Name: זילוח כירורגי ובידוד הלבלב החזירי לבידוד האי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-06-07T13:50:00.000+00:00
Duration: 8 min 32 s
Description: למדו שיטת זילוח כירורגי לבידוד איים בלבלב חזירי תוך מזעור נזק איסכמי ומכני. הפרוטוקול מספק אסטרטגיות לעיכול יעיל ולתפוקה גבוהה של איים לשימוש בקסנו-השתלות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>טיהור איים חזיריים על ידי זילוח כירורגי של לבלב חזיר

<ol><li>Gillespie, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+1+diabetes%3A+pathogenesis+and+prevention%5BTitle%5D)+AND+%22CMAJ%22%5BJournal%5D)">Type 1 diabetes: pathogenesis and prevention.</a> CMAJ. 175 (2), 165-170 (2006).</li>
<li>Shapiro, A. M., Pokrywczynska, M., Ricordi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+pancreatic+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Clinical pancreatic islet transplantation.</a> Nat Rev Endocrinol. 13 (5), 268-277 (2017).</li>
<li>Shapiro, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Islet+transplantation+in+seven+patients+with+type+1+diabetes+mellitus+using+a+glucocorticoid-free+immunosuppressive+regimen%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen.</a> N Engl J Med. 343 (4), 230-238 (2000).</li>
<li>Anazawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+method+of+porcine+pancreas+procurement+with+arterial+flush+and+ductal+injection+enhances+islet+isolation+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Improved method of porcine pancreas procurement with arterial flush and ductal injection enhances islet isolation outcome.</a> Transplant Proc. 42 (6), 2032-2035 (2010).</li>
<li>Dufrane, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parameters+favouring+successful+adult+pig+islet+isolations+for+xenotransplantation+in+pig-to-primate+models%5BTitle%5D)+AND+%22Xenotransplantation%22%5BJournal%5D)">Parameters favouring successful adult pig islet isolations for xenotransplantation in pig-to-primate models.</a> Xenotransplantation. 13 (3), 204-214 (2006).</li>
<li>Hilling, D. E., Rijkelijkhuizen, J. K., Tons, H. A., Terpstra, O. T., Bouwman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porcine+islet+isolation+outcome+is+not+affected+by+the+amount+and+distribution+of+collagen+in+the+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Xenotransplantation%22%5BJournal%5D)">Porcine islet isolation outcome is not affected by the amount and distribution of collagen in the pancreas.</a> Xenotransplantation. 17 (3), 250-255 (2010).</li>
<li>Lamb, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+maturation+of+viable+islets+from+partially+digested+young+pig+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">In vitro maturation of viable islets from partially digested young pig pancreas.</a> Cell Transplant. 23 (3), 263-272 (2014).</li>
<li>Otsuka, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreas+preservation+with+a+neutrophil+elastase+inhibitor%2C+alvelestat%2C+contributes+to+improvement+of+porcine+islet+isolation+and+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Med%22%5BJournal%5D)">Pancreas preservation with a neutrophil elastase inhibitor, alvelestat, contributes to improvement of porcine islet isolation and transplantation.</a> J Clin Med. 11 (15), 4290(2022).</li>
<li>Vanderschelden, R., Sathialingam, M., Alexander, M., Lakey, J. R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cost+and+scalability+analysis+of+porcine+islet+isolation+for+islet+transplantation%3A+comparison+of+juvenile%2C+neonatal+and+adult+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Cost and scalability analysis of porcine islet isolation for islet transplantation: comparison of juvenile, neonatal and adult pigs.</a> Cell Transplant. 28 (7), 967-972 (2019).</li>
