Name: הפרדה מהירה והצגה של חומרים פיברינוגנוליטיים פעילים ב- Sipunculus nudus באמצעות אלקטרופורזה של גל פיברינוגן-פוליאקרילאמיד (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-19T13:50:00.000+00:00
Duration: 4 min 36 s
Description: למד שיטת PAGE-פיברינוגן לסינון חומרים פיברינוגנוליטיים ב-Sipunculus nudus. שיטה זו מאפשרת זיהוי מהיר של גנים פעילים ומאיצה פיתוח תרופות טרומבוליטיות לטיפול במחלות לב וכלי דם.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>חשיפת חומרים פיברינוגנוליטיים בתולעי בוטנים עם פיברינוגן-PAGE

<ol><li>Bikdeli, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((COVID-19+and+thrombotic+or+thromboembolic+disease%3A+Implications+for+prevention%2C+antithrombotic+therapy%2C+and+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">COVID-19 and thrombotic or thromboembolic disease: Implications for prevention, antithrombotic therapy, and follow-up.</a> J Am Coll Cardiol. 75 (23), 2950-2973 (2020).</li>
<li>Tsivgoulis, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombolysis+for+acute+ischaemic+stroke%3A+current+status+and+future+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurol%22%5BJournal%5D)">Thrombolysis for acute ischaemic stroke: current status and future perspectives.</a> Lancet Neurol. 22 (5), 418-429 (2023).</li>
<li>Tang, M., Hu, C., Lin, H., Yan, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrinolytic+drugs+induced+hemorrhage%3A+mechanisms+and+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Coagul+Fibrinolysis%22%5BJournal%5D)">Fibrinolytic drugs induced hemorrhage: mechanisms and solutions.</a> Blood Coagul Fibrinolysis. 34 (5), 263-271 (2023).</li>
<li>Lu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification%2C+characterization%2C+and+chemical+modification+of+Bacillus+velezensis+SN-14+fibrinolytic+enzyme%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biol+Macromol%22%5BJournal%5D)">Purification, characterization, and chemical modification of Bacillus velezensis SN-14 fibrinolytic enzyme.</a> Int J Biol Macromol. 177, 601-609 (2021).</li>
<li>Abu-Tahon, M. A., Abdel-Majeed, A. M., Ghareib, M., Housseiny, M. M., Abdallah, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombolytic+and+anticoagulant+efficiencies+of+purified+fibrinolytic+enzyme+produced+from+Cochliobolus+hawaiiensis+under+solid-state+fermentation%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Appl+Biochem%22%5BJournal%5D)">Thrombolytic and anticoagulant efficiencies of purified fibrinolytic enzyme produced from Cochliobolus hawaiiensis under solid-state fermentation.</a> Biotechnol Appl Biochem. 70 (6), 1954-1971 (2023).</li>
<li>Lin, W., Lin, H., Xin, P., Yan, H., Kang, B., Tang, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Comprehensive+approach+to+analyze+the+cell+components+of+cerebral+blood+clots%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A Comprehensive approach to analyze the cell components of cerebral blood clots.</a> J Vis Exp. (197), e65791(2023).</li>
<li>Tang, M., Lin, H., Hu, C., Yan, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Affinity+purification+of+a+fibrinolytic+enzyme+from+Sipunculus+nudus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Affinity purification of a fibrinolytic enzyme from Sipunculus nudus.</a> J Vis Exp. (196), e65631(2023).</li>
<li>Tang, M., Lin, H., Huang, Y., Xu, R., Cui, X., Yan, H. Plasmin affinity purification method based on agarose gel and plasmin and application thereof. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://patents.google.com/patent/CN116103270A/en?oq=CN202310108470">https://patents.google.com/patent/CN116103270A/en?oq=CN202310108470</a> (2023).</li>
<li>Walton, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+fibrin+plate+method+for+the+assay+of+plasminogen+activators%5BTitle%5D)+AND+%22Clinica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">An improved fibrin plate method for the assay of plasminogen activators.</a> Clinica Chimica Acta. 13 (5), 680-684 (1966).</li>
