Name: הזרקת זרע עגולה לעכבר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-01-26T13:50:00.000+00:00
Duration: 8 min 41 s
Description: למד את שיטת הזרקת זרע עגולה בעכברים לשיפור יעילות התפתחות עוברית במחקר ביולוגיית הרבייה. טכניקה זו מציעה פתרונות קליניים לחולים באזוספרמיה לא חסימתית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>הליך הזרקת זרע עגול Murine לחקר התפתחות עוברית

<ol><li>Redgrove, K. A., McLaughlin, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+immune+response+in+Chlamydia+trachomatis+infection+of+the+male+genital+tract%3A+A+double-edged+sword%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">The role of the immune response in Chlamydia trachomatis infection of the male genital tract: A double-edged sword.</a> Front Immunol. 5, 534(2014).</li>
<li>Yanagimachi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracytoplasmic+injection+of+spermatozoa+and+spermatogenic+cells%3A+Its+biology+and+applications+in+humans+and+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Biomed+Online%22%5BJournal%5D)">Intracytoplasmic injection of spermatozoa and spermatogenic cells: Its biology and applications in humans and animals.</a> Reprod Biomed Online. 10 (2), 247-288 (2005).</li>
<li>Palermo, G., Joris, H., Devroey, P., Van Steirteghem, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pregnancies+after+intracytoplasmic+injection+of+single+spermatozoon+into+an+oocyte%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Pregnancies after intracytoplasmic injection of single spermatozoon into an oocyte.</a> Lancet. 340 (8810), 17-18 (1992).</li>
<li>Kimura, Y., Yanagimachi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+oocytes+injected+with+testicular+spermatozoa+or+round+spermatids+can+develop+into+normal+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Mouse oocytes injected with testicular spermatozoa or round spermatids can develop into normal offspring.</a> Development. 121 (8), 2397-2405 (1995).</li>
<li>Tesarik, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spermatid+injection+into+human+oocytes.+II.+Clinical+application+in+the+treatment+of+infertility+due+to+non-obstructive+azoospermia%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reprod%22%5BJournal%5D)">Spermatid injection into human oocytes. II. Clinical application in the treatment of infertility due to non-obstructive azoospermia.</a> Human Reprod. 11 (4), 780-783 (1996).</li>
<li>Tesarik, J., Mendoza, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spermatid+injection+into+human+oocytes.+I.+Laboratory+techniques+and+special+features+of+zygote+development%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reprod%22%5BJournal%5D)">Spermatid injection into human oocytes. I. Laboratory techniques and special features of zygote development.</a> Human Reprod. 11 (4), 772-779 (1996).</li>
<li>Hirabayashi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+regimens+for+full-term+development+of+rabbit+oocytes+injected+with+round+spermatids%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Reprod+Dev%22%5BJournal%5D)">Activation regimens for full-term development of rabbit oocytes injected with round spermatids.</a> Mol Reprod Dev. 76 (6), 573-579 (2009).</li>
<li>Ogonuki, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Birth+of+a+marmoset+following+injection+of+elongated+spermatid+from+a+prepubertal+male%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Reprod+Dev%22%5BJournal%5D)">Birth of a marmoset following injection of elongated spermatid from a prepubertal male.</a> Mol Reprod Dev. 86 (8), 928-930 (2019).</li>
<li>Niederberger, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Forty+years+of+IVF%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil+Steril%22%5BJournal%5D)">Forty years of IVF.</a> Fertil Steril. 110 (2), 185(2018).</li>
<li>Gross, K. X., Hanson, B. M., Hotaling, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Round+spermatid+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Urol+Clin+North+Am%22%5BJournal%5D)">Round spermatid injection.</a> Urol Clin North Am. 47 (2), 175-183 (2020).</li>
<li>Hanson, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Round+spermatid+injection+into+human+oocytes%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Asian+J+Androl%22%5BJournal%5D)">Round spermatid injection into human oocytes: a systematic review and meta-analysis.</a> Asian J Androl. 23 (4), 363-369 (2021).</li>
