Name: מיקרוסקופיה תוך-חיונית דו-פוטונית של גליובלסטומה במודל מורין (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-03-01T14:15:00.000+00:00
Duration: 7 min 25 s
Description: חקור מיקרוסקופיה דו-פוטונית תוך-חיונית להדמיית ננו-חלקיקי תחמוצת ברזל בגליובלסטומה במודל מורין. שיטה זו מאפשרת הבנה מעמיקה של מנגנוני מסירת תרופות דרך מחסום הדם-מוח.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ברצוננו להודות לשירות המיקרוסקופיה של מדעי המוח ע"ש סטנפורד וו צאי, למרכז סטנפורד לחידושים בדימות In Vivo (SCi3) - מרכז הדמיה לבעלי חיים קטנים, למענק המכשור המשותף של NIH S10 (S10RR026917-01, PI מייקל מוסלי, Ph.D.) ולמתקן הדימות הפרה-קליני של סטנפורד בפורטר דרייב על אספקת הציוד והתשתית לפרויקט זה. עבודה זו נתמכה על ידי מענק מהמכון הלאומי לבריאות הילד והתפתחות האדם, מענק מספר R01HD103638. ברצוננו להודות לקבוצת שניצר, אוניברסיטת סטנפורד; מעבדת Zuo, אוניברסיטת סנטה קרוז; והמעבדה לדימות נוירו-וסקולרי, המרכז הפוטוני של בוסטון, אוניברסיטת בוסטון, לדיונים חינוכיים על דימות דו-פוטוני ומודלים של חלונות גולגולת.

