Name: מיקרוסקופ תוך-ויטלי דו-פוטוני של ריאת העכבר המושתל (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 16 s
Description: חקור מנגנונים חיסוניים בפציעת איסכמיה-ריפויון ותגובות דלקתיות לאחר השתלת ריאה בעכבר. השיטה משתמשת במיקרוסקופיה דו-פוטונית תוך-ויטלית לניתוח תאים בזמן אמת.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>ניטור בזמן אמת של דינמיקה תאית בהשתלת ריאות עכבר

<table><tbody><tr><td>0.75% פובידון-יוד</td><td>Aplicare</td><td>NDC 52380-0126-2</td><td>לחיטוי</td></tr><tr><td>1 אינץ' 20G IV קטטר</td><td>Terumo</td><td>SROX2025CA</td><td>לצינור אנדוטרכיאלי (ETT)</td></tr> <tr><td>סרט משי 1 אינץ'</td><td>Durapore</td><td>3M ID 7100057168</td><td>לאבטחת העכבר במצב</td></tr><tr><td>20x טבילה במים עדשת אובייקטיביות ארוכה</td><td>אולימפוס</td><td>N20X-PFH</td><td></td></tr><tr><td>3M דבק</td> <td>VetbondMedi-Vet.com</td><td>10872</td><td>להדבקת כיסוי זכוכית לריאה</td></tr><tr><td>655 ננומטר נקודות קוונטיות לא ממוקדות</td><td>ThermoFisher</td><td>Q21021MP</td><td>לתיוג כלי דם</td></tr><tr><td>70% אתנול</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>EX0281</td><td>לחיטוי</td></tr><tr><td>Argent High Temp Fine Tip Cautery Pen</td><td>McKesson</td><td>231</td><td></td></tr><tr><td>טבעת O שחורה (2 ס"מ)</td> <td>חנות לחומרי בניין</td><td>N/A</td><td>להדמיה בהתאמה אישית </td></tr><tr><td>תא בורג (2)</td> <td>חנות לחומרי בניין</td><td>N / A</td><td>עבור תא הדמיה בהתאמה אישית</td></tr><tr><td>אגוז אגודל פליז (2)</td> <td>חנות לחומרי בניין</td><td>N / A</td><td>עבור תא הדמיה בהתאמה אישית</td></tr><tr><td>בופרנורפין 1.3 מ"ג/מ"ל</td><td>פידליס בריאות בעלי חיים</td><td>NDC 86084-100-30</td><td>לשליטה בכאב</td></tr><tr><td>זיקית טיטניום-ספיר פמטו-שנייה פועם לייזר</td><td>קוהרנטי</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>כיסוי זכוכית (24 מ"מ x 50 מ"מ)</td><td>Thomas Scientific</td><td>1202F63</td><td>לתא הדמיה שנבנה בהתאמה אישית</td></tr><tr><td>מהדק יתושים מעוקל (1)</td><td>Fine Science</td><td>Tools 13009-12</td><td></td></tr><tr><td>בקר חימום דו-ערוצי</td><td>Warner Instruments</td><td>TC-344B</td><td></td></tr><tr><td>מספריים עדינים (1)</td><td>Fine Science Tools</td><td>15040-11</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ זקוף שלב קבוע</td><td>Olympus</td><td>BX51WI</td><td></td></tr><tr><td>גזה (חתוכה ל-1 ס"מ על 3 ס"מ)</td><td>McKesson</td><td>476709</td><td>להניח מתחת לריאה השמאלית</td></tr><tr><td>גריז ואקום גבוה</td><td>Dow Corning</td><td>N/A</td><td>כדי להדביק זכוכית כיסוי על הצלחת העליונה</td></tr><tr><td>איזופלורן 1%</td> <td>סיגמא אולדריץ'</td><td>26675-46-7</td><td>להרדמה</td></tr><tr><td>קטמין הידרוכלוריד 100 מ"ג/מ"ל</td><td>Vedco</td><td>NDC 50989-996-06</td><td>להרדמה</td></tr><tr><td>יריעת מתכת (3 ס"מ על 7 ס"מ)</td><td>חנות לחומרי בניין</td><td>N/A</td><td>לתא הדמיה שנבנה בהתאמה אישית</td></tr><tr><td>אפליקטורים מחודדים עם קצה כותנה</td><td>Solon</td><td>56225</td><td>למניפולציה של ריאות ולדיסקציה קהה</td></tr><tr><td>Power Pro Ultra Clipper</td><td>Oster</td><td>078400-020-001</td><td></td></tr><tr><td>Puralube Veter משחת עיניים</td><td>Medi-Vet.com</td><td>11897</td><td>למניעת ייבוש עיניים</td></tr><tr><td>מאוורר לבעלי חיים קטנים</td><td>הרווארד מכשיר</td><td>55-0000</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים ישרים (1)</td> <td>Fine Science Tools</td><td>91113-10</td><td></td></tr><tr><td>דרייבר תריס תלת ערוצי</td><td>Uniblitz</td><td>VMM-D3</td><td>סורק תהודה</td></tr><tr><td>xyz מנוע צעד אופטי</td><td>Pre Scientific</td><td>OptiScan II</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine 20 מ"ג/מ"ל</td><td>Akorn</td><td>NDC 59399-110-20</td><td>לשליטה בכאב</td></tr></tbody></table>

