Name: ייצור מטריצה חוץ-תאית לבבית מפיברובלסטים אנושיים בוגרים לציפוי צלחת תרבית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-03-22T13:20:00.000+00:00
Duration: 6 min 47 s
Description: למדו לייצר מטריצה חוץ-תאית לבבית מפיברובלסטים אנושיים בוגרים לציפוי צלחות תרבית. שיטה זו מאפשרת חקר אינטראקציות תא-מטריצה והנדסת רקמות לבביות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>יצירת מטריצה תאית נוספת מחקה שריר הלב לתרבית תאים

<ol><li>Gattazzo, F., Urciuolo, A., Bonaldo, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix%3A+A+dynamic+microenvironment+for+stem+cell+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix: A dynamic microenvironment for stem cell niche.</a> Biochim Biophys Acta. 1840 (8), 2506-2519 (2014).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-specific+extracellular+matrix+coatings+for+the+promotion+of+cell+proliferation+and+maintenance+of+cell+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Tissue-specific extracellular matrix coatings for the promotion of cell proliferation and maintenance of cell phenotype.</a> Biomaterials. 30 (23-24), 4021-4028 (2009).</li>
<li>Xing, H., Lee, H., Luo, L., Kyriakides, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix-derived+biomaterials+in+engineering+cell+function%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Adv%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix-derived biomaterials in engineering cell function.</a> Biotechnol Adv. 42, 107421(2020).</li>
<li>Andrés-Delgado, L., Mercader, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interplay+between+cardiac+function+and+heart+development%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Interplay between cardiac function and heart development.</a> Biochim Biophys Acta. 1863 (7), Pt B 1707-1716 (2016).</li>
<li>Hall, C., Gehmlich, K., Denning, C., Pavlovic, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+relationship+between+cardiac+fibroblasts+and+cardiomyocytes+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Heart+Assoc%22%5BJournal%5D)">Complex relationship between cardiac fibroblasts and cardiomyocytes in health and disease.</a> J Am Heart Assoc. 10 (5), e019338(2021).</li>
<li>Castaldo, C., Chimenti, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+progenitor+cells%3A+The+matrix+has+you%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Cardiac progenitor cells: The matrix has you.</a> Stem Cells Transl Med. 7, 506-510 (2018).</li>
<li>Nurzynska, D., Iruegas, M. E., Castaldo, C., Müller-Best, P., Di Meglio, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+biotechnology+in+myocardial+regeneration-tissue+engineering+triad%3A+cells%2C+scaffolds%2C+and+signaling+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Application of biotechnology in myocardial regeneration-tissue engineering triad: cells, scaffolds, and signaling molecules.</a> Biomed Res Int. 2013, 236893(2013).</li>
<li>Giacca, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+regeneration+after+myocardial+infarction%3A+An+approachable+goal%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Cardiol+Rep%22%5BJournal%5D)">Cardiac regeneration after myocardial infarction: An approachable goal.</a> Curr Cardiol Rep. 22 (10), 122(2020).</li>
<li>Spedicati, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomimetic+design+of+bioartificial+scaffolds+for+the+in+vitro+modeling+of+human+cardiac+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Bioeng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Biomimetic design of bioartificial scaffolds for the in vitro modeling of human cardiac fibrosis.</a> Front Bioeng Biotechnol. 10, 983782(2022).</li>
<li>Souders, C. A., Bowers, S. L., Baudino, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+fibroblast%3A+The+renaissance+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Cardiac fibroblast: The renaissance cell.</a> Circ Res. 105 (12), 1164-1176 (2009).</li>
<li>Castaldo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+fibroblast-derived+extracellular+matrix+%28biomatrix%29+as+a+model+for+the+studies+of+cardiac+primitive+cell+biological+properties+in+normal+and+pathological+adult+human+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Cardiac fibroblast-derived extracellular matrix (biomatrix) as a model for the studies of cardiac primitive cell biological properties in normal and pathological adult human heart.</a> Biomed Res Int. 2013, 352370(2013).</li>
