Name: רישום תקינות תפקודית של מחסום ב-bend.3 תאי אנדותל וסקולריים באמצעות זיהוי התנגדות חשמלית טרנסאנדותל (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-09-29T13:40:00.000+00:00
Duration: 9 min 3 s
Description: חקור הערכת תקינות מחסום הדם-מוח בקו התאים bEnd.3 באמצעות מדידת התנגדות חשמלית טרנסאנדותלית. שיטה זו מאפשרת סינון מהיר של תרופות למערכת העצבים המרכזית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מעריכים את התמיכה הכספית מהקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (82274207 ו- 82104533), תוכנית המחקר והפיתוח המרכזית של נינגשיה (2023BEG02012), ופרויקט קידום המחקר המלומד Xinglin של אוניברסיטת צ'נגדו של TCM (XKTD2022013).

הערה: תאי אנדותל שמקורם במוח עכבר.3 (bBend.3) חוסנו לתוך תאים של צלחת בת 24 בארות כדי לבנות מודל פשוט במבחנה של BBB בתנאים בינוניים ספציפיים. ה-TEER של תאים נורמליים ותאים היפוקסיים נמדד על-ידי מד TEER (איור 1 ואיור 2).
1. הכנת פתרון
<ol><li>הכינו את מדיום תרבית תאי DMEM המכיל FBS (10%, v/v), 100 U/mL פניצילין וסטרפטומיצין 10 מ"ג/מ"ל (ראו טבלת חומרים).</li>
	<li>הכן תמיסת מלאי CoCl2 של 100 מ"מ על ידי הוספת תמיסת CoCl2 עד 100 מיקרוליטר DMSO של 1.30 מ"ג. הערה: כל התמיסות הנ"ל אוחסנו במצב של 4 מעלות צלזיוס, ותמיסת המלאי דוללה בהתאם לריכוז הרצוי לפני השימוש.</li>
	<li>הכן תמיסת 5% נתרן היפוכלוריט (v/v) על ידי הוספת 2 מ"ל של תמיסת נתרן היפוכלוריט ל 38 מ"ל של מים מזוקקים כפול.</li>
</ol>2. תרבית תאים וכדאיות התא
<ol><li>זרע 1 מ"ל של bend.3 תאים בצלחת תרבית (100 מ"מ) המכיל מדיום DMEM בצפיפות של 1 x 106 תאים / מ"ל ותרבית ב 37 ° C באטמוספירה לחה של 5% CO2. שנה את המדיום כל 2 עד 3 ימים ותת-תרבית את התאים 2 פעמים בשבוע.</li>
	<li>לאחר bend.3 תאים לגדול 80% מפגש, לעכל את התאים עם 0.25% טריפסין במשך 30 שניות.</li>
	<li>בצע השעיה של bend.3 תאים בצפיפות של 7 x 104 תאים/מ"ל באמצעות תווך DMEM דרך מונה תאים. לאחר מכן, זרעו 100 μL של bend.3 השעיית תאים בצלחת של 96 בארות.</li>
	<li>לאחר היצמדות התא, נקו את התאים עם PBS ותרביתו את התאים עם 100 μL של מדיום תרבית או מדיום המכיל תרופות (100 μM, 200 μM, 300 μM, 400 μM, 500 μM CoCl2) במשך 24 שעות באותם תנאים. לאחר הסרת המדיום בתוך צלחת הבאר וניקוי עם PBS, להוסיף 100 μL של תמיסת CCK-8. הערה: אין ליצור בועות בבאר, אשר ישפיעו על ערכי הצפיפות האופטית (OD).</li>
	<li>שים צלחות 96 בארות בסביבה של 37 מעלות צלזיוס ודגור במשך שעה אחת. מדוד את הספיגה של לוחות 96 בארות ב 450 ננומטר באמצעות קורא microplates. הערה: כדי למנוע הבדלים בתוך הקבוצה, לוחות הבאר צוננו לטמפרטורת החדר לפני הגילוי.</li>
	<li>חשב את כדאיות התא המושרה על ידי ריכוזים שונים של CoCl2 בהתאם לנוסחה [ODDrug - ODBlank] / [ODControl-OD Blank] x 100%. בחר את ריכוז CoCl2 עם הבדל משמעותי בהפחתת כדאיות התא בהשוואה לקבוצת הביקורת לניסוי הבא.</li>
</ol>3. הרכבת דגם
<ol><li>שטפו את החדר העליון של צלחות 24 הבארות עם PBS. הערה: תאים גדלו והתמזגו בתחתית החדר העליון של צלחת 24 בארות, וצמתים הדוקים בין תאים נוצרו בהדרגה כדי למלא תפקיד מחסום. אם תאי האנדותל ששימשו במחקרים מסוימים אינם מסוגלים ליצור מחסום מלא על קרומי PET באופן עצמאי, נדרש ציפוי הקרומים בתמיסת קולגן IV לפני חיסון התא.</li>
	<li>ערבבו את תאי bend.3 עם מדיום DMEM ליצירת תרחיף בצפיפות של 5 x 105 תאים/מ"ל באמצעות מערבל מערבולת. לאחר מכן, זרע 200 μL של bend.3 השעיית תאים על קרום PET בחדר העליון של צלחת 24 בארות (0.33 ס"מ2, 0.4 מיקרומטר גודל נקבוביות הממברנה). הערה: מחקר הפיילוט של פרוטוקול זה לא מצא הבדל בתוצאות בעת שימוש ב-5 עד 10 מעברים של תאי bend.3 לניסויים. כדי להבטיח את ההסתברות למידול מוצלח, עיין במרווח מספר התא של פרוטוקול זה.</li>
