Name: מודל Ex Vivo של סרטן השחלות גרורות פריטוניאליות באמצעות Omentum אנושי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-01-26T14:15:00.000+00:00
Duration: 5 min 42 s
Description: למד כיצד ליצור מודל תלת-ממדי ex vivo של סרטן השחלות עם Omentum אנושי. שיטה זו מאפשרת חקר אינטראקציות ישירות בין תאי סרטן לסביבת השומן ופיתוח טיפולים חדשניים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה ממומן בחלקו על ידי קרן הזיכרון של ג'נט בורוס. אנו מודים למטופלות ולמחלקה האונקולוגית הגינקולוגית של מכון קרמנוס לסרטן על איסוף דגימות אומנטום. כמו כן, אנו מודים לליבת ביובנק ומדעי הקורלציה במכון הסרטן קרמנוס על תיאום גיוס חולים והכנת שקופיות פתולוגיות. הליבה של ביובנק ומדעי הקורלציה נתמכת בחלקה על ידי מענק P30 CA22453 של מרכז NIH למכון קרמנוס לסרטן באוניברסיטת וויין סטייט.

פרוטוקול המחקר הבא נבדק ואושר על ידי מועצת הביקורת המוסדית של אוניברסיטת וויין סטייט (IRB). הסכמה מדעת התקבלה מכל המטופלים לפני הניתוח. איור 1 ממחיש את שלושת השלבים הכלליים בפרוטוקול זה.
1. הכנת רקמת omentum האנושי
<ol><li>הכינו תרבית אומנטום (DMEM/F12 + 10% סרום בקר עוברי + 1% פניצילין-סטרפטומיצין) ואחסנו בטמפרטורה של 4°C. Aliquot 30-40 מ"ל של מדיה זו לתוך סטרילי 50 מ"ל צינור חרוטי או מיכל דגימה כירורגית.</li>
	<li>קבל דגימות כירורגיות מביופסיה אומנטלית או ניתוח omentectomy. יש לטבול את הדגימה הסטרילית בתרבית אומנטום מיד לאחר ההסרה בחדר הניתוח. אם זרימת העבודה אינה מאפשרת זאת, מקם את הדגימה במדיה של תרבית omentum בהקדם האפשרי. מעבירים את הדגימה על ידי הנחתה על קרח ומאחסנים בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס עד לעיבוד. הערה: גודל דגימת האומנטום שהוסרה יקבע את כמות הרקמה הניתנת לעבודה.</li>
	<li>עבד את דגימת omentum בתוך 1-2 שעות של איסוף באמצעות מכסה מנוע זרימה למינרית. ודא שכל החומרים והכלים סטריליים או מעוקרים.</li>
	<li>מוציאים את האומנטום ממיכל האיסוף ומעבירים לצלחת תרבית בקוטר 100 מ"מ. יש לטבול את הדגימה במי מלח חוצצי פוספט 1x (1x PBS) ולשטוף בעדינות את הדגימה כדי להסיר קרישי דם או פסולת.</li>
	<li>חותכים את הרקמה לחתיכות (0.5 ס"מ x 0.5 ס"מ או 100-200 מ"ג; איור 2A) באמצעות מספריים כירורגיים קטנים או אזמל 10-15 מ"מ. השתמש מלקחיים כירורגיים קטנים כדי לעזור לתפעל את הרקמה ולמנוע ריסוק omentum. אם נעשה שימוש במכשיר אנרגיה כדי להסיר בניתוח את דגימת האומנטום, הימנע משימוש ברקמה המעוותת בקצה האטום.</li>
	<li>הניחו כל פיסת אומנטום חתוכה בבארות נפרדות של צלחת תרבית בת 24 בארות ומלאו את הבארות ב-500 מיקרוליטר של מצע תרבית אומנטום או בנפח שמספיק כדי לכסות את האומנטום מבלי לאפשר לחתיכת האומנטום לצוף מעל רצפת הבאר (איור 2B).</li>
	<li>אחסנו חתיכות אומנטום במצע תרבית טרי בטמפרטורה של 4°C עד להזרקה.</li>
</ol>2. הכנת תאי סרטן השחלות
<ol><li>תרבית תאי סרטן שחלות אנושיים בבקבוק תרביתשל 75 ס"מ 2 ב 37 ° C ו 5% CO2 לפחות 75% מפגש עד יום איסוף omentum. הערה: פרוטוקול זה משתמש בתאי סרטן שחלות אנושיים מסוג OCSC1-F2 חיוביים ל-mCherry שתוארו בעברכ-15,16,17,18. ניתן לשנות אותו לכל קו תאים סרטניים המתויג באות פלואורסצנטי.</li>
	<li>הכינו תאים בתוך מכסה מנוע זרימה למינרית מיד לאחר איסוף דגימת האומנטום. ודא שכל החומרים והכלים סטריליים או מעוקרים.</li>
	<li>הוסף 10 מ"ל של PBS סטרילי 1x PBS לבקבוק התרבית ושטוף את התאים על ידי נדנוד עדין של הצלוחית. הסר את 1x PBS ולאחר מכן הוסף 3 מ"ל של 0.05% טריפסין-EDTA.</li>