מעקב בזמן אמת אחר ננו-חלקיקים בגידולי מוח באמצעות 2P-IVM בעכברים

<ol><li>Denk, W., Strickler, J. H., Webb, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+laser+scanning+fluorescence+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Two-photon laser scanning fluorescence microscopy.</a> Science. 248 (4951), 73-76 (1990).</li>
<li>Wang, Z., McCracken, S., Williams, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transpupillary+two-photon+in+vivo+imaging+of+the+mouse+retina%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Transpupillary two-photon in vivo imaging of the mouse retina.</a> J Vis Exp. 168, 61970(2021).</li>
<li>Zhang, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+two-photon+microscopy+reveals+the+contribution+of+Sox9%2B+to+kidney+regeneration+in+a+mouse+model+with+extracellular+vesicle+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">In vivo two-photon microscopy reveals the contribution of Sox9+ to kidney regeneration in a mouse model with extracellular vesicle treatment.</a> J Biol Chem. 295 (34), 12203(2020).</li>
<li>Jang, W. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+microscopy+of+Paneth+cells+in+the+small+intestine+of+live+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Two-photon microscopy of Paneth cells in the small intestine of live mice.</a> Sci Rep. 8 (1), 14174(2018).</li>
<li>Ihler, F., Bertlich, M., Weiss, B., Dietzel, S., Canis, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+microscopy+allows+imaging+and+characterization+of+cochlear+microvasculature+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Two-photon microscopy allows imaging and characterization of cochlear microvasculature in vivo.</a> Biomed Res Int. 2015, 154272(2015).</li>
<li>Matsuura, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+imaging+with+two-photon+microscopy+reveals+cellular+dynamics+in+the+ischeamia-reperfused+rat+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Intravital imaging with two-photon microscopy reveals cellular dynamics in the ischeamia-reperfused rat heart.</a> Sci Rep. 8 (1), 15991(2018).</li>
<li>Veres, T. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intubation-free+in+vivo+imaging+of+the+tracheal+mucosa+using+two-photon+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Intubation-free in vivo imaging of the tracheal mucosa using two-photon microscopy.</a> Sci Rep. 7 (1), 694(2017).</li>
<li>Zong, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+two-photon+calcium+imaging+in+freely+moving+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Large-scale two-photon calcium imaging in freely moving mice.</a> Cell. 185 (7), 1240-1256.e30 (2022).</li>
<li>Takasaki, K., Abbasi-Asl, R., Waters, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Superficial+bound+of+the+depth+limit+of+two-photon+imaging+in+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22eNeuro%22%5BJournal%5D)">Superficial bound of the depth limit of two-photon imaging in mouse brain.</a> eNeuro. 17 (1), (2019).</li>
<li>Birkner, A., Konnerth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+two-photon+imaging+in+vivo+with+a+red-shifted+calcium+indicator%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Deep two-photon imaging in vivo with a red-shifted calcium indicator.</a> Methods Mol Biol. 1929, 15-26 (1929).</li>
<li>Busche, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+two-photon+calcium+imaging+of+hippocampal+neurons+in+Alzheimer+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">In vivo two-photon calcium imaging of hippocampal neurons in Alzheimer mouse models.</a> Methods Mol Biol. 1750, 341-351 (2018).</li>
<li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+sensitive+two-photon+probe+to+selectively+detect+monoamine+oxidase+B+activity+in+Parkinson%27s+disease+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">A sensitive two-photon probe to selectively detect monoamine oxidase B activity in Parkinson's disease models.</a> Nat Commun. 5, 3276(2014).</li>
<li>Madden, K. S., Zettel, M. L., Majewska, A. K., Brown, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+tumor+imaging%3A+live+imaging+of+glioma+by+two-photon+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Brain tumor imaging: live imaging of glioma by two-photon microscopy.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2013 (3), (2013).</li>
<li>Ricard, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+dynamics+of+microglial+and+monocyte-derived+cells+in+glioblastoma-bearing+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Phenotypic dynamics of microglial and monocyte-derived cells in glioblastoma-bearing mice.</a> Sci Rep. 6, 26381(2016).</li>
<li>Soubéran, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+VEGF+blockade+on+the+dynamics+of+the+inflammatory+landscape+in+glioblastoma-bearing+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Effects of VEGF blockade on the dynamics of the inflammatory landscape in glioblastoma-bearing mice.</a> J Neuroinflammation. 16 (1), 191(2019).</li>
<li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+vivo+reveals+specific+nanoparticle+target+binding+in+a+syngeneic+glioma+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale%22%5BJournal%5D)">Real-time vivo reveals specific nanoparticle target binding in a syngeneic glioma mouse model.</a> Nanoscale. 14 (15), 5678-5688 (2022).</li>
<li>Wartchow, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+with+cyclic+AMP+activators+reduces+glioblastoma+growth+and+invasion+as+assessed+by+two-photon+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Treatment with cyclic AMP activators reduces glioblastoma growth and invasion as assessed by two-photon microscopy.</a> Cells. 10 (3), 556(2021).</li>
<li>Jiang, L. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Label-free+detection+of+fibrillar+collagen+deposition+associated+with+vascular+elements+in+glioblastoma+multiforme+by+using+multiphoton+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Microsc%22%5BJournal%5D)">Label-free detection of fibrillar collagen deposition associated with vascular elements in glioblastoma multiforme by using multiphoton microscopy.</a> J Microsc. 265 (2), 207-213 (2017).</li>
<li>Chen, Z., Ross, J. L., Hambardzumyan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+2-photon+imaging+reveals+distinct+morphology+and+infiltrative+properties+of+glioblastoma-associated+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Intravital 2-photon imaging reveals distinct morphology and infiltrative properties of glioblastoma-associated macrophages.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 116 (28), 14254-14259 (2019).</li>
<li>Zhang, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Labeling+human+mesenchymal+stem+cells+with+gold+nanocages+for+in+vitro+and+in+vivo+tracking+by+two-photon+microscopy+and+photoacoustic+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">Labeling human mesenchymal stem cells with gold nanocages for in vitro and in vivo tracking by two-photon microscopy and photoacoustic microscopy.</a> Theranostics. 3 (8), 532-543 (2013).</li>
<li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiji%3A+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nat Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li>
<li>Hoeferlin, G. F., Menendez, D. M., Krebs, O. K., Capadona, J. R., Shoffstall, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+thermal+damage+from+robot-drilled+craniotomy+for+cranial+window+surgery+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Assessment of thermal damage from robot-drilled craniotomy for cranial window surgery in mice.</a> J Vis Exp. 189, 64188(2022).</li>
<li>Holtmaat, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((high-resolution+imaging+in+the+mouse+neocortex+through+a+chronic+cranial+window%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window.</a> Nat Protoc. 4 (8), 1128-1144 (2009).</li>
<li>Heo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+soft%2C+transparent%2C+freely+accessible+cranial+window+for+chronic+imaging+and+electrophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A soft, transparent, freely accessible cranial window for chronic imaging and electrophysiology.</a> Sci Rep. 6, 27818(2016).</li>
<li>Kim, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+optical+access+to+an+estimated+one+million+neurons+in+the+live+mouse+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Long-term optical access to an estimated one million neurons in the live mouse cortex.</a> Cell Rep. 17 (12), 3385-3394 (2016).</li>
<li>Kılıç, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+cranial+windows+for+long+term+multimodal+neurovascular+imaging+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">Chronic cranial windows for long term multimodal neurovascular imaging in mice.</a> Front Physiol. 11, 612678(2021).</li>
<li>Helm, P. J., Ottersen, O. P., Nase, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+optical+properties+of+the+mouse+cranium-implications+for+in+vivo+multi+photon+laser+scanning+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Analysis of optical properties of the mouse cranium-implications for in vivo multi photon laser scanning microscopy.</a> J Neurosci Methods. 178 (2), 316-322 (2009).</li>
<li>Lu, W., Sun, Q., Wan, J., She, Z., Jiang, X. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cationic+albumin-conjugated+pegylated+nanoparticles+allow+gene+delivery+into+brain+tumors+via+intravenous+administration%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Cationic albumin-conjugated pegylated nanoparticles allow gene delivery into brain tumors via intravenous administration.</a> Cancer Res. 66 (24), 11878-11887 (2006).</li>
<li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LDLR-mediated+peptide-22-conjugated+nanoparticles+for+dual-targeting+therapy+of+brain+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">LDLR-mediated peptide-22-conjugated nanoparticles for dual-targeting therapy of brain glioma.</a> Biomaterials. 34 (36), 9171-9182 (2013).</li>
<li>Xin, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+anti-glioblastoma+efficacy+by+PTX-loaded+PEGylated+poly%28%C9%9B-caprolactone%29+nanoparticles%3A+In+vitro+and+in+vivo+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Pharm%22%5BJournal%5D)">Enhanced anti-glioblastoma efficacy by PTX-loaded PEGylated poly(ɛ-caprolactone) nanoparticles: In vitro and in vivo evaluation.</a> Int J Pharm. 402 (1-2), 238-247 (2010).</li>
<li>Valable, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+MRI+tracking+of+exogenous+monocytes%2Fmacrophages+targeting+brain+tumors+in+a+rat+model+of+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroimage%22%5BJournal%5D)">In vivo MRI tracking of exogenous monocytes/macrophages targeting brain tumors in a rat model of glioma.</a> Neuroimage. 40 (2), 972(2008).</li>
<li>Jia, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phototheranostics%3A+Active+targeting+of+orthotopic+glioma+using+biomimetic+proteolipid+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Phototheranostics: Active targeting of orthotopic glioma using biomimetic proteolipid nanoparticles.</a> ACS Nano. 13 (1), 386-398 (2021).</li>
<li>Asan, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+correlates+of+gray+matter+volume+changes+in+magnetic+resonance+morphometry+identified+by+two-photon+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Cellular correlates of gray matter volume changes in magnetic resonance morphometry identified by two-photon microscopy.</a> Sci Rep. 11, 4234(2021).</li>
</ol>