	<li>הוסף 1200 μL של תווך שלם לתא התחתון של הצלחת כדי להבטיח שהלחץ האוסמוטי של החדרים העליונים והתחתונים נוטה להתייצב. ישנם הבדלים בנפח המדיום שנוסף בהתאם לסוג; ודא כי רמת הנוזל של החדרים העליונים והתחתונים הוא סמוק.</li>
	<li>שנה את התווך של החדר העליון והחדר התחתון בשעה קבועה בכל יום ועקוב אחר ערך ההתנגדות בו זמנית.<ol><li>בעת שינוי המדיום, שלמות שכבת התא תיפגע על ידי מגע מלאכותי או תנועה מוגזמת. כדי למנוע את המצב הנ"ל, לאט להסיר את המדיום הישן מצד אחד עם פיפטה לחץ שלילי ולאט לאט להוסיף מדיום חדש לאורך הקיר במהלך חילופי נוזלים.</li>
	</ol></li>
</ol>4. מדידת TEER
<ol><li>לפני תחילת העבודה, הניחו את הנגד, תמיסת 5% נתרן היפוכלוריט, 75% אתנול ותמיסת מים מזוקקים כפולה בשולחן נקי במיוחד. הפעל את הקרנת UV למשך 30 דקות כדי לחסל שאריות חיידקים ופתוגנים.</li>
	<li>מניחים את האלקטרודות בתמיסת 5% נתרן היפוכלוריט עם ניעור איטי במשך 3 שניות עד 5 שניות, ולאחר מכן טובלים באתנול 75% למשך 15 דקות. לבסוף, יש להעביר ל-PBS או לתמיסת מים מזוקקים פעמיים עד לשימוש.</li>
	<li>הפעל את המתג בגב מד נגדי התא, לחץ על בחר צלחת בהתאם לפרמטרים בטבלה 1 ובחר צלחת 24 בארות.</li>
	<li>בהתאם לצרכי הפעולה, בחר את רצף הזיהוי המתאים. בחרנו הליך A1 במחקר זה.</li>
	<li>הכנס נגד kΩ לתקע הימני כדי לכייל את המכשיר. אם תוצאת הכיול היא 1000 ± 5 Ω, שקול את דיוק המכשיר כתקין.<ol><li>אם תוצאת הכיול אינה 1000 Ω, לחץ על יחידות מצב בממשק הראשי כדי לבחור OHMS, ולאחר מכן לחץ על כיול במסך הראשי כדי לכייל מחדש את המכשיר.</li>
	</ol></li>
	<li>משוך את נגד kΩ בצד ימין והחלף את אלקטרודת המדידה בחוט חיבור.</li>
	<li>מקם את האלקטרודה בלוח 24 הקידוחים מבלי לזרוע תאים אנכית ולחץ על טיפול ריק במסך הראשי של המכשיר. ערך הרקע של עמידות הצלחת ללא תאי זרע הוא כ 134.4 Ω.</li>
	<li>הכנס את שתי האלקטרודות לחדרים העליונים והתחתונים של צלחת הזרע עם תאים כך ששכבת התא תהיה ביניהם, ולאחר מכן רשום את ערך ההתנגדות על ידי דריכה עדינה על הדוושה.<ol><li>ודא שהאלקטרודה אינה נוגעת בתאים בתא העליון ובתחתית התא התחתון. לזמן ההשריה של האלקטרודה בתמיסה אין השפעה על ערך ההתנגדות, ויש רק לוודא שהאלקטרודה נמצאת במיקום הנכון.</li>
	</ol></li>
	<li>קבל ערכי TEER (Ωcm2) על ידי הכפלת ערכי התנגדות חשמלית (ohms) עם השטח התחתון (cm2) של החדר העליון, כמו במשוואה: TEER (Ωcm2) = התנגדות (Ω) xS insert (ס"מ2)</li>
	<li>צייר תרשים קו של TEER-Time (בימים). כאשר ערך ההתנגדות אינו עולה עוד יותר עם הזמן (נמדד על פני ימים), שקול את התא נוצר מחסום. NOTW: מודל BBB חד-שכבתי של תאי bEnd.3 ייבנה בהצלחה על ידי תרבית תאי bEND.3 עם הפרמטרים במחקר זה במשך כ-6 ימים. ה-TEER של מודל חד-שכבתי של תא bEnd.3 נע בין 16.49 ±-2.12 Ωcm2 ל-27.59 ±-1.50 Ωcm2 תוך 6 ימים (n = 8, ממוצע ± SD).</li>
</ol>5. הרס מחסומים וניתוח סטטיסטי
<ol><li>על פי עקומת הזמן TEER, בחר את הבארות עם פונקציית מחסום וחלק אותן לקבוצת הבקרה ולקבוצת CoCl2 (n = 4).</li>
	<li>הוסף את מדיום התרבית ואת מדיום התרבית המכיל 300 מיקרומטר CoCl2 (200 μL) לקבוצת הביקורת ולתא העליון של קבוצת CoCl2 , בהתאמה.</li>
	<li>זהה את ערכי ההתנגדות של קבוצות הבקרה ו- CoCl2 ב- 12 שעות ו- 24 שעות הדגירה ב- 37 ° C באמצעות ההליך המתואר בשלב 4.</li>
	<li>השתמש בתוכנה מסחרית כדי למפות את המגמה של ערכי TEER של מחסום התאים בתרבית עם או בלי 300 מיקרומטר CoCl2.</li>
	<li>השתמש בתוכנת ניתוח סטטיסטי כדי לנתח את ההבדל בערכי ההתנגדות בין תאים שטופלו ב- CoCl2 לבין תאים נורמליים (n=4, *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001).</li>
</ol>

