Name: הזרקה תוך-מצלמה בחולדות עם סיכון נמוך לתופעות לוואי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-05-31T14:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 19 s
Description: למדו הזרקה תוך-מצלמה בחולדות באמצעות חתך מרכזי בקרנית להפחתת נזק רקמות. שיטה זו מאפשרת מסירה מדויקת של תרכובות לחדר הקדמי בעין ומשפרת את אמינות המחקר האופתלמולוגי הניסויי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

הניסויים בפרוטוקול אושרו על ידי ועדת ההיתרים הארצית - למדעי בעלי חיים ועומדים בהצהרת ARVO לשימוש בבעלי חיים במחקר עיניים וראייה. נקבות חולדות Sprague-Dawley, בגילאי 8-10 שבועות, שימשו במחקר הנוכחי ונחשפו למחזורי אור-חושך של 12/12 שעות. בעלי החיים התקבלו ממקור מסחרי (ראו טבלת חומרים).
1. הכנת בעלי חיים
<ol><li>הכינו תערובת מרדימה של קטמין (80 מ"ג/ק"ג משקל גוף ב-0.8 מ"ל) וקסילזין (4 מ"ג/ק"ג משקל גוף ב-0.2 מ"ל) והזריקו אותה תוך צפקית בזריקה אחת כדי להרדים את החולדות.</li>
	<li>להזריק משכך כאבים buprenorphine (0.03 מ"ג / ק"ג) intraperitoneally בזריקה אחת.</li>
	<li>החל הרדמה אופתלמית מקומית 0.4% oxybuprocaine על שתי העיניים.</li>
</ol>2. יצירת תעלת קרנית אוטמת עצמה
<ol><li>ייצוב העין על ידי החזקת לובן העין העליון בקו האמצע האנכי ליד הצומת הקורנאוסקרלי עם מלקחיים אופתלמיים כירורגיים.</li>
	<li>תחת מיקרוסקופ כירורגי, הניחו להב סטילטו סטרילי בקוטר 0.8 מ"מ, 31 G באזור הקרנית הפארא-מרכזית בקו האמצע האנכי (מעל מרכז האישון) במצב שטוח בזווית קרובה ככל האפשר לאופקית (איור 2).</li>
	<li>במצב זה, לנקב את הקרנית כדי לבצע חתך וליצור מנהרה ארוכה (2-3 מ"מ) עד שהיא חודרת לאזור המרכזי של החדר הקדמי. הימנעו מלגעת בעדשה (איור 2). הערה: מנהרה מוצלחת לא תגרום לדליפה של ההומור המימי והרידוד של החדר הקדמי.</li>
	<li>יש למרוח 0.3% ofloxacin מקומי ו-0.1% dexamethasone על העין המוזרקת.</li>
	<li>יש לבחון תחת מיקרוסקופ סדק באופן הבא.<ol><li>שימו לב לעומק החדר הקדמי של העין המוזרקת בהשוואה לעין שאינה מוזרקת. הערה: העומק צריך להיות דומה.</li>
		<li>שימו לב לעדשת העין המוזרקת בהשוואה לעין שאינה מוזרקת. הערה: העדשה צריכה להיות ברורה. האטימות עלולה לשקף נזק לעדשה במהלך ההליך הכירורגי.</li>
	</ol></li>
</ol><img alt="תרשים ניתוחי עיניים המציג חתך בקרנית; עדשה מסומנת, תא קדמי, להב רפואי." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66662/66662fig02.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> איור 2: ייצוג סכמטי של הלהב וזווית החתך ומיקומו. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66662/66662fig02large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
3. אפשרות 1: הזרקה תוך-מצלמה של טריפאן כחול להערכת הזריקה המוצלחת לחדר הקדמי
<ol><li>יש להעמיס 5 μL של טריפאן כחול לתוך מזרק סטרילי של 10 μL זכוכית המילטון עם מחט קהה 34 G. הערה: הזרקת טריפאן כחול מתוארת כאמצעי להערכת הצלחת ההזרקה במהלך שלבי כיול המודל או ההתקנה. בהגדרות הניסוי, ניתן לטעון את המזרק בתמיסה של התרכובת הנבחרת.</li>
	<li>הכנס את מחט המזרק הטעונה דרך התעלה שנוצרה בסעיף 2 לתא הקדמי.</li>
	<li>יש להזריק ולהחזיק את המחט במקומה לאחר ההזרקה למשך 2-3 שניות עד שכל הנוזלים יתבהרו.</li>
	<li>הסר את המחט על ידי שליפתה החוצה בעדינות ובאיטיות כדי למנוע דליפה מתעלת הקרנית.</li>
	<li>יש לבחון תחת מיקרוסקופ חריץ. להעריך את עומק החדר הקדמי כדי למנוע רידוד ולאמת את נוכחותו של כחול טריפאן בחדר הקדמי.</li>
	<li>יש לחזור על בדיקת החריץ לאחר 24 שעות, 48 שעות ו-72 שעות.</li>
</ol>4. אפשרות 2: הזרקה תוך-מצלמה של Hoechst להערכת הזמינות הביולוגית של חומר מוזרק לשכבת תאי האנדותל
<ol><li>יש להעמיס 5 μL של Hoechst לתוך מזרק המילטון סטרילי זכוכית 10 μL עם מחט קהה 34 G. הערה: הזרקת Hoechst מתוארת כאמצעי להערכת הזמינות הביולוגית של חומר מוזרק על ידי ספיגה לתוך שכבת תאי האנדותל והיא שימושית במהלך כיול המודל או שלבי ההתקנה. בהגדרות הניסוי, ניתן לטעון את המזרק בתמיסה של התרכובת הנבחרת.</li>
	<li>הכנס את מחט המזרק הטעונה דרך התעלה שנוצרה בסעיף 2 לתא הקדמי.</li>
	<li>יש להזריק ולהחזיק את המחט במקומה לאחר ההזרקה למשך 2-3 שניות עד שכל הנוזלים יתבהרו.</li>
	<li>הסר את המחט על ידי שליפתה החוצה בעדינות ובאיטיות כדי למנוע דליפה מהחתך בתעלת הקרנית.</li>
	<li>כ 15-20 דקות לאחר ההזרקה, להרדים את החולדות על ידי הזרקה intraperitoneal של 500 מ"ג / ק"ג נתרן pentobarbitone.</li>
	<li>לחנך את שתי העיניים ולבודד קרניות. לאסוף את הקרנית שלא הוזרקה כבקרה.</li>
	<li>יש להכתים את שתי הקרניות ב-0.5% Alizarin Red S בהתאם להוראות היצרן לזיהוי תאי אנדותל.</li>
	<li>בחנו תחת מיקרוסקופ אור כדי לדמות את הצביעה האדומה-אליזרינית של תאי אנדותל ותחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי כדי לצפות בצביעת הוכסט, בהשוואה לקרנית שלא הוזרקה כבקרה.</li>
</ol>

