Name: טכניקות לדגימה מהירה של שישה איברים חיוניים בקסנופוס בוגר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-02-16T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 10 s
Description: למדו טכניקות לדגימה מהירה של שישה איברים חיוניים בקסנופוס בוגר, כולל חדר הלב, הכבד, הלבלב, גופי השומן, הכליות והעור. שיטות אלה מאפשרות איסוף רקמות סטנדרטי למחקר בביולוגיה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי R24OD031956 מענק OD של NIH. אנו מודים לסמנתה ג'לברט, ג'יל רלסטון וקורה אנדרסון על עזרתן ותמיכתן, כמו גם לעורך ולמבקרים עמיתים אנונימיים על המשוב המועיל שלהם

כל הניסויים בוצעו בהתאם לכללים ולתקנות של בית הספר לרפואה של הרווארד IACUC (הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים) (IS 00001365_3). התוצאות המייצגות מוצגות הן עבור זכר לבקנים בוגר והן עבור זכר לבקנים בוגר שאינו מחורר.
1. הכנה ניסיונית 
הערה: אם מתבצע פרוטוקול זילוח8 לפני הדגימה, דלג לשלב 2.2.
<ol><li>ודא שמוסד המחקר אישר את טכניקת המתת החסד המתוארת בפרוטוקול זה.</li>
	<li>הכינו תמיסה של 5 גרם/ליטר MS-222 (טריקאין מתאן-סולפונט) ו-5 גרם/ליטר סודיום ביקרבונט (ראו טבלת חומרים). הנפח חייב להיות גדול מהנפח הדרוש כדי לכסות את בעלי החיים המומתים לחלוטין. בדוק את ה- pH כדי לוודא שהוא ≥7.</li>
	<li>לבצע המתת חסד ראשונית על ידי הצבת Xenopus בתמיסת המתת חסד; בעל החיים יישאר שקוע במשך שעה אחת בסך הכל.</li>
	<li>הגדר את תחנת הדיסקציה כך שמיד לאחר הדגימה, ניתן יהיה לשטוף את כל הרקמות ב- PBS מקורר או 0.7x PBS9 (בהתאם לצרכי הניסוי), לבדוק ולקצץ תחת אור הגדלה פי 5 (או יותר). עמדה זו חייבת גם לאפשר למשתמש להחליף את כל המלקחיים והמספריים או לנגב אותם בין שימושים.</li>
	<li>לאחר שהצפרדע הייתה בתמיסה במשך שעה אחת, המתת חסד ראשונית הושלמה. הסר את הצפרדע ובדוק את אובדן תגובת הכאב על ידי ביצוע צביטה ברגל.</li>
	<li>רשום את הפרטים המתאימים לבעל החיים, כגון מין, זן, מין, גיל ומצב בריאותי, כמו גם אם הוא היה מחורר. שקול את ה- Xenopus ובצע מדידות נוספות, כגון אורך פתח החוטם.</li>
	<li>הניחו את הצפרדע על גבה והצמידו את הגפיים באופן פרוקסימלי לגוף (איור 1).</li>
	<li>בעזרת מספריים דיסקציה, לחתוך דרך העור, במעלה קו האמצע, ולאחר מכן לרוחב, עושה שני דשים.</li>
	<li>בהתייחס לאיור 2, זהו את linea alba והשתמשו במלקחיים כדי לתפוס אותו ולמשוך אותו הרחק מהחלל הקואלומי. חותכים דרך השרירים בזהירות באמצעות מספריים. צור שני דשים מקיר החלל. גזור או נעץ את כל הדשים מהדרך.</li>
	<li>זהה את הלב שעדיין פועם. השתמשו במספריים מנתחים כדי להקטין את עצמות הקוראקואיד (איור 2) כדי לקבל גישה טובה יותר ללב. הערה: אם הלב הפסיק לפעום לפני הדגימה, יש לציין כי טריות הדגימה נפגעה.</li>
</ol>2. דגימה
הערה: אם בעל החיים היה מחורר, דלג לשלב 2.2.
<ol><li>זהו את קרום הלב הדק ומשכו אותו מתוח בעזרת מלקחיים רקמתיים (איור 3).</li>
	<li>באמצעות קצה מספריים iridectomy, בעדינות לנקב את קרום הלב, נזהר לא לחתוך את הרקמות הבסיסיות. מקלפים את קרום הלב הרחק משלושת חדרי הלב.</li>
	<li>השתמשו במלקחיים כדי לתפוס את החדר לפי הקודקוד, לזהות היכן הוא מתחבר לגזע האאוריקלי ולגזע העורקי (איור 4), וחתכו אותו מתחת לחיבורים האלה (איור 5). במידת הצורך, חתכו את החדר כך שלא יראו רקמות מהאוריקלים או מגזע העורק, ורקמת שסתום בהירה עדיין תיראה בתוך החדר. הערה: בבעלי חיים שאינם מחוררים, הסרת החדר עשויה להיחשב כהמתת חסד משנית.</li>
