Name: הכנת דגימות אורגנואידים ברשתית למיקרוסקופ אלקטרונים תמסורת (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-06-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 43 s
Description: למדו הכנת דגימות אורגנואידים ברשתית למיקרוסקופ אלקטרונים תמסורת (TEM). שיטה זו מאפשרת ניתוח תת-תאי מפורט של מבני סינפסות ברמת הננומטר, כולל סינפסות רצועתיות וקונבנציונליות, לקידום מחקר רטינלי ויישומים קליניים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>פרוטוקול ממוטב להכנת דגימת אורגנואיד ברשתית עבור TEM

<ol><li>Andreazzoli, M., Barravecchia, I., De Cesari, C., Angeloni, D., Demontis, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducible+pluripotent+stem+cells+to+model+and+treat+inherited+degenerative+diseases+of+the+outer+retina%3A+3d-organoids+limitations+and+bioengineering+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Inducible pluripotent stem cells to model and treat inherited degenerative diseases of the outer retina: 3d-organoids limitations and bioengineering solutions.</a> Cells. 10 (9), 2489(2021).</li>
<li>Moser, T., Grabner, C. P., Schmitz, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensory+processing+at+ribbon+synapses+in+the+retina+and+the+cochlea%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Sensory processing at ribbon synapses in the retina and the cochlea.</a> Physiol Rev. 100 (1), 103-144 (2020).</li>
<li>Tom Dieck, S., Brandstätter, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ribbon+synapses+of+the+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Ribbon synapses of the retina.</a> Cell Tissue Res. 326 (2), 339-346 (2006).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Webvision%3A+The+organization+of+the+retina+and+visual%22">Webvision: The organization of the retina and visual</a>. Kolb, H., Fernandez, E., Nelson, R. , University of Utah Health Sciences Center, Webvision. Salt Lake City (UT). (1995).</li>
<li>Soto, F., Zhao, L., Kerschensteiner, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synapse+maintenance+and+restoration+in+the+retina+by+ngl2%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Synapse maintenance and restoration in the retina by ngl2.</a> Elife. 7, e30388(2018).</li>
<li>Kruczek, K., Swaroop, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pluripotent+stem+cell-derived+retinal+organoids+for+disease+modeling+and+development+of+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Pluripotent stem cell-derived retinal organoids for disease modeling and development of therapies.</a> Stem Cells. 38 (10), 1206-1215 (2020).</li>
<li>O'Hara-Wright, M., Gonzalez-Cordero, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+organoids%3A+A+window+into+human+retinal+development%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Retinal organoids: A window into human retinal development.</a> Development. 147 (24), dev189746 (2020).</li>
<li>Norrie, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinoblastoma+from+human+stem+cell-derived+retinal+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Retinoblastoma from human stem cell-derived retinal organoids.</a> Nat Commun. 12 (1), 4535(2021).</li>
<li>Luni, C., Serena, E., Elvassore, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human-on-chip+for+therapy+development+and+fundamental+science%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Human-on-chip for therapy development and fundamental science.</a> Curr Opin Biotechnol. 25, 45-50 (2014).</li>
<li>Chahine Karam, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+ipsc-derived+retinal+organoids+and+retinal+pigment+epithelium+for+novel+intronic+rpgr+variant+assessment+for+therapy+suitability%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pers+Med%22%5BJournal%5D)">Human ipsc-derived retinal organoids and retinal pigment epithelium for novel intronic rpgr variant assessment for therapy suitability.</a> J Pers Med. 12 (3), 502(2022).</li>