מדידת התנגדות טרנסאנדותל להערכת שלמות מחסום התא

<ol><li>Kim, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CLEC14A+deficiency+exacerbates+neuronal+loss+by+increasing+blood-brain+barrier+permeability+and+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">CLEC14A deficiency exacerbates neuronal loss by increasing blood-brain barrier permeability and inflammation.</a> J Neuroinflammation. 17 (1), 48(2020).</li>
<li>Bagchi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In-vitro+blood-brain+barrier+models+for+drug+screening+and+permeation+studies%3A+an+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Des+Devel+Ther%22%5BJournal%5D)">In-vitro blood-brain barrier models for drug screening and permeation studies: an overview.</a> Drug Des Devel Ther. 13, 3591-3605 (2019).</li>
<li>Daneman, R., Prat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+perspect+Biol%22%5BJournal%5D)">The blood-brain barrier.</a> Cold Spring Harb perspect Biol. 7 (1), 020412(2015).</li>
<li>Profaci, C. P., Munji, R. N., Pulido, R. S., Daneman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+blood-brain+barrier+in+health+and+disease%3A+Important+unanswered+questions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">The blood-brain barrier in health and disease: Important unanswered questions.</a> J Exp Med. 217 (4), 20190062(2020).</li>
<li>Pardridge, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Discov+Today%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier delivery.</a> Drug Discov Today. 12 (1-2), 54-56 (2007).</li>
<li>Eigenmann, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+of+four+immortalized+human+brain+capillary+endothelial+cell+lines%2C+hCMEC%2FD3%2C+hBMEC%2C+TY10%2C+and+BB19%2C+and+optimization+of+culture+conditions%2C+for+an+in+vitro+blood-brain+barrier+model+for+drug+permeability+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Fluids+Barriers+CNS%22%5BJournal%5D)">Comparative study of four immortalized human brain capillary endothelial cell lines, hCMEC/D3, hBMEC, TY10, and BB19, and optimization of culture conditions, for an in vitro blood-brain barrier model for drug permeability studies.</a> Fluids Barriers CNS. 10 (1), 33(2013).</li>
<li>Gajdács, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+concept+of+an+ideal+antibiotic%3A+Implications+for+drug+design%5BTitle%5D)+AND+%22Molecule%22%5BJournal%5D)">The concept of an ideal antibiotic: Implications for drug design.</a> Molecule. 24 (5), 892(2019).</li>
<li>Stanimirovic, D. B., Bani-Yaghoub, M., Perkins, M., Haqqani, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+models%3A+in+vitro+to+in+vivo+translation+in+preclinical+development+of+CNS-targeting+biotherapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier models: in vitro to in vivo translation in preclinical development of CNS-targeting biotherapeutics.</a> Expert Opin Drug Discov. 10 (2), 141-155 (2015).</li>
<li>Helms, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+models+of+the+blood-brain+barrier%3A+An+overview+of+commonly+used+brain+endothelial+cell+culture+models+and+guidelines+for+their+use%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">In vitro models of the blood-brain barrier: An overview of commonly used brain endothelial cell culture models and guidelines for their use.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 36 (5), 862-890 (2016).</li>
<li>Özyurt, M. G., Bayir, E., DoĞan, Ş, ÖztÜrk, Ş, Şendemİr, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coculture+model+of+blood-brain+barrier+on+electrospun+nanofibers%5BTitle%5D)+AND+%22Turk+J+Biol%22%5BJournal%5D)">Coculture model of blood-brain barrier on electrospun nanofibers.</a> Turk J Biol. 44 (4), 121-132 (2020).</li>
<li>Kim, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+validation+of+the+simplified+in+vitro+3D+Co-culture+based+BBB+model%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Functional validation of the simplified in vitro 3D Co-culture based BBB model.</a> Biochem Biophys Res Commun. 625, 128-133 (2022).</li>
<li>Aazmi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularizing+the+brain+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Vascularizing the brain in vitro.</a> iScience. 25 (4), 104110(2022).</li>
<li>Burkhart, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transfection+of+brain+capillary+endothelial+cells+in+primary+culture+with+defined+blood-brain+barrier+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Fluids+Barriers+CNS%22%5BJournal%5D)">Transfection of brain capillary endothelial cells in primary culture with defined blood-brain barrier properties.</a> Fluids Barriers CNS. 12, 19(2015).</li>
<li>Campisi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+self-organized+microvascular+model+of+the+human+blood-brain+barrier+with+endothelial+cells%2C+pericytes+and+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">3D self-organized microvascular model of the human blood-brain barrier with endothelial cells, pericytes and astrocytes.</a> Biomaterials. 180, 117-129 (2018).</li>
