Name: מודל Ileus Murine לאחר הניתוח (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-07-12T13:10:00.000+00:00
Duration: 4 min 26 s
Description: למדו כיצד ליצור מודל עכברים לאיליאוס לאחר ניתוח באמצעות מניפולציה מעיים. שיטה זו מאפשרת חקר פיזיולוגיית מחלה ופיתוח טיפולים אנטי-דלקתיים חדשניים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>מודל מורין לחקר אילאוס לאחר הניתוח באמצעות מניפולציה במעיים

<ol><li>Chapman, S. J., Pericleous, A., Downey, C., Jayne, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postoperative+ileus+following+major+colorectal+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Postoperative ileus following major colorectal surgery.</a> Br J Surg. 105 (7), 797-810 (2018).</li>
<li>Farro, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CCR2-dependent+monocyte-derived+macrophages+resolve+inflammation+and+restore+gut+motility+in+postoperative+ileus%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">CCR2-dependent monocyte-derived macrophages resolve inflammation and restore gut motility in postoperative ileus.</a> Gut. 66 (12), 2098-2109 (2017).</li>
<li>Wouters, M. M., Vicario, M., Santos, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+mast+cells+in+functional+GI+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">The role of mast cells in functional GI disorders.</a> Gut. 65 (1), 155-168 (2016).</li>
<li>Engel, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+helper+type+1+memory+cells+disseminate+postoperative+ileus+over+the+entire+intestinal+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">T helper type 1 memory cells disseminate postoperative ileus over the entire intestinal tract.</a> Nat Med. 16 (12), 1407-1413 (2010).</li>
<li>Schwartz, C., Voehringer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+murine+basophils+by+flow+cytometry+and+histology%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Identification of murine basophils by flow cytometry and histology.</a> Methods Mol Biol. 2163, 367-375 (2020).</li>
<li>Funk, E. K., Weissbrod, P., Horgan, S., Orosco, R. K., Califano, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+experience+with+a+novel+single-port+platform+for+transoral+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Surg+Endosc%22%5BJournal%5D)">Preclinical experience with a novel single-port platform for transoral surgery.</a> Surg Endosc. 35 (8), 4857-4864 (2021).</li>
<li>Nemoto, S., Mailloux, A. W., Kroeger, J., Mulé, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OMIP-031%3A+Immunologic+checkpoint+expression+on+murine+effector+and+memory+T-cell+subsets%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">OMIP-031: Immunologic checkpoint expression on murine effector and memory T-cell subsets.</a> Cytometry A. 89 (5), 427-429 (2016).</li>
<li>Brandi, J., Wiethe, C., Riehn, M., Jacobs, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OMIP-93%3A+A+41-color+high+parameter+panel+to+characterize+various+co-inhibitory+molecules+and+their+ligands+in+the+lymphoid+and+myeloid+compartment+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">OMIP-93: A 41-color high parameter panel to characterize various co-inhibitory molecules and their ligands in the lymphoid and myeloid compartment in mice.</a> Cytometry A. 103 (8), 624-630 (2023).</li>
