Name: הערכה של התמוטטות מחסום דם-מוח במודל עכבר של פגיעה מוחית טראומטית קלה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-18T13:05:00.000+00:00
Duration: 5 min 19 s
Description: למדו להעריך התמוטטות מחסום דם-מוח בעכברים לאחר פגיעה מוחית טראומטית קלה. השיטה משתמשת בשני צבעים פלואורסצנטיים לניטור דינמיקת תיקון המחסום לאורך זמן.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>הדמיה מבוססת צבע פלואורסצנטי של פירוק מחסום דם-מוח בעכברים

<ol><li>Sweeney, M. D., Zhao, Z., Montagne, A., Nelson, A. R., Zlokovic, B. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier%3A+From+physiology+to+disease+and+back%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier: From physiology to disease and back.</a> Physiol Rev. 99 (1), 21-78 (2019).</li>
<li>Kabu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blast-associated+shock+waves+result+in+increased+brain+vascular+leakage+and+elevated+ros+levels+in+a+rat+model+of+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Blast-associated shock waves result in increased brain vascular leakage and elevated ros levels in a rat model of traumatic brain injury.</a> PLoS One. 10 (5), e0127971(2015).</li>
<li>Kuriakose, M., Rama Rao, K. V., Younger, D., Chandra, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+and+spatial+effects+of+blast+overpressure+on+blood-brain+barrier+permeability+in+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Temporal and spatial effects of blast overpressure on blood-brain barrier permeability in traumatic brain injury.</a> Sci Rep. 8 (1), 8681(2018).</li>
<li>Yeoh, S., Bell, E. D., Monson, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+blood-brain+barrier+disruption+in+primary+blast+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Distribution of blood-brain barrier disruption in primary blast injury.</a> Ann Biomed Eng. 41 (10), 2206-2214 (2013).</li>
<li>Readnower, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increase+in+blood-brain+barrier+permeability%2C+oxidative+stress%2C+and+activated+microglia+in+a+rat+model+of+blast-induced+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Increase in blood-brain barrier permeability, oxidative stress, and activated microglia in a rat model of blast-induced traumatic brain injury.</a> J Neurosci Res. 88 (16), 3530-3539 (2010).</li>
<li>Shetty, A. K., Mishra, V., Kodali, M., Hattiangady, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+dysfunction+and+delayed+neurological+deficits+in+mild+traumatic+brain+injury+induced+by+blast+shock+waves%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier dysfunction and delayed neurological deficits in mild traumatic brain injury induced by blast shock waves.</a> Front Cell Neurosci. 8, 232(2014).</li>
<li>Nishii, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evans+blue+and+fluorescein+isothiocyanate-dextran+double+labeling+reveals+the+precise+sequence+of+vascular+leakage+and+glial+responses+after+exposure+to+mild-level+blast-associated+shock+waves%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Evans blue and fluorescein isothiocyanate-dextran double labeling reveals the precise sequence of vascular leakage and glial responses after exposure to mild-level blast-associated shock waves.</a> J Neurotrauma. 40 (11-12), 1228-1242 (2023).</li>
<li>Hoffmann, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+and+low+molecular+weight+fluorescein+isothiocyanate+%28FITC%29-dextrans+to+assess+blood-brain+barrier+disruption%3A+Technical+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Stroke+Res%22%5BJournal%5D)">High and low molecular weight fluorescein isothiocyanate (FITC)-dextrans to assess blood-brain barrier disruption: Technical considerations.</a> Transl Stroke Res. 2 (1), 106-111 (2011).</li>
<li>Saunders, N. R., Dziegielewska, K. M., Møllgård, K., Habgood, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Markers+for+blood-brain+barrier+integrity%3A+How+appropriate+is+Evans+blue+in+the+twenty-first+century+and+what+are+the+alternatives%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Markers for blood-brain barrier integrity: How appropriate is Evans blue in the twenty-first century and what are the alternatives.</a> Front Neurosci. 9, 385(2015).</li>
<li>Manaenko, A., Chen, H., Kammer, J., Zhang, J. H., Tang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+Evans+blue+injection+routes%3A+Intravenous+versus+intraperitoneal%2C+for+measurement+of+blood-brain+barrier+in+a+mice+hemorrhage+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Comparison Evans blue injection routes: Intravenous versus intraperitoneal, for measurement of blood-brain barrier in a mice hemorrhage model.</a> J Neurosci Methods. 195 (2), 206-210 (2011).</li>
<li>Yen, L. F., Wei, V. C., Kuo, E. Y., Lai, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+patterns+of+cerebral+extravasation+by+Evans+blue+and+sodium+fluorescein+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Distinct patterns of cerebral extravasation by Evans blue and sodium fluorescein in rats.</a> PLoS One. 8 (7), e68595(2013).</li>