<li>Peng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroinflammatory+in+vitro+cell+culture+models+and+the+potential+applications+for+neurological+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Neuroinflammatory in vitro cell culture models and the potential applications for neurological disorders.</a> Front Pharmacol. 12, 671734(2021).</li>
<li>Secker, P. F., Schlichenmaier, N., Beilmann, M., Deschl, U., Dietrich, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+transepithelial+transport+measurements+to+detect+nephrotoxicity+in+vitro+using+the+RPTEC%2FTERT1+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Functional transepithelial transport measurements to detect nephrotoxicity in vitro using the RPTEC/TERT1 cell line.</a> Arch Toxicol. 93 (7), 1965-1978 (2019).</li>
<li>Nazari, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+TEER+measurements+of+biological+barriers+in+microphysiological+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">Advances in TEER measurements of biological barriers in microphysiological systems.</a> Biosens Bioelectron. 234, 115355(2023).</li>
<li>Nicolas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+throughput+transepithelial+electrical+resistance+%28TEER%29+measurements+on+perfused+membrane-free+epithelia%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">High throughput transepithelial electrical resistance (TEER) measurements on perfused membrane-free epithelia.</a> Lab Chip. 21 (9), 1676-1685 (2021).</li>
<li>Yang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+alleviates+hypoxia-induced+blood-brain+barrier+injury+via+regulation+of+CLDN5+%28claudin+5%29%5BTitle%5D)+AND+%22Autophagy%22%5BJournal%5D)">Autophagy alleviates hypoxia-induced blood-brain barrier injury via regulation of CLDN5 (claudin 5).</a> Autophagy. 17 (10), 3048-3067 (2021).</li>
<li>Feng, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RhoA%2FROCK-2+pathway+inhibition+and+tight+junction+protein+upregulation+by+catalpol+suppresses+lipopolysaccaride-induced+disruption+of+blood-brain+barrier+permeability%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">RhoA/ROCK-2 pathway inhibition and tight junction protein upregulation by catalpol suppresses lipopolysaccaride-induced disruption of blood-brain barrier permeability.</a> Molecules. 23 (9), (2018).</li>
<li>Sulhan, S., Lyon, K. A., Shapiro, L. A., Huang, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroinflammation+and+blood-brain+barrier+disruption+following+traumatic+brain+injury%3A+Pathophysiology+and+potential+therapeutic+targets%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Neuroinflammation and blood-brain barrier disruption following traumatic brain injury: Pathophysiology and potential therapeutic targets.</a> J Neurosci Res. 98 (1), 19-28 (2020).</li>
<li>Liu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Notoginsenoside+R1+intervenes+degradation+and+redistribution+of+tight+junctions+to+ameliorate+blood-brain+barrier+permeability+by+Caveolin-1%2FMMP2%2F9+pathway+after+acute+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Phytomedicine%22%5BJournal%5D)">Notoginsenoside R1 intervenes degradation and redistribution of tight junctions to ameliorate blood-brain barrier permeability by Caveolin-1/MMP2/9 pathway after acute ischemic stroke.</a> Phytomedicine. 90, 153660(2021).</li>
<li>Hou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salidroside+intensifies+mitochondrial+function+of+CoCl2-damaged+HT22+cells+by+stimulating+PI3K-AKT-MAPK+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Phytomedicine%22%5BJournal%5D)">Salidroside intensifies mitochondrial function of CoCl2-damaged HT22 cells by stimulating PI3K-AKT-MAPK signaling pathway.</a> Phytomedicine. 109, 154568(2023).</li>
<li>Muñoz-Sánchez, J., Chánez-Cárdenas, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+cobalt+chloride+as+a+chemical+hypoxia+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Toxicol%22%5BJournal%5D)">The use of cobalt chloride as a chemical hypoxia model.</a> J Appl Toxicol. 39 (4), 556-570 (2019).</li>
<li>Jiang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salidroside+attenuates+high+altitude+hypobaric+hypoxia-induced+brain+injury+in+mice+via+inhibiting+NF-%CE%BAB%2FNLRP3+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Salidroside attenuates high altitude hypobaric hypoxia-induced brain injury in mice via inhibiting NF-κB/NLRP3 pathway.</a> Eur J Pharmacol. 925, 175015(2022).</li>
<li>Xie, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rhodiola+crenulate+alleviates+hypobaric+hypoxia-induced+brain+injury+via+adjusting+NF-%CE%BAB%2FNLRP3-mediated+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Phytomedicine%22%5BJournal%5D)">Rhodiola crenulate alleviates hypobaric hypoxia-induced brain injury via adjusting NF-κB/NLRP3-mediated inflammation.</a> Phytomedicine. 103, 154240(2022).</li>
