Name: דגימת דם ומדידת הורמונים לקביעת השלב במחזור השחלה במרמוסטים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-07-05T13:20:00.000+00:00
Duration: 6 min 17 s
Description: למד שיטת דגימת דם לניבוי ביוץ במרמוסטים באמצעות מדידת רמות הורמונים. פרוטוקול זה משפר דיוק בקביעת מועד הביוץ ותומך ביצירת מרמוסטים מגוונים גנטית למחקר תאי גרם זכריים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>הערכת מחזור השחלות במרמוסטים לפי איסוף דם וניתוח הורמונים

<ol><li>Kholkute, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+progesterone+levels+throughout+the+ovarian+cycle+of+the+common+marmoset+%28Callithrix+jacchus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Primates%22%5BJournal%5D)">Plasma progesterone levels throughout the ovarian cycle of the common marmoset (Callithrix jacchus).</a> Primates. 25 (1), 123-126 (1984).</li>
<li>Harding, R. D., Hulme, M. J., Lunn, S. F., Henderson, C., Aitken, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+progesterone+levels+throughout+the+ovarian+cycle+of+the+common+marmoset+%28Callithrix+jacchus%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Primatol%22%5BJournal%5D)">Plasma progesterone levels throughout the ovarian cycle of the common marmoset (Callithrix jacchus).</a> J Med Primatol. 11 (1), 43-51 (1982).</li>
<li>Gilchrist, R. B., Wicherek, M., Heistermann, M., Nayudu, P. L., Hodges, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+follicle-stimulating+hormone+and+follicle+populations+during+the+ovarian+cycle+of+the+common+marmoset%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Changes in follicle-stimulating hormone and follicle populations during the ovarian cycle of the common marmoset.</a> Biol Reprod. 64 (1), 127-135 (2001).</li>
<li>Gromoll, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+subclass+of+the+luteinizing+hormone%2Fchorionic+gonadotropin+receptor+lacking+exon+10+messenger+RNA+in+the+New+World+monkey+%28Platyrrhini%29+lineage%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">A new subclass of the luteinizing hormone/chorionic gonadotropin receptor lacking exon 10 messenger RNA in the New World monkey (Platyrrhini) lineage.</a> Biol Reprod. 69 (1), 75-80 (2003).</li>
<li>Müller, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chorionic+gonadotrophin+beta+subunit+mRNA+but+not+luteinising+hormone+beta+subunit+mRNA+is+expressed+in+the+pituitary+of+the+common+marmoset+%28Callithrix+jacchus%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Chorionic gonadotrophin beta subunit mRNA but not luteinising hormone beta subunit mRNA is expressed in the pituitary of the common marmoset (Callithrix jacchus).</a> J Mol Endocrinol. 32 (1), 115-128 (2004).</li>
<li>Pacchiarotti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+stimulation+protocol+in+IVF%3A+an+up-to-date+review+of+the+literature%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Pharm+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Ovarian stimulation protocol in IVF: an up-to-date review of the literature.</a> Curr Pharm Biotechnol. 17 (4), 303-315 (2016).</li>
<li>Ezcurra, D., Humaidan, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+luteinising+hormone+and+human+chorionic+gonadotropin+when+used+in+assisted+reproductive+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Biol+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">A review of luteinising hormone and human chorionic gonadotropin when used in assisted reproductive technology.</a> Reprod Biol Endocrinol. 12, 95(2014).</li>
<li>Lopez-Gatius, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+response+to+prostaglandin+F%282alpha%29+in+lactating+dairy+cows%3A+A+clinical+update%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Dev%22%5BJournal%5D)">Ovarian response to prostaglandin F(2alpha) in lactating dairy cows: A clinical update.</a> J Reprod Dev. 68 (2), 104-109 (2022).</li>