<li>Kawai, S., Takagi, Y., Kaneko, S., Kurosawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+three+types+of+mixed+anesthetic+agents+alternate+to+ketamine+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Anim%22%5BJournal%5D)">Effect of three types of mixed anesthetic agents alternate to ketamine in mice.</a> Exp Anim. 60 (5), 481-487 (2011).</li>
<li>Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manual+restraint+and+common+compound+administration+routes+in+mice+and+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Manual restraint and common compound administration routes in mice and rats.</a> J Vis Exp. 67, e2771(2012).</li>
<li>Satoh, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+hydrogen+prevents+social+deficits+and+depression-like+behaviors+induced+by+low-intensity+blast+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuropathol+Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Molecular hydrogen prevents social deficits and depression-like behaviors induced by low-intensity blast in mice.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 77 (9), 827-836 (2018).</li>
<li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> J Vis Exp. 65, e3564(2012).</li>
<li>Selever, J., Kong, J. Q., Arenkiel, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+approach+to+high-resolution+fluorescence+imaging+in+semi-thick+brain+slices%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A rapid approach to high-resolution fluorescence imaging in semi-thick brain slices.</a> J Vis Exp. 53, e2807(2011).</li>
<li>Jiao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+and+sensitive+antigen+retrieval+method+for+free-floating+and+slide-mounted+tissue+sections%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A simple and sensitive antigen retrieval method for free-floating and slide-mounted tissue sections.</a> J Neurosci Methods. 93 (2), 149-162 (1999).</li>
<li>Nagaraja, T. N., Keenan, K. A., Fenstermacher, J. D., Knight, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+leakage+patterns+of+fluorescent+plasma+flow+markers+after+transient+focal+cerebral+ischemia+suggest+large+openings+in+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Acute leakage patterns of fluorescent plasma flow markers after transient focal cerebral ischemia suggest large openings in blood-brain barrier.</a> Microcirculation. 15 (1), 1-14 (2010).</li>
<li>Xu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+blood-brain-barrier+leakage+using+a+combination+of+Evans+blue+and+high+molecular+weight+fitc-dextran%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Quantifying blood-brain-barrier leakage using a combination of Evans blue and high molecular weight fitc-dextran.</a> J Neurosci Methods. 325, 108349(2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>10% תמיסת חיץ ניטרלית פורמלין</td><td>FUJIFILM Wako Chemicals</td><td>062-01661</td><td></td></tr><tr><td>אנטי GFAP, ארנב</td><td>DAKO-Agilent</td><td>IR524</td><td></td></tr><tr><td>אנטי IBA1, ארנב</td><td>FUJIFILM Wako Chemicals</td><td>019-19741</td><td></td></tr><tr><td>עוף נגד עכבר IgG (H+L) נוגדן משני נספג צולב, Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-21200</td><td></td></tr><tr><td>Cryo Mount</td><td>Muto Pure Chemicals</td><td>33351</td><td>מדיום הקפאת רקמות</td></tr><tr><td>Domitor</td><td>Orion Corporation</td><td></td><td>medetomidine</td></tr><tr><td>Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) נוגדן משני בעל ספיחה צולבת גבוהה, Alexa Fluor 546</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A10040</td><td></td></tr><tr><td>Evans Blue</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>E2129</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 24 בארות פוליסטירן שקוף תחתית שטוחה לא מטופלת צלחת תרבית תאים, עם מכסה, עטוף בנפרד, סטרילי, 50/מארז</td><td>CORNING</td><td>351147</td><td></td></tr><tr><td>פלואורסצאין איזותיוציאנט &ndash; דקסטרן ממוצע מול משקל 40,000</td><td>סיגמא-אולדריץ'&nbsp;</td><td>FD40S</td><td>FITC-dextran</td></tr><tr><td>צלחת בסיס זכוכית 27 מ"מ (זכוכית מס' 1)</td> <td>AGC TECHNO GLASS</td><td>3910-035</td><td>צלחת תחתית זכוכית 35 מ"מ</td></tr><tr><td>IX83 מיקרוסקופ הפוך</td><td>OLYMPUS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MAS שקופיות מיקרוסקופ הידרופילי הידרופילי</td><td>זכוכית מטסונאמי</td><td>MAS-04</td><td></td></tr><tr><td>Matsunami&nbsp; זכוכית כיסוי (מס' 1)&nbsp; 18 x 18 מ"מ</td><td>זכוכית מטסונאמי</td><td>C018181</td><td></td></tr><tr><td>הזרקת מידזולם 10 מ"ג [SANDOZ]</td> <td>Sandoz</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde EMPROVE ESSENTIAL DAC</td><td>Merck Millipore</td><td>1.04005.1000</td><td></td></tr><tr><td>משאבה פריסטלטית</td><td>ATTO</td><td>SJ-1211 II-H</td><td></td></tr><tr><td>RODENT BRAIN MATRIX עכבר למבוגרים, 30 גרם, Coronal</td><td>ASI INSTRUMENTS</td><td>RBM-2000C</td><td>פורס מוח</td></tr><tr><td>Vetorphale</td><td>Meiji בריאות בעלי חיים</td><td>VETLI5</td><td>butorphanol</td></tr></tbody></table>