	<li>נענעו בעדינות את בקבוק התרבית כדי לצפות את כל התאים, ולאחר מכן הניחו את הבקבוק באינקובטור (37°C ו-5% CO2) למשך לא יותר מ-5 דקות. הקש על בקבוק התרבית כדי לנתק לחלוטין את התאים, ולאחר מכן נטרל טריפסין על ידי הוספת 3 מ"ל של מדיה תרבית omentum.</li>
	<li>מערבבים את תרחיף התא על ידי פיפטינג, ולאחר מכן מעבירים את התרחיף לתוך צינור חרוטי 15 מ"ל. צנטריפוגה את המתלים למשך 5 דקות ב-1,200 x גרם ב-24°C. הסר את supernatant ו resuspend את גלולת התא ב 6 מ"ל של מדיה תרבית omentum טרי.</li>
	<li>ספור את התאים באמצעות hemacytometer. לדלל את תרחיף התא לפחות 100,000 תאים לכל 100-200 μL של תרחיף. זהו נפח ההזרקה לכל חתיכת אומנטום חתוכה.</li>
	<li>העבר מספר מתאים של תאים לבקבוק תרבית חדש כדי להמשיך את מעבר התא.</li>
</ol>3. הזרקת תאי סרטן השחלות
<ol><li>השתמש מזרק 1 מ"ל כדי לצייר את השעיית התא, ולאחר מכן לחבר מחט 26-G. אין לצייר את השעיית התא באמצעות המחט, שכן זה יכול לשבור את התאים.</li>
	<li>השתמש במלקחיים כירורגיים קטנים כדי להרים חתיכת omentum חתוך. מעבירים את האומנטום לצלחת סטרילית נפרדת כדי להקל על ההזרקה. ניקבו בעדינות את האומנטום עם קצה המחט והזריקו נפח קטן של תרחיף תאים לתוך הרקמה (איור 2C).</li>
	<li>הזרקה חוזרת על פני מספר אזורים של omentum לנפח כולל של לפחות 100 μL או 100,000 תאים. שימו לב שחלק גדול מתרחיף התא עשוי להיראות כאילו הוא מצטבר סביב הדגימה. אם יש חשש לגבי איכות ההזרקה, יש לחזור על הזריקה או להזריק נפח גדול יותר של תרחיף תאים לדגימה.</li>
	<li>מחזירים את דגימות האומנטום המוזרקות לכל באר של צלחת תרבית בת 24 בארות. שימו לב שנפח המדיה של תרבות האומנטום הוא ברמה שמכסה את האומנטום מבלי לאפשר לו לצוף. בזהירות לטפל בצלחת ולהניח אותו בתוך אינקובטור (37 ° C ו 5% CO2).</li>
	<li>אופציונלי: השתמש במטריג'ל (מטריצת קרום מרתף) כדי להשהות רקמת אומנטום במטריצה מוצקה כדי לאפשר הזרקה קלה יותר ותרחיף תאים מרוכז יותר.<ol><li>הפשירו את מטריצת קרום המרתף בטמפרטורה של 4°C וערבבו ביחס של 1:1 עם מדיית תרבית אומנטום מיד לפני השימוש. אחסנו את תערובת מטריצת קרום המרתף על קרח או בטמפרטורה של 4°C עד להזרקה. מלאו בארות ריקות בתערובת מטריצת קרום מרתף מספיק כדי לטבול חתיכת omentum חתוך.</li>
		<li>מניחים דגימות לתוך תערובת מטריצת קרום המרתף ולאחר מכן מניחים את צלחת תרבית 24 בארות באינקובטור (37 ° C ו 5% CO2) במשך 20 דקות. לאחר שהתערובת התמצקה, המשיכו בהזרקה כמתואר לעיל.</li>
	</ol></li>
	<li>ודא הזרקה מוצלחת באמצעות הדמיה פלואורסצנטית. ודאו שפס של אות פלואורסצנטי מוצג באופן חזותי באתרי ההזרקה (איור 2D). שים לב כי מספר התאים בפועל מחובר omentum לאחר ההזרקה הוא בלתי צפוי.</li>
</ol>4. תרבות משותפת של omentum אנושי ותאי סרטן השחלות
<ol><li>שנה מדיה כל 48-72 שעות על ידי הוספת 500-2000 μL של מדיה תרבותית omentum טרי. אין לצנרת מדיה ישירות על גבי רקמת omentum, שכן זה עלול לעקור תאים סרטניים. שים לב שאם צבע המדיה הופך לצהוב, שנה את המדיה. הערה: תדירות שינוי המדיה תהיה תלויה בנפח המדיה בשימוש ובמסלול צמיחת התאים הסרטניים. ברגע שהתאים הסרטניים זרעו את האומנטום, כבר לא חשוב אם חתיכת האומנטום צפה או לא.</li>
	<li>אופציונלי: אם נעשה שימוש במטריצת קרום מרתף, המטריצה בדרך כלל תתמוסס בזמן שינוי המדיה הראשון.</li>
	<li>עקוב אחר הצמיחה של גידולים סרטניים בשחלות באמצעות הדמיה פלואורסצנטית. תדירות ההדמיה נתונה לשיקול דעתו של החוקר. צפו עדויות לגידולים קטנים בכ-14 יום (איור 3A-C). התוצאות עשויות להשתנות בהתאם לאיכות ההזרקה.</li>
	<li>סיים את הניסוי בהתבסס על נקודת הקצה של הניסוי. הערה: צמיחת הגידול ושלמות רקמת האומנטום נצפו ב-50 הימים האחרונים.</li>
</ol>

