Name: הזרקות תוך עצם הירך הפשוטות באמצעות עכברים חיים מאפשרות ניתוח רציף של מח עצם (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-11-10T13:50:00.000+00:00
Duration: 6 min 28 s
Description: למד הזרקה תוך עצמית לעכברים לחקר המטופויזה ומחלות דם. שיטה זו מאפשרת שתל תאי גזע אנושיים ביעילות ובבטיחות לניתוח סדרתי של מח עצם.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>הזרקה תוך עצם הירך לחקר מח עצם בעכברים חיים

<ol><li>Majeti, R., Park, C. Y., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+hierarchy+of+multipotent+hematopoietic+progenitors+in+human+cord+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Identification of a hierarchy of multipotent hematopoietic progenitors in human cord blood.</a> Cell Stem Cell. 1 (6), 635-645 (2007).</li>
<li>Wilkinson, A. C., Igarashi, K. J., Nakauchi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haematopoietic+stem+cell+self-renewal+in+vivo+and+ex+vivo.+Nature+reviews%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Haematopoietic stem cell self-renewal in vivo and ex vivo. Nature reviews.</a> Genetics. 132, 1-14 (2020).</li>
<li>Pinho, S., Frenette, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haematopoietic+stem+cell+activity+and+interactions+with+the+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Molecular+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Haematopoietic stem cell activity and interactions with the niche.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 20 (5), 303-320 (2019).</li>
<li>Méndez-Ferrer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow+niches+in+haematological+malignancies%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Bone marrow niches in haematological malignancies.</a> Nature Reviews. Cancer. 20 (5), 285-298 (2020).</li>
<li>Frassoni, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+intrabone+transplant+of+unrelated+cord-blood+cells+in+acute+leukaemia%3A+a+phase+I%2FII+study%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet.+Oncology%22%5BJournal%5D)">Direct intrabone transplant of unrelated cord-blood cells in acute leukaemia: a phase I/II study.</a> The Lancet. Oncology. 9 (9), 831-839 (2008).</li>
<li>Mazurier, F., Doedens, M., Gan, O. I., Dick, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+myeloerythroid+repopulation+after+intrafemoral+transplantation+of+NOD-SCID+mice+reveals+a+new+class+of+human+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Rapid myeloerythroid repopulation after intrafemoral transplantation of NOD-SCID mice reveals a new class of human stem cells.</a> Nature Medicine. 9 (7), 959-963 (2003).</li>
<li>McKenzie, J. L., Gan, O. I., Doedens, M., Dick, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+short-term+repopulating+stem+cells+are+efficiently+detected+following+intrafemoral+transplantation+into+NOD%2FSCID+recipients+depleted+of+CD122%2B+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Human short-term repopulating stem cells are efficiently detected following intrafemoral transplantation into NOD/SCID recipients depleted of CD122+ cells.</a> Blood. 106 (4), 1259-1261 (2005).</li>
<li>Futrega, K., Lott, W. B., Doran, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+bone+marrow+HSC+transplantation+enhances+local+engraftment+at+the+expense+of+systemic+engraftment+in+NSG+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Direct bone marrow HSC transplantation enhances local engraftment at the expense of systemic engraftment in NSG mice.</a> Scientific Reports. 6 (1), 23886(2016).</li>
<li>Chung, Y. R., Kim, E., Abdel-Wahab, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Femoral+bone+marrow+aspiration+in+live+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Femoral bone marrow aspiration in live mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (89), e51660(2014).</li>
<li>Iwano, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+bioluminescence+imaging+of+deep+tissue+in+freely+moving+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Single-cell bioluminescence imaging of deep tissue in freely moving animals.</a> Science. 359 (6378), 935-939 (2018).</li>
<li>Sundberg, R. D., Hodgson, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aspiration+of+bone+marrow+in+laboratory+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Aspiration of bone marrow in laboratory animals.</a> Blood. 4 (5), 557-561 (1949).</li>
<li>Schmitz, M., Bourquin, J. -P., Bornhauser, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+technique+for+intrafemoral+injection+and+bone+marrow+sampling+in+mouse+transplant+models%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia+%26+lymphoma%22%5BJournal%5D)">Alternative technique for intrafemoral injection and bone marrow sampling in mouse transplant models.</a> Leukemia & lymphoma. 52 (9), 1806-1808 (2011).</li>
<li>Nakauchi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cell+type-specific+5hmC+landscape+and+dynamics+of+healthy+human+hematopoiesis+and+TET2-mutant+preleukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Cancer+Discovery%22%5BJournal%5D)">The cell type-specific 5hmC landscape and dynamics of healthy human hematopoiesis and TET2-mutant preleukemia.</a> Blood Cancer Discovery. 3 (4), 346-367 (2022).</li>
<li>Chan, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isocitrate+dehydrogenase+1+and+2+mutations+induce+BCL-2+dependence+in+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Isocitrate dehydrogenase 1 and 2 mutations induce BCL-2 dependence in acute myeloid leukemia.</a> Nature Medicine. 21 (2), 178-184 (2015).</li>
<li>Zhang, T. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-6+blockade+reverses+bone+marrow+failure+induced+by+human+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">IL-6 blockade reverses bone marrow failure induced by human acute myeloid leukemia.</a> Science Translational Medicine. 12 (538), (2020).</li>