<li>Marini, R. P., Wachtman, L. M., Tardif, S. D., Mansfield, K., Fox, J. G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMarini%2C+RP+%22The+Common+Marmoset+in+Captivity+and+Biomedical+Research%22">The Common Marmoset in Captivity and Biomedical Research</a>. , Elsevier Science. (2018).</li>
<li>Schultz-Darken, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sample+collection+and+restraint+techniques+used+for+common+marmosets+%28Callithrix+jacchus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Med%22%5BJournal%5D)">Sample collection and restraint techniques used for common marmosets (Callithrix jacchus).</a> Comp Med. 53 (4), 360-363 (2003).</li>
<li>Hopper, J. Common marmosets. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHopper%2C+J+%22Handbook+of+Exotic+Pet%22">Handbook of Exotic Pet</a>. Kubik, M. , 27-42 (2020).</li>
<li>Harlow, C. R., Hearn, J. P., Hodges, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovulation+in+the+marmoset+monkey%3A+endocrinology%2C+prediction+and+detection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Ovulation in the marmoset monkey: endocrinology, prediction and detection.</a> J Endocrinol. 103 (1), 17-24 (1984).</li>
<li>Ludlage, E., Mansfield, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+care+and+diseases+of+the+common+marmoset+%28Callithrix+jacchus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Med%22%5BJournal%5D)">Clinical care and diseases of the common marmoset (Callithrix jacchus).</a> Comp Med. 53 (4), 369-382 (2003).</li>
<li>Summers, P. M., Wennink, C. J., Hodges, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cloprostenol-induced+luteolysis+in+the+marmoset+monkey+%28Callithrix+jacchus%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Fertil%22%5BJournal%5D)">Cloprostenol-induced luteolysis in the marmoset monkey (Callithrix jacchus).</a> J Reprod Fertil. 73 (1), 133-138 (1985).</li>
<li>Takahashi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Birth+of+healthy+offspring+following+ICSI+in+in+vitro-matured+common+marmoset+%28Callithrix+jacchus%29+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Birth of healthy offspring following ICSI in in vitro-matured common marmoset (Callithrix jacchus) oocytes.</a> PLoS One. 9 (4), e95560(2014).</li>
<li>Tomioka, I., Takahashi, T., Shimada, A., Yoshioka, K., Sasaki, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Birth+of+common+marmoset+%28Callithrix+jacchus%29+offspring+derived+from+in+vitro-matured+oocytes+in+chemically+defined+medium%5BTitle%5D)+AND+%22Theriogenology%22%5BJournal%5D)">Birth of common marmoset (Callithrix jacchus) offspring derived from in vitro-matured oocytes in chemically defined medium.</a> Theriogenology. 78 (7), 1487-1493 (2012).</li>
<li>Abe, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+marmoset+genome+engineering+by+autologous+embryo+transfer+and+CRISPR%2FCas9+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Efficient marmoset genome engineering by autologous embryo transfer and CRISPR/Cas9 technology.</a> Sci Rep. 11 (1), 20234(2021).</li>
<li>Summers, P. M., Shephard, A. M., Taylor, C. T., Hearn, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+cryopreservation+and+transfer+on+embryonic+development+in+the+common+marmoset+monkey%2C+Callithrix+jacchus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Fertil%22%5BJournal%5D)">The effects of cryopreservation and transfer on embryonic development in the common marmoset monkey, Callithrix jacchus.</a> J Reprod Fertil. 79 (1), 241-250 (1987).</li>
<li>Thomson, J. A., Kalishman, J., Hearn, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonsurgical+uterine+stage+preimplantation+embryo+collection+from+the+common+marmoset%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Primatol%22%5BJournal%5D)">Nonsurgical uterine stage preimplantation embryo collection from the common marmoset.</a> J Med Primatol. 23 (6), 333-336 (1994).</li>