המחברים מצהירים כי אין להם ניגוד עניינים.

אנו מציגים שיטה למעקב בזמן אמת in vivo NP באמצעות 2P-IVM דרך חלון גולגולתי כדי להעריך את העברת הגידול של NPs תחמוצת ברזל עם תווית פלואורסצנטית. הטכניקה הכירורגית להליך זה דורשת יד יציבה ומיומנויות כירורגיות ניסיוניות מתקדמות. מומלץ לתרגל שימוש בפגרים או פנטומים לפני שמתקדמים לחוויה חיה של בעלי חיים. כחלופה, Hoeferlin et al. יישמו מקדחה רובוטית כדי להפחית את הנזק התרמי, למזער את השתנות הטכניקה הכירורגית ולתקנן ניתוח22.
גודל החלון מייצג פרמטר קריטי נוסף. חלון גדול יותר יאפשר הדמיה של חלק גדול יותר של הגידול עם 2P-IVM. בספרות תוארו גדלים בין 3-7 מ"מ23. עם זאת, חלונות גדולים יותר אינם יכולים להכיל את עקמומיות המוח, מה שעלול להוביל ללחץ אזורי מוגבר24. כדי להתגבר על האיפוק הזה, מה שנקרא "גולגולת זכוכית" יכול לשמש במקום25. בהשוואה לחלונות זכוכית מסורתיים, שיטה זו משתמשת בזכוכית מעוקלת, המתאימה לעקמומיות המוח ובכך מאפשרת יצירת חלונות גדולים יותר תוך הפחתת לחץ המוקד על קליפת המוח. סוג זה של זכוכית מעוקלת אינו זמין מסחרית, ויש לו רק יישומים מוגבלים ב- 2P-IVM, מכיוון שהמשטח המעוגל גורם לתוצרי השתקפות, ומגביל את שטח החלון שניתן לצלם. חלופה נוספת היא חלון24 מבוסס סיליקון. מצד אחד, שיטה זו מציעה גמישות רבה יותר לגבי גודל וצורת החלון שייווצר. בנוסף, דווחו תוצאות דומות מבחינת כשל בחלונות ושיעורי דלקת לחלונות זכוכית קלאסיים. מצד שני, איכות הדמיה של 2 פוטונים בחלונות מבוססי פולימר הוכחה כיורדת מהר יותר מאשר בחלונות זכוכית, מה שהופך אותה לבלתי ישימה עבור יישומים ארוכי טווח26. חלון גולגולת דליל מייצג חלופה נוספת. למרות היותו פחות פולשני מחלון הזכוכית הקלאסי, הוא אינו מאפשר השתלת תאי GBM באותה טכניקה המתוארת כאן. בנוסף, קשה להשיג עובי גולגולת עקבי, וכתוצאה מכך, זה יכול לגרום לממצאים משמעותיים ב 2P-IVM27.
קו התאים וכמות תאי GBM המושתלים הם שיקולים חשובים אחרים בעת תכנון ציר הזמן של המחקר. קו תאי גליומה של חולדה C6 הוא אחד מקווי התאים הנפוצים ביותר במחקר GBM. בחולדות ובעכברים, מספרי תאים בין 5 x 104 ו 5 x 106 דווחו עבור השתלות תוך גולגולתיות 27,28,29,30,31. ככלל, בעת השתלת מספר גבוה יותר של תאים, יש לצפות לצמיחת גידול מהירה יותר. בפרוטוקול זה הושתלו 1 x 105 תאים וההדמיה בוצעה בימים 11 ו -12 לאחר ההשתלה. Xin et al. השתילו 1 x 105 C6 תאים בעכברים עירומים BALB/c ודיווחו על גילוי GBM מתקדם ב- MRI ביום 7 לאחר ההשתלה ותמותה מוגברת לאחר 15 יום30. לשם השוואה, Jia et al. השתמשו במספר גבוה יותר של תאים (1 x 106) ובאותו זן עכבר וזיהו מסת גידול קטנה ביום 7 ב- MRI עם מחסום דם-מוח משובש מעט (BBB), כפי שהודגם על ידי כתם כחול חיוור של אוונס ברקמת GBM32. ביום ה-14, הכתם הכחול של אוונס היה חזק יותר מאשר ביום ה-7, מה שמצביע על כך שה-BBB היה משובש מאוד. בתורו, הגידול הגידול משפיע גם על כמה זמן בעלי החיים יכולים להישמר בניסוי. זהו שיקול חשוב של רווחת בעלי חיים במחקרי הדמיה אורכיים. חלונות גולגולתיים כרוניים דווחו כמתאימים להדמיה עד 6 חודשים לאחר ההשתלה26.
הננו-חלקיקים המשמשים בפרוטוקול זה מורכבים מתחמוצת ברזל ורכיבים פלואורופוריים. יישומים אפשריים כוללים חקירה של העברת הגידול של תרופות טיפוליות חדשניות, טיפולים תאיים, והתערבויות על כלי הדם של הגידול ומיקרו-סביבה של הגידול. מועמדים שונים לתרופות וטיפולים משולבים ניתנים להערכה ברמה התאית והמולקולרית. רכיב תחמוצת הברזל של NPs מאפשר הדמיה מולטימודאלית עם MRI או דימות חלקיקים מגנטיים בנוסף ל- 2P-IVM. בעוד MRI מייצג שיטת הדמיה רלוונטית מבחינה קלינית, הרזולוציה האנטומית שלו נחותה מזו של מיקרוסקופ תוך חיוני33.
לשיטה זו יש גם מגבלות מסוימות. קואורדינטות המוח על פי אטלס מוח עכבר מתוקננות לעכברי C57BL/6J ויש להתאים אותן בהתאם לזן העכבר, מין וגיל. יתר על כן, עם הדמיה של שני פוטונים, ניתן לגשת רק לעומק מוגבל של כ -450 מיקרומטר9. לכן, אפיון חלקי בלבד של הגידול אפשרי עם 2P-IVM, וניתן להחמיץ הבדלים אזוריים במאפייני הגידול. בנוסף, נכללו רק שתי נקודות זמן לאחר ניהול NP. מחקרים עתידיים, כולל נקודות זמן רבות יותר לאחר מתן תוך ורידי, יאפשרו ניתוח מפורט יותר של ההתנהגות המרחבית-זמנית של NPs במיקרו-סביבה של הגידול.
לסיכום, הערכנו את העברת הגידול של ננו-חלקיקי תחמוצת ברזל עם תווית פלואורסצנטית באמצעות 2P-IVM במודל עכברי של GBM. שיטה זו ניתנת לשינוי בקלות כך שתתאים לתחומי מחקר שונים ומייצגת כלי חשוב לדימות מוחי in vivo בתחום מדעי המוח.