<li>Swidsinski, A., Weber, J., Loening-Baucke, V., Hale, L. P., Lochs, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+organization+and+composition+of+the+mucosal+flora+in+patients+with+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Spatial organization and composition of the mucosal flora in patients with inflammatory bowel disease.</a> J Clin Microbiol. 43 (7), 3380-3389 (2005).</li>
<li>Bialkowska, A. B., Ghaleb, A. M., Nandan, M. O., Yang, V. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+Swiss-rolling+technique+for+intestinal+tissue+preparation+for+immunohistochemical+and+immunofluorescent+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Improved Swiss-rolling technique for intestinal tissue preparation for immunohistochemical and immunofluorescent analyses.</a> J Vis Exp. (113), e54161(2016).</li>
<li>van Bree, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+method+for+studying+postoperative+ileus+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Physiol+Pathophysiol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Novel method for studying postoperative ileus in mice.</a> Int J Physiol Pathophysiol Pharmacol. 4 (4), 219-227 (2012).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 M HEPES</td><td>תרמו</td><td>15630080</td><td></td></tr><tr><td>APC נגד עכבר I-A/I-E (MHC-II)Biolegend</td><td></td> <td>107614</td><td></td></tr><tr><td>APC נגד עכבר TCRb</td><td>Biolegend</td><td>109212</td><td></td></tr><tr><td>APC/Cy7 נגד עכבר CD4</td><td>Biolegend</td><td>100414</td><td></td></tr><tr><td>APC/Cy7 נגד עכבר Ly6G</td><td>Biolegend</td><td>127624</td><td></td></tr><tr><td>סגול מבריק 421 נגד עכבר CD69</td><td>Biolegend</td><td>104545</td><td></td></tr><tr><td>סגול מבריק 421 נגד עכבר F4/80</td><td>Biolegend</td><td>123132</td><td></td></tr><tr><td>סגול מבריק 785 נגד עכבר/אנושי CD44</td><td>Biolegend</td><td>103041</td><td></td></tr><tr><td>BUV395 נגד עכבר CD8a</td><td>BD</td><td>563786</td><td></td></tr><tr><td>BUV737 נגד עכבר CD3e</td><td>BD</td><td>612771</td><td></td></tr><tr><td>קולגנאז IV</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>C5138</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ תרבית</td><td>CKX53</td><td>אולימפוס</td><td></td></tr><tr><td>דאוקסיריבונוקלאז I מלבלב בקר (<חזק>DNase I</חזק>)</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>DN25-5G</td><td></td></tr><tr><td>DL-Dithiothreitol תמיסת</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>43816-10ML</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>EDS-100G</td><td></td></tr><tr><td>FITC נגד עכבר CD45</td><td>Biolegend</td><td></td><td></td>147709</tr><tr><td>FITC-dextran (70 kWM)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>FD70-100MG</td><td>בדיקת מעבר במערכת העיכול</td></tr><tr><td>HE ערכת צביעה</td><td>solarbio</td><td>G1120</td><td></td></tr><tr><td>PE נגד עכבר CD11b</td><td>Biolegend</td><td>101208</td><td></td></tr><tr><td>PE נגד עכבר PD-1</td><td>Biolegend</td><td>114118</td><td></td></tr><tr><td>PE/Cy7 נגד עכבר CD11c</td><td>Biolegend</td><td>117318</td><td></td></tr><tr><td>Percoll</td><td>GE (Pharmacia)</td><td>17-0891-01</td><td></td></tr><tr><td>Symphony A5 ציטומטר זרימה</td><td>BD-זיהוי</td><td></td> <td>ומיון של תאים חיסוניים</td></tr><tr><td>Tribromoethanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T48402</td><td>הרדמה</td></tr><tr><td>Varioskan LUX</td><td>Thermo</td><td>N16699</td><td>קורא מיקרו-פלטות מולטימוד</td></tr><tr><td>זומבי אקווה ערכת כדאיות ניתנת לתיקון</td><td>Biolegend</td><td>423102</td><td>פלואורסצנטי צבע כדאיות&nbsp;</td></tr></tbody></table>

