Name: שיטה פשוטה, מהירה ויעילה לניתוח השתלת גידול בעוברים שקופים של דגי זברה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-07-12T12:40:00.000+00:00
Duration: 6 min 10 s
Description: למדו שיטה מהירה ויעילה להשתלת גידולים בעוברי דגי זברה שקופים. הפרוטוקול כולל צביעת תאים להערכת איכות החומר המושתל וציטומטריית זרימה לניתוח התקדמות הגידול ועומס המחלה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מענקי NIH R37AI110985 ו-P30CA006927, הקצאה מחבר העמים של פנסילבניה, האגודה ללוקמיה ולימפומה וקרן בישופ. מחקר זה נתמך גם על ידי מתקני הליבה של פוקס צ'ייס, כולל Cell Culture, Flow Cytometry ומתקן חיות מעבדה. אנו מודים לד"ר ג'ניפר רודס על תחזוקת דגי הזברה ומתקן המיקרו-הזרקה ב-FCCC.

שימוש בדגי זברה זחלים למחקרים יעילים בגידולי Vivo

<ol><li>Sharma, G., Goyal, Y., Bhatia, S. Handbook of Animal Models and its Uses in Cancer Research. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSharma%2C+G+%22Preclinical+Animal+Models+of+Cancer%3A+Applications+and+Limitations%22">Preclinical Animal Models of Cancer: Applications and Limitations</a>. , Springer. Singapore. (2022).</li>
<li>Singhal, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advancement+in+breast+cancer+research%3A+Insights+from+model+organisms-Mouse+models+to+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">Recent advancement in breast cancer research: Insights from model organisms-Mouse models to zebrafish.</a> Cancers. 15 (11), 2961(2023).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+xenograft+models+in+cancer+therapy%3A+technologies+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduction+and+Targeted+Therapy%22%5BJournal%5D)">Patient-derived xenograft models in cancer therapy: technologies and applications.</a> Signal Transduction and Targeted Therapy. 8 (1), 160(2023).</li>
<li>Fuochi, S., Galligioni, V. Disease Animal Models for Cancer Research. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFuochi%2C+S+%22Cancer+Cell+Culture%3A+Methods+and+Protocols%22">Cancer Cell Culture: Methods and Protocols</a>. , Springer, Humana. New York, NY. (2023).</li>
<li>Shaw, T. J., Senterman, M. K., Dawson, K., Crane, C. A., Vanderhyden, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+intraperitoneal%2C+orthotopic%2C+and+metastatic+xenograft+models+of+human+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Characterization of intraperitoneal, orthotopic, and metastatic xenograft models of human ovarian cancer.</a> Mol Ther. 10 (6), 1032-1042 (2004).</li>
<li>Deroose, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multimodality+imaging+of+tumor+xenografts+and+metastases+in+mice+with+combined+small-animal+PET%2C+small-animal+CT%2C+and+bioluminescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">Multimodality imaging of tumor xenografts and metastases in mice with combined small-animal PET, small-animal CT, and bioluminescence imaging.</a> J Nucl Med. 48 (2), 295-303 (2007).</li>
<li>Zeng, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation%2C+evolution%2C+interfering+factors%2C+applications%2C+and+challenges+of+patient-derived+xenograft+models+in+immunodeficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell+Int%22%5BJournal%5D)">Generation, evolution, interfering factors, applications, and challenges of patient-derived xenograft models in immunodeficient mice.</a> Cancer Cell Int. 23 (1), 120(2023).</li>
<li>Adhish, M., Manjubala, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effectiveness+of+zebrafish+models+in+understanding+human+diseases-A+review+of+models%5BTitle%5D)+AND+%22Heliyon%22%5BJournal%5D)">Effectiveness of zebrafish models in understanding human diseases-A review of models.</a> Heliyon. 9 (3), e14557(2023).</li>
<li>MacRae, C. A., Peterson, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+mainstream+model+for+in+vivo+systems+pharmacology+and+toxicology%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Rev+Pharmacol+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a mainstream model for in vivo systems pharmacology and toxicology.</a> Ann Rev Pharmacol Toxicol. 63, 43-64 (2023).</li>
<li>Choe, S. -K., Kim, C. -H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+A+powerful+model+for+genetics+and+genomics%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: A powerful model for genetics and genomics.</a> Int J Mol Sci. 24 (9), 8169(2023).</li>
<li>White, R., Rose, K., Zon, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+cancer%3A+the+state+of+the+art+and+the+path+forward%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Zebrafish cancer: the state of the art and the path forward.</a> Nat Rev Cancer. 13 (9), 624-636 (2013).</li>
<li>Al-Hamaly, M. A., Turner, L. T., Rivera-Martinez, A., Rodriguez, A., Blackburn, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+cancer+avatars%3A+A+translational+platform+for+analyzing+tumor+heterogeneity+and+predicting+patient+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Zebrafish cancer avatars: A translational platform for analyzing tumor heterogeneity and predicting patient outcomes.</a> Int J Mol Sci. 24 (3), 2288(2023).</li>
<li>White, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transparent+adult+zebrafish+as+a+tool+for+in+vivo+transplantation+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Transparent adult zebrafish as a tool for in vivo transplantation analysis.</a> Cell Stem Cell. 2 (2), 183-189 (2008).</li>
<li>Hill, D., Chen, L., Snaar-Jagalska, E., Chaudhry, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+zebrafish+xenograft+assay+of+human+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22F1000Res%22%5BJournal%5D)">Embryonic zebrafish xenograft assay of human cancer metastasis.</a> F1000Res. 7, 1682(2018).</li>
<li>Corkery, D. P., Dellaire, G., Berman, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leukaemia+xenotransplantation+in+zebrafish--chemotherapy+response+assay+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Haematol%22%5BJournal%5D)">Leukaemia xenotransplantation in zebrafish--chemotherapy response assay in vivo.</a> Br J Haematol. 153 (6), 786-789 (2011).</li>
<li>Lin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+clinically+relevant+in+vivo+zebrafish+model+of+human+multiple+myeloma+to+study+preclinical+therapeutic+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">A clinically relevant in vivo zebrafish model of human multiple myeloma to study preclinical therapeutic efficacy.</a> Blood. 128 (2), 249-252 (2016).</li>
<li>Grissenberger, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-content+drug+screening+in+zebrafish+xenografts+reveals+high+efficacy+of+dual+MCL-1%2FBCL-XL+inhibition+against+Ewing+sarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Lett%22%5BJournal%5D)">High-content drug screening in zebrafish xenografts reveals high efficacy of dual MCL-1/BCL-XL inhibition against Ewing sarcoma.</a> Cancer Lett. 554, 216028(2023).</li>
<li>Baxi, D. Zebrafish: A Versatile Animal Model to Study Tumorigenesis Process and Effective Preclinical Drug Screening for Human Cancer Research. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBaxi%2C+D+%22Handbook+of+Animal+Models+and+its+Uses+in+Cancer+Research%22">Handbook of Animal Models and its Uses in Cancer Research</a>. , Springer. Singapore. (2022).</li>