הקמת מודל 3D Ex Vivo לאינטראקציה בין סרטן השחלות לאומנטום

<ol><li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Wagle, N. S., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+statistics%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J+Clin%22%5BJournal%5D)">Cancer statistics.</a> CA Cancer J Clin. 73 (1), 17-48 (2023).</li>
<li>Berek, J. S., Renz, M., Kehoe, S., Kumar, L., Friedlander, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+of+the+ovary%2C+fallopian+tube%2C+and+peritoneum%3A+2021+update%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Gynaecol+Obstet%22%5BJournal%5D)">Cancer of the ovary, fallopian tube, and peritoneum: 2021 update.</a> Int J Gynaecol Obstet. 155 (Suppl 1), 61-85 (2021).</li>
<li>Ledermann, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Newly+diagnosed+and+relapsed+epithelial+ovarian+carcinoma%3A+ESMO+clinical+practice+guidelines+for+diagnosis%2C+treatment+and+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Oncol%22%5BJournal%5D)">Newly diagnosed and relapsed epithelial ovarian carcinoma: ESMO clinical practice guidelines for diagnosis, treatment and follow-up.</a> Ann Oncol. 24 (Suppl 6), vi24-32 (2013).</li>
<li>Jelovac, D., Armstrong, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+progress+in+the+diagnosis+and+treatment+of+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J+Clin%22%5BJournal%5D)">Recent progress in the diagnosis and treatment of ovarian cancer.</a> CA Cancer J Clin. 61 (3), 183-203 (2011).</li>
<li>Morgan, R. J. Jr, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+cancer.+Clinical+practice+guidelines+in+oncology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Compr+Canc+Netw%22%5BJournal%5D)">Ovarian cancer. Clinical practice guidelines in oncology.</a> J Natl Compr Canc Netw. 6 (8), 766-794 (2008).</li>
<li>Nieman, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipocytes+promote+ovarian+cancer+metastasis+and+provide+energy+for+rapid+tumor+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Adipocytes promote ovarian cancer metastasis and provide energy for rapid tumor growth.</a> Nat Med. 17 (11), 1498-1503 (2011).</li>
<li>Motohara, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+evolving+story+of+the+metastatic+voyage+of+ovarian+cancer+cells%3A+cellular+and+molecular+orchestration+of+the+adipose-rich+metastatic+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">An evolving story of the metastatic voyage of ovarian cancer cells: cellular and molecular orchestration of the adipose-rich metastatic microenvironment.</a> Oncogene. 38 (16), 2885-2898 (2019).</li>
<li>Di Nicola, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Omentum+a+powerful+biological+source+in+regenerative+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Regen+Ther%22%5BJournal%5D)">Omentum a powerful biological source in regenerative surgery.</a> Regen Ther. 11, 182-191 (2019).</li>
<li>Meza-Perez, S., Randall, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+functions+of+the+omentum%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunological functions of the omentum.</a> Trends Immunol. 38 (7), 526-536 (2017).</li>
<li>Liu, M., Silva-Sanchez, A., Randall, T. D., Meza-Perez, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specialized+immune+responses+in+the+peritoneal+cavity+and+omentum%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">Specialized immune responses in the peritoneal cavity and omentum.</a> J Leukoc Biol. 109 (4), 717-729 (2021).</li>
<li>Lee, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophils+facilitate+ovarian+cancer+premetastatic+niche+formation+in+the+omentum%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Neutrophils facilitate ovarian cancer premetastatic niche formation in the omentum.</a> J Exp Med. 216 (1), 176-194 (2019).</li>
<li>Cardenas, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipocyte+microenvironment+promotes+Bclxl+expression+and+confers+chemoresistance+in+ovarian+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Apoptosis%22%5BJournal%5D)">Adipocyte microenvironment promotes Bclxl expression and confers chemoresistance in ovarian cancer cells.</a> Apoptosis. 22 (4), 558-569 (2017).</li>
<li>Wu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer-associated+adipocytes%3A+key+players+in+breast+cancer+progression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hematol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Cancer-associated adipocytes: key players in breast cancer progression.</a> J Hematol Oncol. 12 (1), 95(2019).</li>
<li>Zhang, Z., Scherer, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+tissue%3A+The+dysfunctional+adipocyte+-+a+cancer+cell%27s+best+friend%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Adipose tissue: The dysfunctional adipocyte - a cancer cell's best friend.</a> Nat Rev Endocrinol. 14 (3), 132-134 (2018).</li>
<li>Alvero, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TRX-E-002-1+Induces+c-Jun-dependent+apoptosis+in+ovarian+cancer+stem+cells+and+prevents+recurrence+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer+Ther%22%5BJournal%5D)">TRX-E-002-1 Induces c-Jun-dependent apoptosis in ovarian cancer stem cells and prevents recurrence in vivo.</a> Mol Cancer Ther. 15 (6), 1279-1290 (2016).</li>
<li>Alvero, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+approach+for+the+detection+of+intraperitoneal+micrometastasis+using+an+ovarian+cancer+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Novel approach for the detection of intraperitoneal micrometastasis using an ovarian cancer mouse model.</a> Sci Rep. 7, 40989(2017).</li>
<li>Craveiro, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+modifications+in+ovarian+cancer+stem+cells+following+Paclitaxel+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Med%22%5BJournal%5D)">Phenotypic modifications in ovarian cancer stem cells following Paclitaxel treatment.</a> Cancer Med. 2 (6), 751-762 (2013).</li>
<li>Sumi, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+model+for+non-invasive+imaging+to+detect+and+monitor+ovarian+cancer+recurrence%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Murine model for non-invasive imaging to detect and monitor ovarian cancer recurrence.</a> J Vis Exp. (93), e51815(2014).</li>
<li>Agarwal, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+migration+inhibitory+factor+expression+in+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Obstet+Gynecol%22%5BJournal%5D)">Macrophage migration inhibitory factor expression in ovarian cancer.</a> Am J Obstet Gynecol. 196 (4), 348.e1-348.e5 (2007).</li>
<li>Kelly, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TLR-4+signaling+promotes+tumor+growth+and+paclitaxel+chemoresistance+in+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">TLR-4 signaling promotes tumor growth and paclitaxel chemoresistance in ovarian cancer.</a> Cancer Res. 66 (7), 3859-3868 (2006).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CBX7+binds+the+E-box+to+inhibit+TWIST-1+function+and+inhibit+tumorigenicity+and+metastatic+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">CBX7 binds the E-box to inhibit TWIST-1 function and inhibit tumorigenicity and metastatic potential.</a> Oncogene. 39 (20), 3965-3979 (2020).</li>
<li>Tedja, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+stable+epithelial-mesenchymal+hybrid+cancer+cells+with+tumorigenic+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Generation of stable epithelial-mesenchymal hybrid cancer cells with tumorigenic potential.</a> Cancers (Basel). 15 (3), 15030684(2023).</li>
<li>Dauleh, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterisation+of+cultured+mesothelial+cells+derived+from+the+murine+adult+omentum%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Characterisation of cultured mesothelial cells derived from the murine adult omentum.</a> PLoS One. 11 (7), e0158997(2016).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

