24 במאי 2024
פרוטוקול זה מספק שיטה של בידוד תאי T ראשוניים ומיקרוסקופ בהילוך מהיר של נדידת תאי T בתנאים סביבתיים ספציפיים עם ניתוח כמותי.
מטרת המחקר שלנו היא להבין דפוסי נדידת תאי T בתנאים סביבתיים מוגדרים מאוד כדי לאפשר ניסויים מושכלים במבחנה ולפענח אינטראקציות מולקולריות המשפיעות על הגירה. הדמיה חיה, כגון מיקרוסקופ מולטיפוטון תוך-חיוני, משמשת להבנה in vivo של קינטיקה של תאי מערכת החיסון. אבל התקנים מיקרופלואידים הם כלי מבחנה נפוץ המציעים שליטה מדויקת על המיקרו-סביבה שלא ניתן להרשות לעצמה בדגימה חיה.
הפרוטוקול שלנו מאפשר לנו לנתח מסלולי איתות מורכבים ומספק הבנה טובה יותר לניסויים ממוקדים במבחנה כדי להמשיך ולטפל בתפקידים הביולוגיים של אותות בודדים באופן ספציפי לסוג התא. השיטה שלנו פשוטה, ניתנת לשחזור וקלה לגישה במעבדות מחקר בעלות מיקרוסקופ שדה בהיר הכולל מצלמה דיגיטלית מחוברת. לכן, הגישה שלנו מבטיחה מערך אמין של שיטות לחקר אירועי נדידת תאים דינמיים.
המעבדה שלנו תתמקד בחקירת נדידת תאי מערכת החיסון, כולל תאי T ונויטרופילים במגוון מצבי מחלה, כגון גידולים וזיהומים, ובכך להבין את המנגנונים החשובים לוויסות נדידת תאי מערכת החיסון. זה יעזור בפיתוח שיטות טיפוליות כדי לסייע בטיפול ומניעת מחלות.
This protocol provides a method for isolating primary murine T cells and conducting time-lapse microscopy to study T cell migration under controlled environmental conditions. The approach enables quantitative analysis of T cell dynamics.