<li>Weegman, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature+profiles+of+different+cooling+methods+in+porcine+pancreas+procurement%5BTitle%5D)+AND+%22Xenotransplantation%22%5BJournal%5D)">Temperature profiles of different cooling methods in porcine pancreas procurement.</a> Xenotransplantation. 21 (6), 574-581 (2014).</li>
<li>Hart, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+an+adequate+perfusion+pressure+for+continuous+dual+vessel+hypothermic+machine+perfusion+of+the+rat+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Transpl+Int%22%5BJournal%5D)">Determination of an adequate perfusion pressure for continuous dual vessel hypothermic machine perfusion of the rat liver.</a> Transpl Int. 20 (4), 343-352 (2007).</li>
<li>Tullius, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accumulation+of+crystal+deposits+in+abdominal+organs+following+perfusion+with+defrosted+University+of+Wisconsin+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Accumulation of crystal deposits in abdominal organs following perfusion with defrosted University of Wisconsin solutions.</a> Am J Transplant. 2 (7), 627-630 (2002).</li>
<li>Ching, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reliable+method+for+isolation+of+viable+porcine+islet+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Surg%22%5BJournal%5D)">A reliable method for isolation of viable porcine islet cells.</a> Arch Surg. 136 (3), 276-279 (2001).</li>
<li>Lu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+pig+islet+isolation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Adult pig islet isolation.</a> J Vis Exp. (176), (2021).</li>
<li>Taylor, M. J., Baicu, S., Greene, E., Vazquez, A., Brassil, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Islet+isolation+from+juvenile+porcine+pancreas+after+24-h+hypothermic+machine+perfusion+preservation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Islet isolation from juvenile porcine pancreas after 24-h hypothermic machine perfusion preservation.</a> Cell Transplant. 19 (5), 613-628 (2010).</li>
<li>Iwanaga, Y., Sutherland, D. E., Harmon, J. V., Papas, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreas+preservation+for+pancreas+and+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Organ+Transplant%22%5BJournal%5D)">Pancreas preservation for pancreas and islet transplantation.</a> Curr Opin Organ Transplant. 13 (4), 445-451 (2008).</li>
<li>Pratschke, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+death+and+its+influence+on+donor+organ+quality+and+outcome+after+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Brain death and its influence on donor organ quality and outcome after transplantation.</a> Transplantation. 67 (3), 343-348 (1999).</li>
<li>vander Windt, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+islet+damage+after+direct+exposure+of+pig+islets+to+blood%3A+has+humoral+immunity+been+underestimated%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Early islet damage after direct exposure of pig islets to blood: has humoral immunity been underestimated.</a> Cell Transplant. 21 (8), 1791-1802 (2012).</li>