	<li>3 האונות של הכבד ייראו (איור 6 ואיור 7). אחזו בשפה של האונה השמאלית (מימין לצופה) והרימו אותה בעדינות כך שצינורות הכבד והציסטיק יהיו גלויים לעין (איור 8). דגמו את 1/3 האונה התחתונה מתחת לקבצים המצורפים האלה (איור 9).</li>
	<li>כדי לקבל גישה טובה יותר לרקמות של צפרדע נקבה, כדאי להסיר את השחלה. זהה את השחלה אשר עטופה בשכבה של הצפק הקרבי הנקרא אפיתל הנבט. הזיזו בעדינות את האונות עד שהן נמצאות בצדדים שלהן כדי להפוך את אזור החיבור לגלוי (איור 10). חיבורים אלה הם גחונים ישירות לכליה הזוגית.</li>
	<li>בעזרת מספריים, הסירו את השחלות קרוב ככל האפשר לכליות מבלי לפגוע בהן (איור 11).</li>
	<li>בדקו את האונה האמצעית (שנקראת גם האונה הקדמית) של הכבד ושימו לב כיצד היא מתחברת לקיבה ולתריסריון דרך המזנטריה וצינור הפטופנקריאטי (שנקרא גם צינור המרה המשותף) (איור 6, איור 7 ואיור 8).</li>
	<li>לנתק את הרצועה mesentery, hepatoduodenal באמצעות מספריים iridectomy, כמו גם את צינור hepatopancreatic שבו הוא פוגש את התריסריון. נתקו את החיבור של הלבלב וצינור הכבד לאונה האמצעית של הכבד כך שלא תצורף רקמת כבד כהה (איור 12).</li>
	<li>אחוז את הבטן עם מלקחיים שיניים ואת הקצה העליון של הלבלב עם מלקחיים רקמות. תחת הגדלה של פי 5, הרחיקו בעדינות את הלבלב מהקיבה (איור 13). הערה: אם הוא לא יוצא בצורה נקייה, רקמת הלבלב הנותרת תהיה גלויה וניתן לקטוף אותה בשברים. לחלופין, ניתן לנתק את הלבלב באופן שיטתי באמצעות מספריים אירידקטומיים ומלקחיים רקמות.</li>
	<li>בהתייחס לאיור 14A, זהו את שלפוחית השתן והוציאו אותה, תוך חיתוך קרוב ככל האפשר לקלואקה. השליכו את הרקמה הזו.</li>
	<li>בהתייחס לאיור 14B, זהו את המעי הגס ומשכו אותו מתוח כדי לנתק את המעי הגס קרוב ככל האפשר לקלואקה. הסר והשליך את כל תעלת alimentary, ניתוק הצפק שבו הוא מתחבר לטחול. הגופות השמנות יהיו כעת נגישות במלואן.</li>
	<li>להקניט את הגופים השמנים כך שהם יהיו בצד שלהם. האזור מעל הכליה, שבו גוף השומן מתחבר לצפק, יהיה גלוי. אחזו בבסיס גוף השומן השמאלי (מימין לצופה) והשתמשו במספריים כדי לחתוך אותו מהצפק, תוך השארת שוליים קטנים כדי שהכליה לא תיפגע (איור 15).</li>
	<li>הסר והשלך את הגוף השמן שנותר. הכליות הזוגיות יהיו כעת גלויות במלואן.</li>
	<li>אצל נקבות צפרדעים או זכרים עם שרידי אובידוקט מובהקים, אחזו באובידוקט ומשכו אותו הרחק מהכליה ומהקלואקה (איור 16). חותכים את האובידוקט במקום שבו הוא פוגש את הקלואקה וממשיכים למשוך אותו הרחק מהכליה, חותכים את כל החיבורים הצפקיים הברורים כשהם מתגלים. השליכו את הרקמה הזו.</li>
	<li>חזור על תהליך זה עם האובידוקט הנותר.</li>
	<li>הכליות עדיין מכוסות בצפק שקוף (retroperitoneal)10. השתמש במלקחיים כדי לתפוס את הכליות ולנתק את הצפק בקצה התחתון שלהם.</li>
	<li>הרימו את הכליות מהחלל הקואלומי באמצעות מספריים כדי לנתק את הצפק קרוב ככל האפשר לכליות מבלי לפגוע בהן (איור 17).</li>
	<li>תחת הגדלה של פי 5, יש לחתוך את עודפי הצפק וכל רקמה אחרת שנותרה (גופי שומן, טחול). אם הצפרדע נקבה, יש לוודא שכל רקמת השחלה שנותרה מוסרת (איור 18). אם הצפרדע זכרית, הסירו בזהירות את האשכים ובדקו אם יש שריד של ביצית, שייתכן שלא ייראה לעין ללא הגדלה (איור 19).</li>
	<li>הסר את הסיכות מהחיה, הפוך אותה על הגחון שלה, ונעץ מחדש את גפיו של החיה.</li>
	<li>בחר אחת מהגפיים האחוריות כדי לדגום ממנה ולהצמיד את כף הרגל של איבר זה.</li>
	<li>הסירו דש עור בצורת שקד מעל הגסטרוקנמיוס/טיביופיבולה (איור 20).</li>
</ol>