הערכה של התמוטטות מחסום דם-מוח במודל עכבר של פגיעה מוחית טראומטית קלה

Evaluation of Blood-Brain Barrier Breakdown in a Mouse Model of Mild Traumatic Brain Injury

איור 1A מציג את מהלך הזמן של הזרקת הצבע ביחס להופעת BSW, עם לחץ יתר שיא של 25 kPa. בפרוטוקול 'פוסט', התמיסה הכחולה של אוונס ניתנה תוך וסקולרית שעתיים לפני זלוף FITC-dextran, שנערך 6 שעות, יום אחד, 3 ימים ו-7 ימים לאחר חשיפה ל-BSW. בפרוטוקול 'Pre', התמיסה הכחולה של אוונס הוזרקה מיד לפני החשיפה ל-BSW. בפרוטוקול 'פוסט', ריכוז הכחול של אוונס צפוי להגיע למקסימום שלו כשעתיים לפני קיבוע הזלוף, בעוד שבפרוטוקול 'Pre', הוא צפוי להגיע למקסימום בסביבות זמן החשיפה ל-BSW (איור 1B). ריכוז ה-FITC-דקסטרן בכלי הדם במוח נשמר קבוע במשך 2 דקות במהלך הזלוף.
התווית הכחולה של אוונס הראתה שפירוק BBB החל תוך 6 שעות ונמשך עד 7 ימים לאחר החשיפה ל-BSW (איור 2A). יש לציין כי התמוטטות BBB לא התרחשה מיד לאחר החשיפה ל-BSW, מכיוון שלא הייתה אקסטרוואזציה של צבע כחול אוונס לאחר 3 שעות בפרוטוקול 'Pre' (איור 2B). באופן מפתיע, תיוג ארוך טווח עם כחול אוונס הצביע על אופיו המצטבר בפרוטוקול 'Pre' (איור 2B)7.
השימוש בשני צבעים נפרדים, שכל אחד מהם הוכנס במרווחים של שעתיים או יותר, איפשר לבחון שינויים זמניים בשלמות ה-BBB על ידי השוואת התפלגותם. איור 3 מציג תמונות פלואורסצנטיות של הפרוסות שהראו הבדל משמעותי בהתפלגות של כחול אוונס ו-FITC-dextn.
נצפו נקודות חמות פלואורסצנטיות רבות בגדלים שונים. למרות שחלק מהנקודות החמות היו בהירות מספיק כדי להיות מדורגות בין 0.1% הפיקסלים העליונים, רבות מהן היו בהירות רק במעט מהרקמות שמסביב. הפער בין הצבעים מצביע על כך ששינויים התרחשו במרווח זה. נקודות חמות המציגות רק פלואורסצנטיות כחולה של אוונס הצביעו על התמוטטות BBB מתמשכת בזמן ההזרקה הכחולה של אוונס, שתוקנה מאוחר יותר על ידי הזרקת FITC-dextran. לעומת זאת, נקודות חמות המציגות רק פלואורסצנטיות של FITC-dextern הצביעו על כך שהפרעה ב-BBB התרחשה בין שתי זריקות הצבע. לבסוף, נקודות חמות המציגות פלואורסצנטיות משני הצבעים הצביעו על פירוק BBB מתמשך במהלך כל תקופת ההזרקה.
איור 4A מציג את מספר הנקודות החמות החיוביות עבור אוונס כחול (כולל נקודות חמות כחולות של אוונס בלבד ושל אוונס כחול/FITC-dextran עם חיוביים כפולים), FITC-dextan (כולל נקודות חמות חיוביות כפולות של FITC-dextn-בלבד ו-Evans blue/FITC-dextran), או שני הצבעים (רק נקודות חמות עם אוונס כחול/FITC-dextran עם חיוביים כפולים). בפרוטוקול 'Pre' בשעה 3 שעות, נצפו נקודות חמות רבות של FITC-dextan בלבד. לאחר 6 שעות ויום אחד בפרוטוקול 'פוסט', זוהו גם נקודות חמות כחולות של אוונס בלבד וגם נקודות חמות של FITC-dextan בלבד. עם זאת, לאחר 3 ימים ו-7 ימים בפרוטוקול 'פוסט', הנקודות החמות היו חיוביות בעיקר לשני הצבעים. ממצאים אלה מצביעים על כך שהתמוטטות BBB התרחשה לאחר 3 שעות, עוצבה מחדש ביום אחד, ונמשכה עד 7 ימים לאחר החשיפה ל-BSW (איור 4B). חשוב לציין, היקף התפלגות ה-BBB נטה לרדת ב-7 ימים, כפי שהוזכר קודם לכן.