<li>Thiebaut de Schotten, M., Forkel, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+emergent+properties+of+the+connected+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The emergent properties of the connected brain.</a> Science. 378 (6619), 505-510 (2022).</li>
<li>Tu, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimated+burden+of+stroke+in+China+in+2020%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Netw+Open%22%5BJournal%5D)">Estimated burden of stroke in China in 2020.</a> JAMA Netw Open. 6 (3), 231455(2023).</li>
<li>Alzheimers Dement. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alzheimer%27s+disease+facts+and+figures%5BTitle%5D)+AND+%22Alzheimers+Dement%22%5BJournal%5D)">Alzheimer's disease facts and figures.</a> Alzheimers Dement. 17 (3), 327-406 (2021).</li>
<li>Wang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps+promote+tPA-induced+brain+hemorrhage+via+cGAS+in+mice+with+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps promote tPA-induced brain hemorrhage via cGAS in mice with stroke.</a> Blood. 138 (1), 91-103 (2021).</li>
<li>Liu, X. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+Cdk5+deficit+leads+to+the+development+of+spontaneous+epilepsy+through+CXCL1%2FCXCR2-mediated+reactive+astrogliosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Endothelial Cdk5 deficit leads to the development of spontaneous epilepsy through CXCL1/CXCR2-mediated reactive astrogliosis.</a> J Exp Med. 217 (1), 20180992(2020).</li>
<li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+Sporadic+Alzheimer%27s+Disease+in+Human+Brain+Organoids+under+Serum+Exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Sci+%28Weinh%29%22%5BJournal%5D)">Modeling Sporadic Alzheimer's Disease in Human Brain Organoids under Serum Exposure.</a> Adv Sci (Weinh). 8 (18), 2101462(2021).</li>
<li>Qi, D., Lin, H., Hu, B., Wei, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+on+in+vitro+model+of+the+blood-brain+barrier+%28BBB%29+based+on+hCMEC%2FD3+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">A review on in vitro model of the blood-brain barrier (BBB) based on hCMEC/D3 cells.</a> J Control Release. 358, 78-97 (2023).</li>
<li>Artus, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Wnt%2Fplanar+cell+polarity+signaling+pathway+contributes+to+the+integrity+of+tight+junctions+in+brain+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">The Wnt/planar cell polarity signaling pathway contributes to the integrity of tight junctions in brain endothelial cells.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 34 (3), 433-440 (2014).</li>
<li>Sivandzade, F., Cucullo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In-vitro+blood-brain+barrier+modeling%3A+A+review+of+modern+and+fast-advancing+technologies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">In-vitro blood-brain barrier modeling: A review of modern and fast-advancing technologies.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 38 (10), 1667-1681 (2018).</li>
<li>Galla, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocultures+of+primary+porcine+brain+capillary+endothelial+cells%3A+Still+a+functional+in+vitro+model+for+the+blood-brain-barrier%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Monocultures of primary porcine brain capillary endothelial cells: Still a functional in vitro model for the blood-brain-barrier.</a> J Control Release. 285, 172-177 (2018).</li>
<li>Srinivasan, B., Kolli, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transepithelial%2Ftransendothelial+electrical+resistance+%28TEER%29+to+measure+the+integrity+of+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Blood-Brain+Barrier%22%5BJournal%5D)">Transepithelial/transendothelial electrical resistance (TEER) to measure the integrity of blood-brain barrier.</a> Blood-Brain Barrier. 142, 99-114 (2019).</li>
<li>Liang, Y., Yoon, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+sensors+for+blood-brain+barrier+%28BBB%29+on+a+chip%5BTitle%5D)+AND+%22Sens+Actuators+Rep%22%5BJournal%5D)">In situ sensors for blood-brain barrier (BBB) on a chip.</a> Sens Actuators Rep. 3, 100031(2021).</li>
<li>Ozgür, B., Helms, H. C. C., Tornabene, E., Brodin, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia+increases+expression+of+selected+blood-brain+barrier+transporters+GLUT-1%2C+P-gp%2C+SLC7A5+and+TFRC%2C+while+maintaining+barrier+integrity%2C+in+brain+capillary+endothelial+monolayers%5BTitle%5D)+AND+%22Fluids+Barriers+CNS%22%5BJournal%5D)">Hypoxia increases expression of selected blood-brain barrier transporters GLUT-1, P-gp, SLC7A5 and TFRC, while maintaining barrier integrity, in brain capillary endothelial monolayers.</a> Fluids Barriers CNS. 19 (1), (2022).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