<li>Hanazawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimally+invasive+transabdominal+collection+of+preimplantation+embryos+from+the+common+marmoset+monkey+%28Callithrix+jacchus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Theriogenology%22%5BJournal%5D)">Minimally invasive transabdominal collection of preimplantation embryos from the common marmoset monkey (Callithrix jacchus).</a> Theriogenology. 78 (4), 811-816 (2012).</li>
<li>Ishibashi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+embryo+transfer+in+the+common+marmoset+monkey+%28Callithrix+jacchus%29+with+a+reduced+transfer+volume%3A+a+non-surgical+approach+with+cryopreserved+late-stage+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Efficient embryo transfer in the common marmoset monkey (Callithrix jacchus) with a reduced transfer volume: a non-surgical approach with cryopreserved late-stage embryos.</a> Biol Reprod. 88 (5), 115(2013).</li>
<li>Kishimoto, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+novel+common+marmoset+embryonic+stem+cell+lines+under+various+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Establishment of novel common marmoset embryonic stem cell lines under various conditions.</a> Stem Cell Res. 53, 102252(2021).</li>
<li>Diehl, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+good+practice+guide+to+the+administration+of+substances+and+removal+of+blood%2C+including+routes+and+volumes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Toxicol%22%5BJournal%5D)">A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes.</a> J Appl Toxicol. 21 (1), 15-23 (2001).</li>
<li>Daskalaki, M., Drummer, C., Behr, R., Heistermann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+alfaxalone+for+short-term+anesthesia+can+confound+serum+progesterone+measurements+in+the+common+marmoset%3A+a+case+report%5BTitle%5D)+AND+%22Primate+Biol%22%5BJournal%5D)">The use of alfaxalone for short-term anesthesia can confound serum progesterone measurements in the common marmoset: a case report.</a> Primate Biol. 9 (2), 23-28 (2022).</li>
<li>Hodges, J. K., Cottingham, P. G., Summers, P. M., Liang, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlled+ovulation+in+the+marmoset+monkey+%28Callithrix+jacchus%29+with+human+chorionic+gonadotropin+following+prostaglandin-induced+luteal+regression%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil+Steril%22%5BJournal%5D)">Controlled ovulation in the marmoset monkey (Callithrix jacchus) with human chorionic gonadotropin following prostaglandin-induced luteal regression.</a> Fertil Steril. 48 (2), 299-305 (1987).</li>
<li>Barrett, J., Abbott, D. H., George, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extension+of+reproductive+suppression+by+pheromonal+cues+in+subordinate+female+marmoset+monkeys%2C+Callithrix+jacchus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Fertil%22%5BJournal%5D)">Extension of reproductive suppression by pheromonal cues in subordinate female marmoset monkeys, Callithrix jacchus.</a> J Reprod Fertil. 90 (2), 411-418 (1990).</li>
<li>Barrett, J., Abbott, D. H., George, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensory+cues+and+the+suppression+of+reproduction+in+subordinate+female+marmoset+monkeys%2C+Callithrix+jacchus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Fertil%22%5BJournal%5D)">Sensory cues and the suppression of reproduction in subordinate female marmoset monkeys, Callithrix jacchus.</a> J Reprod Fertil. 97 (1), 301-310 (1993).