באמצעות פרוטוקול זה, פותח מודל פרה-קליני של קרצינומטוזיס פריטוניאלי לסרטן השחלות תוך שימוש בשילוב של טכניקות בסיסיות במבחנה ואקס ויוו. גידול גידול מתקדם נצפה לאורך 50 יום של תרבית משותפת לאחר זריעת דגימות omentum עם mCherry+ OCSC1-F2 תאי סרטן שחלות אנושיים. שיטה זו פותחה ועברה אופטימיזציה במספר ניסויים ניסיוניים תוך שימוש בדגימות אומנטום שונות. גידול מוצלח של הגידול היה תלוי באיכות האומנטום, בכדאיות התאים הסרטניים וביעילות ההזרקה. בדו"ח זה, השתמשנו רק בתאי mCherry+ OCSC1-F2 ובקווי סרטן השחלות האנושי mCherry+ R182 שדווחו בעבר במספר פרסומים 12,15,16,17,18,19,20,21,22. באמצעות שני קווי תאים אלה עם זמני הכפלה שונים (16 שעות עבור OCSC1-F2 ו 36 שעות עבור R182), הבדל בזמן להשגת צמיחה לוגריתמית בתוך רקמת omental נצפתה. אף על פי כן, הצלחנו לבסס את שני קווי התאים במערכת התרבית המשותפת.
תקשורת יעילה בין חוקרים, מתאמי מחקר וצוותי ניתוח הייתה קריטית לאיסוף ועיבוד דגימות אומנטום. החוקר זיהה מועמדים לפרוטוקול, מתאמי המחקר קיבלו את הסכמת המטופלים לפני הניתוח, והחוקר אסף את הדגימות מחדר הניתוח. בהתחשב בתהליך עבודה זה, לוח הזמנים של החוקר היה צריך להיות גמיש מכיוון שגורמים רבים בצד המטופל שהשפיעו על הגבייה היו בלתי צפויים (למשל, ניתוח בוטל, זמן הניתוח השתנה, לא מספיק או לא הוסר omentum). הדמיה ישירה ובחירת רקמות מחדר הניתוח הבטיחו את שלמות הדגימה, סטריליות כירורגית ועיבוד בזמן. בתחילה, איסוף הדגימות הועבר למתאמי מחקר; עם זאת, לאחר שנאספו כמה דגימות, שמנו לב שזמן העיבוד התעכב (כלומר, >4 שעות) ואיכות האומנטום הייתה נחותה באופן גס (למשל, הרקמה הייתה בחתיכות). בניסוי אחד, רקמת אומנטל אוחסנה בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס במשך 48 שעות לפני ההזרקה מכיוון שהתאים הסרטניים לא היו מוכנים בזמן. גידול גידול דומה עדיין נצפתה, אך רצף זה לא חזר על עצמו מכיוון ששינויי טמפרטורה ידועים כמשפיעים על המיקרו-סביבה של הגידול (TME).
לפני איסוף הדגימות, היה חשוב שיהיו מספיק תאים סרטניים בהתאם ללוח הזמנים של הניתוח. מכיוון שמספר הדגימות שנאספו מדי חודש השתנה, לא תמיד נשמרו תרביות פעילות של תאי סרטן השחלות. התאים הקפואים הופשרו לפחות שבוע מראש, צופו בפרוטוקול סטנדרטי, ולאחר מכן עברו את התאים לפחות פעם אחת כדי להבטיח את כדאיותם. קווי התאים ששימשו בפרוטוקול זה היו עמידים יחסית; עם זאת, עדיין נתקלנו במקרים שבהם התאים לא התאוששו עד יום הניתוח ולא ניתן היה להזריק אותם. במחקר זה, לא היה ניסיון להזריק תאים סרטניים שהיו פחות מ 50% זורמים. עיכובים מאוחרים יותר הקשורים להכנת תאים הופחתו על ידי שימוש בטכניקה סטרילית טובה ופיצול תאים ביחסים כדי לשמור על מפגש בהתאם ללוח הזמנים הצפוי לאיסוף הדגימות. הגבלנו את הפרוטוקול לשני קווי תאים סרטניים מתויגים פלואורסצנטית בלבד, אך חשוב לציין שניתן להשתמש גם בקווי תאים סרטניים מבוססים אחרים או בתאי סרטן ראשוניים ללא חלבונים פלואורסצנטיים.
לבסוף, קצב צמיחת הגידול היה מתואם עם מפגש של תאים סרטניים הסמוכים ובתוכם אדיפוציטים מיד לאחר ההזרקה. זה נקבע על ידי לקיחת תמונות פלורסנט של כל דגימות omentum לאחר ההזרקה. בהשוואה לחיסון תאי גידול של איברים מוצקים או רקמות תת עוריות, הזרקת תאים סרטניים לרקמות אומנטליות הייתה מאתגרת יותר. המבנה הרופף והעקביות השומנית של omentum מונעים מהרקמה להחזיק ביעילות נפחים של תרחיף תאים מבלי לדלוף. כאשר נעשה שימוש במחט קטנה יותר (כלומר, 30 גרם או צרה יותר) כדי להזריק, היה חשש לפיצול תאים ככל שהתפשטות התאים פחתה. בדקנו טכניקות הזרקה שונות, מספרי תאים ונפחי תרחיף תאים ומצאנו תוצאות עקביות עם הפרוטוקול שתואר לעיל. יחד עם זאת, אנו מכירים בכך שווריאציות כאלה לפרוטוקול עשויות עדיין להניב תוצאות דומות בהתחשב באופי הממאיר של התאים. התוספת של מטריג'ל הפכה את שלב ההזרקה לקל יותר מכיוון שהמטריצה החוץ תאית החזיקה טוב יותר את מתלה התא; עם זאת, שיטה זו יקרה יותר ולא יצרה באופן עקבי נטל גידול גבוה יותר בדגימות. בסך הכל, זה היה נדיר עבור כל דגימות omentum לא לגדל גידולים, אבל מספר הגידולים ומהירות הצמיחה השתנו.
מודל זה דימה סימן היכר של גידולים סרטניים בשחלות על ידי שכפול גרורות מוקדמות לרקמות הצפק העשירות בשומן. פרוטוקול זה מאפשר וריאציה ללא מיומנות נדרשת, קל לשכפל ויוצר מערכת בעלת ערך תרגומי פוטנציאלי. בהשוואה למודלים קיימים במבחנה ואקס ויו בסרטן השחלות, השיטה המתוארת כאן משלבת מספר טכניקות ליצירת מודל השומר על ארכיטקטורת הגידול ועל TME לאורך תוחלת חיים ארוכה. בנוסף, ראינו שכאשר דגימת אומנטום עם גידולים מרובים הועברה לבאר חדשה ותורבתה עם אומנטום ללא סרטן (כלומר, לא הוזרק), האומנטום התמים נזרע עם תאים סרטניים תוך 7 ימים. ממצא זה מצביע על כך שהגידולים המשוכפלים שומרים על פוטנציאל גרורתי באמצעות מעבר אפיתל-מזנכימלי. לא זיהינו מודלים דומים של סרטן השחלות בספרות שתרבית ביופסיות רקמה לפרקי זמן ממושכים. גישה זו נתמכת על ידי ממצא קודם לפיו תאים מזותליים שבודדו מאומנטום עכבר יכולים להיות בתרבית במשך יותר מ -30 מעברים לאחר איסוף23.
ניתן להשתמש במודל המתואר במחקר זה כדי להבין עוד יותר את ההשפעה של אינטראקציה ישירה בין תאי סרטן השחלות לבין התאים בתוך האומנטום העשיר בשומן. תאים סרטניים יכולים להיות מנותקים מרקמות omentum ולהתקבל עבור ניתוח transcriptomic או immunohistochemistry (IHC). בנוסף, תאים יכולים לשמש למחקרי תגובה לתרופות.
המגבלות העיקריות של מודל זה הן שמספר הגידולים, קצב צמיחת הגידול ומיקום הגידולים היו בלתי צפויים. היעדר סטנדרטיזציה ושונות בין דגימות עלול להגביל את היישום של מודל זה. כמו כן, ערכנו מספר תצפיות שיחייבו בדיקה נוספת במהלך פיתוח פרוטוקול זה. לדוגמה, שכפול ה"ביקורת" בניסוי אחד לא היה למעשה נקי מסרטן, שכן החולה אובחן לאחר מכן עם מיקרו-גרורות אומנטליות; עם זאת, הגידולים שלא הוזרקו נותרו בני קיימא לאורך כל תקופת הניסוי. יישומים עתידיים של מודל זה יכללו מחקרים מולקולריים של TME במהלך גידולים מוקדמים, מניפולציה של TME על ידי הזרקת תאים חיסוניים, וחקירות תגובה לתרופות. לסיכום, אנו מאמינים כי המודל הפרה-קליני המתואר כאן יוסיף לרפרטואר כלי המחקר הקיימים ויסייע להבהיר מנגנונים מולקולריים של TME בסרטן השחלות.