מיקרוסקופ תוך-ויטלי דו-פוטוני (2P-IVM) היא טכניקת הדמיה פלואורסצנטית המאפשרת הדמיה של רקמה חיה1.
פותח לראשונה בשנות התשעים, 2P-IVM שימש לניתוח in vivo של הרשתית2, כליות3, מעי דק4, שבלול5, לב6, קנה הנשימה7, והמוח במודלים פרה-קליניים שונים 8,9. בתחום מדעי המוח, 2P-IVM צברה חשיבות כטכניקה לדימות בזמן אמת של המוח הבריא בחיות ערות10, כמו גם לחקר מחלות של מערכת העצבים כגון אלצהיימר11, פרקינסון12 וגליובלסטומה (GBM)13,14,15,16.
2P-IVM מציעה פתרון אלגנטי לחקר המיקרו-סביבה של הגידול במהלך התפתחות GBM. בעוד שחלק מהמחקרים הקודמים התמקדו במודלים במבחנה17 ו-ex vivo 18, אחרים יישמו מודלים אורתוטופיים19 וקסנוטרופיים20 in vivo לבחינת GBM. Madden et al. ביצעו הדמיה טבעית של קו תאי גליומה של חולדה CNS-1 במודלעכבר 13. באמצעות מודל אורתוטופי GL261-DsRed murine, ריקארד ואחרים ביצעו מתן תוך ורידי של פלואורופור כדי לשפר את כלי הדם באזור הגידול ב 2P-IVM14.
כאן, אנו מיישמים 2P-IVM למעקב אחר העברת הגידול של ננו-חלקיקי תחמוצת ברזל עם תווית פלואורסצנטית (NP) במודל עכבר אורתוטופי של GBM. באמצעות חלון גולגולתי, שיטה זו מאפשרת לנו לחקור את ההתפלגות המרחבית-זמנית בזמן אמת של NPs במוח בפירוט.