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>AIA-360</td><td>Tosoh Corporation</td><td>0019945</td><td>מדידת הורמונים (P4/E2)</td></tr> <tr><td>תרכיז מדלל AAIA-PACK</td><td>Tosoh Corporation</td><td>0020956</td><td>מדידת הורמונים (P4/E2)</td></tr> <tr><td>AIA-PACK SUBSTRATE SET II</td><td>Tosoh Corporation</td><td>0020968</td><td>מדידת הורמונים (P4/E2)</td></tr> <tr><td>תרכיז כביסה AIA-PACK</td><td>Tosoh Corporation</td><td>0020955</td><td>מדידת הורמונים (P4/ E2)</td></tr> <tr><td>CMS-1</td><td>CLEA יפן</td><td></td><td>מרמוסט מזון</td></tr><tr><td>אסטרומט</td><td>MSD בריאות</td><td></td> בעלי חיים <td>PGF2alpha אנלוגי (קלופרוסטנול)</td></tr> <tr><td>Gonal-f הזרקה תת עורית 150</td><td>Merck Biopharma Co., Ltd.</td><td></td><td>FSH</td></tr><tr><td>Gonatropin להזרקה תוך שרירית 1000</td><td>ASKA Pharmaceutical Co., Ltd.</td><td>872413</td><td>hCG</td></tr><tr><td>Heparin תמיסת הזרקת נתרן 5,000 יחידות/5 מ"ל</td><td>Mochida Pharmaceutical Co., Ltd.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>224122458 ערכת בדיקה אימונוכרומטוגרפית לאיסוף דם לאיתור גונדוטרופין כוריוני מרמוסט נפוץ (בודק כפול)</td><td>CLEA Japan, Inc.</td><td></td><td>קביעת רמת CG</td></tr><tr><td>תאורת מיקרוסקופ כפולה בפרופיל נמוך LPF-SD</td><td>SHIOKAZE GIKEN</td><td></td><td>מנורת שולחן לאיסוף דם</td></tr><tr><td>מכשיר ריסון לאיסוף דם מרמוסט</td><td>JIC יפן JM-1006</td><td></td><td>איסוף דם http://www.jic-japan.jp/prd/marmoset/prd016.html דוא"ל: vi@jic-japan.jp</td></tr><tr><td>Metacam 0.05%</td><td>Boehringer Ingelheim בריאות בעלי חיים יפן ושות', בע"מ.</td><td></td> <td>לדוגמא לטיפול בהמטומה</td></tr><tr><td>, 3 מ"ל, PS, עבור Tosoh 360 ו-AIA-600 II, 1000/שקית</td><td>גלובוס 110913</td><td></td><td>מדעי מדידת הורמונים (P4/E2)</td></tr><tr><td>ST AIA-PACK iE2</td><td>Tosoh Corporation</td><td>0025224</td><td>מדידת הורמונים (P4/E2)</td></tr><tr><td>סט כיול ST AIA-PACK iE2</td><td>Tosoh Corporation</td><td>0025324</td><td>מדידת הורמונים (P4/E2)</td></tr><tr><td>ST AIA-PACK iE2 תמיסת דילול מדגם</td><td>Tosoh Corporation</td><td>0025524</td><td>מדידת הורמונים (P4/E2)</td></tr><tr><td>ST AIA-PACK PROGIII</td><td>Tosoh Corporation</td><td>0025240</td><td>מדידת הורמונים (P4/E2)</td></tr><tr><td>סט כיול ST AIA-PACK PROGIII</td><td>Tosoh Corporation</td><td>0025340</td><td>מדידת הורמונים (P4/E2)</td></tr><tr><td>ST AIA-PACK PROGIII תמיסת דילול מדגם</td><td>Tosoh Corporation</td><td>&nbsp; 0025540</td><td>מדידת הורמונים (P4/E2)</td></tr> <tr><td>מזרק עם מחט 25 גרם (0.50 x 25 מ"מ)</td><td>TERUMO</td><td>SS-01T2525</td><td>איסוף דם</td></tr><tr><td>Tensolvet 5.000 כלומר ג'ל.</td><td>Dechra Pharmaceuticals</td><td>14033492</td><td>טיפול בהמטומה</td></tr><tr><td>TOSOH MULTI-CONTROL SET</td><td>0015965</td><td>Tosoh Corporation</td><td>מדידת הורמונים (P4/E2)</td></tr></tbody></table>

דגימת דם ומדידת הורמונים לקביעת השלב במחזור השחלה במרמוסטים

Blood Sampling and Hormone Measurement for Determining the Stage in the Ovarian Cycle in Marmosets

פרטים הקשורים לבעלי החיים ששימשו במחקר זה מפורטים בטבלה 1.
ניתוחים אנטומיים של וריד הירך ניתוחים אנטומיים של וריד הירך בוצעו באמצעות מרמוסט מצוי זכר בן שנתיים (I 7713M) שעבר המתת חסד. ורידי הירך והעורקים ממוקמים במשולש הירך. משולש הירך נוצר בגבולות שבין דופן הבטן לשרירי הירך (איור 1B-D). בבסיס הירך, וריד גדול עובר במרכז המשולש ההפוך, ועורק עובר במקביל מחוץ לווריד. באזור התחתון, הוורידים והעורקים נעשים דקים וחופפים, כאשר העורקים ממוקמים על גבי הוורידים (איור 1D).
עבור דגימת דם, הווריד צריך להיות ממוקד כי פגיעה עורקי יכול לגרום שטף דם עורק הירך, אשר עלול להוביל להלם לב וכלי דם כאשר הדימום הוא חמור13. למרות שניתן לשאוב דם מכל חלק של הווריד במשולש והאזור הדיסטלי שלו, מומלץ לנקב מהאתר הפרוקסימלי של משולש הירך בגלל גודלו הגדול של הווריד והחפיפה הקטנה לכאורה שלו עם העורק. בנוסף, הווריד באתר הפרוקסימלי הוא שטחי, ומאפשר מיקום קל באמצעות מחט. מכיוון שהוא פועם, העורק במשולש הירך מזוהה לעיתים חזותית או על ידי מישוש, והווריד עובר אליו רק מדיאלי. לפיכך, התצפית של פעימת העורקים מסייעת לחזות את מיקום הווריד.