סרטן השחלות הוא הממאירות הגינקולוגית הקטלנית ביותר בעולם1. הסיכון לכל החיים לפתח סרטן זה הוא כ -1 ל -70, כאשר הגיל החציוני של האבחנה הוא 63 שנים2. ממאירויות שחלות ראשוניות מסווגות היסטולוגית כאפיתל או לא אפיתל. סרטן שחלות אפיתל (EOC) מייצג מעל 90% מהגידולים, ותת-הסוג הנפוץ ביותר הוא קרצינומה סרוטית בדרגה גבוהה (HGSC), המהווה כ-70%-80% ממקרי EOC. נכון לעכשיו, אין שיטות סינון יעילות כדי לזהות מחלה מוקדם. אז רוב החולים מאובחנים בשלב מתקדם (כלומר, Fédération Internationale de Gynécologie et d'Obstétrique [FIGO] שלב III או IV) לאחר שהסרטן התפשט בכל חלל הצפק2.
טיפול סטנדרטי בקו החזית הוא ניתוח ציטורדוקטיבי להסרת כל המחלה המקרוסקופית הנראית לעין, ואחריו כימותרפיה מבוססת פלטינה אדג'ובנטית כדי להרוס כל מחלה מיקרוסקופית שיורית. בעוד שבשני העשורים האחרונים חלה התקדמות רבה בטיפול בסרטן השחלות, כ-70% מהחולות עם מחלה מתקדמת יחזרו תוך 3 שנים מהטיפול3. בהתחשב בפרוגנוזה הגרועה הכוללת של חולים אלה, מאמצי מחקר תרגומיים מתמשכים ועתידיים ב- EOC שואפים לזהות סמנים ביולוגיים לגילוי מוקדם, למנוע גרורות, לשפר את הטיפולים הנוכחיים כדי להתחמק מעמידות ולפתח טיפולים מותאמים אישית חדשים לסרטן.
גרורות כלליות בתוך חלל הצפק והעמידות הכימותרפית הנלווית אליו הן שתיים מהמגבלות העיקריות לשיפור הטיפול בחולות עם סרטן השחלות 4,5. האומנטום, מבנה דמוי סינר שומני התלוי מהקיבה מעל המעיים, הוא האתר העיקרי של גרורות סרטן השחלות 6,7. בנוסף לתפקודו כמחסום פיזי, האומנטום הוכח כבעל יכולות התחדשות ואנגיוגניות ובעל פעילות חיסונית, אשר יחד מקדמים את כלי הדם, מאיצים ריפוי פצעים ומגבילים זיהום8. הוא מכיל ריכוז גבוה של תאי גזע שיכולים להתמיין לסוגי תאים שונים ויכולים לסייע בתיקון רקמות פגועות. omentum יכול להיות מודלק בתגובה לפציעה או זיהום, אשר מפעיל את ההגירה של תאים חיסוניים לאתר של פציעה9. תאי חיסון אלה משחררים גורמי גדילה ומולקולות אחרות המסייעות לקדם את התיקון וההתחדשות של רקמות פגועות. תאים חיסוניים, כגון מקרופאגים, לימפוציטים ותאי פלזמה, הממוקמים באומנטום הם מבנים המכונים "כתמים חלביים", האחראים על איתור ותקיפה של פתוגנים וויסות חסינות הצפק. כמו כן, הוכח כי האומנטום ממלא תפקיד בגרימת סבילות חיסונית10, שהיא היכולת של מערכת החיסון לסבול אנטיגנים עצמיים ולא לתקוף רקמות בריאות. עם זאת, אותן פעילויות הקשורות למערכת החיסון מעורבות גם בתגובות פתולוגיות, כגון צמיחת גידולים אומנטליים, גרורות ובריחה ממעקב חיסוני 9,11. מחקרים קודמים מהמעבדה שלנו ואחרים הדגימו תפקיד ייחודי ופעיל של מיקרו-סביבת השומן בעיכוב תגובות חיסוניות אנטי-גידוליות וברכישת עמידות לכימותרפיה12,13,14. למרבה הצער, יש לנו מידע מוגבל על המנגנונים התאיים והמולקולריים שבאמצעותם האומנטום מספק מיקרו-סביבה פרו-גידולית.
כדי להבין טוב יותר את יחסי הגומלין בין תאים סרטניים לבין האומנטום, פותחה מערכת תרבית תלת-ממדית המורכבת מתאי סרטן שחלות אנושיים וצמחי אומנטום שמקורם במטופלות. הפרוטוקול המתואר כאן מייצג מודל אקס ויו חדשני של קרצינומטוזיס פריטוניאלי. מודל זה מחקה את ההתקדמות הטבעית של גידולי סרטן השחלות ברקמה עשירה בשומן. המודל המוצע קל לייצור, זול ועשוי להיות ישים למחקרים תרגומיים בחקר סרטן השחלות.