<li>Li, X., Li, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+application+of+zebrafish+patient-derived+xenograft+tumor+models+in+the+development+of+antitumor+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Res+Rev%22%5BJournal%5D)">The application of zebrafish patient-derived xenograft tumor models in the development of antitumor agents.</a> Med Res Rev. 43 (1), 212-236 (2023).</li>
<li>Yin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+patient-derived+xenograft+model+as+a+preclinical+platform+for+uveal+melanoma+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceuticals%22%5BJournal%5D)">Zebrafish patient-derived xenograft model as a preclinical platform for uveal melanoma drug discovery.</a> Pharmaceuticals. 16 (4), 598(2023).</li>
<li>Nakayama, J., Makinoshima, H., Gong, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+drug+screening+to+identify+anti-metastatic+drugs+in+Twist1a-ER%28T2%29+transgenic+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">In vivo drug screening to identify anti-metastatic drugs in Twist1a-ER(T2) transgenic zebrafish.</a> Bio Protoc. 13 (10), e4673-e4673 (2023).</li>
<li>Lam, S., Chua, H., Gong, Z., Lam, T., Sin, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+maturation+of+the+immune+system+in+zebrafish%2C+Danio+rerio%3A+a+gene+expression+profiling%2C+in+situ+hybridization+and+immunological+study%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Comp+Immunol%22%5BJournal%5D)">Development and maturation of the immune system in zebrafish, Danio rerio: a gene expression profiling, in situ hybridization and immunological study.</a> Dev Comp Immunol. 28 (1), 9-28 (2004).</li>
<li>Nicoli, S., Presta, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish%2Ftumor+xenograft+angiogenesis+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">The zebrafish/tumor xenograft angiogenesis assay.</a> Nat Protoc. 2 (11), 2918-2923 (2007).</li>
<li>Casey, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+zebrafish+pediatric+brain+tumors+into+immune-competent+hosts+for+long-term+study+of+tumor+cell+behavior+and+drug+response%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Transplantation of zebrafish pediatric brain tumors into immune-competent hosts for long-term study of tumor cell behavior and drug response.</a> J Vis Exp. (123), e55712(2017).</li>
<li>Soh, G. H., Kögler, A. C., Müller, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+and+effective+transplantation+device+for+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A simple and effective transplantation device for zebrafish embryos.</a> J Vis Exp. (174), e62767(2021).</li>
<li>Martinez-Lopez, M., Póvoa, V., Fior, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+zebrafish+larval+xenografts+and+tumor+behavior+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Generation of zebrafish larval xenografts and tumor behavior analysis.</a> J Vis Exp. (172), e62373(2021).</li>
<li>Ren, J., Liu, S., Cui, C., Ten Dijke, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invasive+behavior+of+human+breast+cancer+cells+in+embryonic+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Invasive behavior of human breast cancer cells in embryonic zebrafish.</a> J Vis Exp. (122), e55459(2017).</li>
<li>Zhao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+xenograft+model+in+zebrafish+for+high-resolution+investigating+dynamics+of+neovascularization+in+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">A novel xenograft model in zebrafish for high-resolution investigating dynamics of neovascularization in tumors.</a> PloS One. 6 (7), e21768(2011).</li>
<li>Cabezas-Sáinz, P., Pensado-López, A., Sáinz Jr, B., Sánchez, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+cancer+using+zebrafish+xenografts%3A+drawbacks+for+mimicking+the+human+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Modeling cancer using zebrafish xenografts: drawbacks for mimicking the human microenvironment.</a> Cells. 9 (9), 1978(2020).</li>
<li>Haraoka, Y., Akieda, Y., Ishitani, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live-imaging+analyses+using+small+fish+models+reveal+new+mechanisms+that+regulate+primary+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Yakugaku+Zasshi%22%5BJournal%5D)">Live-imaging analyses using small fish models reveal new mechanisms that regulate primary tumorigenesis.</a> Yakugaku Zasshi. 139 (5), 733-741 (2019).</li>
<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWesterfield%2C+M+%22The+Zebrafish+Book.+A+Guide+for+the+Laboratory+Use+of+Zebrafish+%28Danio+rerio%29%22">The Zebrafish Book. A Guide for the Laboratory Use of Zebrafish (Danio rerio)</a>. , University of Oregon Press. Oregon. (2000).</li>
<li>Rao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivation+of+ribosomal+protein+L22+promotes+transformation+by+induction+of+the+stemness+factor%2C+Lin28B%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Inactivation of ribosomal protein L22 promotes transformation by induction of the stemness factor, Lin28B.</a> Blood. 120 (18), 3764-3773 (2012).</li>
<li>Goel, M. K., Khanna, P., Kishore, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+survival+analysis%3A+Kaplan-Meier+estimate%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Ayurveda+Res%22%5BJournal%5D)">Understanding survival analysis: Kaplan-Meier estimate.</a> Int J Ayurveda Res. 1 (4), 274-278 (2010).</li>
<li>Usai, A., Di Franco, G., Gabellini, C., Morelli, L., Raffa, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+zebrafish+patient-derived+xenografts+from+pancreatic+cancer+for+chemosensitivity+testing%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Establishment of zebrafish patient-derived xenografts from pancreatic cancer for chemosensitivity testing.</a> J Vis Exp. (195), e63744(2023).</li>
<li>Murali Shankar, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+assessment+of+CAR-NK+cell-mediated+killing+efficacy+and+pharmacokinetics+in+a+rapid+zebrafish+xenograft+model+of+metastatic+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Preclinical assessment of CAR-NK cell-mediated killing efficacy and pharmacokinetics in a rapid zebrafish xenograft model of metastatic breast cancer.</a> Front Immunol. 14, 1254821(2023).</li>
<li>Takahi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenograft+of+human+pluripotent+stem+cell-derived+cardiac+lineage+cells+on+zebrafish+embryo+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Xenograft of human pluripotent stem cell-derived cardiac lineage cells on zebrafish embryo heart.</a> Biochem Biophys Res Commun. 674, 190-198 (2023).</li>
<li>Rudner, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shared+acquired+genomic+changes+in+zebrafish+and+human+T-ALL%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Shared acquired genomic changes in zebrafish and human T-ALL.</a> Oncogene. 30 (41), 4289-4296 (2011).</li>
<li>Regan, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+sequencing+of+long-term+label-retaining+colon+cancer+stem+cells+identifies+novel+regulators+of+quiescence%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">RNA sequencing of long-term label-retaining colon cancer stem cells identifies novel regulators of quiescence.</a> iScience. 24 (6), 102618(2021).</li>
</ol>