לאחר השלמת ניסויי האקסטרוואזציה של הצבע, בוצעה צביעה אימונוהיסטוכימית של הפרוסות7. סריקות התמונה האימונוהיסטוכימית הושוו באופן עקבי לאלו של אקסטרוואזציות הצבע, ואישרו כי השפעת ההעברה של החומרים הפלואורסצנטיים הייתה כמעט זניחה7. כפי שמוצג באיור 5, צבירים של אסטרוציטים ריאקטיביים היו קשורים קשר הדוק לאתרים של התמוטטות BBB. תצפיות נוספות גילו כי מיקרוגליה מופעלת ואמבואידית הייתה נוכחת לצד אסטרוציטים תגובתיים 3 ימים לאחר החשיפה ל-BSW.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66653/66653fig01.jpg"> 
איור 1: תכנון הניסוי. (A) מהלך הזמן של הניסוי. התמיסה הכחולה של אוונס הוזרקה תוך ורידית לאחר (פרוטוקול 'פוסט') או מיד לפני (פרוטוקול 'לפני') חשיפה ל-BSW, בעוד ש-FITC-dextran הוזרקה דרך הלב במשך 2 דקות לפני הקיבוע. (B) ריכוזים צפויים של Evans blue ו-FITC-dextan בכלי הדם בפרוטוקולי 'Post' ו-'Pre', בהתאמה. BSW, גלי הלם הנגרמים על ידי פיצוץ; FITC, פלואורסצאין איזותיוציאנט. איור זה נלקח מ-Nishii et al.7. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66653/66653fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66653/66653fig02.jpg"> 
איור 2: השוואה של עוצמת הקרינה בפרוסות מוח. עוצמת הקרינה של 0.1% הפיקסלים הבהירים ביותר במוח הוערכה על פני כל 12 הפרוסות והושוותה בין התנאים 'פוסט' (A) ו'טרום' (B). השונות והמשמעות של ההבדלים מצוינים. xxx מציין p &lt; 0.001; xxxx מציין p &lt; 0.0001 (ערכי p ממבחן F). *עמ' &lt; 0.05; עמ' &lt; 0.0001 (ניתוח השונות עם מבחן ההשוואות המרובות של דנט). איור זה נלקח מ-Nishii et al.7. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66653/66653fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66653/66653fig03.jpg"> 
איור 3: התמוטטות BBB נצפתה בנקודות זמן שונות באמצעות תיוג כפול עם כחול אוונס ו-FITC-dextran. כחול אוונס (מגנטה), FITC-dextran (ירוק) ותמונות ממוזגות מוצגות. פרוטוקולי הזרקת הצבע מוצגים בצד שמאל. חלק מהנקודות החמות הראו פלואורסצנטיות דומיננטית של כחול אוונס (חץ) או FITC-dextan (ראשי חץ). כוכביות מציינות את מקלעת הכורואיד וכלי הדם הקשורים. BBB, מחסום דם-מוח; FITC, פלואורסצאין איזותיוציאנט; CVO, איברים סביב החדר השלישי. סרגל קנה מידה: 1 מ"מ. איור זה נלקח מ-Nishii et al.7. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66653/66653fig03large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66653/66653fig04.jpg"> 