<meta charset="utf8"></head><body>טכניקת הזרקה תוך-מצלמה אופטימלית של חולדות להפחתת נזק לרקמות

<ol><li>Ramsay, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+and+conjunctival+drug+permeability%3A+Systematic+comparison+and+pharmacokinetic+impact+in+the+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pharm+Sci%22%5BJournal%5D)">Corneal and conjunctival drug permeability: Systematic comparison and pharmacokinetic impact in the eye.</a> Eur J Pharm Sci. 119, 83-89 (2018).</li>
<li>Cholkar, K., Dasari, S. R., Pal, D., Mitra, A. K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCholkar%2C+K+%22Eye%3A+Anatomy%2C+Physiology+and+Barriers+to+Drug+Delivery.+Ocular+Transporters+and+Receptors%22">Eye: Anatomy, Physiology and Barriers to Drug Delivery. Ocular Transporters and Receptors</a>. , Elsevier, Woodhead Publishing. (2013).</li>
<li>Prausnitz, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Permeability+of+cornea%2C+sclera%2C+and+conjunctiva%3A+A+literature+analysis+for+drug+delivery+to+the+eye%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharm+Sci%22%5BJournal%5D)">Permeability of cornea, sclera, and conjunctiva: A literature analysis for drug delivery to the eye.</a> J Pharm Sci. 87 (12), 1479-1488 (1998).</li>
<li>Varela-Fernández, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+delivery+to+the+posterior+segment+of+the+Eye%3A+Biopharmaceutic+and+pharmacokinetic+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Drug delivery to the posterior segment of the Eye: Biopharmaceutic and pharmacokinetic considerations.</a> Pharmaceutics. 12 (3), 269(2020).</li>
<li>Gautam, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracameral+drug+delivery%3A+A+Review+of+agents%2C+indications%2C+and+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ocul+Pharmacol+Ther%22%5BJournal%5D)">Intracameral drug delivery: A Review of agents, indications, and outcomes.</a> J Ocul Pharmacol Ther. 39 (2), 102-116 (2023).</li>
<li>Shah, T. J., Conway, M. D., Peyman, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracameral+dexamethasone+injection+in+the+treatment+of+cataract+surgery+induced+inflammation%3A+design%2C+development%2C+and+place+in+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Intracameral dexamethasone injection in the treatment of cataract surgery induced inflammation: design, development, and place in therapy.</a> Clin Ophthalmol. 12, 2223-2235 (2018).</li>
<li>Perlman, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+human+disease%3A+An+evolutionary+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Evol+Med+Public+Health%22%5BJournal%5D)">Mouse models of human disease: An evolutionary perspective.</a> Evol Med Public Health. 2016 (1), 170-176 (2016).</li>
<li>Chawla, S., Jena, S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aChawla%2C+S+%22The+Anatomy+and+Physiology+of+Laboratory+Rat.Essentials+of+Laboratory+Animal+Science%3A+Principles+and+Practices%22">The Anatomy and Physiology of Laboratory Rat.Essentials of Laboratory Animal Science: Principles and Practices</a>. , Springer. Singapore. (2021).</li>
<li>Lundström, M., Wejde, G., Stenevi, U., Thorburn, W., Montan, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endophthalmitis+after+cataract+surgery%3A+a+nationwide+prospective+study+evaluating+incidence+in+relation+to+incision+type+and+location%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Endophthalmitis after cataract surgery: a nationwide prospective study evaluating incidence in relation to incision type and location.</a> Ophthalmology. 114 (5), 866-870 (2007).</li>
<li>Fine, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clear+corneal+incisions%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Ophthalmol+Clin%22%5BJournal%5D)">Clear corneal incisions.</a> Int Ophthalmol Clin. 34 (2), 59-72 (1994).</li>
<li>Herretes, S., Stark, W. J., Pirouzmanesh, A., Reyes, J. M. G., McDonnell, P. J., Behrens, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflow+of+ocular+surface+fluid+into+the+anterior+chamber+after+phacoemulsification+through+sutureless+corneal+cataract+wounds%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Inflow of ocular surface fluid into the anterior chamber after phacoemulsification through sutureless corneal cataract wounds.</a> Am J Ophthalmol. 140 (4), 737-740 (2005).</li>