<li>Wright, M. J., Cavanagh, T. J., Fetterhoff, T. J., Wile, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+blood+content+on+porcine+pancreatic+dissociation+and+islet+yield%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Effect of blood content on porcine pancreatic dissociation and islet yield.</a> Transplant Proc. 26 (6), 3442(1994).</li>
<li>Toso, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+adult+porcine+islets+of+Langerhans%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Isolation of adult porcine islets of Langerhans.</a> Cell Transplant. 9 (3), 297-305 (2000).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 M NaOH, 100 מ"ל</td><td>Millipore Sigma</td><td>1310-73-2</td><td></td></tr><tr><td>10x HBSS, 500 מ"ל (15 עד 30 מעלות; C)</td> <td>תרמו פישר</td><td>14065056</td><td></td></tr><tr><td>1x D-PBS, 500 מ"ל</td><td>תרמו פישר</td><td>14200075</td><td></td></tr><tr><td>1x HBSS, 1 ליטר</td><td>תרמו פישר</td><td>14025076</td><td></td></tr><tr><td>250 מ"ל צינורות חרוטיים</td><td>Millipore Sigma</td><td>CLS430236-6EA</td><td></td></tr><tr><td>אמפוטריצין B [50 מ"ג]</td> <td>Millipore Sigma</td><td>PHR1662</td><td></td></tr><tr><td>אנטיספטי פובידון יוד 10%</td> <td>Millipore Sigma</td><td>25655-41-8</td><td></td></tr><tr><td>BioRad Gradient לשעבר</td><td>BioRad</td><td>395</td><td></td></tr><tr><td>סידן כלוריד דיהידרט</td><td>תרמו פישר</td><td>10035-04-8</td><td></td></tr><tr><td>מעבד תאים</td><td>COBE Ebay</td><td>317690&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>מאגר מעגל עיכול, בקבוק ג'יבקו, 1 ליטר</td><td>תרמו פישר</td><td>10341001</td><td></td></tr><tr><td>דימתילסולפוקסיד (DMSO)Thermo</td> <td>Fisher</td><td>85190</td><td></td></tr><tr><td>Dithizone</td><td>Thermo Fisher</td><td>60-10-6</td><td></td></tr><tr><td>שיפוע ערכת חיבור לשעבר</td><td>BioRad</td><td>1652008</td><td></td></tr><tr><td>Heparin [1000 U/mL]</td> <td>מוצרי רפואת חירום</td><td>0409-2720-01</td><td></td></tr><tr><td>HEPES Buffer (1 מ '), 100 מ"ל</td><td>תרמו פישר</td><td>15630080</td><td></td></tr><tr><td>סרום אנושי אלבומין 25%, 100 מ"ל</td><td>Celprogen</td><td>HSA2001-25-1</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Covetrus</td><td>פריט#:11695067772</td><td></td></tr><tr><td>קטמין</td><td>פטרסון</td><td>פריט #:07-894-8462</td><td></td></tr><tr><td>ליבראז (100 מ"ג)</td><td>Millipore Sigma</td><td>5401020001</td><td></td></tr><tr><td>חי/מת ערכת כדאיות/ציטוטוקסיות</td><td>תרמו פישר</td><td>L3224</td><td></td></tr><tr><td>לימפוליט 1.1 מדיה 500 מ"ל</td><td>Cedarlane Labs</td><td>CL5020</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex LS 16 צינורות</td><td>מאסטרפל</td><td>96419-16</td><td></td></tr><tr><td>משאבה פריסטלטית Masterflex</td><td></td><td>Masterflex 07522-30</td><td></td></tr><tr><td>PenStrep (2 מ"ג/מ"ל)</td><td>Celprogen</td><td>PS-30-002</td><td></td></tr><tr><td>Pulmozyme (1 מ"ג/מ"ל, 2.5 מ"ל/בקבוקון)</td><td>Dornase Alfa</td><td>8931278</td><td></td></tr><tr><td>Recovery Medium, PIM(R)</td><td>Prodo Laboratories, Inc.</td><td>PIM-R001GMP</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Millipore Sigma</td><td>R8758-1L</td><td></td></tr><tr><td>מדיום תרבית סטנדרטי, PIM(S)</td><td>Prodo Laboratories, Inc.</td><td>PIM-S001GMP</td><td></td></tr><tr><td>Tzed&trade; (טילטמין וזולאזפאם) הזרקה C</td><td>פטרסון</td><td>פריט #:07-894-6240</td><td></td></tr><tr><td>פתרון אוניברסיטת ויסקונסין (UW), 3 L</td><td>Global Transplant Solutions</td><td>1000-0046-06</td><td></td></tr><tr><td>Waterbath</td><td>Sigma Alderich</td><td>CLS6783-1EA</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Patterson</td><td>פריט #:07-891-6165</td><td></td></tr></tbody></table>