מיקרוסקופ תוך-ויטלי דו-פוטוני של ריאת העכבר המושתל

Intravital Two-Photon Microscopy of the Transplanted Mouse Lung

לאחר שעה של אחסון איסכמי קר בטמפרטורה של 4°C, השתלנו אורתוטופית את הריאה השמאלית מעכבר B6 לתוך B6. עכבר LysM-GFP4, ולאחר מכן בוצעה הדמיה תוך חיונית של שני פוטונים, כמתואר לעיל. ביצענו הדמיה בשתי נקודות זמן לאחר ההשתלה – שעתיים (איור 3A) ו-24 שעות (איור 3B). כלי הדם מסומנים באדום על ידי נקודות ה-q המוזרקות מיד לפני ההדמיה. בנוסף, אנו יכולים לדמיין מונוציטים שתפסו q-dots ב 24 h4. ניתן לראות נויטרופילים שמקורם במושתל המסומן בירוק חודרים לשתל הריאה בסרטון המתאים 24 שעות לאחר ההשתלה (סרטון משלים 1). ניתן לדמיין נאדיות כמכתשים כהים כתוצאה מ-SHG מקולגן (חיצים לבנים באיור 3). אנו רואים ש-24 שעות לאחר ההשתלה יש יותר נויטרופילים בריאה בהשוואה לשעתיים לאחר ההשתלה (איור 3).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66566/66566fig01.jpg"> איור 1: הכנת עכבר לדימות של שני פוטונים. (A) העור נפתח מחדש מעל בית החזה השמאלי. (B) עור ורקמות רכות שנכרתו מעל החזה השמאלי. (ג,ד) הצלעות הידקו במשך 10 שניות לפני החלוקה. (E)צלעות שמאליות 3-5 שנכרתו ליצירת חלון בגודל ~0.8 ס"מ גולגולתי x 1.0 ס"מ קדמי. (F) ריאה שמאלית מוגבהת מתוך החזה השמאלי ומונחת על רצועת גזה. (G) תא הדמיה עם חלון הדמיה מכסה את הריאה השמאלית. (ח) תא ההדמיה הונח על במת המיקרוסקופ. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66566/66566fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66566/66566fig02.jpg"> איור 2: הגדרת תא ההדמיה. (A) תא הדימות שהונח על במת המיקרוסקופ. (B) תצוגה מוגדלת של מנגנון בורג טעון קפיץ כדי לאבטח את הפלטה העליונה מעל הריאה השמאלית. (C) החלק הקדמי והאחורי של הלוח העליון עם טבעת O וזכוכית כיסוי. קווים לבנים מייצגים את האזור שבו מורחים שומן ואקום כדי להדביק זכוכית כיסוי לצלחת העליונה. העיגול האפור מייצג טבעת דבק שיש למרוח על זכוכית הכיסוי. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66566/66566fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66566/66566fig03.jpg"> איור 3: הדמיה תוך-חיונית של שני פוטונים של השתלת ריאה שמאלית של עכבר מ-B6 ל-B6. עכבר LysM-GFP עם אחסון איסכמי קר של שעה אחת. ההדמיה מתבצעת ב-(A) 2 שעות ו-(B) 24 שעות לאחר ההשתלה. אדום מייצג נקודות q. ירוק מייצג נויטרופילים מ-B6. מושתל LysM-GFP. כחול מייצג SHG מנאדיות עשירות בקולגן. חיצים לבנים מראים מרחבי אוויר בנאדיות. סרגל קנה המידה מייצג 20 מיקרומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66566/66566fig03large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
איור משלים 1: פלטה עליונה עם שני נגדים מחוברים כדי לספק חימום נוסף. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66566/Supplemental%20Figure%201.zip" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.</a>
סרטון משלים 1: הדמיית קיטוע זמן של שני פוטונים של ריאה שמאלית של עכבר מושתל מ-B6 ל-B6. עכבר LysM-GFP עם 1 שעות של אחסון איסכמי קר, מבוצע ב 24 שעות לאחר ההשתלה. אדום מייצג נקודות q. ירוק מייצג נויטרופילים ממושתל LysM-GFP. כחול מייצג את הדור ההרמוני השני מנאדיות עשירות בקולגן. סרגל קנה המידה מייצג 20 מיקרומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66566/Supplemental%20Video%201.zip" target="_blank">אנא לחץ כאן להורדת קובץ זה.</a>