<li>Masket, S., Belani, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proper+wound+construction+to+prevent+short-term+ocular+hypotony+after+clear+corneal+incision+cataract+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cataract+Refract+Surg%22%5BJournal%5D)">Proper wound construction to prevent short-term ocular hypotony after clear corneal incision cataract surgery.</a> J Cataract Refract Surg. 33 (3), 383-386 (2007).</li>
<li>Taban, M., Rao, B., Reznik, J., Zhang, J., Chen, Z., McDonnell, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+morphology+of+sutureless+cataract+wounds+-+Effect+of+incision+angle+and+location%5BTitle%5D)+AND+%22Surv+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Dynamic morphology of sutureless cataract wounds - Effect of incision angle and location.</a> Surv Ophthalmol. 49, Suppl 2 S62-S72 (2004).</li>
<li>Belforte, N., Sande, P. H., de Zavalía, N., Dorfman, D., Rosenstein, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+benefit+of+radial+optic+neurotomy+in+a+rat+model+of+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Therapeutic benefit of radial optic neurotomy in a rat model of glaucoma.</a> PLoS One. 7 (3), e34574(2012).</li>
<li>Moreno, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+experimental+model+of+glaucoma+in+rats+through+intracameral+injections+of+hyaluronic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">A new experimental model of glaucoma in rats through intracameral injections of hyaluronic acid.</a> Exp Eye Res. 81 (1), 71-80 (2005).</li>
<li>Belforte, N., Sande, P., de Zavalía, N., Knepper, P., Rosenstein, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+chondroitin+sulfate+on+intraocular+pressure+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Effect of chondroitin sulfate on intraocular pressure in rats.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 51 (11), 5768-5775 (2010).</li>
<li>Matsumoto, Y., Kanamori, A., Nakamura, M., Negi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+chronic+glaucoma+model+induced+by+intracameral+injection+of+microbeads+suspended+in+sodium+sulfate-sodium+hyaluronate%5BTitle%5D)+AND+%22Jpn+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Rat chronic glaucoma model induced by intracameral injection of microbeads suspended in sodium sulfate-sodium hyaluronate.</a> Jpn J Ophthalmol. 58 (3), 290-297 (2014).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+rat+model+of+ocular+hypertension+by+a+single+intracameral+injection+of+cross-linked+hyaluronic+acid+hydrogel+%28Healaflow%C2%AE+%29%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+Clin+Pharmacol+Toxicol%22%5BJournal%5D)">A novel rat model of ocular hypertension by a single intracameral injection of cross-linked hyaluronic acid hydrogel (Healaflow® ).</a> Basic Clin Pharmacol Toxicol. 127 (5), 361-370 (2020).</li>
<li>Bowen, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+the+safety+and+efficacy+of+intracameral+cefuroxime%2C+moxifloxacin+and+vancomycin+at+the+end+of+cataract+surgery%3A+a+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of the safety and efficacy of intracameral cefuroxime, moxifloxacin and vancomycin at the end of cataract surgery: a meta-analysis.</a> Br J Ophthalmol. 102 (9), 1268-1276 (2018).</li>
<li>Kato, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prophylactic+antibiotics+for+postcataract+surgery+endophthalmitis%3A+a+systematic+review+and+network+meta-analysis+of+6.8+million+eyes%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Prophylactic antibiotics for postcataract surgery endophthalmitis: a systematic review and network meta-analysis of 6.8 million eyes.</a> Sci Rep. 12 (1), 17416(2022).</li>
<li>Wang, M., Liu, Y., Dong, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+cefuroxime+intracameral+injection+antibiotic+prophylactic+on+postoperative+endophthalmitis+wound+post-cataract%3A+A+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Wound+J%22%5BJournal%5D)">Effect of cefuroxime intracameral injection antibiotic prophylactic on postoperative endophthalmitis wound post-cataract: A meta-analysis.</a> Int Wound J. 20 (5), 1376-1383 (2023).</li>