אחד מאיברי הגוף המפותחים ביותר, המוח שולט במגוון רחב של תהליכים פיזיולוגיים מורכבים, כולל זיכרון, קוגניציה, שמיעה, ריח ותנועה27. המוח הוא אחד האיברים המסובכים והמטופלים ביותר בגוף האדם בעת ובעונה אחת. הופעתן של הפרעות רבות במערכת העצבים המרכזית מראה נטייה גוברת משנה לשנה בשל גורמים הכוללים זיהום אוויר, דפוסי אכילה לא סדירים וגורמים אחרים 27,28,29. מעניין כי ההתחלה וההתקדמות של כמה מחלות מערכת העצבים המרכז...

BBB הוא ממשק ביולוגי ייחודי בין מחזור הדם לרקמת העצב, המורכב מתאי אנדותל וסקולריים, פריציטים, אסטרוציטים, נוירונים ומבנים תאיים אחרים1. זרימת היונים, הכימיקלים והתאים בין הדם למוח מווסתת בקפדנות על ידי מחסום זה. הומאוסטזיס זה מגן על רקמות העצבים מפני רעלים ופתוגנים תוך שהוא מאפשר פעולה מתאימה של עצבי המוח 2,3. שמירה על שלמות BBB יכולה למנוע ביעילות התפתחות והתקדמות של הפרעות המשפיעות על מערכת העצבים המרכזית, כגון תפקוד עצבי, בצקת ודלקת עצבית4. עם זאת, התכונות הפיזיולוגיות הייחודיות של BBB מונעות מיותר מ-98% מהתרופות במולקולות קטנות ומ-100% מהתרופות המקרומולקולאריות להיכנס למערכת העצבים המרכזית5. לכן, הגברת החדירה של תרופות דרך BBB במהלך פיתוח תרופות למערכת העצבים המרכזית חיונית להשגת יעילות טיפולית 6,7. אף על פי שסימולציה ממוחשבת של מצעים העלתה באופן משמעותי את ההסתברות של מועמדים לתרופות לחצות את מחסום הדם-מוח, עדיין נדרשים מודלים אמינים ובמחיר סביר של BBB in vitro/in vivo כדי לענות על צרכי המחקר המדעי8.
טכניקה מהירה ומשתלמת לבדיקת תרופות בתפוקה גבוהה היא מודל 9 במבחנה. כדי לשפוך אור על התהליכים הבסיסיים של השפעות התרופות על תפקוד BBB וחלקם בהתפתחות והתקדמות המחלה, נוצרה סדרה של מודלים פשוטים של BBB במבחנה. כיום, המודלים הנפוצים של BBB במבחנה הם מודלים חד-שכבתיים, תרבית משותפת, דינמיים ומיקרופלואידים 10,11,12, שנבנו על ידי תאי אנדותל וסקולריים ואסטרוציטים, פריציטים או מיקרוגליה 13,14. למרות שתרביות תאים תלת-ממדיות תואמות יותר את המבנה הפיזיולוגי של BBB15, היישום שלהן כאמצעי לסינון תרופות עבור BBB עדיין מוגבל על ידי העיצוב המורכב שלהן ויכולת השחזור שלהן. לעומת זאת, המודל החד-שכבתי במבחנה הוא המודל הנפוץ ביותר לחקר BBB והוא ישים לקביעת הביטוי של מובילי ממברנות וחלבוני צומת הדוקים בתאים מסוימים.
מדידת התנגדות חשמלית טרנסממברנה (TEER) היא טכניקה להערכה וניטור של שכבת התאים על פני ההתנגדות והערכת שלמות התא וחדירות המחסום. על ידי החדרה בו זמנית של שתי אלקטרודות למדיום הגידול או לתמיסת החיץ משני צדי החד-שכבה, ניתן למדוד את זרם החילופין או העכבה החשמלית דרך השכבה הקומפקטית16,17 של התא. על מנת לקבוע אם מודל BBB במבחנה נוצר כראוי, המדידה של TEER תשמש בדרך כלל כתקן זהב18. מצד שני, ניתן לחזות במדויק את מגמת הפעולה התרופתית על חדירות BBB על ידי מדידת השינוי בהתנגדות החשמלית של שכבת התא לאחר מעורבות סמים19. לדוגמה, פנג ועמיתיו גילו כי קטלפול (המונומר הפעיל העיקרי של rehmanniae) יכול להפוך ביעילות את הוויסות כלפי מטה המושרה על ידי ליפופוליסכריד של חלבוני צומת הדוקים ב- BBB ולהעלות את ערך TEER של שכבת תאי אנדותל במוח העכבר20.
התגובה הנוירו-דלקתית היא בדרך כלל הגורם העיקרי לחוסר איזון בהומאוסטזיס BBB21. טיפול היפוקסי לגרימת פגיעה נוירו-דלקתית הוא השיטה העיקרית להרוס את מחסום הדם-מוח, בעיקר כולל שיטות פיזיות ושיטות ריאגנטים כימיים. הראשון משתמש בעיקר באינקובטור של שלושה גזים כדי לשנות את תכולת החמצן בסביבת גידול התאים כדי לדמות תנאים היפוקסיים22, ואילו האחרון מושג על ידי החדרה מלאכותית של ריאגנטים deoxy כגון CoCl2 למדיום תרבית התא23. התאים יישארו במצב לא מחומצן אם Fe2+ יוחלף ב- Co2+ ב- heme. אם Fe2+ מוחלף ב- Co2+ בקבוצה הקטליטית, פעילות הידרוקסילאז פרולין והידרוקסילאז אספרטט יעוכבו, וכתוצאה מכך הצטברות של גורם השראת היפוקסיה-1α (HIF-1α)24. תחת היפוקסיה מתמשכת, dephosphorylation של HIF-1α בציטופלסמה מעורר מוות התא ומפעיל גורם גדילה אנדותל כלי הדם, אשר בסופו של דבר מעלה חדירות כלי הדם. במחקרים קודמים 25,26, הוכח היטב כי היפוקסיה יכולה להפחית באופן משמעותי את הביטוי של חלבוני צומת הדוק אנדותל כדי להגדיל את החדירות של BBB. במחקר זה נמדדה עקומת התנגדות הזמן של תאי bend.3 שנזרעו בלוחות של 24 בארות על מנת ליצור מודל BBB פשוט. באמצעות מודל זה, אפיינו את השינויים ב-TEER התא לאחר התערבות CoCl2 על מנת לבנות מודל תאי שניתן להשתמש בו כדי לסנן תרופות להגנה מפני BBB.