<li>Tekayev, M., Vuruskan, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+values+and+advances+in+round+spermatid+injection+%28ROSI%29%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Biol%22%5BJournal%5D)">Clinical values and advances in round spermatid injection (ROSI).</a> Reprod Biol. 21 (3), 100530(2021).</li>
<li>Tanaka, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fourteen+babies+born+after+round+spermatid+injection+into+human+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Fourteen babies born after round spermatid injection into human oocytes.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 112 (47), 14629-14634 (2015).</li>
<li>Tanaka, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ninety+babies+born+after+round+spermatid+injection+into+oocytes%3A+survey+of+their+development+from+fertilization+to+2+years+of+age%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil+Steril%22%5BJournal%5D)">Ninety babies born after round spermatid injection into oocytes: survey of their development from fertilization to 2 years of age.</a> Fertil Steril. 110 (3), 443-451 (2018).</li>
<li>Yang, H., Shi, L., Chen, C. D., Li, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mice+generated+after+round+spermatid+injection+into+haploid+two-cell+blastomeres%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Mice generated after round spermatid injection into haploid two-cell blastomeres.</a> Cell Res. 21 (5), 854-858 (2011).</li>
<li>Moreira, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+mouse+offspring+generated+by+ROSI%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Dev%22%5BJournal%5D)">Transgenic mouse offspring generated by ROSI.</a> J Reprod Dev. 62 (1), 37-42 (2016).</li>
<li>Federici, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Round+spermatid+injection+rescues+female+lethality+of+a+paternally+inherited+Xist+deletion+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Round spermatid injection rescues female lethality of a paternally inherited Xist deletion in mouse.</a> PLoS Genet. 12 (10), e1006358(2016).</li>
<li>Sakamoto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paternally+inherited+H3K27me3+affects+chromatin+accessibility+in+mouse+embryos+produced+by+round+spermatid+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Paternally inherited H3K27me3 affects chromatin accessibility in mouse embryos produced by round spermatid injection.</a> Development. 149 (18), 200696(2022).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+multiomics+sequencing+reveals+the+reprogramming+defects+in+embryos+generated+by+round+spermatid+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Single-cell multiomics sequencing reveals the reprogramming defects in embryos generated by round spermatid injection.</a> Sci Adv. 8, (2022).</li>
<li>Ward, M. A., Yanagimachi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracytoplasmic+sperm+injection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Intracytoplasmic sperm injection in mice.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2018 (1), (2018).</li>
<li>Yoshida, N., Perry, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Piezo-actuated+mouse+intracytoplasmic+sperm+injection+%28ICSI%29%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Piezo-actuated mouse intracytoplasmic sperm injection (ICSI).</a> Nat Protoc. 2 (2), 296-304 (2007).</li>
<li>Zhu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FACS+selection+of+valuable+mutant+mouse+round+spermatids+and+strain+rescue+via+round+spermatid+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Zygote%22%5BJournal%5D)">FACS selection of valuable mutant mouse round spermatids and strain rescue via round spermatid injection.</a> Zygote. 23 (3), 336-341 (2013).</li>
<li>Kong, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+the+histone+deacetylase+inhibitor+%27Scriptaid%27+on+the+developmental+competence+of+mouse+embryos+generated+through+round+spermatid+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Reprod%22%5BJournal%5D)">Effects of the histone deacetylase inhibitor 'Scriptaid' on the developmental competence of mouse embryos generated through round spermatid injection.</a> Hum Reprod. 32 (1), 76-87 (2017).</li>
<li>Hosseini, S., Salehi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tricostatin+A-treated+round+spermatid+enhances+preimplantation+embryo+developmental+competency+following+round+spermatid+injection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Zygote%22%5BJournal%5D)">Tricostatin A-treated round spermatid enhances preimplantation embryo developmental competency following round spermatid injection in mice.</a> Zygote. 30 (3), 373-379 (2022).</li>
