Complementary Approaches to Interrogate Mitophagy Flux in Pancreatic &#946;-Cells

Elena Levi-D&#8217;Ancona; Vaibhav Sidarala; Scott A. Soleimanpour

doi:10.3791/65789

גישות משלימות לחקירת שטף מיטופגיה בתאי β הלבלב

JoVE Journal
Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biology

Complementary Approaches to Interrogate Mitophagy Flux in Pancreatic β-Cells

גישות משלימות לחקירת שטף מיטופגיה בתאי β הלבלב

Full Text

1,836 Views

07:04 min

September 15, 2023

DOI: 10.3791/65789-v

Elena Levi-D’Ancona^1,2, Vaibhav Sidarala¹, Scott A. Soleimanpour^1,3,4

¹Department of Internal Medicine, Division of Metabolism, Endocrinology and Diabetes,University of Michigan, Ann Arbor, ²Graduate Program in Immunology,University of Michigan Medical School, ³Department of Molecular and Integrative Physiology,University of Michigan, Ann Arbor, ⁴VA Ann Arbor Healthcare System

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Summary

פרוטוקול זה מתאר שתי שיטות לניתוח כמותי של מיטופגיה בתאי β של הלבלב: הראשונה, שילוב של צבעים ספציפיים למיטוכונדריה החדירים, ושנית, כתב מיטופגיה מקודד גנטית. שתי טכניקות אלה משלימות זו את זו וניתנות לפריסה על בסיס צרכים ספציפיים, ומאפשרות גמישות ודיוק בטיפול כמותי בבקרת איכות מיטוכונדריאלית.

Transcript

הפרוטוקול שלנו מתאר שתי שיטות משלימות לחקר שטף מיטופגיה של תאי בטא ברזולוציה של תא בודד באמצעות ציטומטריית זרימה. פרוטוקול mt-Keima משתמש בכתב מיטופגיה גנטית, ואילו פרוטוקול MtPhagy משלב שלושה צבעים פלואורסצנטיים, מה שמקל על אקסטרפולציה לתאים קשים להעברה בדגימות אנושיות. הערכות של מיטופגיה באמצעות גישות ביוכימיות מסורתיות וגישות הדמיה הן גוזלות זמן רב ומאתגרות.

לכן, חשוב לפתח שיטות חדשות, חזקות ויעילות לחקר שטף מיטופגיה בתאי בטא. הן שיטת mt-Keima והן שיטת MtPhagy הן הערכות כמותיות היעילות לחקר שטף מיטופגיה בתאי בטא של הלבלב. לכן, מעבדת סולימנפור מתמקדת במנגנונים השונים המניעים אי ספיקת תאי בטא בלבלב וסוכרת.

אנו מתמקדים באופן ספציפי בהיבטים השונים של מחזור החיים של המיטוכונדריה, כולל מיטופגיה, כדי להבין כיצד פגמים בתפקוד המיטוכונדריה מניעים את התפתחות הסוכרת.