מודל ileus murine לאחר הניתוח

Postoperative Ileus Murine Model

בפרוטוקול זה, POI נגרם בניתוח על ידי מניפולציה במעיים (IM), הדומה להשפעה של ניתוח קליני. בקבוצת הדמה, בוצע חתך ללא IM. עכברי POI הוקרבו 24 שעות לאחר ניתוח POI יחד עם עכברי בקרת דמה. הפונקציה הקריטית של מערכת העיכול, תפקוד מעבר תוכן, זוהתה על ידי gavage של FITC-dextran. מודל POI נחשב מוצלח מאחר שעוצמת FITC עלתה בחלק הפרוקסימלי של המעי הדק (איור 2B). ממוצע GCs חושב כדי לכמת את תפקוד המעבר של IM ולציין את עקביות הפעולה (איור 2C).
צביעת HE הצביעה על המורפולוגיה של מקטעים שונים במערכת העיכול (איור 3). התת רירית ושכבת השריר החלק של התריסריון והאיליאום התנפחו 24 שעות לאחר השראת POI (איור 3A,B). בהשוואה לעכברים דמים, צביעת תריסריון HE חשפה חדירה מוגברת של תאי מערכת החיסון בעכברי POI (איור 3A).
ניתוח ציטומטרי של זרימה מרובת צבעים הוא השיטה המרכזית לניתוח הפרופורציה, המצב והתפקוד של תאי מערכת החיסון. רקמת המעי עוכלה עם collagenase ו deoxyribonuclease והופרד לתוך תרחיף תא יחיד עבור ציטומטריה זרימה. אסטרטגיית ה-gating שימשה לקביעת הפרופורציות של תאי CD3 T ותת-אוכלוסיות קשורות בין תאי LPL (איור 4A). סמן ההפעלה וההדבקה CD69 והביטוי של תאי CD4 T, תאי CD8 T ותאי gd T מווסתים בעכברי POI (איור 4B)7. באופן דומה, שיעור תת-האוכלוסייה CD44+ PD-1+ (הפעלה, התמיינות סופנית וסמן תשישות) הראה נטייה גוברת (איור 4C)7. בנוסף ללימפוציטים, הפרופורציות של תת-קבוצות תאים מיאלואידים (נויטרופילים, תאים דנדריטיים ומקרופאגים) גדלות גם הן לאחר ניתוח IM (איור 4D)8.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66465/66465fig1v2.jpg"> 
איור 1: מודל מורין של אילאוס לאחר ניתוח. (A) סכמטי של מודל מורין של אילאוס לאחר ניתוח. (B) קיבוע עכבר לאחר הרדמה וגילוח. (ג) החתך נחשף וכוסה בגזה רפואית סטרילית. (D) צינורות המעי נסחטו מחלל הבטן דרך חתך הבטן ונחשפו על ידי הנחתם על גזה סטרילית. (E) המעי הדק כולו נחשף לצמר גפן סטרילי לח. (F) שכבת השריר נסגרה בתפר כירורגי. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66465/66465fig1v2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66465/66465fig02v2.jpg"> 
איור 2: בדיקת מעבר במערכת העיכול להערכת תפקוד מערכת העיכול. ב-22.5 שעות לאחר הניתוח, עכברי הדמה או ה-POI קיבלו תמיסת FITC-דקסטרן והוקרבו 90 דקות לאחר מכן. (A) מערכת העיכול חולקה ל-15 מקטעים ומוספרה לפי מיקום פיזיולוגי. (B) עוצמת FITC של כל מקטע ממערכת העיכול של עכברי דמה ו-POI. (C) המרכזים הגיאומטריים של FITC-dextran המנוהל חושבו ומוצגים כחלקות כינור. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66465/66465fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66465/66465fig03.jpg"> 
איור 3: צביעה מייצגת של המעי הדק של עכברי POI. HE צביעה של חתכי רוחב של (A) תריסריון ו (B) ileum מעכברי דמה ו- POI. פסי קנה מידה: 100 מיקרומטר או 25 מיקרומטר (תמונה מוגדלת של הכניסה). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66465/66465fig03large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66465/66465fig04.jpg"> 
איור 4: אנליזה ציטומטרית של זרימה מייצגת של תאי מערכת החיסון של המעי הדק מעכברי POI. (A) אסטרטגיית גריטת ציטומטריה של זרימה עבור אוכלוסיות תאי T מרקמות מעי קטנות של עכברי POI 24 שעות לאחר הניתוח. (B) הפרופורציות של סמן פעיל תאי T CD69+ בתאי T CD4, תאי T CD8 ותאי T gd מהמעי הדק של עכברי דמה ונקודות עניין. (C) הפרופורציות של סמנים פעילים CD44+ PD-1+ בקרב תאי CD4 T, תאי CD8 T ותאי gd T במעי הדק של עכברי דמה ונקודות עניין. (D) הפרופורציות של נויטרופילים (Ly6G+ CD11b+), תאים דנדריטיים (CD11c + MHC-II+) ומקרופאגים (CD11b + F4/80+) בקרב CD45+ Aqua- תאים חיסוניים חיים מהמעי הדק של עכברי דמה ו- POI. המספר בכל חלונית מייצג את אחוז סוגי התאים המתאימים. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66465/66465fig04large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>

מודל Ileus Murine לאחר הניתוח

Most patients experience postoperative ileus (POI) after surgery, which is associated with increased morbidity, mortality, and hospitalization time. POI ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

ileus לאחר הניתוח (POI) הוא סיבוך של ניתוח בטן מוביל לתחלואה ואשפוז ממושך. בגלל אסטרטגיות מניעות או טיפול חסרות מחקר התעצם הוא הכרחי. לכן הקמנו מודל עכבר סטנדרטי וריאלי כדי לחקור את הפתופיזיולוגיה של POI וללמוד אפשרויות טיפוליות פוטנציאליות.