<li>Nurzynska, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+produced+cardiac+extracellular+matrix+for+studies+of+myocardium+regeneration+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+A%22%5BJournal%5D)">In vitro produced cardiac extracellular matrix for studies of myocardium regeneration potential.</a> Tissue Eng Part A. 21, 77(2015).</li>
<li>VanWinkle, W. B., Snuggs, M. B., Buja, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+ECM%3A+A+biosynthetic+extracellular+matrix+for+cardiomyocyte+culture%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cell+Dev+Biol+Anim%22%5BJournal%5D)">Cardiac ECM: A biosynthetic extracellular matrix for cardiomyocyte culture.</a> In Vitro Cell Dev Biol Anim. 32, 478-485 (1996).</li>
<li>Santhakumar, R., Vidyasekar, P., Verma, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+ECM%3A+A+nano-matrix+scaffold+with+potential+application+in+cardiac+regeneration+using+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Cardiac ECM: A nano-matrix scaffold with potential application in cardiac regeneration using mesenchymal stem cells.</a> PLoS One. 9 (12), e114697(2014).</li>
<li>Gopal, S., Multhaupt, H. A. B., Couchman, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+in+cell-extracellular+matrix+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Exp+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Calcium in cell-extracellular matrix interactions.</a> Adv Exp Med Biol. 1131, 1079-1102 (2020).</li>
<li>Hellewell, A. L., Rosini, S., Adams, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Rapid%2C+scalable+method+for+the+isolation%2C+functional+study%2C+and+analysis+of+cell-derived+extracellular+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A Rapid, scalable method for the isolation, functional study, and analysis of cell-derived extracellular matrix.</a> J Vis Exp. (119), e55051(2017).</li>
<li>Nurzynska, D., Di Meglio, F., Montagnani, S., Castaldo, C. Cardiac stem cells derived from epithelial-mesenchymal transition of epicardial cells: role in heart regeneration (method). <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNurzynska%2C+D+%22Stem+Cells+and+Cancer+Stem+Cells%2C+vol.+5%3A+Therapeutic+Applications+in+Disease+and+Injury%22">Stem Cells and Cancer Stem Cells, vol. 5: Therapeutic Applications in Disease and Injury</a>. Hayat, M. A. , Springer. New York. 109-115 (2012).</li>
<li>Pagano, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normal+versus+pathological+cardiac+fibroblast-derived+extracellular+matrix+differentially+modulates+cardiosphere-derived+cell+paracrine+properties+and+commitment%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Int%22%5BJournal%5D)">Normal versus pathological cardiac fibroblast-derived extracellular matrix differentially modulates cardiosphere-derived cell paracrine properties and commitment.</a> Stem Cells Int. 2017, 7396462(2017).</li>
<li>Xu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitamin+C+regulates+the+profibrotic+activity+of+fibroblasts+in+in+vitro+replica+settings+of+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Vitamin C regulates the profibrotic activity of fibroblasts in in vitro replica settings of myocardial infarction.</a> Int J Mol Sci. 24 (9), 8379(2023).</li>
<li>Jaffré, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+and+angiotensin+receptors+in+cardiac+fibroblasts+coregulate+adrenergic-dependent+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Serotonin and angiotensin receptors in cardiac fibroblasts coregulate adrenergic-dependent cardiac hypertrophy.</a> Circ Res. 104 (1), 113-123 (2009).</li>
<li>Błyszczuk, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activated+cardiac+fibroblasts+control+contraction+of+human+fibrotic+cardiac+microtissues+by+a+%CE%B2-adrenoreceptor-dependent+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Activated cardiac fibroblasts control contraction of human fibrotic cardiac microtissues by a β-adrenoreceptor-dependent mechanism.</a> Cells. 9 (5), 1270(2020).</li>
<li>Duval, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+physiological+events+in+2D+vs.+3D+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol%22%5BJournal%5D)">Modeling physiological events in 2D vs. 3D cell culture.</a> Physiol. 32 (4), 266-277 (2017).</li>
<li>Ungerleider, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fabrication+and+characterization+of+injectable+hydrogels+derived+from+decellularized+skeletal+and+cardiac+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Fabrication and characterization of injectable hydrogels derived from decellularized skeletal and cardiac muscle.</a> Methods. 84, 53-59 (2015).</li>