המחברים מצהירים כי אין אינטרסים מתחרים.

השתלת שדגי זברה התגלתה כחלופה מהירה, חזקה וחסכונית למחקרי עכברים12. למרות שדווחו מספר גישות להשתלת קסנו של דגי זברה, ההסתגלות שלנו הביאה לשיפור משמעותי. בנוסף לסטנדרטיזציה של הפרמטרים סביב ההליך, שיפורים אלה מתמקדים באופן ספציפי בהאצת הקצב שבו ניתן לבצע זריקות גידול, ובכך מאפשרים להגדיל את מספר בעלי החיים בכל זרוע מחקר ולהשתמש בסימון הגידול כדי לפקח על איכות ההזרקה וההתנהגות שלאחר ההזרקה. 
בעוד שלשיפורים בשיטה זו המתוארים כאן יש פוטנציאל גדול, ביצוע מוצלח של אסטרטגיה זו ידרוש מתרגל מיומן ואופטימיזציה עבור היישום הספציפי. השתמשנו בתאי לוקמיה. כתוצאה מכך, השימוש בסרטן מוצק עשוי להביא אתגרים נוספים. גידולים כאלה עשויים להיות מועדים לצבירה, אשר תיצור שונות במסירת בולוס התא; עם זאת, גם בנסיבות כאלה, תיוג RFP אמור לאפשר בקרת איכות נאותה לאחר ההזרקה של הבולוס. זה עדיף על תיוג GFP או צבעים ירוקים, אשר מוסתרים על ידי autofluorescence. לבסוף, הסטנדרטיזציה המתוארת כאן של רוב הפרמטרים המשפיעים על ההצלחה (בריאות העובר, טמפרטורת החקלאות הימית, פתח המחט, לחץ ההזרקה וכו ') ממזערת את השונות של תהליך זה. 
שיקול מרכזי בניסויי השתלת קסנו בדגי זברה הוא אתר ההזרקה. כאן, הראינו כי הזריקות בחלמון הן די קלות יחסית לאתרים אחרים מאתגרים יותר מבחינה טכנית, כמו חלל פריביטלין34, צינור של קיווייה35, והזרקה תוך לבבית (חדר הלב)36. החיסרון של הזרקת חלמון הוא שמדובר באיבר חיוני לעוברים הגדלים, ולכן יש להקפיד על שליטה קפדנית בקוטר המחט ובלחץ כדי שהעובר לא ימות עקב טראומה בהזרקה. הגישה המתוארת כאן מפחיתה חשש זה על ידי מזעור הפציעה והשלכת כל פציעה ברורה או מוות על ידי 1 dpi מכיוון שנושאים אלה אינם קשורים לצמיחת הגידול. השיקול האחרון לגבי אתר ההזרקה הוא שלמיקרו-סביבות שונות עשויה להיות יכולת גדולה יותר או פחותה לתמוך בהתפשטות גידולים מושתלים. כתוצאה מכך, אולי ניתן לבצע תחילה זריקות חלמון לפני שממשיכים לזריקות אורתוטופיות מאתגרות יותר. היתרון הגדול של הזרקת החלמון הוא בכך שהיא אינה דורשת היערכות מדויקת של העוברים ולכן מאפשרת הזרקה מהירה יותר של מספר גדול יותר של עוברים, ובכך שומרת טוב יותר על בריאותם ומגדילה את הכוח הסטטיסטי לפתור הבדלים בהתנהגות תאי הגידול המושתלים.
מעקב לאחר הזרקה אחר התקדמות המחלה מוערך בדרך כלל באמצעות השפעות על הישרדות באמצעות ניתוח קפלן-מאייר37; עם זאת, בדיקת נטל המחלה יכולה גם להיות אינפורמטיבית למדי. עבור תאים מושתלים הנותרים באתר ההזרקה, ניתן לכמת את נטל הגידול בשיטות מיקרוסקופיה שונות, בתנאי ששיטת הסימון של תאי הגידול אינה מוסתרת על ידי אוטופלואורסנציה29. כתם CM-Dil נפתר בקלות ואינו מושפע מאוטופלואורסצנציה, ולכן הוא פועל היטב לכימות נטל הגידול של תאים מקומיים. האתגר מתרחש כאשר תאי הגידול אינם נשארים באתר ההזרקה ומפיצים. במקרים כאלה, ציטומטריית זרימה, יחד עם סימון גנטי בל יימחה באמצעות חלבונים פלואורסצנטיים אדומים, היא דרך יעילה מאוד לניטור נטל המחלה במצמדים מתוקננים של עוברים, שכן ניתן לנתח את הגידול המסומן באמצעות כתמים ספציפיים למין שונים מתאי דגי הזברה. חסרון אחד של CM-דיל הוא שהוא מדולל על ידי חלוקת התא38. בהתאם לכך, הסתגלות באמצעות סימון גנטי של הגידולים באמצעות RFP או mCherry נושאת יתרונות משמעותיים. ביטוי mCherry, יחד עם נוגדן ספציפי לגידול, מאפשר זיהוי בטוח של תאים מושתלים בין מה שיכול להיות דפוס מורכב של אותות רקע המסופקים על ידי תאי דג הזברה המארח. 