הערכה תפקודית של תנועתיות מעיים ודלקת דופן מעי במכרסמים: ניתוח בדגם סטנדרטי של מניפולצית מעיים

סרטון זה מתאר את הפרוטוקול המפורט לכריתת מעיים במודל מורין. טכניקה זו מספקת תובנות לגבי ספיגת מרה הנגרמת על ידי כריתת איליקטומיה, הצטברות יתר ורעילות במעי העכבר.

מודל כריתת אילים מורין: חקר מטבוליזם מרה המושרה על ידי איליקטומיה במודל מורין

כריתה אילאוקולית מבוצעת בדרך כלל במספר מחלות אנושיות; עם זאת, מעט ידוע על השפעת כריתת המעי על מחלות כירורגיות. מאמר זה מספק הדרכה לביצוע ההליך בעכברים בהצלחה גבוהה, ומספק אמצעי לחקר ההשפעות של כריתה אילאוקולית במודלים של מחלות.

עכברי Ileocolic מעי כריתה עם השקה ראשונית

מודל העכברים של חסימת שופכן חד צדדית בלתי הפיכה (UUO) מוצג יחד עם המודל של UUO הפיך שבו חסימת השופכן מוקלה על ידי אנסטומוזה של השופכן המנותק לשלפוחית השתן. מודלים אלה מאפשרים לחקור דלקת כליות וצלקות כמו גם עיצוב מחדש של רקמות.

דגם Murine של חסימת Ureteric חד-צדדית בלתי הפיכה והפיכה

כאן אנו מתארים את ההליך המפורט של reperfusion איסכמיה מעיים בעכברים שתוצאתה הפגיעה לשחזור ללא תמותה לעודד סטנדרטיזציה של טכניקה זו על פני השדה. מודל זה של פגיעת איסכמיה-רה-פרפוזיה במעי יכול להיות מנוצל כדי לחקור את המנגנונים התאיים ומולקולריים של פציעה והתחדשות.

דגם Murine של פגיעת המעיים איסכמיה reperfusion

חומצות מרה תלויי-המעי הדק התחדשות וניגוד משוב של סינתזה של חומצות מרה הכבד חשוב הומאוסטזיס מערכתית ובריאות. במחקר זה, נתאר מודל העכבר עבור כריתה ileal להעריך malabsorption מרה הנוצרות על-ידי ileectomy, overaccumulation, ורעילות במעי העכבר.

Ileectomy-induced מרה Overaccumulation במעי העכבר

חסימות מעיים הם סתימה חלקית או מלאה של המעי העלולה לגרום כאבי בטן, בחילות, הקאות, מניעת המעבר של צואה. ההליך ליצירת obsructions חלקי המעי בעכברים זה אמין בלימוד המנגנונים צמיחת תאים פתולוגיים ומוות במעי.

דגם העכבר של חסימת מעיים חלקית

מאתר למעי הגס דיסטלי מספק מודל מאתר הסחה האנושי קוליטיס, קוליטיס בעיקר לימפוציטית קטע המעי הגס נכללו הנחל צואה.

מאתר למעי הגס הדיסטלי, מודל הרומן של הסחה קוליטיס בעכברים C57BL/6

אנו מתארים בפירוט קלינית המעי הגס הרלבנטי סרטן הכבד גרורות (CRLM) הגידול מודל ההשפעה של איסכמיה של הכבד reperfusion (I/R) גידול גרורות. מודל זה יכול לעזור להבין טוב יותר את המנגנונים בבסיס קידום הניתוח המושרה של צמיחה גרורתית הכבד.

מודל מורנה של גידולים גרורות בכבד בהגדרה של איסכמיה Reperfusion פציעה

מעקף יחיד anastomosis duodeno-ileal (SADI-S) הוא הליך בריאטרי מתפתח עם השפעות מטבוליות חשובות. במאמר זה, אנו מציגים מודל אמין וניתן לשחזור של SADI-S בעכברים.

מעקף Duodeno-Ileal יחיד Anastomosis עם שרוול Gastrectomy דגם בעכברים

למדו כיצד ליצור מודל עכברים לאיליאוס לאחר ניתוח באמצעות מניפולציה מעיים. שיטה זו מאפשרת חקר פיזיולוגיית מחלה ופיתוח טיפולים אנטי-דלקתיים חדשניים.

מודל Ileus Murine לאחר הניתוח

גלה סרטונים נוספים