הערכה של התמוטטות מחסום דם-מוח במודל עכבר של פגיעה מוחית טראומטית קלה

אנו מבקשים להבין את המנגנונים המורכבים העומדים בבסיס פגיעה מוחית טראומטית קלה הנגרמת מחשיפה לגלי הלם הנגרמים על ידי פיצוץ. אנו גם חוקרים שיטות להקלה על תסמינים אלה. זה היה תיאור מקיף של השלב הראשוני של התמוטטות מחסום הדם-מוח עקב גלי הלם הנגרמים על ידי פיצוץ בעוצמה נמוכה.

באופן ספציפי, ההתמוטטות מתחילה בפתאומיות כשלוש שעות לאחר החשיפה, והנגעים הנגועים עוברים שיפוץ במשך כיממה לאחר הופעתם. שיטה זו מאפשרת לנו לבחון את התפלגות ה-BBB ביתר פירוט, ומספקת מדד נוסף להערכת יעילותם של טיפולים שונים שניתן להשתמש בהם במקרה של פיצוץ. כדי להתחיל, הכינו צינור הלם לחשיפת החיה לגלי ההלם הנגרמים על ידי הפיצוץ.

מקם את העכבר המורדם במרחק של חמישה סנטימטרים מקצה היציאה של צינור ההלם, וודא שציר הגוף שלו מקביל לציר הצינור, אך אינו מיושר איתו. לאחר מכן העבירו גל הלם פיצוץ יחיד עם לחץ יתר שיא של 25 קילופסקל לראש החיה. לזריקה הכחולה של אוונס, הכינו תמיסה כחולה של אוונס במשקל של 4% בנפח.

מערבל את התמיסה ושומר אותה בחושך עד לשימוש. הזרקו את התמיסה הכחולה של אוונס לווריד הזנב במינון של 2.5 מיקרוליטר לגרם. לאחר החדרת העכבר המורדם בצבע FITC-dextern ופרפורמלדהיד, השתמש במספריים ובפינצטה כירורגית כדי להסיר בזהירות את המוח.

הניחו את המוח למשך הלילה באותו קיבוע בארבע מעלות צלזיוס. למחרת, החלף את הקיבוע ב- PBS. כדי להתחיל, השיגו את המוח הקבוע מעכבר שטופל בגלי הלם שהוזרק בצבעי כחול אוונס ו-FITC-dextran.

הכינו צלחת של 24 בארות עם 500 מיקרוליטר של 20% גליצרול במאגר פוספט המותאם ל-pH 7.4 בכל באר. בעזרת פורס מוח, חתכו את המוח ל-12 פרוסות, כל אחת בעובי של מילימטר אחד. מעבירים כל פרוסה לבאר המתאימה בצלחת 24 הבארות, ושומרים את הצלחת בארבע מעלות צלזיוס למשך שעתיים לפחות.

לאחר מכן החלף את התמיסה במאגר גליצרול פוספט 50% ואחסן אותו שוב בארבע מעלות צלזיוס למשך שעתיים לפחות. לבסוף, החלף את התמיסה ב-100% גליצרול. לתצפית מיקרוסקופית מיידית, אפשר לפרוסות לעמוד לפחות שעתיים בטמפרטורת החדר.

הוסף 500 מיקרוליטר גליצרול לתחתית צלחת זכוכית בגודל 35 מילימטר. העבירו את פרוסת המוח לתמיסת הגליצרול וכסו את פני השטח בכוס כיסוי. הסר עודפי גליצרול מקצה זכוכית הכיסוי.

מדוד את עוצמת הקרינה של הפרוסה תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי. לאחר המדידה המיקרוסקופית מחזירים את הפרוסה לבאר הצלחת. הוסף 500 מיקרוליטר של מאגר פוספט לכל באר ואחסן את צלחת 24 הבארות בארבע מעלות צלזיוס למשך הלילה.

החלף את התמיסה במאגר 30% גליצרול פוספט ודגר את הצלחת בארבע מעלות צלזיוס למשך שעתיים לפחות לפני ביצוע אימונוהיסטוכימיה התיוג הכחול של אוונס הראה כי מחסום דם-מוח או פירוק BBB החל תוך שש שעות לאחר החשיפה לגלי הלם ונמשך עד שבעה ימים. נקודות חמות פלואורסצנטיות השתנו בגודלן ובעוצמתן, כאשר נקודות חמות כחולות בלבד של אוונס מצביעות על פירוק BBB במהלך הזרקת אוונס כחול ותיקון לאחר הזרקת FITC-dextran. אשכולות של אסטרוציטים תגובתיים היו קשורים קשר הדוק לאתרי פירוק BBB שאושרו על ידי אימונוהיסטוכימיה.

מיקרוגליה פעילה ומיקרוגליה אמבואידית נצפו לצד אסטרוציטים תגובתיים שלושה ימים לאחר החשיפה לגלי ההלם של הפיצוץ.