<li>Lo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+strategies+for+glaucoma+and+optic+neuropathies%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Aspects+Med%22%5BJournal%5D)">Therapeutic strategies for glaucoma and optic neuropathies.</a> Mol Aspects Med. 94, 101219(2023).</li>
<li>Capowski, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproducibility+and+staging+of+3d+human+retinal+organoids+across+multiple+pluripotent+stem+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Reproducibility and staging of 3d human retinal organoids across multiple pluripotent stem cell lines.</a> Development. 146 (1), 171686(2019).</li>
<li>Cowan, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+types+of+the+human+retina+and+its+organoids+at+single-cell+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Cell types of the human retina and its organoids at single-cell resolution.</a> Cell. 182 (6), e1634 1623-1640 (2020).</li>
<li>Cora, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cleared+view+on+retinal+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">A cleared view on retinal organoids.</a> Cells. 8 (5), 391(2019).</li>
<li>Żak, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Light-induced+in+situ+transmission+electron+microscopy%E2%94%80development%2C+challenges%2C+and+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Lett%22%5BJournal%5D)">Light-induced in situ transmission electron microscopy─development, challenges, and perspectives.</a> Nano Lett. 22 (23), 9219-9226 (2022).</li>
<li>Tschulakow, A. V., Oltrup, T., Bende, T., Schmelzle, S., Schraermeyer, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+anatomy+of+the+foveola+reinvestigated%5BTitle%5D)+AND+%22PeerJ%22%5BJournal%5D)">The anatomy of the foveola reinvestigated.</a> PeerJ. 6, e4482(2018).</li>
<li>Syrbe, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((M%C3%BCller+glial+cells+of+the+primate+foveola%3A+An+electron+microscopical+study%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Müller glial cells of the primate foveola: An electron microscopical study.</a> Exp Eye Res. 167, 110-117 (2018).</li>
<li>Xiao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rod+bipolar+cells+receive+cone+photoreceptor+inputs+through+both+invaginating+synapses+and+flat+contacts+in+the+mouse+and+guinea+pig+retinas%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Rod bipolar cells receive cone photoreceptor inputs through both invaginating synapses and flat contacts in the mouse and guinea pig retinas.</a> J Comp Neurol. 531 (11), 1184-1197 (2023).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+degeneration+in+rpgra+mutant+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Retinal degeneration in rpgra mutant zebrafish.</a> Front Cell Dev Biol. 11, 1169941(2023).</li>
<li>Yang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+%CE%B1-synuclein+in+the+mouse+retina+is+confined+to+inhibitory+presynaptic+elements%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Expression of α-synuclein in the mouse retina is confined to inhibitory presynaptic elements.</a> J Comp Neurol. 531 (10), 1057-1079 (2023).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+degeneration+of+photoreceptor+synapse+in+ccl2%2Fcx3cr1-deficient+mice+on+crb1%28rd8%29+background%5BTitle%5D)+AND+%22Synapse%22%5BJournal%5D)">Early degeneration of photoreceptor synapse in ccl2/cx3cr1-deficient mice on crb1(rd8) background.</a> Synapse. 67 (8), 515-531 (2013).</li>
<li>De Robertis, E., Franchi, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electron+microscope+observations+on+synaptic+vesicles+in+synapses+of+the+retinal+rods+and+cones%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biophys+Biochem+Cytol%22%5BJournal%5D)">Electron microscope observations on synaptic vesicles in synapses of the retinal rods and cones.</a> J Biophys Biochem Cytol. 2 (3), 307-318 (1956).</li>
<li>Frey, T. G., Mannella, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+internal+structure+of+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Biochem+Sci%22%5BJournal%5D)">The internal structure of mitochondria.</a> Trends Biochem Sci. 25 (7), 319-324 (2000).</li>