<table><tbody><tr><td>תמיסת עירוי נתרן כלורי 0.9%</td><td>Baxter Corp</td><td>533-JB1301P</td><td></td></tr><tr><td> Dulbecco's Modified Eagle Medium</td><td>Invitrogen</td><td>11965-092</td><td></td></tr><tr><td>1 מ"ל</td><td></td><td>מזרק BD Luer-Lok, REF309628</td><td></td></tr><tr><td>10%&nbsp; FBS</td><td>Thermo Fisher</td><td>Cytiva SH30910.03HI</td><td></td></tr><tr><td>10% DMSO</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8418-50ML</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ 2 פוטונים</td><td>Prairie Technologies, Bruker</td><td>Prairie Ultima IV</td><td></td></tr><tr><td>אפליקטורים אלכוהוליים, 70%</td> <td>Medline Industries, LP</td><td>MDS093810</td><td></td></tr><tr><td>אלכוהול, בקבוק ריסוס</td><td>Decon Labs Inc</td><td>Decon SaniHol, 04-355-122</td><td></td></tr><tr><td>רדיד אלומיניום</td><td>Reynold Brands</td><td>Reynold Wrap רדיד</td><td></td>אלומיניום נון-סטיק</tr><tr><td>מכונת הרדמה</td><td>Patterson Scientific</td><td>SAS3</td><td></td></tr><tr><td>ניטור הרדמה&nbsp;</td><td>קנט סיינטיפיק&nbsp;</td><td>MouseSTAT Jr. מכרסמים פולסוקסיקמטר</td><td></td></tr><tr><td>אנטיביוטיקה-אנטימיקוטית (100x), נוזל</td><td>Invitrogen</td><td>15240-096</td><td></td></tr><tr><td>אפליקטורים בטדין</td><td>מקצועיים חד פעמיים בינלאומיים, Inc</td><td>S41125</td><td></td></tr><tr><td>אגרוף ביופסיה, 5 מ"מ&nbsp;</td><td>Miltex</td><td>גודל 5</td><td></td></tr><tr><td>בופרנורפין בשחרור מושהה</td><td>Zoo Pharm</td><td>Bup SR Lab, 1.0 מ"ג/מ"ל</td><td>ניתן להשתמש בתרופה גנרית במקום.</td></tr><tr><td>קו תאי גליומה של עכברוש C6</td><td>ATCC (אוסף תרביות רקמה אמריקאיות)</td> <td>CCL-107</td><td></td></tr><tr><td>Cannulas</td><td>BD</td><td>16 גרם, 1.1/2 אינץ', 30 גרם, 1 אינץ'</td><td></td></tr><tr><td>קרפרופן</td><td>פייזר&nbsp;</td><td>רימדיל, 50 מ"ג/מ"ל</td><td>ניתן להשתמש בתרופה גנרית במקום.</td></tr><tr><td>Cefazoline</td><td>Sagent Pharmaceuticals</td><td>25021-101-10, 1 גרם לבקבוקון</td><td>ניתן להשתמש בתרופה גנרית במקום.&nbsp;</td></tr><tr><td>מסננת תאים, 40 ומיקרו; m</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>87711</td><td></td></tr><tr><td>אפליקטורים עם קצה כותנה, 6 אינץ' &nbsp;</td><td>Dyad Medical Sourcing, LLC</td><td>HCS1005</td><td></td></tr><tr><td>Dental Cement</td><td>Stoelting Co</td><td>51459</td><td>ערכת צמנט דנטלי, שקופה, 2 רכיבים</td></tr><tr><td>Dexamethasone</td><td>Bimeda</td><td>138RX, 2 מ"ג/מ"ל</td><td>ניתן להשתמש בתרופה גנרית במקום.</td></tr><tr><td>DietGel</td><td>ClearH2O</td><td>Recovery, וילון 72-06-502</td><td></td></tr>&<tr><td>nbsp;</td>מקדחת <td>גלישת</td><td></td> <td>קרדינל בריאות</td> ביו שילד</tr><tr><td></td><td>Saeyang Microtech</td><td>Escort Pro, B08350</td><td></td></tr><tr><td>טיפים למקדחה&nbsp;</td><td>הגר & Meissinger GmbH</td><td></td><td>REF310104001001005 גודל 005, ארה"ב 1/4</td></tr><tr><td>FIJI תוכנת ניתוח הדמיה</td><td>של המכון הלאומי לבריאות</td><td>https://imagej.net/software/fiji/</td><td></td></tr> <tr><td>Forceps</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-812-41</td><td></td></tr><tr><td>Gauze</td><td>Fisher HealthCare</td><td>כרית גזה כותנה סטרילית, 4 x 4 אינץ', 22-415-469</td><td></td></tr><tr><td>Gelfoam&nbsp;</td><td>אתיקון בע"מ&nbsp;</td><td>ספוג ג'לטין נספג קצף Surgifoam, Ref. 1972</td><td></td></tr><tr><td>Germinator&nbsp;</td><td>סלפוינט סיינטיפיק&nbsp;</td><td>נביטה 500, מס' 11688</td><td></td></tr><tr><td>כיסויי זכוכית, קוטר 5 מ"מ</td><td>Fisher Scientific</td><td>Menzel כיסוי זכוכית&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>כפפות, כפפות</td><td></td>בדיקה רפואיות לא סטריליות <td>של פישר סיינטיפיק</td><td>ניטריל ללא אבקה</td></tr><tr><td>כפפות,</td><td>תעשיות מדליין</td><td></td> סטריליות, קרם להסרת שיער LP MDS104070 <td></td></tr><tr><td></td><td>Church & דווייט</td><td>נאייר תחליב מסיר שיער&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>מזרק המילטון</td><td>חברת המילטון בע"מ</td><td>Gastight #1701, 10 ומיקרו; L</td><td></td></tr><tr><td>HBSS ללא Ca, Mg</td><td>Fisher Scientific</td><td>PI88284</td><td></td></tr><tr><td>ראש בר</td><td>Hongway</td><td>5 מ"מ קוטר פנימי O-rings כרית</td><td></td></tr><tr><td>חימום</td><td>Stoelting Co.&nbsp;</td><td>מחמם מכרסמים X2</td><td></td></tr><tr><td>מזרקי אינסולין</td><td>אקסל מוצרים רפואיים בינלאומיים&nbsp;</td><td>29 גרם x 1/2 ופריים;</td><td></td></tr><tr><td>ננו-חלקיקי תחמוצת ברזל</td><td>Covis Pharma GmbH</td><td>Feraheme ferumoxytol הזרקה, 510 מ"ג/17 מ"ל, 59338077501</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Dechra</td><td>26675-46-7</td><td></td></tr><tr><td>עכברים</td><td>מעבדות ג'קסון</td><td>NSG, זן 005557</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ (ניתוח)</td><td>Seiler Medical</td><td>Seiler IQ Q-100-220</td><td></td></tr><tr><td>ננו-חלקיקים</td><td>מותאמים אישית</td><td></td><td>ננו-חלקיקי תחמוצת ברזל (Ferumoxytol) המסומנים עם פלואורסצאין איזותיוציאנט</td></tr><tr><td>משחה אופטלמית</td><td>תרופות עיקריות</td><td>Lubrifresh P.M. משחת לילה, 203964</td><td></td></tr><tr>גז<td>חמצן</td><td>לינדה & ציוד בע"מ&nbsp;</td><td>צילינדר פלדה בלחץ גבוה K Style, 249CF, 2000PSIG, CGA 540</td><td></td></tr><tr><td>כוסות פלסטיק</td><td>ג'ורג'יה-פצ'יריף מוצרי צריכה</td><td>Dixie Portion Cup, 2 אונקיות, פלסטיק, שקוף, PK2400</td><td></td></tr><tr><td>צינורות פוליאתילן</td><td>Braintree Scientific</td><td>50-195-5494</td><td></td></tr><tr><td>בקנה מידה</td><td>Ohaus Corp</td><td>CR2200</td><td></td></tr><tr><td>אזמל</td><td>אינטגרה מדעי החיים Production Corp</td><td>Integra Miltex נירוסטה חד פעמי אזמל</td><td></td></tr><tr><td>מספריים</td><td>פישר מדעי</td><td>13-804-18</td><td></td></tr><tr><td>איטום</td><td>Henkel Corp</td><td>Loctite 4014</td><td></td></tr><tr><td>שמלת מעבדה לשימוש חד פעמי</td><td>המרות היי-טק</td><td>17-444-081</td><td></td></tr><tr><td>מסגרת סטריאוטקטית</td><td>Stoelting Co.&nbsp;</td><td>סטולטינג סטנדרטי חדש TM</td><td></td></tr><tr><td>סטרילי בקבוק ואקום מערכות סינון עליונות</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>S2GPU05RE, MilliporeSigma מס S2GPU05RE</td><td></td>:</tr><tr><td>קופסת קלקר</td><td>N / A</td> N <td>/ A</td><td></td></tr><tr><td>כפפות כירורגיות</td><td>Cardinal Health</td><td>19-163-108</td><td></td></tr><tr><td>דבק כירורגי, 3M דבק רקמות Vetbond</td><td>3M מוצרים לטיפול בבעלי חיים</td><td>1469SB</td><td></td></tr><tr><td>זנב קת'תר ורידים</td><td>מותאם אישית</td><td></td><td>מורכב משתי צינוריות 30 גרם המחוברות עם צינורות סיליקון&nbsp;</td></tr><tr><td>TrypLE Express (1x), ללא פנול אדום</td><td>Invitrogen</td><td>12604-039</td><td></td></tr><tr><td>לפיד אולטרה סגול</td><td>טכנולוגיית שמש אביב</td><td>Consciot</td><td></td></tr></tbody></table>