יחד, הגישה הממוטבת להשתלת קסנו של דגי זברה ושיטת הניתוח המשמשות במחקר זה מספקות שיפור משמעותי לפלטפורמה ניסיונית רבת עוצמה כבר.

ניתוח התנהגות גידולים בתגובה לשינוי גנטי או טיפול תרופתי in vivo הוא מרכיב חיוני בחקר הסרטן 1,2,3,4. מחקרים כאלה כוללים לרוב שימוש במודלים של עכבר מדוכא חיסון (Mus musculus)5; עם זאת, מחקרי השתלת קסנו בעכברים מוגבלים במובנים רבים, כולל קיבולת מוגבלת, משך זמן ממושך, הוצאות משמעותיות והדרישה לציוד הדמיה מתוחכם למעקב אחר התקדמות גידולים פנימיים 6,7. לעומת זאת, מודל דגי הזברה (Danio rerio) מאפשר קיבולת גדולה יותר, משך זמן קצר יותר, הוצאות נמוכות יותר, ובשל שקיפותם, ניטור פשוט של התקדמות המחלה 8,9.
דגי זברה היא מערכת מודל מפותחת של בעלי חוליות עם התפתחות רחם לשעבר ופריון גבוה, כאשר נקבות בודדות מייצרות יותר מ-100 עוברים10. יתר על כן, עוברים של דגי זברה הם שקופים, ומאפשרים הדמיה קלה של תהליכים התפתחותיים באמצעות טכניקות הקשורות לפלואורסצנטיות כגון כתבים. לבסוף, שימור תהליכים התפתחותיים קריטיים הופך אותם למודל אידיאלי עבור סוגים רבים של מחקרים, כולל ההתנהגות של תאים ממאירים מושתלים11,12. עוברי דגי זברה מסוג בר מפתחים מלנוציטים, מה שהופך אותם אטומים אופטית עד גיל שבועיים, אך זה כבר התגבר על ידי הדור של עוברי קספר (RoyA9; MitfaW2), שנשארים שקופים לאורך כל החיים13. בגלל התכונות האופטיות שלהם, דגי זברה קספר הם מושתלים אידיאליים של תאי גידול מושתלים 14,15,16. השתלת קסנו של תאי גידול בדגי זברה צברה חשיבות בשני העשורים האחרונים 17,18,19,20,21. לעוברים של דגי זברה יש חסינות מולדת; עם זאת, הם חסרים חסינות נרכשת בשלב הזחל שלהם, מה שהופך אותם מדוכאי חיסון תפקודיים, מה שמאפשר להם לשמש כמארחים יעילים עבור xenografts גידול מושתל22.
פותחו פרוטוקולים לקליטת גידולים בעוברים של דגי זברה וכן במבוגרים שלקחו בחשבון מספר משתנים שונים 23,24,25,26,27. אלה חקרו אתרים רבים של שקיעת גידולים בדגי זברה, כולל זריקות בחלמון, בחלל פרי-ויטלין ובלב ובשלבי התפתחות שונים16,28. טמפרטורת הסביבה של חקלאות ימית עבור xenografts דגי זברה חשוב גם כמו גידול דגי זברה מתרחשת בדרך כלל ב 28 °C (75 °F), בעוד תאים יונקים לגדול ב 37 °C (77 °F). כתוצאה מכך, יש להשתמש בטמפרטורת פשרה שנסבלת על ידי הדג אך תומכת בצמיחת הגידול, ונראה כי 34 מעלות צלזיוס משיגות את שתי המטרות29. ניתוח ההתנהגות וההתקדמות של גידולים לאחר השתלת קסנו הוא תחום מרכזי נוסף של התמקדות, וזה כרוך בשימוש במגוון שיטות הדמיה, כמו גם ניתוח הישרדות30. אחד היתרונות העיקריים של מודל דגי הזברה הוא זמינותם של מספר רב של חיות מחקר כדי לספק כוח סטטיסטי עצום למחקרי in vivo של התנהגות גידולים; עם זאת, גישות קודמות הגבילו מאוד את הפוטנציאל הזה בגלל הדרישה של הליכי הרכבה מייגעים לזריקות.
כאן, אנו מתמודדים עם מגבלה זו באמצעות פיתוח שיטה פשוטה ומהירה לשלב עוברים המאפשרת תפוקה גבוהה וניטור של איכות ההזרקה באמצעות קו דגי הזברה השקופים של קספר . זה כרוך בהזרקה של xenografts לתוך שק החלמון של עוברי דג זברה קספר ב 2 ימים לאחר ההפריה (dpf). אנו צופים בהישרדות העוברים לאחר השתלת קסנו כחלק מניתוח התנהגות הגידול. אנו גם מראים את הערכת נטל המחלה לאחר השתלת קסנו על-ידי ביצוע תרחיפים של תאים בודדים וניתוח על-ידי ציטומטריית זרימה (איור 1).