<li>Gonzalez-Cordero, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recapitulation+of+human+retinal+development+from+human+pluripotent+stem+cells+generates+transplantable+populations+of+cone+photoreceptors%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Recapitulation of human retinal development from human pluripotent stem cells generates transplantable populations of cone photoreceptors.</a> Stem Cell Reports. 9 (3), 820-837 (2017).</li>
<li>Gao, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-specific+retinal+organoids+recapitulate+disease+features+of+late-onset+retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Patient-specific retinal organoids recapitulate disease features of late-onset retinitis pigmentosa.</a> Front Cell Dev Biol. 8, 128(2020).</li>
<li>Afanasyeva, T. aV., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+look+into+retinal+organoids%3A+Methods%2C+analytical+techniques%2C+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">A look into retinal organoids: Methods, analytical techniques, and applications.</a> Cell Mol Life Sci. 78 (19-20), 6505-6532 (2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>100 מ"מ צלחת פטרי</td><td>קורנינג</td><td>430167</td><td></td></tr><tr><td>אצטון</td><td>אלקטרונים מיקרוסקופיה מדע</td><td>10000</td><td></td></tr><tr><td>B27 תוסף</td><td>Gibco</td><td>A3582801</td><td></td></tr><tr><td>מרים תאים</td><td>סנטה קרוז</td><td>sc-395251</td><td></td></tr><tr><td>רשתות נחושת</td><td>בייג'ינג Zhongjingkeyi טכנולוגיה ושות', בע"מ</td><td></td><td></td>AZH400HH</tr><tr><td>DigitalMicrograph Software</td><td>Gatan, Inc.</td><td></td><td>תוכנה</td></tr><tr><td>Dispase</td><td>StemCell Technologies</td><td>#07913</td><td>פרוטאז חיידקי</td></tr><tr><td>DMEM/F12 בינוני</td><td>Gibco</td><td>#11320033</td><td></td></tr><tr><td>עובש הטמעה</td><td>בייג'ינג Zhongjingkeyi Technology Co., Ltd.</td><td></td><td></td>GZ10592</tr><tr><td>Epon-812 שרף</td><td>מיקרוסקופיה אלקטרונית מדע</td> <td>#14900</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי (FBS)</td><td>תעשיות ביולוגיות</td><td>#04-0021A</td><td></td></tr><tr><td>גלוטרלדהיד</td><td>מיקרוסקופיה אלקטרונית מדע</td><td>16020</td><td></td></tr><tr><td>hiPSC</td><td>Shownin ביוטכנולוגיה ושות 'בע"מ</td><td>RC01001-A</td><td></td></tr><tr><td>עופרת ציטראט</td><td>בייג'ינג Zhongjingkeyi טכנולוגיה ושות', בע"מ</td><td></td><td></td>GZ02618</tr><tr><td>L-GlutaMax</td><td>Life Technologies</td><td>#35050061</td><td>תחליף L-גלוטמין</td></tr><tr><td>מטריג'ל</td><td>קורנינג</td><td>356234</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ שקופית</td><td>CITOTEST</td><td>80312-3161</td><td></td></tr><tr><td>תוסף N2</td><td>Gibco</td><td></td> 17502048 <td></td></tr><tr><td>Na2HPO4&middot; 12H2O</td><td>Sigma</td><td>71650</td><td>רכיב של PB/PBS</td></tr><tr><td>NaH2PO4&middot; H2O</td><td>Sigma</td><td>71507</td><td>רכיב של PB/PBS</td></tr><tr><td>חומצות אמינו לא חיוניות</td><td>סיגמא</td><td>#M7145</td><td></td></tr><tr>מעבדת<td>מיקרוסקופ</td><td>אופטי מיקרוסקופ ביולוגי משקפת</td><td>Xsz-107bnii</td><td></td></tr><tr><td>OsO4</td><td>TED PELLA</td><td>4008-160501</td><td></td></tr><tr><td>תנור</td><td>Bluepard</td><td>BPG9040A</td><td></td></tr><tr><td>מדע</td><td>מיקרוסקופיה אלקטרונית</td> Paraformaldehyde <td>157-8</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומיצין</td><td>Gibco</td><td>#15140-122</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוטום חצי / אולטרה-דק</td><td>Reichert-Jung</td><td>396649</td><td></td></tr><tr><td>סיגמא טאורין</td><td></td><td>#T0625</td><td></td></tr><tr><td>כחול טולואידין</td><td>סנגון ביוטק</td><td>E670105-0100</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופי אלקטרונים</td> <td>שידורהיטאצ'י</td><td>H-7500</td><td></td></tr><tr><td>אורניל אצטט</td><td>טד פלה</td><td>CA96049</td><td></td></tr><tr><td>&בטא;-מרקפטואתנול</td><td>סיגמא</td><td>444203</td><td></td></tr></tbody></table>