Complications after lung transplantation are largely related to the host immune system responding to the graft. Such immune responses are regulated by ...

intravital-two-photon-microscopy-of-the-transplanted-mouse-lung

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

פיתחנו במעבדה רומן כלים ופרוטוקולים לרכישת הדמיה intravital של התימוס. הטכניקה שלנו אמור לעזור בזיהוי של "נישות" בתוך התימוס שבו התפתחות תא T מתרחשת.

הדמיה Intravital של קורנית עכבר באמצעות 2-פוטון מיקרוסקופית

פרוטוקול זה מתאר את השימוש במיקרוסקופיה מולטיפוטונית לביצוע הדמיה ארוכת טווח ברזולוציה גבוהה של תא בודד של הריאה השלמה בזמן אמת באמצעות חלון הדמיה מיוצב ואקום.

לטווח ארוך ברזולוציה גבוהה מיקרוסקופית Intravital בריאה עם חלון הדמיה מיוצב אבק

פרוטוקול זה מתאר את הדמיה intravital של העכברים הטרנסגניים לבטא סמני פלואורסצנט תאים ספציפיים. הדמיה intravital מספק שיטה לא פולשנית ברזולוציה גבוהה תצפיות בבעלי חיים באמצעות windows מושתלת שדרכו החזיית תהליכים מיקרוסקופיים אפשרית. שיטה זו שימושית במיוחד ללמוד תהליכים האורך.

מיקרוסקופ intravital להערכת סרטניים הקשורים לשימוש מתקדם הגבי צ'יימברס Skinfold חלון על העכברים הטרנסגניים פלורסנט

במחקר זה, אנו מציגים פרוטוקול לבצע שני הפוטונים intravital הדמיה ותא ניתוח אינטראקציות בין רירית והכו אותי מאתר לאחר ההדבקה בנגיף שפעת. פרוטוקול זה יהיה רלוונטי עבור החוקרים ללמוד את הדינמיקה תא החיסון במהלך זיהומים בדרכי הנשימה.

אינטראקציה תא הדמיה ב רירית והכו אותי במהלך זיהום בנגיף שפעת באמצעות מיקרוסקופ שני הפוטונים Intravital

פרוטוקול שהוצג כאן מאפשרת אפיון ריאות ביות של לימפוציטים אנושיים הראשי תחת תנאים דלקתיים ויוו. יכול להיות עם תמונה, לכמת על-ידי קרינה פלואורסצנטית אור גיליונות מיקרוסקופיה של רקמת הריאה כימית שנוקה ריאתי חדירה של תאים חיסוניים האנושי הועבר adoptively במודל של עכברים של דלקת אלרגית.