<li>Bak, R. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+genetic+engineering+of+human+hematopoietic+stem+and+progenitor+cells+using+CRISPR%2FCas9+and+AAV6%5BTitle%5D)+AND+%22eLIFE%22%5BJournal%5D)">Multiplexed genetic engineering of human hematopoietic stem and progenitor cells using CRISPR/Cas9 and AAV6.</a> eLIFE. 6, 27873(2017).</li>
<li>Nishimura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sufficiency+for+inducible+Caspase-9+safety+switch+in+human+pluripotent+stem+cells+and+disease+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Sufficiency for inducible Caspase-9 safety switch in human pluripotent stem cells and disease cells.</a> Gene Therapy. 27 (10-11), 525-534 (2019).</li>
<li>Chao, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+AML-iPSCs+reacquire+leukemic+properties+after+differentiation+and+model+clonal+variation+of+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Human AML-iPSCs reacquire leukemic properties after differentiation and model clonal variation of disease.</a> Cell Stem Cell. 20 (3), 329-344 (2017).</li>
<li>Okada, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+prospective+multicenter+phase+II+study+of+intrabone+marrow+transplantation+of+unwashed+cord+blood+using+reduced-intensity+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Haematology%22%5BJournal%5D)">A prospective multicenter phase II study of intrabone marrow transplantation of unwashed cord blood using reduced-intensity conditioning.</a> European Journal of Haematology. 100 (4), 335-343 (2018).</li>
<li>Fink, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capacity+of+the+medullary+cavity+of+tibia+and+femur+for+intra-bone+marrow+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Capacity of the medullary cavity of tibia and femur for intra-bone marrow transplantation in mice.</a> PloS One. 14 (11), 0224576(2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>מזרק 1/2 מ"ל, 27 גרם</td><td>BD</td><td>305620</td><td>https://www.bd.com/en-ca/offerings/capabilities/bd-luer-lok-syringe-with-attached-needle/305620</td></tr><tr><td>מאגר ליסינג ACK</td><td>Qualoty ביולוגי</td><td>118-156-101CS</td><td>https://www.qualitybiological.com/product/ack-lysing-buffer/</td></tr> <tr><td>רדיאטור ביולוגי</td><td>Kimtron</td><td>IC-250</td><td>https://www.kimtron.com/ic-250</td></tr><tr><td>כלורהקסידין</td><td>Nolvasan</td><td>NDC 54771-8701-1</td><td>https://www.zoetisus.com/products/petcare/nolvasan-skin-and-wound-cleanser</td></tr><tr><td>אלכוהול אתילי, הוכחה 190</td><td>Gold Shield</td><td></td><td>https://goldsd.com/line-card/</td></tr> <tr><td>FACSCanto II&nbsp;</td><td>(בקטון דיקינסון ושות' (BD), פרנקלין לייקס, ניו ג'רזי, ארה"ב</td><td></td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי (FBS)</td> <td>אומגה סיינטיפיק</td><td>FB-01</td><td></td></tr> <tr><td>https://www.omegascientific.com/product/fetal-bovine-serum-usda-certified/ ציטומטר זרימה, AriaII</td><td>בקטון דיקינסון (BD)</td><td></td> <td>מיון תאים</td></tr><tr><td>IMDM</td><td>Gibco</td><td>12440053</td><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/12440053</td></tr><tr><td>איזופלורן, USP</td><td>Dechra</td><td>NDC 17033-094-25</td><td>https://www.dechra-us.com/our-products/us/companion-animal/dog/prescription/isoflurane-usp-inhalation-anesthetic</td></tr><tr><td>NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) עכברים&nbsp;</td><td>מעבדת ג'קסון, בר הרבור, מיין, ארה"ב</td><<td>br/> זן #:005557</td><td>זכר או נקבה בני שישה עד עשרה שבועות&nbsp;</td></tr><tr><td>משחת עיניים, USP</td><td>Bausch Lomb</td><td>NDC 24208-780-55</td><td>https://www.bausch.com/contentassets/2914df881e4344a 7a202cc5a0673c977/neomycin-and-polymyxin-b-sulfates-gramicidin-ophthalmic-solution.pdf</td></tr><tr><td>הזרקת OstiFen (קפרופן)</td><td>VetOne</td><td>NDC 13985-748-20</td><td></td></tr><tr><td>http://vetone.net/Default/CatHeaderPage?id=9534ccca-eac5-4d68-8ad8-46436067587b PBS, pH 7.4</td><td>תוצרת בית</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומיצין</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/15140122</td></tr><tr><td>פובידון-יוד</td><td>בטדין</td><td>NDC 67618-155-16</td><td>https://www.betadine.com/veterinary-surgical-scrub-and-solution/</td></tr> <tr><td>TokeOni (בארה"ב)</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>808350-5 מ"ג</td><td>AkaLumine-HCl/Akaluc; https://www.sigmaaldrich.com/US/en/product/aldrich/808350</td></tr><tr><td>UltraPure 0.5 מ' EDTA, pH 8.0</td><td>Invitrogen</td><td>15575020</td><td></td></tr> <tr><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/15575020<חזק>פאנל נוגדנים לחריטה (in vivo, מח עצם עכבר)</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><חזק>אנטיגן</חזק></td><td></td><td></td><td><חזק>דילול</חזק></td></tr><tr><td><חזק>אנטיגן</חזק>: אנטי-אנושי CD45 <חזק>פלואורופור</חזק>: V450 <חזק>שיבוט</חזק>: HI30</td><td>BD Biosciences</td><td>560367</td><td>1:25</td></tr><tr><td><חזק>אנטיגן</חזק>: נגד עכבר CD45.1 <חזק>פלואורופור</חזק>: PE-Cy7 Clone: A20</td><td>eBioscience</td><td>25-0453-81</td><td>1:50</td></tr><tr><td>Antigen:Anti-Mouse TER-119 Fluorophore: PE-Cy5 Clone: TER-119</td><td>eBioscience</td><td>15-5921-83</td><td>1:100</td></tr><tr><td><חזק>אנטיגן</חזק>: אנטי-אנושי CD3 <חזק>פלואורופור</חזק>: APC-Cy7 <חזק>שיבוט</חזק>: SK7</td><td>BD Biosciences</td><td>341090</td><td>1:12.5</td></tr><tr><td><חזק>אנטיגן</חזק>: אנטי-אנושי CD19 <חזק>פלואורופור</חזק>: APC <חזק>שיבוט</חזק>: HIB19</td><td>BD Biosciences</td><td>555415</td><td>1:25</td></tr><tr><td><חזק>אנטיגן</חזק>:אנטי-אנושי CD33 <חזק>פלואורופור</חזק>: PE clone: WM53</td><td>BD Biosciences</td><td>555450</td><td>1:25</td></tr><tr><td>Live/Dead staining</td><td></td><td></td><td>Conc.</td></tr><tr><td>PI</td><td>Invitrogen</td><td></td><td>1 &mu; g/mL</td></tr><tr><td>Compensation beads</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Negative Control</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td>ראה הוראות לפרטים</td></tr><tr><td>נגד עכבר Ig, &kappa;</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td>ראה הוראות לפרטים</td></tr></tbody></table>