יתר על כן, צבע כחול המעיד על הווריד נצפה בדרך כלל מתחת לעור בחלק העליון של המשולש (איור 1B,C). עם זאת, בלוטות הלימפה במשולש ממוקמים לעתים קרובות קרוב לווריד ולהראות צבע כחול כהה, ולכן המראה שלהם דומה. למרבה המזל, הם יכולים להיות מובחנים על ידי הניידות שלהם: הווריד הוא נייח, בלוטות הלימפה הם ניידים. לפיכך, פעימת העורק והצבע הכחול של הווריד הם שני רמזים עיקריים המשמשים לאיתור הווריד, אם כי ייתכן שיהיה צורך לגלח את השיער כדי לדמיין אותם.
קביעת השלב במחזור השחלתי רמות P4 ו-E2 נוטרו בשש נקבות מרמוסטים (בגילאי שנה עד שלוש) כדי לחקור את משך השלב הפוליקולרי והלוטאלי. התוצאות הראו משך זמן ממוצע של 11.58 ימים (n = 6 מארבעה מרמוסטים) ו-16.8 ימים (n = 5 משלושה מרמוסטים) עבור השלב הפוליקולרי והלוטאלי, בהתאמה (טבלה 2). בהמשך, הדינמיקה P4 ו- E2 של אחד (I6751F, בן 3) של ששת המרמוסטים מתוארת בפירוט. דגימות דם ומדידות הורמונים בחיה זו בוצעו כל כמה ימים במשך 38 ימים (טבלה 3).
שלב לוטאלי (ימים 1-10) יום תחילת המדידה נקבע ליום 1. בהתבסס על רמת P4 (21 ננוגרם/מ"ל), סביר להניח שהחיה הייתה בשלב הלוטאלי. רמת P4 גבוהה נצפתה בימים 1 עד 10 (≥21 ננוגרם/מ"ל), מה שמרמז על השלב הלוטאלי. ביום ה-12 הוא ירד בחדות ל-4 ננוגרם/מ"ל. ירידה משמעותית זו הצביעה על המעבר משלב לוטאלי לשלב הזקיקי. ירידה ברמת E2 מהיום ה-10 (241 ננוגרם/מ"ל) ל-12 (189 ננוגרם/מ"ל) תמכה גם היא במעבר זה.
שלב זקיקי (ימים 12-22) לאחר המעבר לשלב הזקיקים, רמת P4 נשארה נמוכה (4-6 ננוגרם/מ"ל) עד היום ה-19 ואז עלתה מעט מהיום ה-19 ל-24 (יום 19, 6 ננוגרם/מ"ל; יום 22, 8 ננוגרם/מ"ל; יום 24, 9 ננוגרם/מ"ל). לעומת זאת, רמת E2 עלתה באופן משמעותי מהיום ה-19 (94 ננוגרם/מ"ל) ל-22 (322 ננוגרם/מ"ל) ולאחר מכן ירדה מהיום ה-22 ל-24 (158 ננוגרם/מ"ל). בהתבסס על העלייה ברמות P4 וירידה ברמות E2, הביוץ היה צפוי להתרחש בין הימים 22 ו -24, מעבר משלב הזקיקים לשלב הלוטאלי.
שלב לוטאלי (ימים 24-36) לאחר הביוץ, רמת P4 נשארה גבוהה עד יום 36 ואז ירדה ל 3 ng / mL ביום 38. לפיכך, סביר להניח כי המעבר מהשלב הלוטאלי לשלב הפוליקולרי התרחש בין הימים 36-38. בהתאם למעבר זה, רמת E2 ירדה במהלך תקופה זו (יום 36, 2517 ננוגרם/מ"ל; יום 38, 73 ננוגרם/מ"ל).