<li>Kishigami, S., Wakayama, S., Nguyen, V. T., Wakayama, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Similar+time+restriction+for+intracytoplasmic+sperm+injection+and+round+spermatid+injection+into+activated+oocytes+for+efficient+offspring+production%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Similar time restriction for intracytoplasmic sperm injection and round spermatid injection into activated oocytes for efficient offspring production.</a> Biol Reprod. 70 (6), 1863-1869 (2004).</li>
<li>Tao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oocyte+activation+during+round+spermatid+injection%3A+state+of+the+art%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Biomed+Online%22%5BJournal%5D)">Oocyte activation during round spermatid injection: state of the art.</a> Reprod Biomed Online. 45 (2), 211-218 (2022).</li>
<li>Ogura, A., Ogonuki, N., Miki, H., Inoue, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microinsemination+and+nuclear+transfer+using+male+germ+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Rev+Cytol%22%5BJournal%5D)">Microinsemination and nuclear transfer using male germ cells.</a> Int Rev Cytol. 246, 189-229 (2005).</li>
<li>Kimura, Y., Yanagimachi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracytoplasmic+sperm+injection+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Intracytoplasmic sperm injection in the mouse.</a> Biol Reprod. 52 (4), 709-720 (1995).</li>
<li>Ogonuki, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-speed+congenic+strategy+using+first-wave+male+germ+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A high-speed congenic strategy using first-wave male germ cells.</a> PLoS One. 4 (3), e4943(2009).</li>
<li>Abdelaal, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fertility+preservation+for+pediatric+male+cancer+patients%3A+illustrating+contemporary+and+future+options%3B+a+case+report%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Androl+Urol%22%5BJournal%5D)">Fertility preservation for pediatric male cancer patients: illustrating contemporary and future options; a case report.</a> Transl Androl Urol. 10 (1), 520-526 (2021).</li>
<li>Eyni, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+bioengineering+of+male+germ+stem+cells+to+preserve+fertility%5BTitle%5D)+AND+%22J+Tissue+Eng%22%5BJournal%5D)">Advanced bioengineering of male germ stem cells to preserve fertility.</a> J Tissue Eng. 12, (2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>CaCl22H2O&nbsp;</td><td>סיגמא</td><td>C7902&nbsp;</td><td>הכנת CZB</td></tr><tr><td>גלוקוז&nbsp;</td><td>סיגמא</td><td>G6152&nbsp;</td><td>הכנת CZB</td></tr><tr><td>HEPES-Na (בסיסי)&nbsp;</td><td>סיגמא</td><td>H3784&nbsp;</td><td>הכנת CZB</td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>Beyotime&nbsp;</td><td>C1025</td><td>FACS</td></tr><tr><td>גונדוטרופין כוריוני אנושי (HCG)</td> <td>חברת ההורמון השני של נינגבו</td><td>HCG</td><td>תרופות מקדמות ביוץ</td></tr><tr><td>Hyaluronidase</td><td>Sigma</td><td>H3506</td><td>הסרת תאי גרנולוזה סביב הביצית</td></tr><tr><td>KCl&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P5405</td><td>הכנת CZB</td></tr><tr><td>KH2PO4&nbsp;</td><td>סיגמא</td><td>P5655&nbsp;</td><td>הכנת CZB</td></tr><tr><td>KSOMaa</td><td>Caisson Labs</td><td>IVL04-100ML</td><td>אשלגן סימפלקס מדיום אופטימלי בתוספת חומצות אמינו</td></tr><tr><td>L-גלוטמין &nbsp;</td><td>סיגמא</td><td>G8540&nbsp;</td><td>הכנת CZB</td></tr><tr><td>M2</td><td>Sigma</td><td>M7167-50ML</td><td>נוזל הפעלה</td></tr><tr><td>MgSO47H2O&nbsp;</td><td>סיגמא</td><td>M1880&nbsp;</td><td>הכנת CZB</td></tr><tr><td>Na2-EDTA2H2O&nbsp;</td><td>סיגמא</td><td>E5134&nbsp;</td><td>הכנת CZB</td></tr><tr><td>NaCl&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>S5886</td><td>הכנת CZB</td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sigma</td><td>S5761&nbsp;</td><td>הכנת CZB</td></tr><tr><td>סירופ Na-lactate 60% d = 1.32 גרם/ליטר</td><td>Sigma</td><td>L7900&nbsp;</td><td>הכנת CZB</td></tr><tr><td>דגם&nbsp;</td><td>סיגמא</td><td>P4562&nbsp;</td><td>הכנת CZB</td></tr><tr><td>טיפים למקדחת פייזו (ICSI)&nbsp;</td><td>אפנדורף&nbsp;</td><td>piezoXpert</td><td>קרע בקרום פיזואלקטרי</td></tr><tr><td>בסרום סוסה בהריון גונדוטרופין (PMSG)</td><td>חברת ההורמון השני של נינגבו</td><td>PMSG</td><td>תרופות מקדמות ביוץ</td></tr><tr><td>PVA&nbsp;</td><td>סיגמא</td><td>P8136</td><td>הכנת CZB</td></tr></tbody></table>