מיקרוסקופיה תוך-חיונית דו-פוטונית של גליובלסטומה במודל מורין

Two-Photon Intravital Microscopy of Glioblastoma in a Murine Model

מתן טיפול בסרטן תוך ורידי לגידולי מוח מוגבל על ידי מחסום הדם-מוח. שיטה להדמיה ישירה של הצטברות והפצה של מקרומולקולות בגידולי מוח in vivo תשפר מאוד את יכולתנו להבין ולייעל מתן תרופות במודלים פרה-קליניים. פרוטוקול זה מתאר שיטה למעקב בזמן אמת in vivo של ננו-חלקיקים בעלי תווית פלואורסצנטית תוך ורידית במיקרוסקופ תוך-חיוני של שני פוטונים (2P-IVM) במודל עכברי של גליובלסטומה (GBM).
הפרוטוקול מכיל תיאור רב-שלבי של ההליך, כולל הרדמה ושיכוך כאבים של חיות ניסוי, יצירת חלון גולגולתי, השתלת תאי GBM, הנחת מוט ראש, ביצוע מחקרי 2P-IVM וטיפול לאחר ניתוח למחקרי מעקב ארוכי טווח. אנו מציגים מפגשי הדמיה 2P-IVM מייצגים וניתוח תמונה, בוחנים את היתרונות והחסרונות של טכנולוגיה זו ודנים ביישומים פוטנציאליים.
שיטה זו ניתנת לשינוי והתאמה בקלות לשאלות מחקר שונות בתחום דימות המוח הפרה-קליני in vivo .