פרוטוקול סטנדרטי לדיסקציה ודגימה לאיברי קסנופוס בוגרים

<ol><li>Porro, L. B., Richards, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Digital+dissection+of+the+model+organism+Xenopus+laevis+using+contrast-enhanced+computed+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Anat%22%5BJournal%5D)">Digital dissection of the model organism Xenopus laevis using contrast-enhanced computed tomography.</a> J Anat. 231 (2), 169-191 (2017).</li>
<li>Ruehl-Fehlert, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revised+guides+for+organ+sampling+and+trimming+in+rats+and+mice--part+1%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Toxicol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice--part 1.</a> Exp Toxicol Pathol. 55 (23), 91-106 (2003).</li>
<li>Kittel, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revised+guides+for+organ+sampling+and+trimming+in+rats+and+mice--Part+2.+A+joint+publication+of+the+RITA+and+NACAD+groups%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Toxicol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice--Part 2. A joint publication of the RITA and NACAD groups.</a> Exp Toxicol Pathol. 55, 413-431 (2004).</li>
<li>Morawietz, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revised+guides+for+organ+sampling+and+trimming+in+rats+and+mice+-+Part+3+-+A+joint+publication+of+the+RITA+and+NACAD+groups%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Toxicol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice - Part 3 - A joint publication of the RITA and NACAD groups.</a> Exp Toxicol Pathol. 55, 433-449 (2004).</li>
<li>Patmann, M. D., Shewade, L. H., Schneider, K. A., Buchholz, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenopus+tadpole+tissue+harvest%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Xenopus tadpole tissue harvest.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2017 (11), 097675(2017).</li>
<li>Lőw, P., Molnár, K., Kriska, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissection+of+a+Frog+%28Rana+sp.%29%5BTitle%5D)+AND+%22Atlas+of+Animal+Anatomy+and+Histology%22%5BJournal%5D)">Dissection of a Frog (Rana sp.).</a> Atlas of Animal Anatomy and Histology. , 213-263 (2016).</li>
<li>O'Rourke, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amphibians+used+in+research+and+teaching%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Amphibians used in research and teaching.</a> ILAR J. 48 (3), 183-187 (2007).</li>
<li>Jonas-Closs, R. A., Peshkin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+rapid+blood+perfusion+in+Xenopus%5BTitle%5D)+AND+%22JoVE%22%5BJournal%5D)">Effective rapid blood perfusion in Xenopus.</a> JoVE. (issue), e65287(2023).</li>
<li>Balls, M., Worley, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amphibian+cells+in+vitro.+II.+Effects+of+variations+in+medium+osmolarity+on+a+permanent+cells+line+isolated+from+Xenopus%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Amphibian cells in vitro. II. Effects of variations in medium osmolarity on a permanent cells line isolated from Xenopus.</a> Exp Cell Res. 76 (2), 333-336 (1973).</li>
<li>Holz, P. H., Raidal, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+renal+anatomy+of+exotic+species%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+North+Am+Exot+Anim+Pract%22%5BJournal%5D)">Comparative renal anatomy of exotic species.</a> Vet North Am Exot Anim Pract. 9 (1), 1-11 (2006).</li>
<li>Trott, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+Mycobacterium+ulcerans-like+infection+in+a+colony+of+African+tropical+clawed+frogs+%28Xenopus+tropicalis%29%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Med%22%5BJournal%5D)">Characterization of a Mycobacterium ulcerans-like infection in a colony of African tropical clawed frogs (Xenopus tropicalis).</a> Comp Med. 54 (3), 309-317 (2004).</li>
<li>Fremont-Rahl, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mycobacterium+liflandii+outbreak+in+a+research+colony+of+Xenopus+%28Silurana%29+tropicalis+frogs%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Pathol%22%5BJournal%5D)">Mycobacterium liflandii outbreak in a research colony of Xenopus (Silurana) tropicalis frogs.</a> Vet Pathol. 48 (4), 856-867 (2011).</li>
<li>Green, S. L., Parker, J., Davis, C., Bouley, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+hyperstimulation+syndrome+in+gonadotropin-treated+laboratory+South+African+clawed+frogs+%28Xenopus+laevis%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Ovarian hyperstimulation syndrome in gonadotropin-treated laboratory South African clawed frogs (Xenopus laevis).</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 46 (3), 64-67 (2007).</li>
<li>Vitt, L. J., Caldwell, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomy+of+amphibians+and+reptiles.+Herpetol%5BTitle%5D)+AND+%22Herpetol%22%5BJournal%5D)">Anatomy of amphibians and reptiles. Herpetol.</a> Herpetol. , 35-81 (2009).</li>
</ol>