הדמיה של לימפוציטים אנושיים יונת ריאות ב ניסיוני במודל Vivo של דלקת אלרגית בהתבסס על מיקרוסקופ אור גיליונות מתקדמות

הדמיית in vivo היא כלי רב עוצמה לחקר הביולוגיה בבריאות ובמחלות. פרוטוקול זה מתאר הדמיה טרנס-אימונית של רשתית העכבר באמצעות מיקרוסקופ סטנדרטי של שני פוטונים. הוא גם מדגים שיטות שונות של הדמיה חיה כדי לתייג פלואורסצנטיות קבוצות תאים מרובות של הרשתית.

הדמיה טרנס-אימונית של שני פוטונים In vivo של רשתית העכבר

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להשתלת חלון אופטי השוכנות לצמיתות עבור בית החזה מורין, המאפשר הדמיה תוך-ויאלית ברזולוציה גבוהה של הריאה. קביעות החלון הופכת אותו מתאים היטב לחקר תהליכים תאיים דינמיים בריאה, במיוחד אלה המתפתחים לאט, כגון התקדמות גרורתית של תאים סרטניים מופצים.

חלון קבוע לחקירת גרורות סרטן לריאה

אנו מתארים את ההשתלה התוך-פרנכימלית של תאי אב עצביים אנושיים שעברו התמרות עם וקטור מדווח כפול המבטא חלבון פלואורסצנטי ירוק-לוציפראז (GFP) במוח העכבר. לאחר ההשתלה, אות הלוציפראז נמדד שוב ושוב באמצעות תאים מושתלים in vivo bioluminescence ותאים מושתלים המבטאים GFP שזוהו בחתכי מוח באמצעות מיקרוסקופיה פלואורסצנטית.

השתלה תוך-מוחית ומעקב ביולומינסנציה In Vivo של תאי אב עצביים אנושיים במוח העכבר

כתב היד מתאר מתודולוגיה להקמה וכן ניטור גדילה אורכי של גרורות ריאה ספונטניות מגידולי שד בהזרקה אורתוטופית, הניתנת להתערבות בכל שלבי המפל הגרורתי.

ב Vivo הדמיה למדידת גרורות ריאה ספונטניות של תאי גידול שד בהזרקה אורתוטופית

טיפול תאי מציע התערבות מבטיחה לפיברוזיס ריאתי על ידי שימוש בתאי אב לתיקון רקמות פגועות ושיפור תפקוד הריאות. מכיוון שהדמיה ממלאת תפקיד מרכזי במעקב אחר אינטגרציה של תאים, כאן, אנו מתארים הדמיה מונחית חלקיקים מגנטיים מעקב in vivo של טיפול תאי בפיברוזיס ריאתי במודל עכבר.

מעקב In Vivo מונחה תמונה של תאי אב אפיתל ריאה דיסטליים מושתלים לפיברוזיס ריאתי באמצעות הדמיית חלקיקים מגנטית

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להדמיה תוך-חיונית של Mycobacterium tuberculosis המאושר על ידי BSL-2 מוחלש. מאמץ בריאה העכברית באמצעות חלון ריאה קבוע. גישה זו מאפשרת ניתוח אורך ברזולוציה תאית אחת של אינטראקציות מוקדמות בין מארח לפתוגן, כולל מיקום חיידקים, דינמיקת כלי דם וספיגת מקרופאגים באותה מיקרוסביבה ריאתית.

הדמיה תוך-חיונית של מיקובקטריום טוברקולוזיס אוקסוטרופי מוחלש בריאות עכברי במהלך זיהום תוך-כלי מוקדם

חקור מנגנונים חיסוניים בפציעת איסכמיה-ריפויון ותגובות דלקתיות לאחר השתלת ריאה בעכבר. השיטה משתמשת במיקרוסקופיה דו-פוטונית תוך-ויטלית לניתוח תאים בזמן אמת.

מיקרוסקופ תוך-ויטלי דו-פוטוני של ריאת העכבר המושתל

גלה סרטונים נוספים