זילוח כירורגי ובידוד הלבלב החזירי לבידוד האי

Surgical Perfusion and Isolation of the Porcine Pancreas for Islet Isolation

מערך הניתוח והלפרוטומיה של קו האמצע מוצגים באיור 1. חתך הלפרוטו צריך להיות מעוקל כדי למנוע את פתח האורגניטל (איור 1B). בעת הגדרת ה- retractor, חבר את העמוד עבור Omni או Bookwalter retractor לפינה השמאלית והנחותה של השולחן. נסיגה אידיאלית כוללת שני להבים נשלפים עבור דופן הבטן הימנית, שניים עבור דופן הבטן השמאלית, ו-1-2 עבור המעי הגס הימני והמעי הדק העטופים במגבת סטרילית (איור 1C). ניתן להשתמש בלהבי קיר גוף, ספלנצ'ניים או נשלפים, בהתאם לזמינות העוזר והעדפת המפעיל. אם אין אפשרות לשלוף אומני או בוקוולטר (Bookwalter retractor), ניתן להשתמש ב-1-2 מחזירי בלפור התומכים בעצמם כדי למשוך את דופן הבטן משני הצדדים. לאחר מכן עוזר יכול להחיל נסיגה על המעי הגס הימני והמעי הדק עטוף במגבת סטרילית.
הדיסקציה הרטרופריטוניאלית המבוצעת באיור 2 יכולה להתבצע בשילוב של דיסקציה קהה וחדה. אמנם חשוב להשיג שליטה היקפית של IVC אינפרא כלייתי ואבי העורקים, אך אין צורך להמשיך בדיסקציה זו עד הביפורקציה. החלק התוך-חזי של ההליך הוא המאתגר ביותר מבחינה טכנית (איור 3), שכן פגיעה ב-IVC תוך-חזי או רטרוהפטי עלולה לגרום לדימום משמעותי ולטשטש את שדה הניתוח. בעת זיהוי אבי העורקים החזי היורד, יש להפריד בבוטות בין אבי העורקים לוושט באמצעות האגודל והאצבע המורה. כדי למנוע את הפגיעה בעורקים הבין-קוסטליים הקטנים ואת הדימום שלאחר מכן, שליטה היקפית אינה חיונית כל עוד אבי העורקים החזי היורד נגיש עם חלל מוגדר בבירור כדי להכיל מהדק אבי העורקים.
קנולציה של אבי העורקים האינפרא-כלייתי מבוצעת בטכניקת סלדינגר (איור 4). ניתן לעשות זאת כאשר אבי העורקים האינפרא-כלייתי מהודק באופן קרוב ומרוחק (איור 4A), או ישירות ללא הידוק. היזהר לא להחדיר את המחט דרך הקיר האחורי של אבי העורקים. נדן גדול יותר יכול לשמש גם אם אבי העורקים הוא בגודל מספיק. חשוב לטהר את האוויר מהצינור המאריך IV ולחבר את צינור העירוי מתמיסת UW לנדן 10Fr בצורה סטרילית. ודאו שתעלת העירוי פתוחה, אם כי הזרימה לא תתחיל עד שאבי העורקים יהיה מהודק (איור 4B). בעת ביצוע הוורונוטומיה ב- IVC אינפרא כלייתי, חשוב שהמנתח הראשי יאחז היטב את ה- IVC באמצעות מלקחיים DeBakey, כדי לא לאבד את אתר הוורונוטומיה ולגרום לנפח דם גדול להישפך לשדה הניתוח. ארס הרחק מהלבלב, עם מיקום מהיר של יניקה בבריכה, שומר על שדה ניתוחי ללא דם עם מישורי רקמה ברורים עבור כריתת הלבלב (איור 4C). הניקוז הראשוני יהיה דם ורידי כהה, אך זה יתבהר כאשר החזיר מנוקד ותמיסת UW מחוררת דרך הקרביים. הקפד להשתמש במיכל יניקה גדול עבור חלק זה של ההליך.
הקרביים, ובמיוחד הלבלב, נעשים חיוורים יותר ויותר ככל שתמיסת ה-UW מחוררת (איור 5A). ניתן לזהות את צינור הלבלב על ידי מעקב אחר מהלך האונה התריסריון לתוך התריסריון. יש לחלק את הצינור בין שני קשרי משי כדי למנוע זיהום בתוכן אנטרי (איור 5B). בעוד שפרנכימת הלבלב צריכה להיראות חיוורת וחסרת דם, יש לנקות את רקמת החיבור הנותרת המקיפה את הלבלב לפני בידוד האיון (איור 5C).