איור 4: כימות הנקודות החמות הקרינה. (A) מספרי הנקודות החמות החיוביות לכחול אוונס (מגנטה), FITC-dextán (ירוק) ושני הצבעים (אפור). הם נאספו מהתמונות שהתקבלו ב-3 שעות בפרוטוקול 'Pre' וכן מהתמונות שהתקבלו ב-6 שעות, יום אחד, 3 ימים ו-7 ימים בפרוטוקול 'Post'. בין 3 שעות ליום אחד, חלק ניכר מהנקודות החמות הקרינה הראו אי התאמה בין צבעים, בעוד שבין 3 ימים ל-7 ימים, כמעט ולא נצפתה אי התאמה כזו. (ב) סכמה המסכמת את מהלך הזמן של התמוטטות BBB. הציר האנכי מייצג באופן רעיוני את עוצמת דליפת הצבע עקב התמוטטות BBB. דפוס הזיגזג בין 3 שעות ליום אחד מצביע על כך שהמיקום והעוצמה של דליפת הצבע אינם יציבים בתקופה זו. FITC, פלואורסצאין איזותיוציאנט; BBB, מחסום דם-מוח; BSW, גלי הלם הנגרמים על ידי פיצוץ. איור זה נלקח מ-Nishii et al.7. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66653/66653fig04large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66653/66653fig05.jpg"> 
איור 5: ביטוי של GFAP ו-Iba1 כסמנים עבור אסטרוציטים ומיקרוגליה, בהתאמה. כל עמודה באיור מכילה תמונות פלואורסצנטיות של אקסטרוואזציה של צבע עם כחול אוונס או FITC-dextern, יחד עם תמונות אימונוהיסטוכימיות GFAP או Iba1. סרגל הצבעים מציין עוצמות פלואורסצנטיות מנורמלות של כחול אוונס ו-FITC-dextan באמצעות אלה בתוך GRN. פרוטוקולי הזרקת הצבע מוצגים בצד שמאל. הפרוסה של יום אחד בפרוטוקול 'Pre' מראה פלואורסצנטיות של כחול אוונס ו-FITC-dextn, בעוד שהפרוסה של 3 ימים בפרוטוקול 'Pre' מראה רק פלואורסצנטיות של כחול אוונס (חיצים). האזורים המסומנים על ידי החצים בתמונות אקסטרוואזציה של הצבע מתיישרים עם התמונות האימונוהיסטוכימיות. ראשי חץ מצביעים על צבירים של אסטרוציטים תגובתיים. נוגדן ה-GFAP הפוליקלונלי סימן אסטרוציטים בתוך החומר הלבן וסביבו, כמו גם ברקמת העצבים הסמוכה ל-pia mater. כתוצאה מכך, אסטרוציטים בתוך ה-DCW וקרוב אליו מסומנים באיור זה. התמונות המוגדלות המתאימות למסגרת או לחץ בעמודה Iba1 מתוארות בכניסות. פסי קנה מידה: 1 מ"מ ו-200 מיקרומטר עבור אקסטרוואזציה של צבע ותמונות אימונוהיסטוכימיות, בהתאמה. GFAP, חלבון חומצי סיבי גליה; Iba1, מולקולת מתאם קושרת סידן מיוננת 1; FITC, פלואורסצאין איזותיוציאנט; BSW, גלי הלם הנגרמים על ידי פיצוץ; DCW, חומר לבן מוחי עמוק. איור זה נלקח מ-Nishii et al.7. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66653/66653fig05large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>