<li>Ngere, J. B., Ebrahimi, K. H., Williams, R., Pires, E., Walsby-Tickle, J., McCullagh, J. S. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ion-exchange+chromatography+coupled+to+mass+spectrometry+in+life+science%2C+environmental%2C+and+medical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Ion-exchange chromatography coupled to mass spectrometry in life science, environmental, and medical research.</a> Anal Chem. 95 (1), 152-166 (2023).</li>
<li>Kato, S., Takeuchi, K., Iwaki, M., Miyazaki, K., Honda, K., Hayashi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chitin-+and+streptavidin-mediated+affinity+purification+systems%3A+A+screening+platform+for+enzyme+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Angew+Chem+Int+Ed+Engl%22%5BJournal%5D)">Chitin- and streptavidin-mediated affinity purification systems: A screening platform for enzyme discovery.</a> Angew Chem Int Ed Engl. 62 (31), e202303764(2023).</li>
<li>Sharma, N., Sharma, R., Rajput, Y. S., Mann, B., Singh, R., Gandhi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Separation+methods+for+milk+proteins+on+polyacrylamide+gel+electrophoresis%3A+Critical+analysis+and+options+for+better+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22International+Dairy+Journal%22%5BJournal%5D)">Separation methods for milk proteins on polyacrylamide gel electrophoresis: Critical analysis and options for better resolution.</a> International Dairy Journal. 114, 104920(2021).</li>
<li>Xu, R., Ma, G., Chen, L., Cui, X. Preparation and application of natural fibrinolytic enzyme from peanut worm. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://patents.google.com/patent/CN109295042A/en">https://patents.google.com/patent/CN109295042A/en</a> (2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1&nbsp; M Tris-HCl (pH 6.8)</td> <td>Solarbio</td><td>T1020</td><td></td></tr><tr><td>1.5 M Tris-HCl (pH 8.8)</td> <td>Solarbio</td><td>T1010</td><td></td></tr><tr><td>30% אקרילאמיד/ביס-אקרילאמיד</td><td>Biosharp</td><td>BL513B</td><td></td></tr><tr><td>אמוניום פרסולפט</td><td>XiLONG SCIENTIFIC</td><td>7727-54-0</td><td></td></tr><tr><td></td><td>PYREX</td><td>2-9425-02</td><td></td></tr><tr><td>צינור צנטריפוגה (1.5 מ"ל)</td> <td>Biosharp</td><td>BS-15-M</td><td></td></tr><tr><td>חממה בטמפרטורה קבועה</td><td>JINGHONG</td><td>JHS-400</td><td></td></tr><tr><td>Coomas Brillant תמיסת מכתים כחולה</td><td>Beyotime</td><td>P0017F</td><td></td></tr><tr><td>איזון אנליטי אלקטרוני</td><td>DENVER</td><td>TP-213</td><td></td></tr><tr><td>פיברינוגן</td><td>Solarbio</td><td>F8051</td><td></td></tr><tr><td>קצות פיפטה לטעינת ג'ל, בתפזורת</td><td>Biosharp</td><td>BS-200-GTB</td><td></td></tr><tr><td>הומוגנייזר</td><td>AHS</td><td>ATS-1500</td><td></td></tr><tr><td>מתנד סיבוב אופקי</td><td>NuoMi</td><td>NMSP-600</td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q התייחסות</td><td>Millipore</td><td>Z00QSV0CN</td><td></td></tr><tr><td>Mini-PROTEAN Tetra Cell</td><td>BIO-RAD</td><td>165-8000~165-8007</td><td></td></tr><tr><td>N,N,N',N'-Tetramethylethylenediamine</td><td>Sigma</td><td>T9281</td><td></td></tr><tr><td>קצה פיפטה (1 מ"ל)</td><td></td> קצה פיפטה Axygene <td>T-1000XT-C</td><td></td></tr><tr><td>(10 ומיקרו; L)</td> <td>Axygene</td><td>T-10XT-C</td><td></td></tr><tr><td>קצה פיפטה (200 ומיקרו; L)</td> <td>Axygene</td><td>T-200XT-C</td><td></td></tr><tr><td>פיפטור (1 מ"ל)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY18723</td><td></td></tr><tr><td>Pipettor (10&micro; L)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZX98775</td><td></td></tr><tr><td>Pipettor (200 ומיקרו; L)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY20280</td><td></td></tr><tr><td>פיפטור (50 ומיקרו; L)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY15331</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה מקוררת</td><td></td><td>H1650R</td><td></td></tr><tr><td>נתרן דודציל סולפט</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>V900859</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>Solarbio</td><td>T8060</td><td></td></tr><tr><td>Tris-HCl</td><td>Solarbio</td><td>T8230</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Solarbio</td><td>T8200</td><td></td></tr></tbody></table>

הפרדה מהירה והצגה של חומרים פיברינוגנוליטיים פעילים ב- sipunculus nudus באמצעות אלקטרופורזה של ג'ל פיברינוגן-פוליאקרילאמיד

