורשים שעירים מבוססי קנה שורש Agrobacterium. טרנספורמציה של שורשים שעירים חיונית לחקר תפקוד גנים של צמחים, הנדסה מטבולית ואינטראקציות בין שורשים למיקרואורגניזמים של ריזוספרה. מאמר זה מספק שיטת טרנספורמציה חד-שלבית, בתיווך קנה שורש אגרובקטריום.
טרנספורמציית שורשים שעירים נוצרת במינים שונים של דיקוטילדונים ומונוקוטילדונים, והיא כמעט בלתי תלויה בגנוטיפ. השיטה החד-שלבית המתווכת על ידי קני שורש אגרובקטריום להשראת שורשים שעירים פשוטה ויעילה יותר ליצירת צמחים מרוכבים בהשוואה לשיטת הזרקת היפוקוטיל. שיטת הזרקת ההיפוקוטיל אינה יעילה ועלולה לגרום למוות של צמחי היפוקוטיל צעירים או זעירים.
השיטה החד-שלבית בתיווך קנה שורש אגרובקטריום יעילה מאוד ודורשת פחות זמן כדי לייצר שורשים שעירים. יתר על כן, אין צורך להשתיל מעבר להיווצרות שורשים שעירים. גנים לוויסות סימני אלפא וגנים לסינתזה של סימני בטא שימשו כסמני מסך נגיפיים בטרנספורמציית שורשים שעירים בתיווך קנה שורש אגרובקטריום.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים
מחקר זה מתמקד בשיטת טרנספורמציה בצעד אחד המתווכת על ידי Agrobacterium rhizogenes, שמטרתה היא הפקת שורשים שיעריים במיני צמחים שונים. טכניקה יעילה זו מפשטת את יצירתם של צמחים מורכבים, ובכך מאפשרת מחקרים מעמיקים יותר על תפקודי גנים בצמחים ועל אינטראקציות עם מיקרואורגניזמים.
יצירה יעילה של צמחים מורכבים בעלי שורשים טרנסגניים באמצעות טרנספורמציה של שורשים שיערים המתווכת על ידי Agrobacterium rhizogenes מאפשרת בחינה תפקודית מהירה של גנים ומסלולים ספציפיים לשורש. שיטה יעילה זו, שאינה תלויה בגנוטיפ, מאיצה גילויים מוקדמים ותיקוף מטרות בפורטפוליו של ביוטכנולוגיית צמחים. יכולת השחזור וההתרחבות שלה תומכות בבדיקת היפותזות חסונה ובצמצום סיכונים מכניסטי עבור צוותי מו"פ המתמקדים באינטראקציות בין צמחים למיקרובים ובהנדסה מטבולית.
שיטה זו להעברה גנטית של שורשים שיריים בשלב אחד משלבת את שלבי הגילוי המוקדמים ותיקוף המטרה, ובכך היא תומכת בזרימות עבודה החל מבדיקת השערות ועד לפיתוח מודלים פרה-קליניים.