הזרקות תוך עצם הירך הפשוטות באמצעות עכברים חיים מאפשרות ניתוח רציף של מח עצם

Simplified Intrafemoral Injections Using Live Mice Allow for Continuous Bone Marrow Analysis

בעקבות פרוטוקולים אלה 1,14,15,16,17,18,19,20, כל דגימה הושתלה, ומודל עכבר xenograft הוקם. מטרת הניסויים כאן הייתה להראות הזרקת IF עם מספר סוגים של תאים אנושיים ומעקב אחר שאיפה/אנליזה של מח עצם בעכברים חיים. מאמר זה מציג את תוצאות ההשתלה של הדגימות הנפוצות ה...

Despite the complexity of hematopoietic cell transplantation in humans, researchers commonly perform intravenous or intrafemoral (IF) injections in mice. ...

simplified-intrafemoral-injections-using-live-mice-allow-for

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

השתלת מח עצם מספקת דרך לשנות את הגנוטיפ של תאים שמקורם במח עצם. אם הגן של העניין בא לידי ביטוי בשני תאי מח עצם ותאים שמקורם במח שאינם נגזרים עצם, השתלת מח עצם יכולה לשנות את התאים שמקורם במח עצם לגנוטיפ שונה מבלי לשנות את גנוטיפ התאים לא נובע מח העצם.