<table><tbody><tr><td>צלחת טרנסוול 24 בארות</td><td>קורנינג (Corning 3470, 0.33 ס"מ2, 0.4 &micro; מ)</td><td>10522023</td><td></td></tr><tr><td>75% אתנול</td><td>ChengDu Chron כימיקלים ושות'. בע"מ</td><td>2023052901</td><td></td></tr><tr><td>96 בארות צלחת</td><td>גואנגג'ואו ג'ט ביו-סינון ושות', בע"מ</td><td>220412-078-B</td><td></td></tr><tr><td>bEnd.3 תאים</td><td>הונאן Fenghui ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ</td><td>CL0049</td><td></td></tr><tr><td>ערכת ספירת תאים -8 (CCK-8)</td> <td>Boster ביולוגי טכנולוגיה ושות', בע"מ</td><td>BG0025</td><td></td></tr><tr><td>צלחת תרבית תאים (100 מ"מ)</td> <td>Zhejiang Sorfa מחקר מדעי החיים ושות', בע"מ</td><td>1192022</td><td></td></tr><tr><td>קובלט כלוריד (CoCl2)</td><td>Sigma</td><td>15862</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Boster Biological Technology Co., Ltd</td><td>PYG0040</td><td></td></tr><tr><td>מדיום הנשר השונה של Dulbecco (1x)</td><td>Gibco ThermoFisher Scientific</td><td>8121587</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>Gibco ThermoFisher Scientific</td><td>2166090RP</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism תוכנה</td><td>תוכנת GraphPad</td><td>9.0.0 (121)</td><td></td></tr> <tr><td>Matrigel (מכיל קולגן IV)</td> <td>MedChemexpress</td><td>HY-K6002</td><td></td></tr><tr><td>Microplate קורא</td><td>מכשירים מולקולריים</td><td>SpectraMax iD5</td><td></td></tr><tr><td>OriginPro 8 תוכנה</td><td>OriginLab Corporation</td><td>v8.0724 (B724)</td><td></td></tr> <tr><td>פניצילין-סטרפטומיצין (100x)</td> <td>Boster ביולוגית טכנולוגיה ושות', בע"מ</td><td>17C18B16</td><td></td></tr><tr><td>מי מלח חוצץ פוספט (PBS, 1x)</td><td>Gibco ThermoFisher Scientific</td><td>8120485</td><td></td></tr><tr><td>נתרן היפוכלוריט</td><td>ChengDu Chron Chemicals Co,. בע"מ</td><td>2022091501</td><td></td></tr><tr><td>מד התנגדות טרנסממברנה</td><td>World Precision Instruments LLC</td><td>VOM3 (גרסה 1.6)</td><td></td></tr></tbody></table>

רישום תקינות תפקודית של מחסום ב-bend.3 תאי אנדותל וסקולריים באמצעות זיהוי התנגדות חשמלית טרנסאנדותל

Barrier Functional Integrity Recording on bEnd.3 Vascular Endothelial Cells via Transendothelial Electrical Resistance Detection

מחסום הדם-מוח (BBB) הוא מבנה פיזיולוגי דינמי המורכב מתאי אנדותל מיקרו-וסקולריים, אסטרוציטים ופריציטים. על-ידי תיאום האינטראקציה בין מעבר מוגבל של חומרים מזיקים, ספיגת חומרים מזינים וסילוק מטבוליטים במוח, מחסום הדם-מוח חיוני לשימור הומאוסטזיס של מערכת העצבים המרכזית. בניית מודלים חוץ גופיים של BBB היא כלי רב ערך לחקר הפתופיזיולוגיה של הפרעות נוירולוגיות ויצירת טיפולים תרופתיים. מחקר זה מתאר הליך ליצירת מודל תאי BBB חד-שכבתי במבחנה על ידי זריעת תאי bend.3 לתוך החדר העליון של צלחת בעלת 24 בארות. כדי להעריך את שלמות תפקוד מחסום התא, נעשה שימוש במד מתח תאי אפיתל קונבנציונלי כדי לרשום את ההתנגדות החשמלית הטרנסממברנה של תאים נורמליים ותאים היפוקסיים המושרים על ידי CoCl2 בזמן אמת. אנו צופים כי הניסויים הנ"ל יספקו רעיונות יעילים ליצירת מודלים חוץ גופיים של BBB ותרופות לטיפול בהפרעות של מחלות מערכת העצבים המרכזית.

פרוטוקול זה איפשר רישום של שינויים בערכי ההתנגדות של תאים על פי הפרמטרים שנקבעו במד הנגד transendothelial. הכדאיות של תאי bEnd.3 (מספר התאים החיים) שטופלו בריכוזים שונים של CoCl2 נבדקה על ידי בדיקת CCK-8. נזק גדול יותר לתאים שנוצר על ידי CoCl2 היה מיוצג על ידי כדאיות תאים נמוכה יותר. מצאנו ש-300 מיקרומטר של CoCl2 היה ציטוטוקסי באופן משמעותי במבחנה, והריכוז הזה שימש לניסויים הבאים (איור 3A). על-ידי ניטור השינויים בהתנגדות לגדילה ב-bBend.3, מצאנו שערכי...

פרוטוקול זה מתאר מודל אמין ויעיל במבחנה של מחסום הדם במוח. השיטה משתמשת בתאי אנדותל של כלי דם מוחיים בעכבר bend.3 ומודדת התנגדות חשמלית טרנסממברנלית.

The blood-brain barrier (BBB) is a dynamic physiological structure composed of microvascular endothelial cells, astrocytes, and pericytes. By coordinating ...

מחקרים נוכחיים משתמשים בדרך כלל בבדיקות חדירות ובביטוי חלבונים הקשור כדי לאמת את הדיוק של זיהוי TEER. מודל BBB של תאים חד-שכבתיים בסגולה פחות יעיל לבדיקת תרופות, והשימוש ביותר תאים מקשה על בניית המודל. הפרוטוקול של מחקר זה פשוט יחסית, שכן ההליך הלא פולשני מאפשר להשתמש בדגימות התאים בניסויים אחרים לאחר זיהוי TEER.הזיהוי של TEER כדי להעריך את החדירות של מודלים התא יכול להאיץ את ההקרנה של תרופות לטיפול ומניעה של מערכת העצבים המרכזית כדי להגדיל את שיעור ההצלחה של פיתוח תרופות חדשות. בעתיד, אנו נזהה את הביטוי של חלבון צומת הדוק בתאי התא העליון של דופן החזה כדי לוודא שתוצאות בדיקת TEER יכולות לייצג ביעילות את שלמות תפקוד מחסום BBB.

barrier-functional-integrity-recording-on-bend3-vascular-endothelial

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

טכניקה מבוסס למדוד את הפלישה של monolayer תא האנדותל על ידי תאים סרטניים חשמל התנגדות בזמן אמת

סרטון זה מדגים שיטה להערכת התנגדות חשמלית טרנסאנדותל (TEER) בתאי אנדותל מיקרו-וסקולריים במוח עכבר במבחנה. ערך TEER גבוה מצביע על צמתים שלמים של תאי אנדותל, בעוד שתוספת של תאי T מופעלים מורידה את ערך ה-TEER, ומשקפת שיבוש של מחסום הצומת.