המחברים מצהירים כי אין אינטרסים מתחרים.

מכיוון שפרוטוקול זה נועד למקסם את הטריות, דגימות מסוימות עשויות לכלול רקמות לא רצויות. לדוגמה, צינור hepatopancreatic וכמה mesentery נדגמים עם הלבלב, וכמה רקמת הצפק, בלוטות יותרת הכליה, שופכנים תמיד יידגמו עם הכליות זוג.  אם טריות אינה מהווה דאגה, ניתן להשיג דגימה מדויקת יותר באמצעות טכניקות מותאמות.
המראה והמיקום של איברים דומים בין המינים והמינים של Xenopus. עם זאת, צבע הרקמות משתנה באופן משמעותי בהתאם לשאלה אם בעלי החיים היו מחוררים או לא. מסיבה זו נכללות תמונות של בעלי חיים מחוררים ובלתי מחוררים.
אילוץ של פרוטוקול זה הוא שמהירות ויכולת שחזור מקבלים עדיפות על פני איסוף דגימות המייצגות בצורה הטובה ביותר את כל הרקמה הרצויה. לדוגמה, החלק של האונה השמאלית של הכבד שנדגם כאן אינו יכול לייצג כראוי את כל שלוש האונות של רקמת הכבד. אם יש שגיאות בדגימה, האפשרויות לפתרון בעיות מושפעות מהפוטנציאל לשונות בין חלקי רקמה שונים. לדוגמה, לא ידוע אם האונה הימנית של הכבד, גוף השומן הנכון, או חלק אחר של העור יהיו חלופות פונקציונליות לרקמות הרצויות. במקרים אלה יש להפעיל שיקול דעת, בהתאם לצרכי המחקר, לפני החלפת חלקי רקמות.
מגבלה נוספת של פרוטוקול זה היא שאם לבעלי החיים הנדגמים יש פגמים אנטומיים דרסטיים או בעיות בריאותיות משמעותיות מבחינה קלינית, האיברים בחלל הקואלומי עשויים שלא להופיע כמתואר כאן. גרנולומות נמצאו ברקמות של צפרדעים נגועות Mycobacterium spp.11,12, ומקרים קודמים של תסמונת גירוי יתר השחלות נראה להוביל להצגה חריגה של איברים13.
אף על פי ששיטה זו פותחה עבור קסנופוס מעבדתי, ישנם קווי דמיון משמעותיים במראה של איברים אלה בקרב דו-חיים רבים שאינם קיציליאנים וזוחלים בעלי גפיים14. חלק הדגימה של פרוטוקול זה יכול בקלות להשתנות עבור מודלים אחרים, כגון axolotls או אנולה ירוקה.