Rapid Separation and Display of Active Fibrinogenolytic Agents in Sipunculus nudus through Fibrinogen-Polyacrylamide Gel Electrophoresis

לאחר אלקטרופורזה, כל הפסים של הסמן הוצגו בבירור. נתיבי הטעינה 1x SDS-PAGE הראו רק 10 רצועות kDa (ברומופנול כחול). דגימות sFE ותולעי בוטנים לא הראו פסים נצפים (איור 1). למרות שהרצועות של הדגימות אינן נראות לעין, הביצועים של הסמן והברומופנול הכחול הצביעו על כך שהאלקטרופורזה הצליחה, והדגימות הופרדו על פי משקלן המולקולרי.
למרות שכל הג'ל הפך כחול בגלל הכתם, שינוי הצבע הפך את האזור שבו פיברינוגן היה מפורק על ידי סוכנים פיברינוגנוליטיים שקוף. בהשוואה לסמן, sFE הצביע על פס פיברינוגנוליטי פעיל ליד 25 kDa. תולעי הבוטנים הציגו הומוגנט של 25 kDa, 33 kDa, 43 kDa, וסדרה של רצועות גדולות מ-70 kDa (איור 2). התוצאות הצביעו על כך ש-sFE הכיל רק מרכיב פיברינוגנוליטי של 25 kDa , אך תולעת הבוטנים הומוגנט הכילה רכיבי sFE וחומרים פיברינוגנוליטיים אחרים. איור משלים 1 הוא דוגמה לתמונת ג'ל שמראה את הסמן בכחול עמוק ואת דגימות המטרה כפסים בהירים.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66536/66536fig01.jpg"> איור 1: ג'ל אחרי אלקטרופורזה. M: מרקר; נתיב 1: מאגר טעינת SDS-PAGE אחד; נתיב 2: sFE; נתיב 3: מאגר טעינת SDS-PAGE אחד; נתיב 4: תולעת בוטנים הומוגנית; נתיב 5: מאגר טעינת SDS-PAGE אחד. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66536/66536fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66536/66536fig02.jpg"> איור 2: ג'ל לאחר הסרת צבע. M: מרקר; נתיב 1: מאגר טעינת SDS-PAGE אחד; נתיב 2: sFE; נתיב 3: מאגר טעינת SDS-PAGE אחד; נתיב 4: תולעת בוטנים הומוגנית; נתיב 5: מאגר טעינת SDS-PAGE אחד. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66536/66536fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
איור משלים 1: תמונת ג'ל המציגה את הסמן בכחול עמוק ואת דגימות המטרה כפסים בהירים. M: מרקר; נתיב 1: מאגר טעינת SDS-PAGE אחד; נתיב 2: sFE; נתיב 3: מאגר טעינת SDS-PAGE אחד; נתיב 4: תולעת בוטנים הומוגנית; נתיב 5: מאגר טעינת SDS-PAGE אחד. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66536/Supplementary%20Figure%201.zip" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.</a>

הפרדה מהירה והצגה של חומרים פיברינוגנוליטיים פעילים ב- Sipunculus nudus באמצעות אלקטרופורזה של ג'ל פיברינוגן-פוליאקרילאמיד

Fibrinogenolytic agents that can dissolve fibrinogen directly have been widely used in anti-coagulation treatment. Generally, identifying new ...

rapid-separation-display-active-fibrinogenolytic-agents-sipunculus

Research

JoVE Journal

Biochemistry

ביוכימיה

וידאו זה מדגים את פרוטוקול ב assay אנגיוגנזה במבחנה כי משחזר שלבים שונים של אנגיוגנזה. זמן לשגות תמונות של הנבטה, היווצרות לומן, הסתעפות ו השקה - התכונות העיקריות של אנגיוגנזה - מוצגים.

אופטימליים הפיברין ג&#39;ל ביד Assay לחקר אנגיוגנזה

בסרטון זה אנו מדגימים שיטת אלקטרופורזה דו-ממדית בג'ל המפרידה חלבונים בודדים מתערובת חלבונים מורכבת המתקבלת מרקמות גידוליות של אדנומת יותרת המוח האנושית הלא תפקודית (NFPA). החלבונים מופרדים על בסיס המטען החשמלי שלהם בממד הראשון ובהמשך מופרדים על בסיס משקלים מולקולריים בממד השני.