<li>Katz, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracameral+cefuroxime+and+the+incidence+of+post-cataract+endophthalmitis%3A+an+Israeli+experience%5BTitle%5D)+AND+%22Graefes+Arch+Clin+Exp+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Intracameral cefuroxime and the incidence of post-cataract endophthalmitis: an Israeli experience.</a> Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 253 (10), 1729-1733 (2015).</li>
<li>Lipnitzki, I., Ben Eliahu, S., Marcovitz, A. L., Ezov, N., Kleinmann, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraocular+concentration+of+moxifloxacin+after+intracameral+injection+combined+with+presoaked+intraocular+lenses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cataract+Refract+Surg%22%5BJournal%5D)">Intraocular concentration of moxifloxacin after intracameral injection combined with presoaked intraocular lenses.</a> J Cataract Refract Surg. 40 (4), 639-643 (2014).</li>
<li>Colleaux, K. M., Hamilton, W. K., Morgan, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+prophylactic+antibiotics+and+incision+type+on+the+incidence+of+endophthalmitis+after+cataract+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Can+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Effect of prophylactic antibiotics and incision type on the incidence of endophthalmitis after cataract surgery.</a> Can J Ophthalmol. 35 (7), 373-378 (2000).</li>
<li>Libre, P. E., Della-Latta, P., Chin, N. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracameral+antibiotic+agents+for+endophthalmitis+prophylaxis%3A+A+pharmacokinetic+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cataract+Refract+Surg%22%5BJournal%5D)">Intracameral antibiotic agents for endophthalmitis prophylaxis: A pharmacokinetic model.</a> J Cataract Refract Surg. 29 (9), 1791-1794 (2003).</li>
<li>Carino, N. S., Slomovic, A. R., Chung, F., Marcovich, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topical+tetracaine+versus+topical+tetracaine+plus+intracameral+lidocaine+for+cataract+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cataract+Refract+Surg%22%5BJournal%5D)">Topical tetracaine versus topical tetracaine plus intracameral lidocaine for cataract surgery.</a> J Cataract Refract Surg. 24 (12), 1602-1608 (1998).</li>
<li>Minakaran, N., Ezra, D. G., Allan, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topical+anaesthesia+plus+intracameral+lidocaine+versus+topical+anaesthesia+alone+for+phacoemulsification+cataract+surgery+in+adults%5BTitle%5D)+AND+%22Cochrane+Database+Syst+Rev%22%5BJournal%5D)">Topical anaesthesia plus intracameral lidocaine versus topical anaesthesia alone for phacoemulsification cataract surgery in adults.</a> Cochrane Database Syst Rev. 7 (7), CD005276 (2020).</li>
<li>Dan-Ni, W., Li-Dian, H., Zhi-Guo, P., Qiang, W., Lei, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracameral+anti-VEGF+injection+for+advanced+neovascular+glaucoma+after+vitrectomy+with+silicone+oil+tamponade%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Intracameral anti-VEGF injection for advanced neovascular glaucoma after vitrectomy with silicone oil tamponade.</a> Int J Ophthalmol. 14 (3), 129-135 (2021).</li>
<li>Bhagat, P. R., Agrawal, K. U., Tandel, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+of+the+effect+of+injection+bevacizumab+through+various+routes+in+neovascular+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Curr+Glaucoma+Pract%22%5BJournal%5D)">Study of the effect of injection bevacizumab through various routes in neovascular glaucoma.</a> J Curr Glaucoma Pract. 10 (2), 39-48 (2016).</li>
<li>Al-Qaysi, Z. K., Beadham, I. G., Schwikkard, S. L., Bear, J. C., Al-Kinani, A. A., Alany, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sustained+release+ocular+drug+delivery+systems+for+glaucoma+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin+Drug+Deliv%22%5BJournal%5D)">Sustained release ocular drug delivery systems for glaucoma therapy.</a> Expert Opin Drug Deliv. 20 (7), 905-919 (2023).</li>
<li>Eghrari, A. O., Gottsch, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fuchs%27+corneal+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Fuchs' corneal dystrophy.</a> Expert Rev Ophthalmol. 5 (2), 147-159 (2010).</li>
</ol>