לאחר מכן הלבלב שנקטף יכול לעבור תהליך בידוד וטיהור רב-שלבי של איונים (איור 6). איור 7A מראה את התפלגות גודל האיון המייצג לאחר תהליך הבידוד והטיהור של האיונים. איור 7B מראה איים מטוהרים באמצעות מיקרוסקופ שדה בהיר, ולאחר צביעה חיה/מתה, עם כתמים ירוקים ואדומים המייצגים תאי איון בני קיימא ולא בני קיימא, בהתאמה. ניתן להעריך את התשואה והטוהר של האי באמצעות מונה תאי איון. יבולים מייצגים מסופקים משלושה בידודים בלתי תלויים של לבלב חזירי המסוכמים באיור 7C.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66350/66350fig01.jpg"> איור 1: מערך אופרטיבי. (A) חזיר הממוקם במצב שכיבה כשהבטן מוכנה באופן סטרילי; (B) לפרוטומיה בקו האמצע העשויה מקסיפואיד לערווה; (C) רטרופריטונאום חשוף עם Omni retractor במקום. פסי קנה מידה = 2 ס"מ. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66350/66350fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66350/66350fig02.jpg"> איור 2: דיסקציה רטרופריטוניאלית. (A) דיסקציה רטרופריטונאלית עם בקרה היקפית של IVC אינפרא כלייתי וורידי הכליה. המלבן הצהוב מוגדל באיור 2B; (B) תמונה מוגדלת של IVC אינפרא כלייתי וורידי כליות; (C) ורידים כלייתיים קשורים. פסי קנה מידה = 2 ס"מ. קיצור: IVC = נבוב ורידי נחות. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66350/66350fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66350/66350fig03.jpg"> איור 3: השגת שליטה סופרצליאק. (A) חצי הסרעפת הימנית חתוכה. הריבוע הצהוב מוגדל באיור 3B; (B) הרחבה של חתך בהמידיאפרגמה הימנית לחשיפת IVC תוך חזי ואבי העורקים החזי היורד; (C) בקרה היקפית של IVC intrathoracic שהתקבל. פסי קנה מידה = 2 ס"מ. קיצור: IVC = נבוב ורידי נחות. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66350/66350fig03large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66350/66350fig04.jpg"> איור 4: קנולציה אינפרא-כלייתית של אבי העורקים, בידוד ויסצרלי וזילוח. (A) בקרה פרוקסימלית ודיסטלית של אבי העורקים האינפרא-כלייתי המתקבל; (B) נדן 10Fr שהונח באבי העורקים האינפרא-כלייתי בטכניקת סלדינגר; (C) זילוח ויסצרלי דרך נדן אבי העורקים האינפרא-כלייתי וניקוז באמצעות ארס ומוצץ בריכה ב- IVC אינפרא כלייתי. פסי קנה מידה = 2 ס"מ. קיצור: IVC = נבוב ורידי נחות. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66350/66350fig04large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66350/66350fig05.jpg"> איור 5: כריתת פנקטומיה כוללת. (A) הקרביים נעשים חיוורים יותר במהלך הזילוח; (ב) צינור לבלב מבודד; (C) לבלב חזירי נטוע. פסי קנה מידה = 2 ס"מ. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66350/66350fig05large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66350/66350fig06.jpg"> איור 6: בידוד וטיהור של איילט. תיאור סכמטי של עירוי תמיסת אנזים, עיכול לבלב חזירי, איסוף רקמות, שטיפת תאים עם מעבד תאים, תרבית תאים ואנליזה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66350/66350fig06large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66350/66350fig07.jpg"> איור 7: כדאיות ותפוקת איים מייצגים לאחר טיהור. (A) איים חזיריים לאחר הדמיית שדה בהיר מוגדל וצביעה חיה/מתה. ירוק מדגים תאים חיים; אדום מדגים תאים מתים. פסי קנה מידה = 100μm (B) התפלגות היסטוגרמה של גודל אי חזירי לאחר טיהור. (C) טבלה המציינת את טוהר האיון ותפוקתו משלושה בידודים של איוני לבלב חזיריים. קיצור: IEQ = שווה ערך לאיון, היחידה הסטנדרטית לכימות איונים. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66350/66350fig07large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>