אלקטרופורזה ג'ל פוליאקרילאמיד דו-מימדי: טכניקת הפרדה לניתוח חלבונים בתערובת חלבונים מורכבת המבוססת על מטען ומשקל מולקולרי

סרטון זה מדגים את השימוש בספקטרופוטומטר נראה UV לניטור היווצרות קריש פיברין בלתי מסיס כפונקציה של השינוי בעכירות התמיסה. הספקטרופוטומטר הנראה UV מודד את ספיגת התמיסה לאורך זמן, מה שמייצג את שינוי העכירות עקב היווצרות קריש פיברין בלתי מסיס.

ספקטרוסקופיה UV-visible לניטור היווצרות קריש פיברין

המטרה היא לאנגיופלסטיקה ולבודד אקטיביים מולקולות קטנות, פפטידים מתוך תמצית צמח מורכב, חלבונים של חיידקים פתוגניים על ידי שימוש בשיטת מיקוד בשלב נוזלי (הארה ב) שיטה. יתרה מזאת, המולקולות המופרדות זוהו ופעילותם הביוביולוגית אושרה.

הפרדת מולקולות ביו-אקטיביות קטנות, פפטידים ממקורות טבעיים וחלבונים מחיידקים על ידי שיטת התמקדות איזואלקטריים

דו"ח זה מתאר טכניקות לבודד ולטהר גליקוסאמינוגליקנים גופרתיים (GAGs) מדגימות ביולוגיות וגישה אלקטרופורזה של ג'ל פוליאקרילמיד בערך בגודלם. GAGs לתרום מבנה רקמות להשפיע על תהליכי איתות באמצעות אינטראקציה אלקטרוסטטית עם חלבונים. אורך פולימר GAG תורם לזיקה המחייבת שלהם לליגנדים קוגנטיים.

זיהוי של גליקוסמינוגליקנס על ידי אלקטרופורזה ג'ל פוליאקרילמיד וכתמים כסף

כאן, אנו מציגים שיטת טיהור זיקה של אנזים פיברינוליטי מ Sipunculus nudus שהיא פשוטה, זולה ויעילה.

זיקה טיהור אנזים פיברינוליטי מ-Sipunculus nudus

הניסוי המשמש כאן מראה שיטה של עגינה מולקולרית בשילוב עם בדיקת שינוי תרמי תאי כדי לחזות ולאמת את האינטראקציה בין מולקולות קטנות למטרות חלבון.

חיזוי ואימות מטרות חלבונים של תרכובת מולקולות קטנות

חלבונים חיוניים לפתוגנזה של חיידקים, ומאפשרים פלישה והתחמקות חיסונית. מיצוי חד-שלבי של חלבונים ציטופלזמיים וממברנה של חיידקים בצורתם הפעילה הוא מטריד. מאמר וידאו זה מדגים מיצוי של חלבונים תאיים שלמים של לפטוספירה לניתוח זימוגרפיה לאיתור ואפיון ג'לטינאזות.

מיצוי חד-שלבי וניתוח זימוגרפי של ג'לטינזות חיידקיות

עבודה זו מתארת בדיקה מיקרופלואידית המשתמשת במאמץ גזירה כדי להפעיל יצירת קרישי דם בדם ומאפיינת את הקריק באמצעות ממדים מרובים של קריאה. הבדיקה יכולה למדוד את הנטייה הפרותרומבוטית של דגימות דם, ולכן היא שימושית באבחון מחלות, גילוי תרופות, וכן במחקרים מכניים בסיסיים הקשורים לטרומבוזיס.

מבחן פרופיל תרומבוס: פלטפורמה מבוססת מיקרופלואידיקה לאפיון מקיף של תרומבוגנזה ביומכנית

פרוטוקול זה מתאר את מבחן ניימכן המוסטזיס, המאפשר מדידה סימולטנית ובזמן של יצירת טרומבין ופלסמין כדי לספק הערכה משולבת של קרישה ופיברינוליזה. המבחן שואף לשפר את אפיון האיזון ההמוסטאטי במחקרים ובהקשרים קליניים, מעבר להיקף הבדיקות המוסטטיות המקובלות.

בדיקת ניימכן המוסטזיס: מדידה פלואורוגנית סימולטנית של יצירת תרומבין ופלסמין בבאר אחת

למד שיטת PAGE-פיברינוגן לסינון חומרים פיברינוגנוליטיים ב-Sipunculus nudus. שיטה זו מאפשרת זיהוי מהיר של גנים פעילים ומאיצה פיתוח תרופות טרומבוליטיות לטיפול במחלות לב וכלי דם.

הפרדה מהירה והצגה של חומרים פיברינוגנוליטיים פעילים ב- Sipunculus nudus באמצעות אלקטרופורזה של ג'ל פיברינוגן-פוליאקרילאמיד

גלה סרטונים נוספים