הזרקת זרע עגולה לעכבר

Mouse Round Spermatid Injection

התחלנו את החקירה שלנו על ידי בחינת ההשפעה של AOAעל היכולת ההתפתחותית של עוברים. המחשה סכמטית של תכנון הניסוי מוצגת באיור 1A. לפני הזרקת הזרע, הביציות עברו AOA (A-ICSI) או נותרו ללא טיפול (ICSI). נתונים מפורטים על התפתחות העובר מוצגים בטבלה 1. התוצאות לא הראו הבדלים משמעותיים בשיעורי המחשוף, הבלסטוציסט או הילודה בין קבוצות A-ICSI ו- ICSI (P &gt; 0.05; איור 1B). ממצאים אלה מצביעים על כך ש- AOA באמצעות 10 mM SrCl2 במשך 20 דקות לא השפיע על הפוטנציאל ההתפתחותי של העוברים.
בעבר דווח כי לא היו הבדלים ניכרים ביעילות ההתפתחותית של עוברי ROSI שנבחרו על ידי FACS או על ידי בדיקה חזותית ישירה תחת מיקרוסקופ22. הניסויים שלנו השתמשו בטכנולוגיית FACS כדי לזהות RS (איורים 2A,B). מתחת למיקרוסקופ, תאי זרע עגולים של עכברים היו בקוטר של כ-10 מיקרומטר והציגו מבנה גרעין דמוי בליטה באמצע (איור 2C). אנו מניחים כי ברירה באמצעות FACS מדויקת יותר מאשר בדיקה חזותית ישירה תחת מיקרוסקופ. בנוסף, הספרות תומכת בחקירה ישירה של RS באמצעות הבדלים מורפולוגיים. עוברי ROSI נוצרו בשתי שיטות שונות: קבוצת A-ROSI, שבה הביציות היו נתונות ל- AOA לפני הזרקת הזרע העגולה, וקבוצת ROSI-A, שבה הביציות היו נתונות ל- AOA לאחר הזרקת הזרע העגולה. התרשים הסכמטי של תכנון הניסוי מוצג באיור 1C. יש לציין כי לא נמצאו הבדלים משמעותיים בשיעורי המחשוף והבלסטוציסט בין קבוצות A-ROSI, ROSI-A ו-ICSI (P &gt; 0.05; איור 1D). שיעורי הבלסטוציסטים של קבוצות A-ROSI, ROSI-A ו- ICSI היו גבוהים משמעותית מאלה של קבוצת ההפעלה (P &lt; 0.05; איור 1D). עם זאת, שיעור הילודה של קבוצת ROSI היה נמוך מזה של קבוצת ICSI, ללא קשר אם הביציות הופעלו לפני או אחרי ההזרקה (P &lt; 0.05; איור 1D). חשוב לציין ששיעור הילודה של קבוצת A-ROSI היה מעט גבוה יותר מזה של קבוצת ROSI-A (איור 1D). פרטים נוספים על נתוני התפתחות העובר מוצגים בטבלה 1.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65898/65958fig01.jpg"> 
איור 1: עוברי ROSI הציגו יעילות התפתחותית נמוכה יותר בהשוואה לעוברי ICSI. (A) המחשה סכמטית של פרוטוקול הניסוי להערכת השפעת ההפעלה על התפתחות עוברית ICSI. כחול = הביציות לא הופעלו; צהוב = הביציות הופעלו. (B) יעילות התפתחותית של עוברים שמקורם ב-A-ICSI וב-ICSI. (C) המחשה סכמטית של פרוטוקול הניסוי ליצירת סוגים שונים של עוברים. (D) יעילות התפתחותית של עוברים שמקורם ב-A-ROSI, ROSI-A, A ו-ICSI. **, P &lt; 0.01. קיצורים: A = הפעלה E = יום עוברי; ROSI = הזרקת זרע עגולה; ICSI = הזרקת זרע תוך ציטופלזמית. קווי השגיאה מציגים סטיית תקן. השוואת התעריפים מתבצעת באמצעות מבחן chi-square. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65898/65958fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65898/65958fig02.jpg"> 
איור 2: זרעונים עגולים נבחרו באמצעות מיון ציטומטרי של זרימה. (A) נעשה שימוש בדיאגרמת מיון ציטומטרית של זרימה לבחירת זרעונים עגולים. (B) תמונות מייצגות המציגות את בחירת הזרעונים העגולים. סרגל קנה מידה: 10 מיקרומטר. קיצורים: FSC = פיזור קדימה; SSC = פיזור צד; 355 הוא אורך גל העירור; 460/50 ו- 670/30 הם שני ערוצי גילוי תחת לייזר באורך גל 355. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65898/65958fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td rowspan="2">קבוצות</td>
			<td colspan="3">פיתוח טרום השרשה</td>
			<td colspan="2">התפתחות לאחר ההשתלה</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>עותקים משוכפלים</td>
			<td>שיעור המחשוף (%)</td>
			<td>שיעור בלסטוציסט (%)</td>
			<td>עוברים בני 2 תאים שהוחזרו/ לא. של נמענים</td>
			<td>שיעור הילודה (%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A-ICSI</td>
			<td>5</td>
			<td>99.33 (149/150)</td>
			<td>75.17 (112/149)</td>
			<td>49/5</td>
			<td>48.98 (24/49)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>א-רוסי</td>
			<td>5</td>
			<td>99.33 (149/150)</td>
			<td>73.83 (110/149)</td>
			<td>44/5</td>
			<td>18.18 (8/44) **</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ROSI-A</td>
			<td>5</td>
			<td>98.00 (147/150)</td>
			<td>64.63 (95/147)</td>
			<td>45/5</td>
			<td>13.33 (6/45) **</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ההפעלה</td>
			<td>5</td>
			<td>100.00 (150/150)</td>
			<td>12.00 (18/150) **</td>
			<td>51/5</td>
			<td>0.00 (0/51) **</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ICSI</td>
			<td>5</td>
			<td>98.00 (147/150)</td>
			<td>73.47 (108/147)</td>
			<td>46/5</td>
			<td>52.17 (24/46)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
טבלה 1. היעילות ההתפתחותית של עוברים הנגזרת מקבוצות שונות.
טבלה משלימה 1. שיעור אוכלוסיות התאים השונות ממוינות לפי ציטומטריית זרימה. חלק P3 הוא זרעונים עגולים. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65898/Supplementary%20Table%201_RE.zip" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.</a>