Fluorescent dyes are used to determine the extent of dye extravasation that occurs due to blood-brain barrier (BBB) breakdown. Labeling with these dyes is ...

evaluation-blood-brain-barrier-breakdown-mouse-model-mild-traumatic

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

מקור: Macheda, T., et. al. מודל ראש סגור מבוקר אלקטרומגנטי של פגיעה מוחית טראומטית קלה בעכברים. J. Vis. Exp. (2022)סרטון זה מדגים את ההליך לגרימת פציעת ראש סגור במודל עכבר באמצעות מסגרת סטריאוטקסית. ההשפעה המבוקרת משכפלת פגיעה מוחית טראומטית קלה, ומאפשרת לחוקרים לחקור השפעות נוירולוגיות והתאוששות על ידי מדידת רפלקסים והתנהגות לאחר פציעה.

אינדוקציה של פגיעה מוחית טראומטית קלה במודל עכבר

מקור: Kuts, R.  et al. פגיעה מוחית הנגרמת על ידי לייזר בקליפת המוח המוטורית של חולדות. J. Vis. Exp. (2020)סרטון זה מדגים את הערכת תקינות מחסום הדם-מוח (BBB) בעקבות פגיעה מוחית הנגרמת על ידי לייזר בחולדות. צבע מעקב מוזרק לווריד הזנב, ומאפשר לו להסתובב למוח ולדלוף לרקמה דרך ה-BBB הפגוע. לאחר מכן המוח מופק ומעובד כדי לשחרר את הצבע. עוצמת הקרינה של הצבע נמדדת כדי לכמת את היקף נזק ה-BBB הנגרם על ידי לייזר.

הערכת שלמות מחסום הדם-מוח במודל של חולדות פגיעה מוחית הנגרמת על ידי לייזר 

פרוטוקול זה מתאר התניה מוקדמת היפוקסית חוזרת ונשנית, או חשיפות קצרות להיפוקסיה מערכתית המפחיתות את נפחי האוטם והפרעה במחסום הדם-מוח בעקבות חסימה חולפת של עורק המוח האמצעי בעכברים. הוא גם מפרט כימות כפול של נפח האוטם והפרעה במחסום הדם-מוח לאחר שבץ מוחי כדי להעריך את היעילות של הגנה נוירו-וסקולרית.

כימות של הגנת עצבים וכלי דם בעקבות חסימת עורק חוזר חוסר חמצן אכשור קד וחלוף התיכון מוחין של עכברים

הספורטאים סופגים כמה מאות פציעות מוחיות טראומטיות קלות (mTBI) / זעזוע מוח מדי שנה; עם זאת, את התוצאות של אלה על המוח הוא הבין היטב. לכן, מודל החיות של mTBI יחיד וחוזר על עצמו באופן עקבי משכפל סימפטומים קליניים רלוונטיים מספק את האמצעים לקדם את המחקר של mTBI ו זעזוע מוח.