<table><tbody><tr><td>0.05% טריפסין-EDTA (1x)</td> <td>מזרק אינסולין Gibco</td><td>25300054</td><td></td></tr><tr><td>1 מ"ל עם מחט ניתנת להסרה 26 גרם</td><td>BD</td><td>329652</td><td></td></tr><tr><td>10 מ"ל צנרת סרולוגית</td><td>CELLTREAT</td><td>229010B</td><td></td></tr><tr><td>100 מ"מ צלחת תרבית רקמות</td><td>Fisherbrand</td><td>FB012924</td><td></td></tr><tr><td>צינור צנטריפוגה 15 מ"ל</td><td>CELLTREAT</td><td>229411</td><td></td></tr><tr><td>24 תאים באר צלחת תרבית</td><td>Costar</td><td>3524</td><td></td></tr><tr><td>צינור צנטריפוגה 50 מ"ל</td><td>CELLTREAT</td><td>229421</td><td></td></tr><tr><td>75 ס"מ2 בקבוק תרבית רקמות</td><td>CELLTREAT</td><td>229341</td><td></td></tr><tr><td>קורנינג תאי נגד</td><td>קורנינג</td><td>9819000</td><td></td></tr><tr><td>ציטציה 5 הדמיה</td><td>Biotek</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12 (1:1) (1x), +L-גלוטמין, +2.438 גרם/ליטר נתרן ביקרבונט</td><td>Gibco</td><td>11320033</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי, מוסמך</td><td>Gibco</td><td>1043028</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>356230</td><td>מטריצת ממברנת מרתף</td></tr><tr><td>מס' 10 נירוסטה חד פעמית</td><td>אזמל Integra-Miltex</td><td>4410</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין סטרפטומיצין</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>פוספט חוצץ מלח, pH 7.4 ( 1x)</td> <td>Gibco</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>סיבוב מיקרוסקופ</td><td>הד</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