<li>Seo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularized+heart+ECM+hydrogel+using+supercritical+carbon+dioxide+for+improved+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Decellularized heart ECM hydrogel using supercritical carbon dioxide for improved angiogenesis.</a> Acta Biomater. 67, 270-281 (2018).</li>
<li>Liguori, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+and+biomechanical+clues+from+cardiac+tissue+decellularized+extracellular+matrix+drive+stromal+cell+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Bioeng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Molecular and biomechanical clues from cardiac tissue decellularized extracellular matrix drive stromal cell plasticity.</a> Front Bioeng Biotechnol. 8, 520(2020).</li>
<li>Silva, A. C., Pereira, C., Fonseca, A. C. R. G., Pinto-do-Ó, P., Nascimento, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bearing+my+heart%3A+The+role+of+extracellular+matrix+on+cardiac+development%2C+homeostasis%2C+and+injury+response%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Bearing my heart: The role of extracellular matrix on cardiac development, homeostasis, and injury response.</a> Front Cell Dev Biol. 8, 621644(2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 ליטר בקבוק מעבדה&nbsp;</td><td>VWR</td><td>215-1595</td><td>נקה וחיטוי לפני השימוש</td></tr><tr><td>10 מ"ל פיפט סרולוגי</td><td>פלקון</td><td>357551</td><td>סטרילי,&nbsp; פוליסטירן</td></tr><tr><td>100 מ"מ צלחת זכוכית&nbsp;</td><td>VWR</td><td>391-0578</td><td>נקה וחיטוי לפני השימוש</td></tr><tr><td>צלחות 100 מ"מ</td><td>פלקון</td><td>351029</td><td>צלחת תרבית תאים סטרילית</td></tr><tr><td>מטופלת וסטרילית 15 מ"ל צינורות סטריליים</td><td>פלקון</td><td>352097</td><td>צינורות סטריליים, פוליפרופילן</td></tr><tr><td>22 מ"מ x 22 מ"מ משקפי כיסוי</td><td>VWR</td><td>631-1570</td><td>חיטוי לפני השימוש</td></tr><tr><td>25 מ"ל פיפט סרולוגי</td><td>פלקון</td><td>357525</td><td>סטרילי, &nbsp; בקבוק מעבדה פוליסטירן</td></tr><tr><td>250 מ"ל&nbsp;</td><td>VWR</td><td>215-1593</td><td>נקה וחיטוי לפני השימוש</td></tr><tr><td>צלחות 35 מ"מ</td><td>פלקון</td><td>353001</td><td>צלחת תרבית תאים סטרילית</td></tr><tr><td>מטופלת וסטרילית 5 מ"ל צינור סרולוגי</td><td>פלקון</td><td>357543</td><td>סטרילי, פוליסטירן</td></tr><tr><td>50 מ"ל צינורות סטריליים</td><td>פלקון</td><td>352098</td><td>צנטריפוגה, בקבוק מעבדה פוליפרופילן</td></tr><tr><td>500 מ"ל</td><td>VWR</td><td>215-1594</td><td>נקי ו חיטוי לפני השימוש</td></tr><tr><td>צלחות 60 מ"מ</td><td>פלקון</td><td>353004</td><td>צלחת תרבית תאים סטרילית מטופלת</td></tr><tr><td>אמוניום הידרוקסיד (NH4OH)</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>338818</td><td>אזמל</td></tr><tr><td>חד פעמי נוזלי</td><td>VWR</td><td>233-5526</td><td>סטרילי וחד פעמי</td></tr><tr><td>של Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>D6429-500ml</td><td>יש לאחסן בטמפרטורה של 2-8 מעלות; C; הימנע מחשיפה</td></tr><tr><td>לסרום בקר עוברי קל (FBS)</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>F9665-500ml</td><td>אחסן ב-20 מעלות צלזיוס. יש לחלק את הסרום לנפחי עבודה קטנים יותר</td></tr><tr><td>מלקחיים עדינים</td><td>VWR</td><td>232-1317</td><td>ניקוי וחיטוי לפני השימוש</td></tr><tr><td>ג'לטין מעור חזיר</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>G1890-100G</td><td>אבקה מסחרית</td></tr><tr><td>תמיסת מלח מאוזנת של האנק (HBSS)</td> <td>Sigma- Aldrich</td><td>H1387-1L</td><td>אבקת</td></tr><tr><td>מספריים כירורגיות גדולות</td><td>VWR</td><td>233-1211</td><td>נקי ו חיטוי לפני השימוש</td></tr><tr><td>מספריים מיקרו-ניתוח&nbsp;</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>S3146</td><td>נקה וחיטוי לפני השימוש</td></tr><tr><td>פניצילין וסטרפטומיצין&nbsp;</td><td>סיגמא- אולדריץ'</td><td>P4333-100 מ"ל</td><td>חנות ב -20 מעלות צלזיוס. הפתרון&nbsp; יש לחלק לנפחי עבודה קטנים יותר</td></tr><tr><td>אשלגן כלורי</td><td>סיגמא- אולדריץ'</td><td>P9333</td><td>אבקת</td></tr><tr><td>אשלגן פוספט מונו-בסיסי</td><td>סיגמא- אולדריץ'</td><td>P5665</td><td>אבקת</td></tr><tr><td>נתרן כלורי&nbsp;</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>S7653</td><td>אבקת</td></tr><tr><td>נתרן פוספט Dibasic</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>94046</td><td></td></tr><tr><td>מסנני אבקה</td><td>Millipore</td><td>S2GPU05RE</td><td>ממברנות סינון סטריליות וחד פעמיות 0.22 מ"מ&nbsp;</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>9002-93-1</td><td></td></tr><tr><td>Liquid Trypsin-EDTA</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>T4049-100ml</td><td>חנות ב -20 מעלות צלזיוס. יש לצטט אותו לנפחי עבודה קטנים יותר</td></tr></tbody></table>