דגם עכבר של פגיעה בודדת וחזרה קלה של פגיעה מוחית טראומטית

במחקר זה, אנו מציגים הליך קל ויעיל להערכת שיבוש מחסום הדם - מוח ניווניות בתנאים. כדי להשיג את המטרה שלנו, אנחנו חדורים משקל מולקולרי גבוה fluorescein isothiocyanate מתויג (FITC)-אלבומין לתוך וריד הצוואר העכבר הווריד וההערכה שלה דליפה לתוך parenchyma המוח על-ידי קרינה פלואורסצנטית מיקרוסקופ.

הערכה של חדירות מחסום הדם - מוח על ידי עירוי תוך ורידי של התווית על-ידי FITC אלבומין במודל של עכברים של מחלות ניווניות

אנו מציגים כאן פרוטוקול של מודל גל פיצוץ למכרסמים לחקור השפעות נוירוביולוגיות ופתולוגיות של פגיעה מוחית טראומטית קלה עד בינונית. הקמנו מערך מונע גז, ספסל עליון מצויד בחיישני לחץ המאפשרים דור אמין וניתן לשחזור של פגיעה מוחית קלה עד בינונית הנגרמת על ידי פיצוץ.

מודל גל פיצוץ בעצימות נמוכה להערכה פרה-קלינית של פגיעה מוחית טראומטית קלה בראש סגור במכרסמים

פרוטוקול זה מציג שיטות לאפיון התגובה הנוירו-דלקתית וההמודינמית לפגיעה מוחית טראומטית קלה ולשילוב נתונים אלה כחלק מניתוח מערכות רב-משתניות תוך שימוש ברגרסיה חלקית של ריבועים מזעריים.

ניתוח מערכות של התגובה הנוירו-דלקתית וההמודינמית לפגיעה מוחית טראומטית

הפרוטוקול מתאר פגיעה מוחית טראומטית קלה במודל עכבר. בפרט, פרוטוקול שלב אחר שלב לגרימת פגיעת ראש סגורה קלה בקו האמצע ואפיון מודל בעלי החיים מוסבר במלואו.

מודל ראש סגור מבוקר אלקטרומגנטי של פגיעה מוחית טראומטית קלה בעכברים

פרוטוקול זה מציג מודל עכברי שונה של פגיעה מוחית טראומטית קלה חוזרת ונשנית (rmTBI) הנגרמת באמצעות שיטת פגיעת ראש סגור (CHI). הגישה כוללת חלון גולגולת דליל וכלי הקשה נוזליים כדי להפחית את הדלקת הנגרמת בדרך כלל על ידי חשיפה לקרומי המוח, יחד עם שיפור יכולת השחזור והדיוק במידול rmTBI במכרסמים.

מודל עכבר שונה של פגיעה מוחית טראומטית קלה חוזרת ונשנית המשלבת חלון גולגולת דליל וכלי הקשה נוזליים

מודלים פשוטים של פגיעה מוחית טראומטית (TBI) הקלו על פיתוח גישות טיפוליות. פרוטוקול זה מתאר את היצירה של קליפת עכבר פצוע דקירה באמצעות מחטים, המאפשרת ניתוח של דימום ודלקת. מודל עכבר TBI פצוע דקירה מציע את היתרון של ביצוע ללא צורך בציוד מיוחד.

מודל עכבר פצע דקירה לחקר דימום ודלקת בפגיעה מוחית טראומטית

למדו להעריך התמוטטות מחסום דם-מוח בעכברים לאחר פגיעה מוחית טראומטית קלה. השיטה משתמשת בשני צבעים פלואורסצנטיים לניטור דינמיקת תיקון המחסום לאורך זמן.

הערכה של התמוטטות מחסום דם-מוח במודל עכבר של פגיעה מוחית טראומטית קלה

גלה סרטונים נוספים