כאן, ביצענו ניתוח חלון גולגולתי והשתלנו תאי C6 במודל עכבר NSG של GBM (n = 5). איטום נכון בין כל הרכיבים המעורבים ביצירת החלון (איור 1A) יבטיח את עמידות החלונות להדמיה ארוכת טווח ובנוסף יפחית את התחלואה. באמצעות השלב שהותאם ל-in vivo 2P-IVM (איור 2), יכולנו לדמיין חיות תחת הרדמה במשך עד שעתיים ללא כל חפצי תנועה משמעותיים. כ-10 דקות לאחר יישום תוך ורידי של ננו-חלקיקים בעכברים נושאי GBM, 2P-IVM מראה את האות הירוק, הפלואורסצנטי, של כלי הדם באזור הגידול, בהתאם ללוקליזציה תוך-וסקולרית של ננו-חלקיקים המסומנים בתווית FITC. רק כמות קטנה של אות ירוק-פלואורסצנטי נרשמת מחוץ לכלי הדם, מה שמצביע על תחילת האקסטרווציה של NPs (איור 3A). ניתן לראות עלייה באות FITC שמקורו בחלל החוץ-וסקולרי, אשר עולה בקנה אחד עם אקסטרווסציה מתקדמת (איור 3B).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66304/66304fig01.jpg"> איור 1. מיקום חלון גולגולת, קרניוטומיה, השתלה והדמיה. (A) חתך רוחב של המיקום האנטומי של חלון גולגולת. מכיוון שמוט הראש נקי ממתכת, ניתן לבצע הדמיית תהודה מגנטית או הדמיית חלקיקים מגנטיים בנוסף למיקרוסקופ תוך-חיוני של שני פוטונים. (B) סקירה כללית (שורה עליונה) ותצוגה מפורטת (שורה תחתונה) של הקרניוטומיה (משמאל), השתלת תאים (באמצע) ומיקרוסקופ תוך-חיוני של 2 פוטונים (מימין). עם פתיחת הגולגולת מתרחש דימום שטחי (משמאל) ונספג מחדש במהירות (באמצע). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66304/66304fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66304/66304fig02.jpg"> איור 2. תכנון בעזרת מחשב (CAD) של הבמה. CAD של השלב המשמש למיקרוסקופיה תוך-חיונית של 2 פוטונים in vivo , כולל מוט נשיכה, ייצוב מוט ראש וברגים לכוונון גובה וזווית. ניתן למצוא את קובץ ה- CAD התלת-ממדי בקובץ קידוד משלים 1. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66304/66304fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66304/66304fig03.jpg"> איור 3. תמונות במיקרוסקופ תוך-חיוני של 2 פוטונים in vivo . תמונות שנרכשו (A) 10 דקות ו-(B) 24 שעות לאחר מתן ננו-חלקיקים תוך ורידי. בעוד שתאי GBM פולטים אותות פלואורסצנטיים בספקטרום האדום (משמאל), הננו-חלקיקים ברקמת המוח מוצגים בירוק (מימין). # מציין NPs אקסטרווס, * מציין כלי דם. רק מספר מצומצם של חלקיקים עברו אקסטרווסציה ונראים בקרבת תאי הגידול 10 דקות לאחר מתן NP. שפע של חלקיקים נראה באזור תאי GBM, מה שמרמז על אקסטרווציה 24 שעות לאחר מתן NP. הננו-חלקיקים מורכבים מאיזותיוציאנט פלואורסצאין (FITC) וננו-חלקיקים של תחמוצת ברזל (Ferumoxytol). פסי קנה המידה מייצגים 100 מיקרומטר. קיצורים: 2P-IVM: מיקרוסקופיה תוך-חיונית של 2 פוטונים, RFP: חלבון פלואורסצנטי אדום, GBM: גליובלסטומה, FITC: איזותיוציאנט פלואורסצאין, NP: ננו-חלקיקים. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66304/66304fig03large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
קובץ קידוד משלים 1: קובץ CAD תלת ממדי של השלב. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66304/custom%20stage%203D%20CAD.zip" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.</a>

אנו מציגים גישה חדשנית למיקרוסקופ דו-פוטוני של העברת הגידול של ננו-חלקיקי תחמוצת ברזל עם תווית פלואורסצנטית לגליובלסטומה במודל עכבר.

The delivery of intravenously administered cancer therapeutics to brain tumors is limited by the blood-brain barrier. A method to directly image the ...

גליובלסטומה הוא אחד מסוגי סרטן המוח הראשוניים הנפוצים ביותר והוא קשור לגדילה מהירה ולתוחלת חיים ירודה. פיתוח טיפולים יעילים לגליובלסטומה נותר אתגר גדול מכיוון שמתן טיפולים מוגבל על ידי מחסום הדם במוח. שיטה להדמיה ישירה של הצטברות והפצה של מקרומולקולות במוח תשפר מאוד את יכולתנו להבין ולייעל את אספקת התרופות.מיקרוסקופ שני פוטונים מציע פתרון אלגנטי לחקר ההתפלגות בזמן אמת של ננו-חלקיקים במודל הפרה-קליני של גליובלסטומה. על ידי שינוי הננו-חלקיק המשמש במחקר זה, ניתן לחקור את המסירה של תרופות מועמדות שונות וטיפולים משולבים ברמה התאית והמולקולרית. בנוסף למיקרוסקופיה תוך-חיונית של שני פוטונים, רכיב תחמוצת הברזל של ננו-חלקיקים אלה מאפשר הדמיה רב-מודאלית באמצעות MRI או MPI.בעתיד, מתקני הדמיה יוכלו לשמש במימוש גילוי מוקדם לסרטן, ובכך להוביל לטיפולים יעילים יותר נגד ניאופלזיה ממאירה. דרך אחת להשיג זאת היא למזג מיקרוסקופיה תוך-חיונית של שני פוטונים עם שיטות הדמיה אחרות כגון טומוגרפיה של פליטת פוזיטרונים ואולטרסאונד פוטואקוסטי.

two-photon-intravital-microscopy-of-glioblastoma-in-a-murine-model

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

ההשתלה תוך גולגולתי של תאים לתוך GL261 C57BL / 6 עכברים מייצרת gliomas ממאיר לשחזר רבים מסימני ההיכר של multiforme glioblastoma האדם. השתמשנו GL261 התאים ביציבות להביע בלוציפראז כדי לאפשר לנו...