הזמינות הביולוגית של תרכובות המועברות על ידי מתן מקומי לפני השטח של העין מוגבלת מאוד, בדרך כלל &lt;5%1. תרכובות המנוהלות על ידי טיפות עיניים מסולקות בעיקר על ידי ניקוז, דמעות מושרה, תחלופת נוזל דמעות וספיגת הלחמית. בנוסף, חלחול התרכובות דרך משטח העין מוגבל מאוד על ידי מחסום הקרנית-לחמית 1,2,3. הקרנית מורכבת משלוש שכבות עיקריות: האפיתל החיצוני ביותר, סטרומה הביניים והאנדותל הפנימי ביותר. אפיתל הקרנית השטחי מחובר על ידי צמתים הדוקים חזקים ויוצר התנגדות פארא-תאית גבוהה, המהווה את המחסום העיקרי לחדירות חומרים. שכבות אפיתל מרובות מגבילות עוד יותר את החלחול של מולקולות הידרופיליות וגדולות דרך החללים הבין-תאיים של אפיתל הקרנית. במקום האפיתל, הסטרומה מורכבת מסיבי קולגן ומכילה נקבוביות מימיות. בניגוד לאפיתל הקרנית, הסטרומה מאפשרת תנועה של תרופות הידרופיליות; עם זאת, הוא אטום מאוד לתרכובות ליפופיליות 1,2,3. יחד, אפיתל הקרנית ושכבות הסטרומה מציגים מחסומי רקמות עיקריים המגבילים את ספיגת התרופות. אנדותל הקרנית אינו נחשב להגביל את העברת התרופות.
חלופה למסלול המסירה של הקרנית היא מסלול הלחמית. הלחמית היא שכבה מרובת אפיתל המכסה את הצד הפנימי של העפעפיים ואת החלק הקדמי של הסקלרה. הלחמית מאופיינת בצמתים הדוקים פחות מאשר אפיתל הקרנית, מה שמאפשר חדירות טובה יותר של תרופות הידרופיליות. עם זאת, וסקולריזציה של הלחמית גורמת לספיגה מערכתית של חלק גדול מהמולקולות המנוהלות, ושוב מגבילה מאוד את הזמינות הביולוגית של תרכובות המועברות לחדר הקדמי 1,2. דרך יעילה לעקוף את מחסומי חדירות העין החיצונית היא לספק את התרופה ישירות לאזור המעניין. לדוגמה, הזרקה intravitreal נפוץ עבור משלוח לתוך הומור הזגוגית4. כמו כן, הזרקה intracameral משמש למסירה לתוך החדר הקדמי5. קביעת ריכוז יעיל בחדר הקדמי היא קריטית למצבים קליניים שונים, כגון טיפול בזיהום על ידי הזרקה תוך-מצלמה של אנטיביוטיקה וטיפולים אנטי דלקתיים לאחר הניתוח בניתוחי קטרקט. למרות היתרון של זמינות ביולוגית משופרת של חומרים המוענקת על ידי הזרקה תוך מצלמה, ישנם חששות בטיחות עיקריים שיש לקחת בחשבון. לדוגמה, הזרקת תרופה תוך-מצלמה עלולה לגרום ללחץ תוך עיני מוגבר, תסמונת מקטע קדמי רעיל ותסמונת הרס תאי אנדותל רעילים 5,6. לכן, חיוני להעריך בזהירות במחקרים פרה-קליניים את היעילות והבטיחות של תרופות הניתנות על ידי זריקות intracameral כדי למקסם את יעילות הטיפול ולמזער תופעות לוואי פוטנציאליות בחולים.
מודלים ניסיוניים של בעלי חיים הם הכרחיים במחקרים פרה-קליניים כדי לחקור טיפולים חדשים. מכרסמים קטנים, כגון עכברים וחולדות, הם חיות המעבדה הנפוצות ביותר למטרות כאלה. בעלי חיים אלה מפגינים קווי דמיון רבים לאנטומיה ולפיזיולוגיה האנושית, ומספקים תובנות חשובות. יתר על כן, השימוש בהם הוא יתרון כלכלי בשל גודלם הקטן, קלות התחזוקה, ההריון המהיר והיכולת לייצר מספר גדול של צאצאים7.
למרות השימוש הנרחב במכרסמים קטנים במודלים של מחלות עיניים, ממדי העיניים והאנטומיה הייחודיים שלהם מציבים אתגרים משמעותיים במהלך מניפולציות ניסיוניות. לדוגמה, הליכים כמו זריקות תוך-מצלמה, שהם פשוטים יחסית בבני אדם, הופכים תובעניים מבחינה טכנית בעכברים ובחולדות. האתגרים נובעים מגורמים כמו הנפח הקטן של הומור מימי, העדשה הגדולה יחסית והלא גמישה, והמיקום והעקמומיות החסימתית של העדשה בתוך עיני המכרסמים (איור 1)8. אתגרים אלה מגבירים את הסיכון לנזק במהלך הזרקות תוך-מצלמה במכרסמים, מה שמוביל לתופעות לוואי אפשריות ומציג שונות ניסויית שיכולה להשפיע על תקפות מסקנות המחקר. במחקר שלנו, פיתחנו בהצלחה הליך להזרקה תוך-מצלמה בטוחה בחולדות. הטכניקה כוללת יצירת מנהרה ארוכה, שטוחה ואטומה עצמית בקרנית לתוך החדר הקדמי. שיטה זו לא רק מבטיחה דיוק אלא גם משפרת את יכולת השחזור הניסיונית, ומטפלת בבעיות הקשורות לטכניקות הזרקה במכרסמים קטנים.
<img alt="דיאגרמת אנטומיה של חולדה לעומת עין אנושית; קשתית, אישון, עדשה, קרנית, השוואת תא קדמי." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66662/66662fig01.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> איור 1: ייצוג סכמטי של מאפייני המקטע האנטומי הקדמי של חולדה ועיניים אנושיות. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66662/66662fig01large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>