ייצור מטריצה חוץ-תאית לבבית מפיברובלסטים אנושיים בוגרים לציפוי צלחת תרבית

Production of Cardiac Extracellular Matrix from Adult Human Fibroblasts for Culture Dish Coating

הצמיחה של פיברובלסטים מקטעים קטנים של שריר הלב המקומי שהונחו בתרבית נצפתה תוך 3-5 ימים (איור 1).
בימים שלאחר מכן, מספר הפיברובלסטים המשיך לגדול, אולי בשל צמיחה מתמשכת מדגימת רקמת הלב והתפשטות הפיברובלסטים הנודדים על פני המנה. אין לצפות כי כל שברי שריר הלב המתקבלים על ידי פירוק מכני עם אזמל מניבים את אותו מספר של פיברובלסטים באותו זמן, כמו שברי הרקמה המתקבלים יכולים להיות נפחים שונים במקצת ושיעורי הישרדות התא. יש לציין כי שברי שריר הלב עם פעילות צמיחה מאושרת יכולים להישמר ולצפות מחדש, ובכך לאפשר להם לשמש לפחות פעמיים לבידוד פיברובלסטים.
הפיברובלסטים יכולים להיות מתורבתים במשך מספר מעברים כדי להגדיל את מספר התאים הזמינים לניסויים נוספים. עם זאת, ברגע שהם מגיעים למפגש, פיברובלסטים מפסיקים להתרבות במבחנה ומניחים פעילות סינתזה והפרשה, ומפקידים מטריצה חוץ-תאית. דה-צלולריזציה לאחר מכן משאירה את פני השטח של הצלחת מצופים ברשת ECM של הלב (איור 2). תצפית חזותית על צלחת התרבית, בעין בלתי ובאמצעות מיקרוסקופ פאזה הפוך, במהלך הסרת פיברובלסטים חיונית כדי למזער את זמן הדגירה בתמיסת הדה-צלולריזציה למינימום הדרוש והמספיק. נוכחותו של צעיף צף במהלך הדגירה מצביעה על חלחול וניתוק של monolayer של פיברובלסטים, ואת הפתרון decellularization יש לדלל ולהסיר מיד לאחר מכן.
הרכב ECM הלב הנגזר מפיברובלסטים תלוי במקור הפיברובלסטים. בניסויים שלנו, ECM הלב המיוצר על ידי פיברובלסטים שבודדו מלב אנושי נורמלי ומלב אנושי עם קרדיופתיה איסכמית היה בעל תכולת חלבונים שונה והשפיע באופן שונה על התפשטות תאי לב פרימיטיביים, אפופטוזיס ונדידה11,12. אף על פי שאיבוד חלבון ECM הוא בלתי נמנע במהלך תהליך הדה-צלולריזציה, השיטה שבה נעשה שימוש בפרוטוקול הנוכחי שימרה במידה רבה את ההרכב והארכיטקטורה של ECM הלב המיוצר במבחנה (איור 3).
בפרוטוקול זה נעשה שימוש ברקמת פרוזדורים מכיוון שניתן להשיג אותה הן מלב רגיל (תורם) והן מלב פתולוגי (מקבל). בעוד שניתן לחתוך את כל הלב הפתולוגי (המקבל) ולהשתמש בו למחקר (בהתאם לעקרונות הצהרת הלסינקי ובאישור ועדת האתיקה המקומית), לא ניתן לקבל דגימות של חדרים מהלב התורם בזמן ההשתלה. מסיבה זו, אם היקף המחקר הוא לחקור הבדלים בין רקמת הלב בתנאים נורמליים ופתולוגיים, המקור הטוב ביותר של הדגימה הוא קיר פרוזדורים. בהתאם לזמינות של מקורות רקמת לב קיימא אחרים, דגימות מדפנות פרוזדורים או חדרים של הלב הרגיל או הפתולוגי ניתן להשתמש בעקבות אותו פרוטוקול עבור ציפוי צלחת ECM הלב.