השרשה תוך גולגולתי עם 3D לאחר In vivo Bioluminescent הדמיה של gliomas Murine

אנו מתארים שיטה משולבת להשתלה המדויקת, stereotactic של תאי multiforme glioblastoma אדם לתוך המוח של עכברים בעירום וסידורי...

השרשה ותוך גולגולת Stereotactic<em&gt; בחי</em&gt; הדמית bioluminescent של xenografts גידול במערכת מודל עכבר של multiforme glioblastoma

בסרטון זה אנו מבצעים הדמיה תוך-חיונית של תאי סרטן שהוזרקו מראש במודל עכבר דרך חלון גולגולת מושתל. טכניקת הדמיה זו ברזולוציה גבוהה של קיטועי זמן מאפשרת לחקור התנהגות דינמית של תאים סרטניים בעכבר החי.

הדמיה תוך-חיונית מבוססת חלון גולגולת במודל עכבר: טכניקת הדמיה לחקר ההתנהגות של תאי סרטן שהוזרקו מראש במוח של מודל מורין

בסרטון זה, אנו מתארים טומוגרפיה מולקולרית פלואורסצנטית או FMT עבור הדמיה in vivo של גליובלסטומה מתויגת חלבון פלואורסצנטי xenografts במודלים עכבריים. הטכניקה שימושית להבהרת ההשפעות של טיפולים נגד גידולים ברמה המולקולרית.

טומוגרפיה מולקולרית פלואורסצנטית: טכניקת הדמיה עבור הדמיה In vivo של גליובלסטומה מתויגת חלבון פלואורסצנטי Xenografts במודל עכבר

מקור: Clark, A.J., et al. הדמיית ביולומינסנציה של מודל בעלי חיים בעלי יכולת חיסונית לגליובלסטומה. J. Vis. Exp. (2016)סרטון זה מדגים הדמיית ביולומינסנציה כדי לעקוב אחר התקדמות גליובלסטומה במודל עכבר בעל יכולת חיסונית, תוך שימוש בתאי גידול המבטאים לוציפראז ולוציפרין כדי לכמת את צמיחת הגידול באופן לא פולשני.

הדמיה ביולומינסנציה של מודל עכבר בעל יכולת חיסונית לגליובלסטומה

הקמנו מודל גליובלסטומה orthotopic קליפת המוח בעכברים לשני הפוטונים במיקרוסקופ intravital שמשחזר אילוצי biophysical בדרך כלל במשחק במהלך הצמיחה של הגידול. חלון זכוכית כרוני החלפת הגולגולת מעל לגידול מאפשר המעקב של התקדמות הגידול לאורך זמן על ידי שני פוטונים במיקרוסקופ.

Glioblastoma עכבר דגם orthotopic שמירה על אילוצי המוח של רקמת ריאה, פיסיים ומתאים לשני פוטונים במיקרוסקופ Intravital

תאי גליומה GL261 מספקים מודל שימושי של בעלי חיים בעלי יכולת חיסונית של גליובלסטומה. מטרות פרוטוקול זה הן להדגים טכניקות מתאימות לניטור צמיחת גידול תוך גולגולתי באמצעות הדמיית ביולומינסנציה in vivo, ולאמת את התועלת של תאי GL261 שעברו שינוי בלוציפראז לחקר אימונולוגיה של גידול וגישות אימונותרפיות לטיפול בגליובלסטומה.

הדמיה פליטת אור של דגם עם מערכת חיסון בבעלי חיים לגליובלסטומה

הזרקה תוך-גולגולתי Orthotopic של תאים סרטניים שימש בחקר הסרטן ללמוד ביולוגיה גידול במוח, התקדמות, התפתחות, תגובה טיפולית. כאן אנו מציגים פלורסצנטיות מולקולרית טומוגרפיה של גידול xenografts, אשר מספק הדמיה intravital בזמן אמת, כימות של גידול המוני במודלים פרה גליובלסטומה.

קרינה פלואורסצנטית טומוגרפיה מולקולרית עבור הדמיה In Vivo של גליובלסטומה Xenografts

הבנת ההתנהגות הממאירה של סרטן דורשת יצירת מודלים מדויקים של האופן שבו תאי הגידול מתקשרים עם מרכיבים של מיקרו-סביבת הגידול, כגון מקרופאגים. כאן אנו מתארים שתי שיטות לחקר אינטראקציה של תאי גליובלסטומה עם מקרופאגים ומיקרוגליה הקשורים לגידול שבהם מוערכת ההשפעה על פלישת גליובלסטומה.

מבחני Coculture ללמוד מקרופאג Microglia גירוי של גליובלסטומה הפלישה

פרוטוקול זה מתאר את השימוש במיקרוסקופיה מולטיפוטונית לביצוע הדמיה ארוכת טווח ברזולוציה גבוהה של תא בודד של הריאה השלמה בזמן אמת באמצעות חלון הדמיה מיוצב ואקום.

לטווח ארוך ברזולוציה גבוהה מיקרוסקופית Intravital בריאה עם חלון הדמיה מיוצב אבק

חקור מיקרוסקופיה דו-פוטונית תוך-חיונית להדמיית ננו-חלקיקי תחמוצת ברזל בגליובלסטומה במודל מורין. שיטה זו מאפשרת הבנה מעמיקה של מנגנוני מסירת תרופות דרך מחסום הדם-מוח.

מיקרוסקופיה תוך-חיונית דו-פוטונית של גליובלסטומה במודל מורין

גלה סרטונים נוספים