<table><tbody><tr><td>אליזרין אדום&nbsp;</td><td>אלפא אייזר</td><td>042040.5</td><td></td></tr><tr><td>בופרנורפין&nbsp;</td><td>ריכטר פארמה</td><td>102047</td><td></td></tr><tr><td>דקסמתזון 0.1%&nbsp;</td><td>פישר פרמצבטיקה</td><td>393102-0413</td><td></td></tr><tr><td>מזרק זכוכית המילטון 10 &mu; L&nbsp;</td><td>המילטון ושות'</td><td></td><td></td>721711</tr><tr><td>Hoeschst</td><td>Merck</td><td>B2261</td><td></td></tr><tr><td>קטמין</td><td>ברמר פארמה GMBH (מדימרקט)</td><td>17889</td><td></td></tr><tr><td>אופלוקסצין 0.3% טיפות עיניים</td><td>אלרגן</td><td>E92170</td><td></td></tr><tr><td>אוקסיבופרוקאין הידרוכלוריד 0.4%&nbsp;</td><td>פישר פרמצבטיקה</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>פנטוברביטל נתרן 200 מ"ג/מ"ל</td><td>CTS</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ חריץ&nbsp;</td><td>Haag-streit bern</td><td>b-90019115</td><td></td></tr><tr><td>Sprague-Dawley Rats</td><td>Envigo</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>להב סטילטו 31 גרם 0.8 מ"מ&nbsp;</td><td>Tecfen רפואי (skymed)</td><td>QKN2808</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ כירורגי</td><td>Zeiss</td><td>OPMI-6 CFC</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue</td><td>Sartorius</td><td>03-102-1B</td><td></td></tr><tr><td>קסילזין</td><td>Eurovet בריאות בעלי חיים&nbsp;</td><td></td><td></td>615648</tr></tbody></table>