למרות ש"הדיסקציה הדיגיטלית" של קסנופוס בוגר זמינה1, דגימת איברים ורקמות הניתנים לשכפול של קסנופוס בוגר נותרה מאתגרת ללא ההוראה המפורטת הזמינה עבור מודלים בוגרים אחרים (למשל עכברים 2,3,4). מאמר זה נועד לספק הנחיות ברורות לדגימת איברים מדויקת וניתנת לשכפול של קסנופוס בוגר בדומה למה שזמין כיום עבור הזחלים שלהם5. דגש מושם על קלות ההשלמה כדי לשמור על טריות מקסימלית ולהנגיש את הפרוטוקול לכל המשתמשים.
למרות שיש מדריך דיסקציה יסודי עבור Rana sp.6, כמו גם מדריכים רבים לנתיחה בכיתה עבור anuransאחרים 7, אין מדריך דיסקציה ודגימה של Xenopus זמין כרגע. עבור אלה שאינם מכירים שיטות דגימה או אנטומיה של דו-חיים, ההבדלים הקטנים בין Xenopus לבין אנוארים אחרים הופכים משאבים אלה לתת-אופטימליים עבור דגימת רקמות הניתנת לשכפול.
רקמות יקרות ערך רבות אינן כלולות ואף מושלכות במדריך הנוכחי; זאת על מנת להבטיח רעננות רקמות. שש דגימות מוגבלות מספיק כדי להבטיח שניתן יהיה לאסוף רקמות אלה תוך פחות משעה לאחר שהלב מתחיל לפעום, ללא קשר לניסיון או לרמת המיומנות של המשתמש. מדריכים מתקדמים ומפורטים יותר לאיסוף רקמות רבות אחרות נמצאים בהכנה כניירות נלווים נפרדים.
למשתמשים פחות מנוסים, מומלץ תמיד לנסות תחילה פרוטוקול זה על בעלי חיים המורדמים מסיבות שאינן ניסויים לפני דגימת בעלי חיים מאתגרים להחלפה (למשל, טרנסגניים, בעלי חיים בגיל מתקדם וכו'). באופן אידיאלי, כל בעלי החיים שנדגמו יהיו בריאים, ואם נקבה, לא היו מבייצים בשבועיים האחרונים.

<table><tbody><tr><td>זכוכית מגדלת 5x עם נורת LED ומעמד</td><td>amazon.com</td><td></td><td>אסור לאור B08QJ6J8P1 לייצר חום</td></tr><tr><td>צנרת העברה חד פעמית</td><td>VWR</td><td>414004-036</td><td></td></tr><tr><td>ניתוח מלקחיים מחודדים עדינים</td><td>פישר Scinetific</td><td>08-875</td><td></td></tr><tr><td>ניתוח: מספריים ניתוח, ישר 6.5 אינץ'</td> <td>VWR</td><td>76457-374</td><td></td></tr><tr><td>מגש חיתוך</td>יריעות קלקר <td>של פישר Scinetific</td><td>14-370-284</td><td>הן אלטרנטיבה מקובלת</td></tr><tr><td>מיכל המתת חסד</td><td>ארה"ב פלסטיק&nbsp;</td><td>פריט&nbsp; 2860</td><td>מיכלים אטומים חלופיים</td></tr><tr><td>מכסה מיכל המתת חסד</td> מקובל <td>ארה"ב פלסטיק&nbsp;</td><td>פריט&nbsp; 3047</td><td></td></tr><tr><td>מספריים לכריתת אירית 6 "</td><td>vwr</td><td>470018-938</td><td>מספריים לקשתית הם אלטרנטיבה מקובלת</td></tr><tr><td>MS-222: סינקאין (לשעבר טריקאין)</td> <td>Pentair AES</td><td>TRS1</td><td></td></tr><tr><td>PBS 1x</td><td>קורנינג</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>נתרן ביקרבונט, אבקה, USP</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>18-606-333</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים לדגימה,</td><td>VWR</td> משונן<td>82027-442</td><td></td></tr><tr><td>פיני T לניתוח</td><td>פישר Scinetific</td><td>S99385</td><td></td></tr></tbody></table>

טכניקות לדגימה מהירה של שישה איברים חיוניים בקסנופוס בוגר

Techniques for Rapidly Sampling Six Crucial Organs in Adult Xenopus

Xenopus היה אורגניזם מודל רב עוצמה להבנת התפתחות חולייתנים ומחלות במשך יותר ממאה שנים. בעוד שטכניקות ניתוח ודיסקציה ניסיוניות של העובר תועדו היטב, תיאורים של מבנים ואיברים בוגרים של קסנופוס , יחד עם טכניקות לעבודה עם מבוגרים, לא עודכנו כדי לקחת בחשבון את הדרישות של גישות מודרניות כגון פרוטאומיקה כמותית ושעתוק חד-תאי. הפרספקטיבות של סוג התא ושל הגנים דורשות תצפיות מנוגדות בשלבים עובריים לאלה שברקמות בוגרות. איברי הזחל עוברים שינויים משמעותיים במבנה הכללי, במורפולוגיה שלהם ובמיקום האנטומי שלהם לאורך כל המעבר של הזחל לבוגר, בעיקר במהלך עיצוב מחדש של מטמורפוזה מסיבית. קביעת סטנדרטים חזקים לזיהוי ונתיחת איברים היא חיונית כדי להבטיח שמערכי נתונים הנובעים ממחקרים שבוצעו במעבדות שונות יוכלו להיות עקביים. הפרוטוקול הנוכחי מזהה שישה מהאיברים בקסנופוס הבוגר, ומדגים שיטות לדיסקציה ודגימה של חדר הלב, הכבד, גוף השומן, הלבלב, הכליה הזוגית והעור של הקסנופוס הבוגר. בהתאם לשיטות השימור, האיברים המנותחים יכולים לשמש לפרוטאומיקה כמותית, שעתוק תא בודד/גרעינים, הכלאה באתר , אימונוהיסטוכימיה, היסטולוגיה ועוד. פרוטוקול זה נועד לתקנן את דגימת הרקמות ולהקל על חקירות רב-מעבדתיות של מערכות האיברים הבוגרים.