הכנת דגימות אורגנואידים ברשתית למיקרוסקופ אלקטרונים תמסורת

Preparing Retinal Organoid Samples for Transmission Electron Microscopy

הקמת ROs תלת-ממדיים באמצעות התמיינות iPSC מספקת כלי רב עוצמה לחקר מנגנונים של מחלות רשתית וטיפול בתחליפי תאי גזע. למרות שאחרים הדגימו את הקשרים הסינפטיים ב-ROs מבחינה תפקודית ואימונוציטוכימית, עדויות ישירות לסינפסות קונבנציונליות וסרטיות מוגבלות מאוד. כאן אנו מציגים שיטה לחקר מבנה העל של שני סוגים של סינפסות ב- ROs על ידי TEM. לאחר 180 ימי תרבית, ROs תוקנו, הוכתמו, הוטמעו ונפרסו דק במיוחד. תצפית TEM חשפה סינפסות סרט בהדקים האקסונליים של פוטורצפטורים (איור 1 ואיור 2), אשר מפוזרים ב-OPL. תחת TEM, סרטים של מוטות מסתובבים סביב הפלישה הסינפטית, ויוצרים פרופיל בצורת פרסה עם תאים אופקיים (איור 1). למוטות יש בדרך כלל רק סרט אחד, אולם לקונוסים יש סרטים מרובים (איור 2). נוסף על כך, נצפו סינפסות כימיות קלאסיות בין תאים אמקריניים ב-IPL (איור 3). תחת TEM, הסינפסה הכימית מורכבת משלושה חלקים: הקדם-סינפטי, השסע הסינפטי והפוסט-סינפטי. קרומי התא המתאימים לחלקים הפרה-סינפטיים והפוסט-סינפטיים עבים מעט יותר משאר החלקים, והמרווח הצר בין שני הקרומים נקרא שסע סינפטי. ישנן שלפוחיות סינפטיות רבות בציטופלסמה של אתר הממברנה הקדם-סינפטית. מחקר זה מאשר את נוכחותם של קשרים סינפטיים מלאים ב- ROs תלת-ממדיים הנגזרים מ- iPSC. עם זאת, יש לציין כי שטיפה חלקית בין השלבים תוביל למשקעים של חלקיקים שחורים במהלך תהליך הכנת הדגימה (איור 4).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66590/66590fig01.jpg"> איור 1: תמונות TEM של סינפסות סרט מוט ב-ROs. (A,B) מוט ותאים אופקיים יוצרים פרופיל בצורת פרסה. סרט יחיד (ראשי חץ) נצפה בכל מוט ב-OPL של ROs, מוקף בשלפוחיות רבות. פסי קנה מידה = 0.2 מיקרומטר. קיצורים: ROs = אורגנואידים ברשתית; HC = תא אופקי; OPL = שכבת פרספקס חיצונית. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66590/66590fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66590/66590fig02.jpg"> איור 2: תמונות TEM של סינפסות סרט חרוט ב-ROs. שלוש סינפסות סרט (ראשי חץ) היו ברורות בפדיקור חרוט ב- OPL של ROs. סרגל קנה מידה = 0.2 מיקרומטר. קיצורים: TEM = מיקרוסקופ אלקטרונים תמסורת; ROs = אורגנואידים ברשתית; OPL = שכבת פרספקס חיצונית. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66590/66590fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66590/66590fig03.jpg"> איור 3: תמונת TEM של סינפסות כימיות ב-ROs. סינפסה כימית קונבנציונלית נצפתה בין תאים אמקריניים בשכבת IPL של ROs. הסינפסה הכימית מורכבת משלושה חלקים: הקדם-סינפטי, השסע הסינפטי והבתר-סינפטי. ישנן שלפוחיות סינפטיות רבות בציטופלסמה של אתר הממברנה הקדם-סינפטית. חץ מציין את כיוון השידור הסינפטי, המציין העברה של שלפוחיות רבות מתהליך AC1 אחד לפרופיל AC2 אחר. סרגל קנה מידה = 0.2 מיקרומטר. קיצורים: TEM = מיקרוסקופ אלקטרונים תמסורת; ROs = אורגנואידים ברשתית; IPL = שכבת פרספקס פנימית; ACs = תאים אמקריניים. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66590/66590fig03large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66590/66590fig04.jpg"> איור 4: דוגמה לבעיה שיכולה להתרחש במהלך תהליך הכנת הדגימה. יש הרבה חלקיקים שחורים (עיגולים) בפדיקור החרוט בגלל שטיפה לא שלמה בין השלבים. חצים: סינפסת רצועת הכלים. סרגל קנה מידה = 0.2 מיקרומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66590/66590fig04large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>

Retinal organoids (ROs) are a three-dimensional culture system mimicking human retinal features that have differentiated from induced pluripotent stem ...

preparing-retinal-organoid-samples-for-transmission-electron

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

פרימטים שאינם בני אדם היא מין translational חשוב להבנת התפתחות והזדקנות. הארגון האנטומי של הרשתית הפרימטים עשויה לספק תובנות חשובות בתנאים נורמליים ופתולוגיים אצל בני אדם.

השער המוח: בניתוח עיניים הפרימאטים

מאמר זה מדגים וידאו הקמת organotypic תרבויות wholemount הרשתית הליך cytospin לניתוח תופעות המושרה exogenously. Organotypic תרבויות wholemount רשתית לחקות...

בשנת vivo, כמו תרבות Wholemount Murine Organotypic רשתית

הפרוטוקול המתואר כאן מיועד להערכה מבנית של תכשיר רשתית שלם. זה כולל תיאורים של דיסקציה של רקמות, הרכבה על תוספת ממברנה פוליטטרפלואורואתילן הידרופילית (PTFE), העמסת בולוס עם סמנים פלואורסצנטיים, והשוואה של קיבוע עם קרבודימיד ופרפורמלדהיד לניתוח אימונוהיסטוכימי של רכיבים תאיים וסינפטיים.