<table><tbody><tr><td>1-פניל 2-תיאוריאה (PTU)</td><td>Sigma</td><td>P7629</td><td></td></tr><tr><td>מסננת תאים 70 מיקרון</td><td>Corning&nbsp;</td><td>CLS431751-50EA</td><td></td></tr><tr><td>90 מ"מ צלחת פטרי</td><td>תרמו פישר מדעי</td><td>S43565</td><td></td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Apex bioresearch</td><td>20-102GP</td><td></td></tr><tr><td>APC APC אנטי עכבר CD45.2 נוגדן</td><td>Biolegend</td><td>109814</td><td></td></tr><tr><td>BD FACSymphony A5 מנתח תאים</td><td>BD Biosciences</td><td>BD FACSymphony A5</td><td></td></tr><tr><td>נימי כיול</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>P1424-1PAK</td><td></td></tr><tr><td>גשש תאים CM-dil צבע</td><td>Invitrogen</td><td>C7001</td><td></td></tr><tr><td>קולג'נס IV</td><td>Gibco</td><td>17104019</td><td></td></tr><tr><td>Dumont מלקחיים מספר 55</td><td>כלים מדעיים עדינים</td><td>11255-20</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Corning&nbsp;</td><td>35-015-CV</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ פלואורסצנטי</td><td>דגם ניקון</td><td>SMZ1500</td><td></td></tr><tr><td>נימי זכוכית (בורוסיליקט)</td><td>מכשירי דיוק עולמיים</td><td>1B100-4</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Corning&nbsp;</td><td>21-023-CV</td><td></td></tr><tr><td>Helix NP Blue</td><td>Biolegend</td><td>425305</td><td></td></tr><tr><td>אינסטנט אוקיינוס מלח ים</td><td>מיידי אוקיינוס</td><td>SS15-10</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ אור</td><td>ניקון</td><td>דגם SMZ1000</td><td></td></tr><tr><td>מתילן כחול</td><td>סיגמא</td><td>M9140-100G</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו-מטען (טיפים ארוכים לתאי לוד)</td> <td>eppendorf</td><td>930001007</td><td></td></tr><tr><td>P1000 חולץ מיקרופיפטה</td> מכשירי <td>סאטר</td><td>דגם P-97</td><td></td></tr><tr><td>PM 1000 מיקרו-מזרק תאים</td><td>MicroData Instruments, Inc. (MDI)</td><td>PM1000</td><td></td></tr><tr><td>טריקאין מתאנסולפט (אתיל 3- אמינובנזואט מתאנסולפט)</td><td>Sigma</td><td>E10521-10G</td><td></td></tr><tr><td>טריפסין-EDTA (0.5%), ללא פנול אדום</td><td>Gibco</td><td>15400054</td><td></td></tr><tr><td>דג זברה תזונה מוקרנת למבוגרים (מזון יבש)</td><td>Zeigler</td><td>388763</td><td></td></tr></tbody></table>

שיטה פשוטה, מהירה ויעילה לניתוח השתלת גידול בעוברים שקופים של דגי זברה

A Simple, Rapid, and Effective Method for Tumor Xenotransplantation Analysis in Transparent Zebrafish Embryos