על-ידי שימוש באיור 1 עד איור 20 וביצוע כל השלבים של פרוטוקול זה, חדר הלב, האונה השמאלית של הכבד, הלבלב, גופי השומן השמאליים, הכליות הזוגיות ודש העור נכרתו באופן נקי תוך שעה מהמתת חסד. בתוך הזמן הזה, הדגימות נשטפות ונחתכות כך שהן יופיעו, כפי שמוצג באיור 21.
<img alt="דיאגרמת דיסקציה של צפרדע המתארת קווי חתך למחקר אנטומי בחינוך לביולוגיה." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig1.JPG" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> איור 1: קסנופוס מוצמד. נקבת X. tropicalis בוגרת נעוצה בכל איבר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig1large.JPG" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="דיאגרמת דיסקציה של אנטומיה של צפרדעים, המדגישה עצמות קורקואידים ולינאה אלבה במחקר ביולוגי." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig2.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> איור 2: דופן הבטן. העור הגחוני של נקבת X. tropicalis נחתך לדשים, מה שהופך את עצמות linea alba ו coracoid גלוי. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="דיסקציה המראה לב סגור בקרום הלב, מחקר אנטומי, בדיקת דגימה." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig3.JPG" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 3"> איור 3: לב סגור קרום הלב. קודקוד חדר הלב נתפס דרך קרום הלב. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig3large.JPG" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="דיאגרמת דיסקציה המציגה תא מטען עורק דו-חיים וחדר לב, מסומן למחקר אנטומי." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig4.JPG" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 4"> איור 4: חדר הלב ותא המטען העורקי. החדר של X laevis מחורר, להיות נאחז, מראה את החיבור שלה לגזע העורקי. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig4large.JPG" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="דיאגרמת אנטומיה של הלב, אפרכסת מסומנת, תא מטען עורקי, חדר, למחקר חינוכי." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig5.JPG" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 5"> איור 5: דיאגרמת לב. תרשים של המבנים הרלוונטיים של הלב עם קו מקווקו המציין היכן לדגום את החדר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig5large.JPG" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="תרשים אנטומיה של כבד, לבלב וצינורות עיכול עם רכיבים מסומנים." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig6.JPG" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 6"> איור 6: דיאגרמת הפטופאנקריאטי. תרשים של 3 האונות של הכבד, הלבלב והאיברים הקשורים. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig6large.JPG" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>