הבחנת תפקידים פונקציונליים של ביטוי גנים מתאים חיסוניים וללא חיסון בקוליטיס המאוס על ידי השתלת מח עצם

רומן ברזולוציה גבוהה<em&gt; בvivo</em&gt; טכניקת הדמיה כדי לחקור את התגובה דינמית של מבנים תוך גולגולתי לצמיחה גידול וTherapeutics

פרוטוקול זה מתאר הליך לדגימה סדרתית של מח עצם הירך (BM) מבלי לדרוש הקרבה של עכברים. הליך זה מקל על מחקרי אורך של הרכב ה-BM של עכברים לאורך זמן ומספק גישה סדרתית לתאים בתוך ה-BM למחקרי ex vivo והשתלות.

הירך מח עצם שאיפה בעכברים חיים

הטבע של האינטראקציות בין תאי גזע hematopoietic ואב (HSPCs) ונישות מח עצם הוא הבין היטב. שינויי חומרה מותאם אישית ופרוטוקול רכישה רב שלבים לאפשר את השימוש בשני הפוטונים ומיקרוסקופיה confocal לתמונת vivo לשעבר HSPCs שכותרתו התביית בתוך אזורי מוח עצם, אינטראקציות מעקב ותנועה.

במעקב 4 ממדי Vivo של תאי גזע ואבות היווצרות דם במבוגרי עכבר calvarial מח עצם

כאן אנו מציגים פרוטוקול לדיסקציה של עצמות ארוכות של הגפיים האחוריות (עצם הירך והשוקה) מעכבר המעבדה. אנו מתארים עוד טכניקה מהירה לבידוד מח עצם מעצמות אלו המשתמשת בצנטריפוגה להסרת מח עצם מחלל מח העצם.

Murine הינד לימב ארוך עצם Dissection ובידוד מח העצם

כתב יד זה מספק את ההליך המפורט של הזרקת עורק תוך כסל (IIA), טכניקה להעברת תאים סרטניים במיוחד לרקמות הגפיים האחוריות כולל עצמות כדי ליצור גרורות ניסיוניות בעצמות. למרות שהוקם בתחילה עם מודלים של גידולי שד, ניתן להרחיב פרוטוקול זה בקלות לסוגי סרטן אחרים.

הזרקת עורק Intra-כסל עבור דוגמנות יעילה וסלקטיבי של מיקרוסקופיים עצם גרור

הפרוטוקול מתאר מודל חדש של תא חלון עצם הירך של עכברים שניתן להשתמש בו כדי לעקוב אחר תנועת תאים במח עצם הירך in vivo. מיקרוסקופיה פלואורסצנטית רב-פוטונית תוך-חיונית משמשת להדמיית שלושה מרכיבים של מח עצם הירך (כלי דם, מטריצת קולגן ונויטרופילים) לאורך זמן.

חלון ירך דגם קאמרי<em&gt; In vivo</em&gt; מעקב תא Murine מח עצם

מיקרוסקופ זריחה intravital (IVFM) של החילונית מוחל בשילוב עם דגמים גנטיים בעלי חיים כדי ללמוד את יונת ואת engraftment של תאים hematopoietic גומחות מח עצם (מוניטור).

שילוב של מיקרוסקופ פלואורסצנטי Intravital (IVFM) עם דגמים גנטיים בחקר דינמיקה Engraftment Hematopoietic תאים במח העצם נישות

זריקות תוך פמורליות מאפשרות קליטה של מספר קטן של תאי גזע ותאי אב המטופויטיים (HSPCs), על ידי הצבת התאים ישירות בחלל מח העצם. כאן אנו מתארים פרוטוקול ניסיוני של הזרקה תוך-פמורלית של HSPCs אנושיים לעכברים מדוכאי חיסון.

הזרקה תוך-פמורלית של תאי גזע ותאי אב המטופויטיים אנושיים לעכברים מדוכאי חיסון 

כאן, מתוארת שיטה מבוססת ציטומטריית פוספופלואו לניתוח איתות במורד הזרם של מסלולי mTORC1, JAK/STAT5 ו-MAPK בתאי לוקמיה מיאלואידית אנושית חריפה שהושתלו בעכברים ומתקבלים מאספיראטים של מח עצם. רמות p-STAT5, p-4EBP1, p-RPS6 ו-p-ERK1/2 נמדדות בו זמנית באמצעות ציטומטר זרימה ספקטרלי מהדור הבא עם רגישות גבוהה.

ציטומטריית פוספו-פלואו תוך-תאית של השתלות קסנו-השתלות שמקורן בלוקמיה מיאלואידית חריפה

למד הזרקה תוך עצמית לעכברים לחקר המטופויזה ומחלות דם. שיטה זו מאפשרת שתל תאי גזע אנושיים ביעילות ובבטיחות לניתוח סדרתי של מח עצם.

הזרקות תוך עצם הירך הפשוטות באמצעות עכברים חיים מאפשרות ניתוח רציף של מח עצם

גלה סרטונים נוספים