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66160/66160fig01.jpg"> איור 1: בידוד של פיברובלסטים לבביים. צמיחת פיברובלסט משברי שריר הלב לאחר 4 ימים (A), 8 ימים (B) ו-12 ימים (C) ימי תרבית. פסי קנה מידה: 200 מיקרומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66160/66160fig01large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66160/66160fig02.jpg"> איור 2: דה-צלולריזציה של מטריצה חוץ-תאית. פיברובלסטים לאחר כ-10 שניות (A), 20 שניות (B), 30 שניות (C), 40 שניות (D), 50 שניות (E) ו-60 שניות (F) של דגירה בתמיסת דה-צלולריזציה. פסי קנה מידה: 200 מיקרומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66160/66160fig02large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66160/66160fig03.jpg"> איור 3: הרכב מטריצה חוץ-תאית לפני ואחרי דה-צלולריזציה. צביעה אימונופלואורסצנטית עקיפה של חלבוני מטריצה חוץ-תאיים לבביים מייצגים, כולל קולגן מסוג III (A,E) וסוג IV (B,F), למינין (C,G) ופיברונקטין (D,H), לפני (A-D) ואחרי (E-H) הסרת פיברובלסטים. גרעיני התא הוכתמו ב-DAPI (כחול). פסי קנה מידה: (A-C,E-G) 50 מיקרומטר; (D,H) 100 מיקרומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66160/66160fig03large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>פתרונות</td>
			<td colspan="2">הרכב פתרונות</td>
			<td>נפח סופי</td>
			<td>הערות</td>
		</tr><tr><td>תמיסת מלח מאוזנת של האנק (HBSS)</td>
			<td colspan="2">מלחים בהפעלה מסחרית + מים סטריליים מזוקקים כפול + 0.35 גרם סודיום ביקרבונט</td>
			<td>1 ליטר</td>
			<td>מעוקר על ידי סינון/אחסון ב 4 ° C</td>
		</tr><tr><td>פתרון דה-סלולריזציה</td>
			<td colspan="2">0.25% טריטון X-100 + 10 mM NH4OH+ PBS</td>
			<td>50 מ"ל</td>
			<td>מעוקר על ידי סינון/אחסון ב 4 ° C</td>
		</tr><tr><td>מדיום הנשר המעובד של דולבקו (DMEM)</td>
			<td colspan="2">223.75 מ"ל DMEM + 25 מ"ל סרום בקר עוברי + 1.25 מ"ל תמיסת פניצילין/סטרפטומיצין</td>
			<td>250 מ"ל</td>
			<td>יש לאחסן ב-4°C</td>
		</tr><tr><td>תמיסת ג'לטין</td>
			<td colspan="2">0.2 גרם אבקת ג'לטין + 100 מ"ל פוספט-חוצץ-מלח</td>
			<td>100 מ"ל</td>
			<td>מעוקר על ידי סינון/אחסון ב 4 ° C</td>
		</tr><tr><td>פוספט-חוצץ-מלח (1x PBS)</td>
			<td colspan="2">0.1 גרם אשלגן פוספט מונובייסיק + 0.1 גרם אשלגן כלורי + 4.0 גרם נתרן כלורי + 0.575 גרם נתרן פוספט דיבייסיק + מים סטריליים מזוקקים פעמיים</td>
			<td>500 מ"ל</td>
			<td>מעוקר על ידי סינון/אחסון ב 4 ° C</td>
		</tr><tr><td>תמיסת עצירת טריפסין (TSS)</td>
			<td colspan="2">5 מ"ל סרום בקר עוברי + 45 מ"ל תמיסת מלח מאוזנת של האנק</td>
			<td>50 מ"ל</td>
			<td>יש לאחסן ב-4°C</td>
		</tr></tbody></table>טבלה 1: המרכיבים והריכוזים המתאימים לכל תמיסה ששימשה במחקר.