<img alt="תרשים אנטומיה של דיסקציה של איברי חולדה המסומן: כבד, לבלב, טחול, קיבה, צינורות." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig7.JPG" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 7"> איור 7: איברי הפטופנקריאטי. זכר X. laevis לבקנים מחורר עם 3 אונות של כבד, לבלב ואיברים נלווים מסומנים. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig7large.JPG" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="תרשים אנטומי של צפרדע מנותחת המדגיש את איברי העיכול והרבייה עם תוויות." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig8.JPG" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 8"> איור 8: צינורות ציסטיים וכבדיים. האונה השמאלית של הכבד מורמת כדי להראות את צינורות הציסטיק והכבד ב- X. laevis מחורר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig8large.JPG" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="דגימת דיסקציה של צפרדע המציגה איברים פנימיים; הגדרת ניסוי ביולוגיה חינוכית." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig9.JPG" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 9"> איור 9: דגימת כבד. אונת הכבד השמאלית של X. tropicalis לא מחורר נקטעת מתחת לחיבורים של צינורות הכבד. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig9large.JPG" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="תרשים של אנטומיה של צפרדעים, המדגיש את השחלות, אפיתל הנבט, הטחול וגופי השומן." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig10.JPG" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 10"> איור 10: התקשרות השחלה. עם אונות השחלה בצד שלהם, המשכיות של אפיתל הנבט לקיר הצפק (מעל הכליות) גלוי. שני קווים מקווקווים לבנים מציינים היכן לנתק קבצים מצורפים אלה.  <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig10large.JPG" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="תרשים דיסקציה המציג איברים פנימיים של צפרדע, המדגיש כבד, קיבה, מעיים, שחלות." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig11.JPG" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 11"> איור 11: הסרת שחלות. השחלה של X. laevis, לא מחוררת, נמשכת מן הכליות הזוגיות. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig11large.JPG" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="תרשים דיסקציה המציג איברים עיקריים: כבד, לבלב, קיבה, תריסריון; אנטומיה מתויגת." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig12.JPG" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 12"> איור 12: חתכי מזנטריה. חלל קולומי של X. laevis לא מחורר, לאחר דגימה של חדר הלב והאונה השמאלית של הכבד וכן הסרת השחלה. קו מקווקו לבן מציין היכן לנתק את הרצועה וצינור ההפטופנקראטי, ואילו קו מקווקו ירוק מציין היכן לנתק את הלבלב מהאונה המדיאלית של הכבד. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig12large.JPG" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="דיסקציה של אנטומיה פנימית של בעלי חיים, המציגה איברים ומבני רקמות למחקר חינוכי." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig13.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 13"> איור 13: דגימת לבלב. הלבלב של X. laevis לא מחורר הוא להיות מתגרה מן הבטן. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig13large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="דיאגרמת אנטומיה המציגה דיסקציה של שלפוחית השתן והמעי הגס עם איברים מסומנים." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig14.JPG" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 14"> איור 14: הסרת איברים. (A) שלפוחית השתן של X. laevis לא מחורר נמשכת הרחק מהקלואקה עם קו מקווקו המציין היכן לחתוך אותה. (B) המעי הגס של X. laevis לא מחורר, נמשך הרחק מהקלואקה עם קו מקווקו המציין היכן לנתק אותו. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig14large.JPG" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="תרשים דיסקציה: אנטומיה של דו-חיים המציגה גופי שומן ימניים, אשכים, כליות מזווגות, שרידי ביציות." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig15.JPG" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 15"> איור 15: דגימת גוף שמן. גופי השומן, המחוברים לצפק בקצה העליון של הכליות הזוגיות, נשלפים מהחלל הקואלומי עם קו מקווקו המראה היכן לחתוך אותם. שימו לב שבסמוך לחיבור זה, לזכר X. tropicalis זה יש 1 אשכים וכן זוג שרידי ביציות מובחנות. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig15large.JPG" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="דיאגרמת אנטומיה המציגה ביצית ימנית, כליות מזווגות, צפק ברור במחקר דיסקציה." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig16.JPG" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 16"> איור 16: הסרת אובידוקט. האובידוקט של X. laevis מחורר נמשך הרחק מהכליה הזוגית, מה שהופך את הצפק השקוף לגלוי. קו מקווקו מציין היכן לחתוך את הצפק. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig16large.JPG" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="דיאגרמת דיסקציה, אנטומיה מסומנת המציגה ריאות, צפק, מקלעת סיאטית, כליות מזווגות." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig17.JPG" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 17"> איור 17: דגימת כליות. הכליות הזוגיות של X. laevis לא מחורר מורמות מהחלל הקואלומי. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig17large.JPG" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="השוואת רקמות: A עם גושים, B ללא; דגימות מנותחות לניתוח חקר הסרטן." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig18.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 18"> איור 18: חיתוך כליה. (A) מבט גחוני של כליה זוגית של נקבת X. laevis ללא מחורר עם איברים פריטוניאליים קשורים מחוברים. (B) אותה כליה עם איברים קשורים שהוסרו אך נותרה בה רקמת צפק כלשהי. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig18large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="דיאגרמת אנטומיה של צלחת פטרי המציגה אשכים וכליות מזווגות למחקר ביולוגי." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig19.JPG" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 19"> איור 19: הסרת אשכים. הכליות המזווג של X. tropicalis unperfused עם אשך אחד הוסר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig19large.JPG" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="השוואת אנטומיה של רגל צפרדע; תצוגת שרירים מנותחים למחקר אנטומיה חינוכית." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig20.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 20"> איור 20: דגימת עור. (A) רגל ימין של X. tropicalis עם קו מקווקו המציין את שטח העור שיש לדגום. (B) רגל ימין של X. tropicalis עם דגימת עור שהוסרה מעל הטיביופיבולה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig20large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="השוואת רקמות של איברי לבקנים זכריים X. laevis שעברו איברים לבקנים לעומת איברי X. laevis, תמונות מיקרוסקופיה." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig21.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 21"> איור 21: תוצאות מייצגות של דגימת איברים. דגימות של חדר הלב, הכבד, הלבלב, הגוף השמן, הכליה הזוגית והעור נלקחו מלבקנים מחוררים ולא מחוררים X . laevis. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig21large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>

מאמר זה מציג מדריך לדגימת שישה איברים משמעותיים ומגוונים בקסנופוס בוגר שניתן לגשת אליהם במהירות ובקלות: חדר הלב, אונת הכבד, הלבלב, גופי השומן, הכליות הזוגיות והעור.