Round spermatids, characterized by their haploid genetic content, represent the precursor cells to mature spermatozoa. Through the innovative technique of ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

פרוטוקול זה מדגים שיטות להפקת הזרע מן האשכים של זכרים ואז כשזרעו נקבות עכברים. הליך זה שימושי כאשר זמן מדויק יש צורך במחקרים התפתחותיים כמו גם עבודה מהונדס.

קצירת הזרע והזרעה מלאכותית של עכברים

מוטציות De novo בקו הנבט הזכרי עשויות לתרום לתוצאות בריאותיות שליליות בדורות הבאים. כאן אנו מתארים פרוטוקול לשימוש במודל מכרסמים טרנסגני לכימות מוטציות בתאי נבט זכריים המושרות על ידי גורמים סביבתיים.

המהונדס מכרסמים Assay עבור תדר Mutant תאי ניבט זכר כימות

מאמר זה מתאר microinjection וelectroporation של אשך עכבר in vivo כטכניקת transfection לתאי עכבר אשכים ללמוד תהליכים ייחודיים של יצירת תאי זרע. הפרוטוקול המובא כרוך בצעדים של הכנת זכוכית נימים, microinjection באמצעות צינור efferent, וtransfection ידי electroporation.

בVivo Microinjection וElectroporation של אשך העכבר

מיוזה הוא תהליך התפתחותי שבו נוצרות גמטות דרך סבב אחד של שכפול ה-DNA, שני סיבובים רצופים של כרומוזום סגרגציה. מיוזה יונקים יכולים להיבדק על ידי ניצול טכניקה כדי להכין ממרחים כרומוזום meiotic. . הנה, נדגים שיטה של הכנת השטח-התפשטות גרעינים של העכבר spermatocytes.