הערכת התנגדות חשמלית טרנסאנדותל במודל מחסום דם-מוח במבחנה

טרנזיסטור אלקטרוכימי אורגני משולב עם תאי חיים ומשמש לניטור שטף יונים על פני מחסום האפיתל במערכת העיכול. במחקר זה, עלייה בשטף יונים, הקשורים להפרעה בצומת הדוקים, הנגרמת על ידי הנוכחות של EGTA chelator סידן (גליקול-BIS אתילן (אתר בטא aminoethyl)-N, N, N ', אצטית N'-טטרה חומצה), הוא נמדדה.

חישה של שיבוש טישו גדר עם טרנזיסטור אלקטרוכימי אורגני

פרוטוקול זה מסוקר Cell-מצע חשמלי עכבת חישה, שיטה להקליט ולנתח את ספקטרום העכבה של תאי חסיד לכימות של התקשרות סלולרי, התפשטות, תנועתיות, ותגובות תאיות לגירויים תרופתיים ורעילים. זיהוי של חדירות האנדותל והערכה של קשרים בין תאים ותא מצע מודגשים.

חשמל Cell-מצע עכבת חישה לכימות של האנדותל למניעת הפצת נשק, תפקוד מחסום, ותנועתיות

כאן, אנו מתארים מודל עכברי במבחנה של מחסום הדם-מוח העושה שימוש בספקטרוסקופיה של תאי עכבה, תוך התמקדות בהשלכות על שלמות תאי האנדותל וחדירות באינטראקציה עם תאי T מופעלים.

<em&gt; במבחנה</em&gt; דגם של מחסום דם-מוח באמצעות ספקטרוסקופיית עכבה: התמקדות T Cell-אנדותל אינטראקציה תא

פרסום זה מתאר את הזיוף של המכשיר איברים על שבב עם אלקטרודות משולב על כימות ישירה של ההתנגדות החשמלית transendothelial (TEER). עבור אימות, מחסום הדם - מוח היה חיקה בתוך המכשיר הזה microfluidic, תפקידה מחסום היה במעקב. שיטות הציג אלקטרודה ואינטגרציה כמת TEER ישירה חלים בדרך כלל.

ייצור ואימות מערכת איברים על שבב עם אלקטרודות משולבת ישירות לכמת התנגדות חשמלית Transendothelial

כאן, אנו מדגימים כיצד להגדיר וולט-אמפר-מונה זול עם תדר פלט מיתכנת שניתן להשתמש בו עם המקל מסחרית זמין אלקטרודות עבור transepi, מדידות התנגדות חשמלית החשמל.

גישה פשוטה לבצע מדידות הטיר באמצעות עצמית וולט-אמפר מונה עם תדר פלט ניתן לתיכנות

פרוטוקול זה מדגים בדיקת טרנסציטוזה של תאי אנדותל במבחנה כמודל להערכת חדירות מחסום הדם-רשתית הפנימית על ידי מדידת יכולתם של תאי אנדותל מיקרו-וסקולריים ברשתית האנושית להעביר פרוקסידאז חזרת על פני תאים בתהליכי הובלה טרנס-תאיים בתיווך caveolae.

בדיקת טרנסציטוזה של תאי אנדותל כמודל In vitro להערכת חדירות מחסום הרשתית הפנימית בדם

כאן אנו מדגימים את הטכניקה של שימוש בחיישנים ביולוגיים מבוססי עכבה: ECIS ו- cellZscope, למדידת חוזק מחסום אנדותל במוח. אנו מפרטים את ההכנה והטכניקה של הוספת גירויים שונים למודל in vitro של אנדותל המוח. אנו מודדים, רושמים ונותנים ניתוח מייצג של הממצאים.

מדידת שינויים בשלמות מחסום האנדותל במוח באמצעות שני חיישנים ביולוגיים מבוססי עכבה בתגובה לתאים סרטניים וציטוקינים

אנו מציגים שיטה לאיסוף אותות electrocorticographic למטרות מחקר מבני אדם אשר עוברים ניטור פולשני אפילפסיה. אנחנו מראים איך להשתמש בפלטפורמה BCI2000 תוכנה לאיסוף נתונים, עיבוד אותות מצגת גירוי. באופן ספציפי, אנחנו מדגימים את זיגפריד, כלי BCI2000 מבוסס על מיפוי בזמן אמת המוח תפקודית.

הקלטת אדם Electrocorticographic (ECOG) אותות לחקר Neuroscientific בזמן אמת מיפוי קורטיקלי פונקציונלית

חקור הערכת תקינות מחסום הדם-מוח בקו התאים bEnd.3 באמצעות מדידת התנגדות חשמלית טרנסאנדותלית. שיטה זו מאפשרת סינון מהיר של תרופות למערכת העצבים המרכזית.

רישום תקינות תפקודית של מחסום ב-bend.3 תאי אנדותל וסקולריים באמצעות זיהוי התנגדות חשמלית טרנסאנדותל

גלה סרטונים נוספים