פרוטוקול אופטימלי עבור רשתית Wholemount הכנה להדמיה ואימונוהיסטוכימיה

אנו מציגים פרוטוקול כדי ללמוד את התפלגות המיטוסקופיה ורשתית העין בתאים שלמים לאחר שינוי גנטי באמצעות מיקרוסקופ האור והנפח האלקטרונים כולל ascorbate peroxidase 2 ו לחזרת peroxidase צביעת, שינוי סדרתי של תאים עם ובלי גן היעד באותו מקטע, והדמיה טורית דרך אלקטרון מיקרוסקופ.

הדמיה של מיקרוסקופיה ואנדופלזמית באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים באור ונפח

מחקר זה נועד לפתח מודל תרבות רשתית אורגניוטיפית אנושית חדשנית (HORC) המונעת פגיעה בשלמות הרשתית במהלך טיפול בהסבר. זה מושגת על ידי פולחן הרשתית עם הזגוזית יתר על המידה ואת אפיתל הפיגמנט ברשתית הבסיסית-choroid (RPE-choroid) ו sclera.

אפיון טכניקה חדשנית של תרבות רשתית אורגניוטיפית אנושית

כאן אנו מציגים פרוטוקול שלב אחר שלב ליצירת אורגנואידים רשתית אנושיים בוגרים ומשתמשים בהם בבדיקת רעילות קולטני אור כדי לזהות מועמדים תרופתיים למחלת רשתית ניוונית הקשורה לגיל טלנגיאקטזיה מקולרית מסוג 2 (MacTel).

מסכי רעילות באורגנואידים ברשתית אנושית לגילוי תרופות

פרוטוקול זה מתאר שיטה יעילה להבחנה של hiPSCs לצברי שדות עיניים ויצירת אורגנואידים נוירו-רשתית באמצעות תנאי תרבית פשוטים המערבים הן מערכות תרבית הדבקה והן מערכת תרבית תלייה. סוגים אחרים של תאי עין, כגון RPE ואפיתל הקרנית, יכולים גם הם להיות מבודדים משדות עיניים בוגרים בתרביות רשתית.

יצירת אורגנואידים ברשתית מתאי גזע פלוריפוטנטיים בריאים וספציפיים למחלות רשתית הנגרמים על ידי בני אדם

פרוטוקול זה מתאר את היצירה של אורגנואידים אנדודרמליים בכבד (eHEPOs) מהירים וניתנים לשחזור. בעזרת פרוטוקול זה, ניתן לייצר eHEPOs תוך שבועיים ולהתרחב לטווח ארוך (יותר משנה) מבלי לאבד את הבידול והפונקציונליות שלהם.

יצירת אורגנואידים פונקציונאליים בכבד אנדודרמלי

פרוטוקול זה מתאר את השלבים המפורטים של הטמעה מראש של מיקרוסקופ אימונואלקטרונים, תוך התמקדות בחקר מעגלים סינפטיים ולוקליזציה של חלבונים ברשתית.

חקירת מעגלי רשתית ולוקליזציה מולקולרית על ידי הטבעה מראש של מיקרוסקופ אימונואלקטרונים

פרוטוקול זה מתאר את השלבים המפורטים להכנת דגימות רשתית עבור מיקרוסקופ אלקטרונים נפח, תוך התמקדות בתכונות המבניות של הדקי קולטני אור ברשתית.

הכנת דגימות רשתית למיקרוסקופ אלקטרונים נפח

פרוטוקול זה משלב ניקוי אופטי ותיוג חיסוני להדמיה קונפוקלית בנפח מלא של אורגנואידים ברשתית שלמה. הוא משמר מבנה תלת מימדי, מאפשר הדמיה מפורטת של מסלולים עצביים מרכזיים, משפר את חקר הבשלת הרשתית, ארגון מרחבי ויישומיו הפוטנציאליים במודלים של מחלות ורפואה מותאמת אישית.

הדמיה אורגנואידית רשתית בהרכבה שלמה עם רזולוציה תאית

למדו הכנת דגימות אורגנואידים ברשתית למיקרוסקופ אלקטרונים תמסורת (TEM). שיטה זו מאפשרת ניתוח תת-תאי מפורט של מבני סינפסות ברמת הננומטר, כולל סינפסות רצועתיות וקונבנציונליות, לקידום מחקר רטינלי ויישומים קליניים.

הכנת דגימות אורגנואידים ברשתית למיקרוסקופ אלקטרונים תמסורת

גלה סרטונים נוספים