הכנה של כרומוזום Meiotic מתפשטת העכבר Spermatocytes

מטרת טכניקה זו סקווש צנורית הוא להעריך במהירות תכונות cytological של פיתוח העכבר spermatocytes תוך שמירה על תקינות הסלולר. שיטה זו מאפשרת הלימוד בכל שלבי יצירת זרע, ניתן ליישם בקלות לצד הביוכימי והמולקולרי ביולוגי גישות אחרות לצורך המחקר של העכבר מיוזה.

טכניקה סקווש צנורית וכמה לניתוח Cytological של יצירת זרע שימוש במודל עכבר

פרוטוקול זה מתאר מיקרו-דיסקציה בסיוע טרנסילומינציה של מקטעים של צינוריות עכבר בוגרות למחצה המייצגות שלבים ספציפיים של מחזור אפיתל חצי-היקפי, וסוגי תאים בו, וחיסון לאחר מכן של תכשירי סקווש ומקטעי צינור שלמים.

ניתוח בסיוע Transillumination של שלבים ספציפיים של מחזור האפיתל החצי-שנתי של העכבר לניתוחים Immunostaining במורד הזרם

מאמר זה נועד להדגים את השימוש בתאי גזע עובריים הפלואידיים פרתנוגנטיים כתחליף לזרע לבניית עוברים משובטים למחצה.

יישום של עכבר פרתנוגנטי תאי גזע עובריים הפלואיד כתחליף של זרע

מאמר זה מדווח על עיכוב in vivo של CENP-E באמצעות ניתוח בטן והזרקת GSK923295 באשכים, מודל רב ערך לחלוקה מיוטית גברית. באמצעות בדיקות אימונופלואורסצנטיות, ציטומטריית זרימה ומיקרוסקופ אלקטרונים תמסורת, אנו מראים כי עיכוב CENP-E גורם לחוסר תיאום כרומוזומים וחוסר יציבות גנומית בזרעונים של עכברים.

הערכה תפקודית של קינזין-7 CENP-E בזרעונים באמצעות עיכוב Vivo , אימונופלואורסנציה וציטומטריית זרימה

שיטת מניפולציית צוואר הרחם המוצגת יכולה לגרום לפסאודו-הריון בעכברים ללא צורך בגידול נקבות עם זכרים שעברו כריתת כלי דם. השראת פסאודו-הריון נדרשת להצלחת החזרת עוברים לא כירורגית והזרעה מלאכותית לא ניתוחית, שניהם מוצגים גם.

גרימת פסאודו-הריון בעכברות נקבות ללא צורך בזכרים שעברו כריתת כלי דם לפני החזרת עוברים לא ניתוחיים או הזרעה מלאכותית

מודל העכבר AcroSensE ושיטות הדמיה של תאים חיים המתוארים כאן מספקים גישה חדשה לחקר דינמיקת הסידן בתא התת-תאי של אקרוזום הזרע וכיצד הם מווסתים שלבי ביניים המובילים לאיחוי קרום ואקסוציטוזה אקרוזומית.

הדמיה בזמן אמת של דינמיקת סידן אקרוזומלית ואקסוציטוזה בזרע עכבר חי

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לביסוס מודל עכבר הזרקת זרע תוך ציטופלזמית (ICSI)-העברת עוברים (ET), המאפשר לנו לצפות בשינויים הקשורים לגיל במטבוליזם של גלוקוז שניתן לייחס ל- ICSI, ומספקים תובנות לגבי ההשפעות ארוכות הטווח הפוטנציאליות שלו על ההתפתחות האנושית.

ניטור רמת הסוכר בדם בצאצאי עכבר לאחר הזרקת זרע תוך ציטופלזמית

למד את שיטת הזרקת זרע עגולה בעכברים לשיפור יעילות התפתחות עוברית במחקר ביולוגיית הרבייה. טכניקה זו מציעה פתרונות קליניים לחולים באזוספרמיה לא חסימתית.

הזרקת זרע עגולה לעכבר

גלה סרטונים נוספים