מחקרי In vivo של התנהגות גידולים הם מצרך עיקרי בחקר הסרטן; עם זאת, השימוש בעכברים מציב אתגרים משמעותיים בעלות ובזמן. כאן, אנו מציגים את דגי הזברה הזחלים כמודל השתלה שיש לו יתרונות רבים על פני מודלים מורינים, כולל קלות טיפול, הוצאות נמוכות ומשך ניסוי קצר. יתר על כן, היעדר מערכת חיסון נרכשת בשלבי הזחל מייתר את הצורך לייצר זנים מדוכאי חיסון ולהשתמש בהם. בעוד פרוטוקולים מבוססים להשתלת קסנו בעוברים של דגי זברה קיימים, אנו מציגים כאן שיטה משופרת הכוללת היערכות עוברים להעברה מהירה יותר, ניתוח הישרדות ושימוש בציטומטריית זרימה להערכת נטל המחלה. עוברים מבוימים כדי להקל על הזרקת תאים מהירה לחלמון הזחלים וסימון תאים כדי לפקח על עקביות בולוס התא המוזרק. לאחר ההזרקה, ניתוח הישרדות העובר מוערך עד 7 ימים לאחר ההזרקה (dpi). לבסוף, נטל המחלה מוערך גם על ידי סימון תאים מועברים עם חלבון פלואורסצנטי וניתוח על ידי ציטומטריית זרימה. ציטומטריית זרימה מתאפשרת על ידי שיטה סטנדרטית להכנת תרחיפים של תאים מעוברי דגי זברה, אשר יכולה לשמש גם בביסוס התרבית הראשונית של תאי דגי זברה. לסיכום, ההליך המתואר כאן מאפשר הערכה מהירה יותר של התנהגות תאי הגידול in vivo עם מספר גדול יותר של בעלי חיים לכל זרוע מחקר ובאופן חסכוני יותר.

השתלת קסנו מבט מקיף על כל הניסוי והניתוח מתואר באיור 1, החל מייצור עוברים ועד להערכת התקדמות המחלה הן על ידי הישרדות והן על ידי ניתוח נטל המחלה באמצעות ציטומטריית זרימה. גישה זו מביאה מספר שיפורים המשפרים את יכולת השחזור והמדרגיות של השתלת קסנו, כמו גם הוספת דרך חדשה להעריך את נטל המחלה. הצלחת ניסויים אלה תלויה מאוד בבריאות התאים המושתלים, שכן תאים שאינם בריאים ובשלב היומן אינם מצליחים להתרבות עם ההשתלה. משך ההזרקה הוא גם פרמטר קריטי. לאחר הכנת תאי הגידול, קריטי להשלים את ההזרקה לדגי זברה תוך 3-4 שעות. הגישה שבה נעשה שימוש במחקר זה מאפשרת להזריק מספר גדול יותר של עוברים במהלך פרק הזמן הזה באמצעות שינוי פשוט של הצבתם ישירות על צדם על צלחת אגרוז והזרקתם לחלמון (איור 2C,D). יתר על כן, זה הכרחי כי פתח המחט אופטימלי נבחר כך מספיק תאים מוזרקים (400-600 תאים) אבל הפתח הוא לא כל כך גדול כי העוברים נפגעים. שיקול נוסף הוא לחץ ההזרקה. אנו מוצאים כי לחצים גדולים מ 12-13 psi לשבש את החלמון של עוברים, גרימת מוות. לבסוף, שונות נוספת הטבועה בהליך זה היא עקביות ההזרקה. התאים שיש להזריק מתיישבים בקצה מחט ההזרקה, מה שהופך את השליטה המדויקת בבולוס ההזרקה למאתגרת. כאשר התאים מושתלים, לכל העוברים יש פוטנציאל לקבל את אותו בולוס בזריקה, אולם בפועל הם אינם מקבלים (איור 3). מספר התאים המועברים יכול להשתנות במידה רבה בהתאם להתנהגות תאי הגידול (למשל, גושים) ורמת המיומנות של המפעיל. התמודדנו עם חוסר ודאות זה באמצעות סימון צביעת CM-Dil / mCherry, המאפשר סיווג לאחר הזרקה של בעלי חיים שקיבלו בולוס תאים מתאים ועקבי, כמו גם אלה שקיבלו בולוס נחות. לצביעת CM-Dil, אך סימון יעיל יותר בחלבון פלואורסצנטי, יש יתרון נוסף בכך שהוא מאפשר מעקב אחר התקדמות המחלה, בין אם באמצעות מיקרוסקופיה או באמצעות ציטומטריית זרימה (איור 4 ואיור 5).
ניתוח התנהגות הגידול ניתן לעקוב בקלות אחר התקדמות הגידול באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי פשוט המתמקד ב-RFP (איור 4A). באופן דומה, ניטור הישרדות מסורתי יכול להתבצע באמצעות ניתוח קפלן-מאייר (מבחן לוג-דרג ווילקוקסון) (איור 4B). באופן מרשים, בניגוד למחקרי השתלת קסנו מבוססי עכבר שבהם יש בדרך כלל 8-10 חיות בכל זרוע מחקר, בשיטת דגי הזברה שתוארה כאן, לא קשה להשיג זרועות מחקר עם יותר מ-60 חיות כל אחת (איור 4B). זה משפר באופן ניכר את כוח הפתרון של מחקרי in vivo. לבסוף, יישמנו גישה נוספת לניתוח נטל המחלה באמצעות ציטומטריית זרימה. זה כרוך בשיבוש של מספר שווה ערך של עוברים וניתוח התוכן התא הגידול של ההשעיה התאית הבודדת המתקבלת על ידי ציטומטריית זרימה. על-ידי שילוב סמן פני השטח של התא הספציפי לגידול עם מחוון החלבון הפלואורסצנטי, ניתן לזהות בביטחון עכברים/תאים אנושיים מושתלי קסנו באמצעות ציטומטריית זרימה כגישה להערכת נטל המחלה (איור 5). למטרה זו, חלבונים פלואורסצנטיים אדומים עדיפים מאחר שהחלבונים הפלואורסצנטיים הירוקים לא הצליחו לספק אות על פני האוטופלואורסצנטיות של תאי דג הזברה המארח. כאן, mCherry שימש עבור תיוג תאים וניטור במהלך xenotransplantation עבור ניתוח FACS יחד עם CD45. הסימון הכפול אפשר לנו למדוד הבדלים בנטל הגידול בין חיסון בולוס טוב לעומת נחות (איור 5B,C).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66164/66164fig01.jpg"> איור 1: סכמה של כל הליכי הניתוח של השתלת קסנו ולאחר הזרקה. (A) מערך הרבייה, איסוף העוברים ומורפולוגיה של יומיים לאחר ההפריה (dpf) סכמטיים. (B) הכנה, צביעה והזרקה של תאי לוקמיה להשתלת קסנו בחלמון של עוברי דגי זברה. (C) ניתוחים לאחר השתלת קסנו, כולל ציטומטריית הישרדות וזרימה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66164/66164fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66164/66164fig02.jpg"> איור 2: תמונות מייצגות של הכלים ששימשו להזרקות. (A) מחטים משוכות בצלחת פטרי. (B) לוחית האגרוז לבימוי עוברים. (ג,ד) לוחית המציגה עוברים מבוימים (תרשים מייצג בלוח C ועוברים אמיתיים (מוקפים באדום) בלוח D) להזרקות על צלחת העמסת העוברים. הכניסה בפינה הימנית התחתונה של לוח D מציגה תצוגת הגדלה גבוהה יותר של העוברים בשלבים. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66164/66164fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66164/66164fig03.jpg"> איור 3: תמונות מייצגות של עוברים מושתלי קסנו. מוצגות תמונות שדה בהיר ואימונופלואורסצנטי של תאים חיוביים לכתם CM-Dil (אדום) בחלמון עוברי קספר ברזולוציה של 1 dpi (תמונת מצמד). עוברים עם בולוס נחות מסומנים בחץ צהוב, ואילו עוברים עם מורפולוגיה מופרעת מסומנים בכוכבית. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66164/66164fig03large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66164/66164fig04.jpg"> איור 4: הערכת התקדמות המחלה באמצעות הדמיה פלואורסצנטית וניתוח הישרדות. (A) תמונה מייצגת של עוברים מושתלים ב- 4 dpi ו- 7 dpi. (B) עלילת קפלן מאייר המציגה ניתוח הישרדות של עוברים בעלי שני קווי לוקמיה שונים גנטית. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66164/66164fig04large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66164/66164fig05.jpg"> איור 5: ניתוח ציטומטרי של זרימה של נטל המחלה בדגי זברה מושתלים. (A) ייצוג סכמטי של הכנת תרחיף תאים וניתוח ציטומטריית זרימה. בקצרה, עוברים ב 4 dpi מפורקים לתרחיפים חד-תאיים באמצעות טריפסין וקולגנאז, ולאחר מכן ציטומטריית זרימה. (B) תרשימים מייצגים לניתוח ציטומטריית זרימה, כאשר התמונה השמאלית בכל פאנל היא FSC-A לעומת SSC-A והתמונה הימנית היא CD45 v/s mCherry signals. (C) גרף עמודות המציג את סטטיסטיקת התאים עבור תאים מושתלים קסנו כפי שהתקבלו מתרשים CD45 לעומת ms mCherry עבור עוברים חד פעמיים, טובים ונחותים (n = 45, 40 ו- 40 עבור כל משוכפל (n = 3); ערך p * ≤ 0.05, מחושב באמצעות מבחן t לא מזווג עם התיקון של וולש ב- GraphPad Prism 9). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66164/66164fig05large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>