Xenopus has been a powerful model organism for understanding vertebrate development and disease for over a hundred years. While experimental analysis and ...

לפני עבודה זו פיתחתי פרוטוקול לזילוח מהיר של דו-חיים. פרוטוקול זה צריך לשמש לפני הדגימה למחקר כגון פרוטאומיקה ואימונוכימיה, שבו נוכחות של כמויות מוגזמות של דם ברקמות אינה רצויה. למרות שישנם דיאגרמות ועזרים רבים אחרים זמינים, אין כיום מדריכים מקיפים כיצד לנתח רקמות מתוך קסנופוס בוגר במהירות ובאמינות.אנו מקווים כי טכניקות דגימה סטנדרטיות יאפשרו למעבדות לשתף רקמות בקלות. זה יתרון במיוחד במצבים שבהם ייבוא וייצוא של בעלי חיים אינו אפשרי בשל חששות ביטחון ביולוגי או אילוצי משלוח.

techniques-for-rapidly-sampling-six-crucial-organs-in-adult-xenopus

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

סרטון זה מדגים את הנהלים משמשים לגידול תרביות ראשוניות של...

סימולטני טרום והקלטת אלקטרו פוסט סינפטי מ<em&gt; Xenopus</em&gt; עצבי שרירי Co-תרבויות

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לשימוש במפות גורל ועוקבי שושלת כדי למקד זריקות לבלסטומרים בודדים המולידים כליה של עוברי Xenopus laevis.

טכניקה לכוון Microinjection אל פיתוח<em&gt; Xenopus</em&gt; כליה

פרוטוקול זה מדגים שיטה מבוססת הקרינה לדמיין את כלי הדם וכדי לכמת את המורכבות שלה tropis Xenopus . כלי הדם ניתן הדמיה דקות לאחר הזרקת צבע פלואורסצנטי לתוך הלב הפועם של עובר לאחר מניפולציות גנטיות ו / או תרופתי ללמוד התפתחות הלב וכלי הדם in vivo .

ויזואליזציה וניתוח כמותי של אנגיוגנזה עובריים ב<em&gt; Xenopus טרופי</em

אנו מתארים צעדים המאפשרים דיגום מהיר בתוך באתרו של חלק קטן של תא יחיד עם דיוק גבוהה, הפלישה מינימלי באמצעות נימי מיקרו-דגימה, כדי להקל על אפיון כימי של תמונת מצב של פעילות מטבולית חיים העוברים באמצעות אלקטרופורזה נימי תא בודד לפי הזמנה ספקטרומטר מסה פלטפורמה.

Microprobe נימי אלקטרופורזה ספקטרומטריית עבור מטבולומיקס תא בודד ב- Live צפרדע (צפרדע רפואית זריזה) העוברים

מוצג כאן פרוטוקול יעיל של זילוח דם מהיר להכנת דגימות רקמה מצפרדעים אפריקאיות בעלות טפרים למחקרי שעתוק ופרוטאומיקה.

זילוח דם מהיר יעיל בקסנופוס

זהו חלק ראשון מפרוטוקול דגימת קסנופוס מקיף. הרקמות שנדגמו הן חדר הלב, תא המטען העורקי, אונת הכבד השמאלית, כיס המרה, הריאות, הלבלב, הטחול, הגרון, הוושט, הקיבה, המעיים, האשכים, גופי השומן, צינור הביצית, כליות מזווגות, מקלעת סיאטית, עור, תימוס ועין שלמה.

טכניקות יעילות לדגימה מקיפה של רקמות נגישות בקסנופוס בוגר

הדמיה ב-RNA לוקליזציה Xenopus ביציות

פרוטוקול זה מתאר את הליך זיהוי ביתור איברים דג הזברה הבוגרת.

Dissection של איברים מן דג הזברה למבוגרים

טכניקות הדמיה Ca 2 + איתות זרע אנושי

יונית הנוכחי של BK ערוצי נרשם באמצעות מהדק טכניקות תיקון. ערוצי BK באים לידי...

הצמד תיקון וטכניקות זלוף עבור לימוד תעלות יונים מתבטא Xenopus ביציות

למדו טכניקות לדגימה מהירה של שישה איברים חיוניים בקסנופוס בוגר, כולל חדר הלב, הכבד, הלבלב, גופי השומן, הכליות והעור. שיטות אלה מאפשרות איסוף רקמות סטנדרטי למחקר בביולוגיה.

טכניקות לדגימה מהירה של שישה איברים חיוניים בקסנופוס בוגר

גלה סרטונים נוספים