הזרקה תוך-מצלמה בחולדות עם סיכון נמוך לתופעות לוואי

Intracameral Injection in Rats with Low Risk of Adverse Effects

לחולדות Sprague Dawley הוזרקו 5 μL של טריפאן כחול בהתאם לפרוטוקול שתואר לעיל. בדיקת מנורת חריץ מיד לאחר ההזרקה הראתה שהחדר היה מוכתם בכחול טריפאן, מה שמעיד על כך שהחומר המוזרק הגיע לחדר הקדמי (איור 3). יתר על כן, עומק החדר הקדמי היה שלם, מה שמרמז על כך שההזרקה לא גרמה לדליפה של הומור מימי ורידוד של החדר.
<img alt="תמונת מיקרוסקופ של עין חולדה למחקר ברפואת עיניים, תוך הדגשת ניתוח מבנה הקרנית." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66662/66662fig03.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 3"> איור 3: תא קדמי שלם לאחר הזרקה תוך-מצלמה. כחול טריפאן הוזרק לחדר הקדמי של החולדה. בדיקת מיקרוסקופ חריץ מדגימה נוכחות של טריפאן כחול ללא דליפה או רידוד של החדר הקדמי. סרגל קנה מידה = 1 מ"מ. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66662/66662fig03large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
לאחר מכן, Hoechst, צבע פלואורסצנטי חדיר לתא הקושר DNA ומכתים גרעיני תאים, הוזרק כדי להעריך את הזמינות הביולוגית של תרופות המועברות על ידי מסלול ההזרקה התוך-קמראלי המתואר. ספיגת Hoechst על ידי תאי אנדותל הוערכה 15 דקות לאחר ההזרקה על ידי בידוד קרניות והתבוננות תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי. כדי לזהות תאי אנדותל, הקרניות הוכתמו ב-Alizarin Red S, אשר מכתים את הגבולות הבין-תאיים של שכבת תאי האנדותל.  כביקורת, בחנו את העין שלא הוזרקה מאותה חולדה. התוצאות שלנו מראות כי שכבת תאי האנדותל הייתה שלמה לאחר ההזרקה, מה שתומך בכך שההליך המתואר אינו גורם נזק לאנדותל. יתר על כן, תאי אנדותל היו חיוביים לצביעה גרעינית של Hoechst, והדגימו את ספיגת Hoechst המוזרק לאחר הזרקה תוך-מצלמה (איור 4).
<img alt="מיקרוסקופ תאים מוכתמים: אליזרין אדום, הוכסט, מיזוג; תהליך הדמיה; תוצאות מיקרוסקופיה." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66662/66662fig04.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 4"> איור 4: זמינות ביולוגית של חומר מוזרק תוך-מצלמה לשכבת תאי האנדותל. הוכסט הוזרק לחדר הקדמי של החולדה. הקרנית בודדה 15 דקות לאחר ההזרקה, הוכתמה ב-Alizarin Red S כדי לצפות בתאי אנדותל, וצולמה תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי כדי לצפות בצביעת Hoechst. תמונות כיסוי מדגימות צביעת Hoechst גרעינית בתאי אנדותל בקרנית. פסי קנה מידה = 50 מיקרומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66662/66662fig04large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>

Intracameral injection is a standard administration routine in ophthalmology. The application of intracameral injection in rodents for research is ...

intracameral-injection-in-rats-with-low-risk-of-adverse-effects

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

הזרקת Intravitreous היא טכניקה בשימוש נרחב במחקר מדעי חזותיים מחלות עיניים או כיישום ישירה של טיפול מקומי. סרט הווידאו הזה הוכיח פרוטוקול להזרקה intravitreous שימוש במזרק 1ml עם כוס פיפטה. טיפים שימושיים לגבי מניעת דימום מסיבי נזק העדשה מקבלים.