אנו מתארים פרוטוקול להשתלת קסנו בחלמון של עוברי דגי זברה שקופים המותאם בשיטת היערכות פשוטה ומהירה. ניתוחים לאחר הזרקה כוללים הישרדות והערכת נטל המחלה של תאים מושתלים על ידי ציטומטריית זרימה.

In vivo studies of tumor behavior are a staple of cancer research; however, the use of mice presents significant challenges in cost and time. Here, we ...

אנו מבקשים להשיג תובנה מולקולרית לגבי השליטה בהמטופויזה נורמלית וממאירה ולאחר מכן לנצל תובנות אלה לפיתוח טיפולים חדשים לטיפול בסרטן הדם. Tumor xenografts הם כלי חיוני להערכת ההשפעה של שינוי גנטי או טיפול על התנהגות הגידול. עם זאת, עכברים xenografts הם יקרים, זמן רב, מוגבל בהיקפו.שימוש בדגי זברה להשתלת קסנו גידולית מתגבר על כל החסרונות הללו. בפרוטוקול זה, אנו מדגימים תהליך הרכבה קל ומהיר להשתלת קסנו, המגדיל את התפוקה. אנו משתמשים גם בצביעת תאים כדי לדעת את איכות החיסון ולאחר מכן ציטומטריית זרימה כדי להעריך את התקדמות הגידול על ידי הערכה או כימות של נטל המחלה.בכוונתנו להשתמש בגישה זו כדי לזהות דרכים חדשות לחסום את תפקודו של מפל הקינאז Ras/MAP, המניע את הרוב המכריע של סוגי הסרטן בבני אדם. ואנו נעשה זאת לא על ידי ניסיון לחסום את הפעילות הקטליטית של מפל הקינאז Ras/MAP, אלא על ידי מניעת יכולתו לזרחן את אותם מצעים מניעי סרטן שהוא משנה.