The myocardium is composed of cardiomyocytes and an even greater number of fibroblasts, the latter being responsible for extracellular matrix production. ...

production-cardiac-extracellular-matrix-from-adult-human-fibroblasts

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

תרבויות cardiomyocyte העכבר ראשיים הן אחד הכלים המרכזיים לחקירה של ארגון ותפקוד myofibrillar. הפרוטוקול הבא מתאר את הבידוד והתרבות של שריר לב עיקרי מלב עכבר בילוד. תרבויות cardiomyocyte וכתוצאה מכך עשויות לשמש בהמשך עבור מגוון רחב של מבחני ביומכנית, ביוכימי ותא ביולוגי.

בידוד והתרבות של שריר לב עכבר בילוד

כתב יד זה מתאר את היצירה של רקמות לב מהונדסות מוגדרות באמצעות ביטוי סמני פני השטח ומיון תאים. לאחר מכן ניתן להשתמש ברקמות המוגדרות בביו-ריאקטור רב-רקמתי כדי לחקור מנגנונים של טיפול בתאי לב על מנת לספק מערכת מודל פונקציונלית, אך מבוקרת, של הלב האנושי.

בניית רקמות לב Engineered האנושית תחם לחקור מנגנונים של טיפול בתאי לב

במחקרים אלה, אנו מספקים מתודולוגיה חדשנית, בילוד, פיגומי לב בעכברים לשימוש במחקרים רגנרטיבית.

Neonatal לב פיגומים: מטריצות Novel ללימודי הרגנרציה

פרוטוקול זה מתאר את decellularization מלא של שריר הלב האנושי תוך שמירה על מרכיביו מטריצה חוץ-תאית. עיבוד נוסף של התוצאות מטריצה חוץ-תאית בייצור של microparticles ו הידרוג וההספק עצמית של cytoprotective.

עיבוד של רקמת הלב האנושי כלפי עצמי בהרכבת הידרוג במבחנה ויישומים In Vivo מטריצה חוץ-תאית

מטריצה חוץ-תאית הלב (ECM) היא רשת מורכבת של מולקולות שננהל את מפתח בתהליכי רקמות ואיברים שתישא את שיפוץ פיזיולוגיים לאורך החיים. Decellularization מתוקננת לב העובר, למבוגרים היתרי השוואתי ניסיוני של שתי רקמות בהקשר תלת-ממד על-ידי לכידתו ארכיטקטורה מקורית ומאפיינים ביו-מכני.