Pancreatic islet transplantation is an emerging treatment for type I diabetes; however, it is limited by donor matching and availability. Porcine islet ...

surgical-perfusion-isolation-porcine-pancreas-for-islet

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

השגת איכות גבוהה וכמות נאותה של איים האנושי הוא אחד התנאים המוקדמים הבולטים איון להשתלה מוצלחת. בסרטון הזה, אנו מתארים צעד אחר צעד את נוהלי בידוד איון האדם הלבלב (אני חלק: העיכול אוסף של רקמת לבלב) בשיטה אוטומטית שונה.

בידוד האדם לבלב: אני חלק: העיכול אוסף של רקמת לבלב

אספקת 2 איים סוכרת סוג למחקר אינה מספיקה. כאן אנו חולקים פרוטוקול שלנו לבידוד איים של חולים שעברו pancreatectomy חלקית. גישה זו מהווה מקום מפגש ייחודי לקבלת איים של סוכרת מסוג 2 שאינם מתאימים קלינית סוכרת הנושאים במספרים נאותה מחקרים בסיסיים וקליניים.

הבידוד של איי האדם מן המטופלים Pancreatectomized חלקית

איי הלבלב, המכונים גם איי לנגרהנס, הם אשכול של תאים אנדוקריניים המייצר הורמונים לוויסות גלוקוז ופונקציות ביולוגיות חשובות אחרות. פרוטוקול זה מסביר שיטה לבידוד איי הלבלב על ידי החדרת קולגנאז תחילה דרך אמפולה של Vater כדי לעכל את רקמת הלבלב האקסוקרינית וצנטריפוגה הדרגתית צפיפות פשוטה כדי לטהר את האיים מעכברים.

בידוד איי הלבלב באמצעות זילוח Collagenase: שיטה אנזימטית לבידוד תאי איון הלבלב

אנו מתארים פרוטוקול בזאת לבידוד איים שלמים מעכברים בילוד. Pancreata היו מעוכל חלקית עם collagenase, ואחריו כביסה בחירה ידנית. 20 - 80 אשכולות איון ניתן להשיג לכל לבלב מעכברים שזה עתה נולדו, אשר מתאימים מספר מחקרי איון.

בידוד יעיל של איי פונקציונלית מן היילודים עכבר לבלב

זה פרוטוקול בידוד של איון תיאר תוואי הרומן של הזרקה הקולגן כדי לעכל את רקמת אקסוקרינית הליך מעבר הדרגתי פשוטה כדי לטהר את איונים מעכברים. זה כרוך בעיכול אנזימטי, הפרדת הדרגתי/טיהור, ואיסוף ביד איון. בידוד מוצלח יכול להניב 250 – 350 באיכות גבוהה, באופן מלא של איונים לכל עכבר.

פרוטוקול פשוט יעילות גבוהה לבידוד איון הלבלב של עכברים

הנדסת רקמות הלבלב כל היא אתגר פונקציות האנדוקרינית אקסוקרינית שלה. אנו מראים שיטת ניתוח הלבלב חזירי שלם של תהליך של decellularization מוצלחת מאת זלוף של דטרגנטים טריטון X-100, סודיום deoxycholate, ואת deoxyribonuclease.

בידוד, Decellularization פוג'אלאדוצ'נוי זהאלאזי כל חזירי

מאמר הווידאו מסכם את הטכניקה של כריתת לבלב והשתלת לבלב במודל הישרדות חזירי של 3 ימים עם תיאור שלב אחר שלב של השיטה ודגש על הטיפים והטריקים הכירורגיים להתמודדות עם האנטומיה הקרבית החזירית הרעועה והעדינה.

טיפים כירורגיים וטריקים לביצוע השתלת לבלב חזיר

כאן, אנו מספקים פרטים על ביצוע הפרשת אינסולין מגורה גלוקוז (GSIS) באמצעות זלוף דרך כלי הדם של העכברים עם לבלב שלם כטכניקה נוספת להערכת תפקוד הלבלב האנדוקריני עם הפחתת מבלבלים אפשריים.

הפרשת אינסולין מגורה על ידי גלוקוז באמצעות זלוף דרך כלי הדם של העכברים עם לבלב שלם

מחקר זה פיתח שיטה פשוטה לחילוץ יעיל של איים ראשוניים תפקודיים ותאי אקינר מהלבלב בעכבר, ומציע כלי חשוב לחקר תקשורת בין-תאית בפתוגנזה של סוכרת מונעת מדלקת לבלב חריפה.

שיטה פשוטה ומהירה לבידוד סימולטני של איים ראשוניים ותאי אצינר ראשוניים בלבלב מעכברים

פרוטוקול זה מתאר שיטה סטנדרטית לקציר כירורגי, עיכול אנזימטי וטיהור גרדיאנט צפיפות של איי הלבלב של עכברוש לואיס, המאפשר הכנות בעלות תפוקה גבוהה וטוהר לשימוש ישיר בהשתלות או במחקרים במבחנה .

בידוד וטיהור איי הלבלב מחולדות לואיס באמצעות עיכול אנזימטי והפרדה בין צפיפות לגרדיאנט

למדו שיטת זילוח כירורגי לבידוד איים בלבלב חזירי תוך מזעור נזק איסכמי ומכני. הפרוטוקול מספק אסטרטגיות לעיכול יעיל ולתפוקה גבוהה של איים לשימוש בקסנו-השתלות.

זילוח כירורגי ובידוד הלבלב החזירי לבידוד האי

גלה סרטונים נוספים