מודל ex vivo של סרטן השחלות גרורות פריטוניאליות באמצעות omentum אנושי

An Ex Vivo Model of Ovarian Cancer Peritoneal Metastasis Using Human Omentum

סרטן השחלות הוא הממאירות הגינקולוגית הקטלנית ביותר. האומנטום ממלא תפקיד מפתח במתן מיקרו-סביבה תומכת לתאי סרטן שחלות גרורתיים, כמו גם אותות מודולריים חיסוניים המאפשרים סבילות לגידול. עם זאת, יש לנו מודלים מוגבלים המחקים באופן הדוק את האינטראקציה בין תאי סרטן השחלות ורקמות עשירות בשומן. כדי להבין עוד יותר את המנגנונים התאיים והמולקולריים שבאמצעותם האומנטום מספק מיקרו-סביבה פרו-גידולית, פיתחנו מודל 3D ex vivo ייחודי של אינטראקציה בין תאים סרטניים לאומנטום (omentum). באמצעות אומנטום אנושי, אנו מסוגלים לגדל תאי סרטן שחלות בתוך מיקרו-סביבה עשירה בשומן זו ולנטר את הגורמים האחראים לצמיחת הגידול ולוויסות מערכת החיסון. בנוסף למתן פלטפורמה לחקר מיקרו-סביבה סרטנית עשירה בשומן, המודל מספק פלטפורמה מצוינת לפיתוח והערכה של גישות טיפוליות חדשניות למיקוד תאי סרטן גרורתיים בנישה זו. המודל המוצע קל ליצור, זול וישים לחקירות תרגומיות.

התבססות מוצלחת של תאי סרטן השחלות לתוך דגימות omentum נראתה בערך ביום ה-14 (איור 3A-C). לפחות 24 עותקים משוכפלים הוכנו והוזרקו לכל דגימה שנאספה כדי לאפשר ניסויים נוספים. צמיחת הגידול נוטרה על-ידי צילום תמונות פלואורסצנטיות (איור 3D,E). תמונות היו צריכות להתפרש בזהירות כשכבה אחת של תאים סרטניים שגדלה גם בתחתית כל באר שלא הייתה מחוברת לאומנטום. העדפנו לצלם תמונות של האומנטום כאשר הוא היה תלוי במדיה כדי להימנע מאותות פלואורסצנטיים חופפים עם חד-שכבה של התא הסרטני.
היעדר אות פלואורסצנטי עד היום ה -14 יכול להיחשב כזריקות כושלות. נצפה כי התאים הסרטניים התפשטו בתחילה על פני השטח של האומנטום במהלך 7 הימים הראשונים, אולם עם הזמן הם התאספו ליצירת גידולים (איור 3A-D). מדד חלופי לעומס הגידול בין דגימות היה הקצב שבו אמצעי תרבית אומנטום שינו את צבעם מאדום לצהוב (איור 3F). השתמשנו בהדמיה פלואורסצנטית, סקירה היסטולוגית ובדיקה גסה כדי לאשר את צמיחת הגידול ואת כדאיות הרקמה החיצונית לאחר 50 יום של תרבית משותפת (איור 4).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66031/66031fig01.jpg"> איור 1: המחשה של שלבים כלליים בפרוטוקול. (א) שלב 1: הכנת אומנטום; (B) שלב 2: הזרקת תאים סרטניים; (C) שלב 3: הקמת מיקרו-סביבה של תאים סרטניים. (איור שהוכן בשנת BioRender.com). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66031/66031fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66031/66031fig02.jpg"> איור 2: הכנה והזרקה של תאים סרטניים לתוך האומנטום . (A) Omentum נחתך לחתיכות בגודל 1x1 ס"מ. (B) כל חתיכה מונחת בבאר של צלחת בת 24 בארות ומכוסה ב-500 מיקרוליטר של מדיה. (C) הזרקה של תאים סרטניים לתוך חתיכת omentum. (D) רצף של תאים סרטניים פלואורסצנטיים נצפה לאחר ההזרקה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66031/66031fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66031/66031fig03.jpg"> איור 3: תמונות מייצגות לאחר 14 ו-25 ימים של תרבות משותפת. (A-C) תמונות מייצגות לאחר 14 יום של תרבות משותפת: (A) שלב, (B) ערוץ mCherry, (C) מוזג. (ד-ה) תמונות מייצגות לאחר 25 ימים של תרבות משותפת. (F) שינוי צבע המדיה מוורוד לצהוב הוא אינדיקציה להזרקה מוצלחת של תאים סרטניים וביסוס תרבית משותפת. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66031/66031fig03large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66031/66031fig04.jpg"> איור 4: מורפולוגיה גולמית וצביעה של המטוקסילין ואוסין (H&amp;E). (A,B) מורפולוגיה גסה מייצגת של תרבויות משותפות ביום 50; החיצים מצביעים על אתרי צמיחה של תאי סרטן השחלות mCherry+. (ג,ד) צביעת H&amp;E ייצוגית של תרבויות משותפות ביום ה-50. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66031/66031fig04large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>

פרוטוקול זה מתאר את הקמתו של מודל אקס ויו תלת-ממדי (3D) של אינטראקציה בין תאים סרטניים ל-omentum. המודל מספק פלטפורמה להבהרת מנגנונים מעודדי גידול בתוך נישת השומן ולבדיקת טיפולים חדשניים.

מודל Ex Vivo של סרטן השחלות גרורות פריטוניאליות באמצעות Omentum אנושי

Ovarian cancer is the deadliest gynecologic malignancy. The omentum plays a key role in providing a supportive microenvironment to metastatic ovarian ...