הזרקת Intravitreous להקמת Ocular דגם מחלות

עבודה בצורה בטוחה ואנושית עם מכרסמי מחקר דורשת מיומנות ליבה בשיטות טיפול ובאיפוק. מאמר זה יציג את העקרונות הבסיסיים הנדרשים לטיפול בצורה בטוחה ויעילים לנהל תרכובות לעכברים וחולדות.

איפוק ידני ומסלולי מנהל מתחם נפוצים בעכברים וחולדות

זריקות תת-רשתית הן הטכניקה הנפוצה ביותר להעברת חומרים טיפוליים גדולים כגון חלבונים ווקטורים נגיפיים לקולטני האור ולאפיתל הפיגמנט ברשתית. שיטה חלופית בעכברים המכוונת בהצלחה לחלל התת-רשתית עם נזק אגבי מינימלי וזמני התאוששות מהירים מתוארת כאן.

שיטת הזרקה אלטרנטיבית והמאומתת עבור גישת שטח subretinal<i&gt; דרך</i&gt; בגישה אחורית Transcleral

פרוטוקול זה נועד להדגים מסלול מתן ורידי הניתן לשחזור שניתן להשתמש בו בחולדות ובעכברים לאורך תקופת היילוד. הליך זה חשוב למחקרי מכרסמים פרה-קליניים המעוניינים לשקף מתן תרופתי ביחידות לטיפול בילודים בעיקר באמצעות מתן תוך ורידי.

מודל מכרסם יילוד של הזרקת ורידים רטרואורביטלית

מתואר הליך כירורגי לביצוע זריקות לתוך בור המים המותני של החולדה הצעירה. גישה זו שימשה להעברה תוך-תאית של וקטורים של ריפוי גנטי, אך צפוי כי גישה זו תוכל לשמש למגוון טיפולים, כולל תאים ותרופות.

משלוח וקטורי תוך-תאי בחולדות צעירות באמצעות הזרקת בור מים מותני

מאמר זה מתאר שיטות להזרקה תת-רשתית בחולדות, תוך שימוש בהדמיה תוך ניתוחית כדי לשלוט הן באתר ההזרקה והן באזור היפרדות הרשתית.

הדמיה תוך ניתוחית של הזרקה תת-רשתית והיפרדות רשתית בחולדות

פרוטוקול זה מתאר טכניקה ייחודית המשתמשת בגישה טרנס-לחמית לגישה לעצב הראייה של החולדה לצורך זריקות.

גישה טרנס-לחמית להזרקה לעצב הראייה של החולדה

מחקר זה מציג מתודולוגיה להעברת טיפולים לרשתית ולעצבי הראייה של החולדה הבוגרת. בנוסף, מוצגת שיטה ייחודית לאחזור רקמות לאיסוף מלמעלה למטה של עצב הראייה והרשתית בחולדה בוגרת.

מתן טיפולי בעיניים ושליפת רקמות מתקדמת בחולדות בוגרות

בסרטון הזה אנחנו מדגימים כיצד לבודד תאים mononuclear ממערכת העצבים המרכזית של חולדות עם Encephalomyelitis אוטואימונית ניסיונית.

בידוד של תאים mononuclear ממערכת העצבים המרכזית של חולדות עם EAE

כאן אנחנו מראים איך לעשות רטרו מסלולית הזרקת דג הזברה מבוגר.

רטרו מסלולית הזרקה של דג הזברה למבוגרים

למדו הזרקה תוך-מצלמה בחולדות באמצעות חתך מרכזי בקרנית להפחתת נזק רקמות. שיטה זו מאפשרת מסירה מדויקת של תרכובות לחדר הקדמי בעין ומשפרת את אמינות המחקר האופתלמולוגי הניסויי.

הזרקה תוך-מצלמה בחולדות עם סיכון נמוך לתופעות לוואי

גלה סרטונים נוספים