דומה Decellularization של רקמת הלב העוברי ומבוגרים Explants כמו פלטפורמות דמויי תלת-ממד עבור לימודי חוץ גופית

פרוטוקול זה מתאר שיטה מבוססת-עובש נטו ליצירת רקמות לגרדום ללא לב תלת מימדי עם המבנית משביע רצון והתנהגות מכות סינכרוני.

שיטה המבוססת על עובש נטו הבריאה ברקמת הלב לגרדום ללא תלת מימדי

המטרה של פרוטוקול זה הוא ייצור של סיבי מטריצה חוץ-תאית כל ממוקד עבור תיקון הפצע אשר מתאימים להערכה פרה כחלק שתל משובי לגרדום. סיבים אלו המיוצר על ידי התרבות של fibroblasts על ממברנות הולופייבר, שחולצו על ידי פירוק הממברנות.

ייצור סיבים מטריצה חוץ-תאית באמצעות תרבית תאים הממברנה ההקרבה הולופייבר

מטרת שיטה זו היא להשיג פיברוההדף מטריצות 3D נגזר כפיגום טבעי עבור הבאים הסלולר assays. פיברותקיעות מורצת לוחית התרבות שטופלו מראש ומגורה עם חומצה אסקורבית ליצירת מטריקס. מטריצות מdecellularized וחסומות לתאים רלוונטיים לתרבות (למשל, תאי האנדותל).

מערכת מטריצה תלת-ממדית פיברובלסט הישימה בשיטת היווצרות שפופרת אנדותל

הפרוטוקול הנוכחי מייצר רקמות לב מהונדסות בצורת רשת המכילות תאי לב וכלי דם המופקים מתאי גזע פלורופוטנטיים אנושיים כדי לאפשר חקירה של טיפול השתלת תאים למחלות לב.

הכנת רקמות לב מהונדסות בצורת רשת נגזר תאי iPS אנושיים לתיקון שריר הלב Vivo

כאן, אנו מתארים מתודולוגיה קלה לשימוש כדי ליצור מערכי מיקרוטיסו לבביים תלת-ממדיים בהרכבה עצמית המורכבים מקרדיומיוציטים פלואוריפוטנטיים מובחנים מראש המושרים על ידי בני אדם, קרדיומיוציטים שמקורם בתאי גזע, פיברובלסטים לבביים ותאי אנדותל. תא זה ידידותי למשתמש ונמוך הדורש טכניקה כדי ליצור microtissues לב ניתן ליישם עבור מידול מחלות ושלבים מוקדמים של פיתוח תרופות.

ייצור מערכי מיקרוטיסו לב תלת-ממדיים באמצעות קרדיומיוציטים אנושיים שמקורם ב-IPSC, פיברובלסטים לבביים ותאי אנדותל

מוצג כאן פרוטוקול ליצירת רקמות חיבור מהונדסות לתרבות מקבילה של 48 רקמות בלוח רב-בארות עם מוטות כפולים, המתאימים למחקרים מכאניסטיים, מידול מחלות ויישומי סינון. הפרוטוקול תואם פיברובלסטים מאיברים ומינים שונים ומודגם כאן עם פיברובלסטים לב ראשוניים אנושיים.

פיברובלסט נגזר רקמת חיבור מהונדסת אנושית עבור יישומי הקרנה

למדו לייצר מטריצה חוץ-תאית לבבית מפיברובלסטים אנושיים בוגרים לציפוי צלחות תרבית. שיטה זו מאפשרת חקר אינטראקציות תא-מטריצה והנדסת רקמות לבביות.

ייצור מטריצה חוץ-תאית לבבית מפיברובלסטים אנושיים בוגרים לציפוי צלחת תרבית

גלה סרטונים נוספים