מחקרים עכשוויים משתמשים במערכות תרבית משותפת המורכבות מאדיפוציטים מבודדים ותאי סרטן השחלות. אדיפוציטים אלה נבדלים במבחנה מקדם-אדיפוציטים. תאים אלה מופרדים לאחר מכן באמצעות החדרת טרנסוול ולכן חסרים מגע ישיר בין תא לתא.שיטת תרבית ex vivo זו מציעה מודל לחקר האינטראקציה הישירה של תאים סרטניים עם מיקרו-סביבת השומן. המודל שלנו משמר את מבנה התנע האנושי ולכן שומר על סוגי התאים השונים שנמצאים בדרך כלל באיבר זה. בנוסף לאדיפוציטים, תאים אלה כוללים תמיכה בפיברובלסטים כמו גם בתאי מערכת החיסון.מודל זה גם שומר על תאים אלה במטריצה הטבועה בהם. מודל זה מספק פלטפורמה מצוינת לפיתוח והערכה של גישות טיפוליות חדשניות למיקוד תאי סרטן גרורתיים בנישה זו.

an-ex-vivo-model-ovarian-cancer-peritoneal-metastasis-using-human

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

Assay אישור mesothelial המתוארת כאן מנצלת את התאים שכותרתו fluorescently ואת זמן לשגות מיקרוסקופיה וידאו להמחיש כמותית למדוד את יחסי הגומלין של סרטן השחלות spheroids תאיים ו monolayers התא mesothelial. Assay מתווך זה מדגים את השלבים המוקדמים של גרורות סרטן השחלות.

ב Assay עמילות חוץ גופית mesothelial כי מודלים השלבים המוקדמים של גרורות סרטן השחלות

בסרטון זה אנו מדגימים פיתוח מודל תלת מימדי במבחנה של רירית חלל הצפק. תרבית אורגנוטיפית זו יכולה לסייע בחקירת הידבקות תאי סרטן השחלות, פלישה והתפשטות.

מידול גרורות סרטן השחלות ברירית חלל הצפק: שיטה להקמת מודל תלת ממדי במבחנה של רירית הצפק

סרטון זה מתאר את הפרוטוקול לבידוד תאים מזותליים אנושיים ראשוניים מדגימת האומנטום האנושי. ניתן להשתמש בתאי המזותל כדי לבסס מודל סרטן שחלות במבחנה כדי לחקור הידבקות תאי סרטן השחלות, פלישה והתפשטות.

בידוד תאי מזותל: טכניקה לבידוד תאים מזותליים ראשוניים מדגימת רקמת אומנטום אנושית

בסרטון זה, אנו מקימים תרבית איברים אומנטליים ex vivo המכוסה בתאי סרטן שחלות המבטאים GFP כדי לחקור נשאות של סרטן השחלות בתוך הצמח האומנטי. פרוטוקול זה מנתח את מבני תאי מערכת החיסון בתוך האומנטום הידועים ככתמים חלביים המקדמים גרורות.

מידול התיישבות תאי סרטן השחלות של Omentum: שיטת Ex Vivo לביסוס התיישבות נקודה חלבית של תאי סרטן שחלות המסומנים באופן פלואורסצנטי בצמחי אומנטום מורין

סרטון זה מתאר את הפרוטוקול ליצירת מודל ניסויי מורין לחקר התפתחות הגידול וגרורות בצפק. מודל סרטן השחלות הזה נוצר על ידי חיסון אורתוטופי של תאי סרטן שחלות אפיתל אנושי לתוך השחלות של עכברה נקבה.

חיסון אורתוטופי של תאי סרטן השחלות לשחלות מורין: הליך להקמת מודל עכבר סרטן השחלות לחקר הפצת תאים בצפק

אנו מתארים פרוטוקול המיישם גישות in vivo ו-ex vivo לחקר קולוניזציה של סרטן השחלות ברקמות השומן הצפקיות, במיוחד האומנטום. יתר על כן, אנו מציגים פרוטוקול לכימות וניתוח מבני תאים חיסוניים באומנטום המכונים כתמים חלביים, המקדמים גרורות של שומן צפק.

In vivo לשעבר vivo גישות לחקר סרטן השחלות גרורתי התיישבות של מבני ספוט החלב בהצפק שומני

גרורות סרטן השחלות מאופיינת בנגעים תוך-צפקיים מפוזרים רבים, כך שכימות חזותי מדויק של עומס הגידול הוא מאתגר.  כאן אנו מתארים שיטה לכימות במקום ומחוץ לגוף של עומס גידול גרורתי באמצעות תאי גידול עם חלבון פלואורסצנטי אדום (RFP) והדמיה אופטית.

כימות של גרורות סרטן השחלות תוך הצפק

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לבניית מודל תלת מימדי במבחנה של רירית חלל הצפק, המורכב מתאי מזותל אנושיים ראשוניים ופיברובלסטים בשכבות עם מטריצה חוץ-תאית, ככלי לחקירת הדבקה, פלישה והתפשטות של תאי סרטן השחלות.

דוגמנות השלבים המוקדמים של סרטן השחלות הפצה בתרבות Organotypic של אדם חלל הבטן

כדי להבהיר את תהליך רב שלבי של הפצת הצפק של קרצינומה השחלות, המחקר הנוכחי מציג מודל ניסיוני בעכברים של התפתחות גידולים המקורי וגרורות הצפק באמצעות חיסון orthotopic עם תאים סרטניים אלה.

Murine ניסיוני דגם של התפתחות גידולים מקורית גרור הצפק<em&gt; דרך</em&gt; Orthotopic הרכבה עם קרצינומה של תאי השחלות

כתב יד זה מתאר פיתוח של מודל בבעלי חיים המאפשר בדיקה ישירה של השפעות היפוקסיה של הגידול על גרורות ופענוח מנגנוני פעולתה. למרות שהניסויים המתוארים כאן מתמקדים בסרקומה של יואינג, ניתן ליישם גישה דומה על סוגי גידולים אחרים.

In vivo מודל השפעת בדיקה של היפוקסיה על גרורות של גידולים

למד כיצד ליצור מודל תלת-ממדי ex vivo של סרטן השחלות עם Omentum אנושי. שיטה זו מאפשרת חקר אינטראקציות ישירות בין תאי סרטן לסביבת השומן ופיתוח טיפולים חדשניים.

מודל Ex Vivo של סרטן השחלות גרורות פריטוניאליות באמצעות Omentum אנושי

גלה סרטונים נוספים