a-simple-rapid-effective-method-for-tumor-xenotransplantation

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

סרטון זה מתאר שיטת מיקרו-הזרקה להעברת תאי סרטן השד לחלל הפריביטלין של עוברי דגי זברה טרנסגניים. לאחר הדגירה, אנו מדמיינים את העובר תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי כדי לצפות בפלישה של תאים סרטניים, הפצתם וגרורות.

zPDX-אנליזה של פולשניות: חקירת התנהגות פולשנית של תאי סרטן גרורתיים בעוברי זברה Xenografts

סרטון זה מתאר את בדיקת xenograft של דג הזברה כדי להעריך היווצרות גידול in vivo וללמוד את ההשפעה של חומרים טיפוליים.

Zebrafish Xenograft Assay: שיטה להערכת היעילות האנטי-סרטנית של טיפולים על גידולים בדגי זברה in vivo

סרטון זה מדגים השתלה אורתוטופית של תאי גידול במוח של דגי זברה בחדר הרביעי של עובר דג זברה מדוכאי חיסון. הליך זה מאפשר מחקר ארוך טווח של פלישה והתנהגות של תאי גידול.

השתלה אורתוטופית ארוכת טווח של תאי גידול בעוברים של דגי זברה: שיטה יעילה להעברת תאי גידול לחדר הרביעי של עוברי דגי זברה לניתוח ארוך טווח של התנהגות תאי הגידול

השתלת תאי סרטן היא כלי חשוב לזיהוי מנגנוני סרטן ותגובות טיפוליות. הטכניקות הנוכחיות תלויים בבעלי חיים חסרי יכולת. כאן, אנו מתארים שיטה להשתלת תאים דג הזברה תאים לתוך עוברי המוסמכת-המוסמכת לניתוח לטווח ארוך של התנהגות התא הגידול בתגובות סמים vivo .

השתלת דג הזברה גידולים מוחיים במוח לתוך מארחים המוסמכת החיסונית עבור מחקר לטווח ארוך של התנהגות תאים סרטניים והתגובה לסמים

מטרת שיטה זו היא ליצור מודל vivo של אנגיוגנזה הגידול על ידי תאי גידול של השתלת מיונקים לתוך העובר הזרע כי יש מתויג כלים של כלי דם. על ידי הדמיה של השתל מבע כלים משויכים, מדידה כמותית של תגובת האנגיוגנטית ניתן להשיג.

בVivo הדמיה וככמת של התגובה המארחת אנגיוגנטית ב-Zebrafish גידול Xenografts

Zebrafish מודלים מבע לאפשר סינון תפוקה גבוהה ההקרנה והדמיה פלורסנט של תאים סרטניים אנושיים ב vivo microenvironment. פיתחנו זרימת עבודה עבור קנה מידה גדול, הקרנת תרופות אוטומטיות על החולה הנגזרת דגימות לוקמיה ב דג זברה באמצעות מיקרוסקופ אוטומטי מצויד במיקרוסקופ הדמיה יחידה.

הקרנת התרופה של החולה העיקרי הנגזר גידול Xenografts ב Zebrafish

כאן, אנו מספקים פרוטוקול צעד אחר צעד, עם טיפים ליצירת קסנוגרפטים והנחיות לניתוח התנהגות הגידול, חיסוניות של כל ההר, וכימות הדמיה confocal.

דור של זברה דג זחל קסנוגרפטים וניתוח התנהגות הגידול

מניפולציות עובריות כגון סילוק והשתלת תאים הן כלים חשובים לחקר ההתפתחות המוקדמת. פרוטוקול זה מתאר מכשיר השתלה פשוט ויעיל לביצוע מניפולציות אלה בעוברי דגי זברה.

מכשיר השתלה פשוט ויעיל לעוברי דגי זברה

מודלים פרה-קליניים נועדו לקדם את הידע בביולוגיה של סרטן ולחזות את יעילות הטיפול. מאמר זה מתאר את הדור של xenografts מבוססי דגי זברה שמקורם בחולה (zPDXs) עם שברי רקמת גידול. zPDXs טופלו בכימותרפיה, שהשפעתה הטיפולית הוערכה במונחים של אפופטוזיס תאי של הרקמה המושתלת.

הקמת קסנוגרפטים מסרטן הלבלב שמקורם בדגי זברה לבדיקת רגישות לכימותרפיה

כאן, אנו מציגים פרוטוקול מפורט להשתלת xenograft אוטומטית של גידול בזחלי דג זברה באמצעות מערכת הזרקה רובוטית חדישה. כמו כן, אנו מציגים סרטוני הזרקה ונתוני ולידציה המדגימים את הביצועים המוצלחים של המערכת.

אוטומציה של השתלת גידול בזחלי דג הזברה לחקר סרטן ורפואה

למדו שיטה מהירה ויעילה להשתלת גידולים בעוברי דגי זברה שקופים. הפרוטוקול כולל צביעת תאים להערכת איכות החומר המושתל וציטומטריית זרימה לניתוח התקדמות הגידול ועומס המחלה.

שיטה פשוטה, מהירה ויעילה לניתוח השתלת גידול בעוברים שקופים של דגי זברה

גלה סרטונים נוספים