חיזוי וקביעת עיתוי הביוץ
כדי לבחון את הקשר בין רמת CG בשתן לבין תאריך הביוץ, הוכנו שבעה מרמוסטים (מס' 1-7). קלופרוסטנול הוזרק כדי לאפס את מחזור הביוץ (יום 0). לאחר מכן, ניטור רמות P4/E2 בדם ורמות CG בשתן בוצע מהיום השביעי. השתן נאסף מיד לאחר ההדלקה. דגימת הדם בוצעה למעשה בבוקר. ההנחה הייתה כי הביוץ מתרחש כאשר רמת E2 ירדה במידה רבה בהשוואה לזו שביום הקודם כפי שדווח17. באותו יום אכן נצפה קרע זקיקי על פני השחלות, ונוכחות של זיגוטות/ביציות בביציות (טבלה 4).
CG זוהה לראשונה בימים 7 עד 11 (יום 7, N = 1; יום 8, N = 2; יום 9, N = 1; יום 10, N = 2; יום 11, N = 1) (טבלה 4). הירידה הגדולה ברמות E2 (אינדיקציה לביוץ) נצפתה 0-3 ימים לאחר אות ה- CG הראשון. משך הזמן מגילוי ה-CG הראשון ועד לירידה ב-E2 נראה גדול כאשר זיהוי ה-CG הראשון היה מוקדם יותר (איור 3A). לדוגמה, חיה אחת (מס' 1) הראתה ירידה באות E2 3 ימים לאחר גילוי ה-CG הראשון ביום ה-7 (טבלה 4). לעומת זאת, המופע המשותף של גילוי ה-CG הראשון ונפילת אות E2 נצפה בחיה אחת (מס' 2) ביום ה-10. לכן, למרות שזיהוי ה-CG הראשון והביוץ נצפו באותו יום באחת מחמש החיות, הביוץ התרחש תוך מספר ימים לאחר הגילוי הראשון של CG.
ערכת הבדיקה האימונוכרומטוגרפית עבור marmoset CG נועדה להשתמש בשתן לבדיקה. בדיקת רמת ה-CG מלווה בדרך כלל בקביעת רמות P4/E2 באמצעות פלסמה בדם. זה יהיה מועיל אם פלסמה בדם, במקום שתן, ניתן להשתמש עבור בדיקת CG. כדי לבדוק זאת, נבדקה פלסמת הדם שנותרה לאחר מדידת רמת P4/E2 בניסויים הנ"ל. פלסמת דם ושתן נאספו מארבעת בעלי החיים בכל אחד מימי הניסויים הנ"ל (ימי הבדיקה צוינו בכוכביות כפולות [**] בטבלה 4). באמצעות שימוש בשתן, שניים מתוך ארבעת בעלי החיים הראו תוצאות חיוביות (ציונים 5 ו-3), והשניים האחרים הראו תוצאות שליליות (ציון 1). פלסמה בדם הראתה למעשה את אותן תוצאות כמו שתן (איור 3B). האות החזק יותר התקבל באמצעות פלסמה בדם. לכן, בעת שימוש פלזמה בדם, שיקול הדעת צריך להיעשות לפני 10 דקות, אשר מוגדר שתן.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66691/66691fig01.jpg"> איור 1: איסוף דם ממרמוסטים. (A) משמש לרסן לאיסוף דם. (B) ירך עליונה של מרמוסט. (C) משולש הירך וכלי הדם. עורק הירך במשולש נראה לעתים קרובות ומראה פעימה. הצבע הכחול של וריד הירך נראה לפעמים באזור הפרוקסימלי של המשולש (מסומן כאתר phlebotomy). בלוטות הלימפה מראות גם צבע כחול. עם זאת, בלוטות הלימפה ניתנות להזזה מכיוון שבלוטות הלימפה מחוברות לעור. (D) מבט אנטומי על הירך של החיה המורדמת. העורק, הווריד ואתר הפלבוטומיה מסומנים. אותה חיה מוצגת ב-ב-ד. (ה) איסוף דם באמצעות ריסון. מנח האחיזה של רגלי המרמוסט והדם הנשאב מוצגים. (F) איסוף שתן ממרמוסט. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66691/66691fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66691/66691fig02.jpg"> איור 2: דפוסים אופייניים של רמות P4, E2 ו-CG במהלך מחזור השחלות במרמוסטים. נקודות הזמן של הזרקות FSH, hCG ו- PGF2α מסומנות. קווים מקווקווים מראים את התבנית ההורמונלית הצפויה לאחר הזרקת PGF2α. קיצורים: P4 = פרוגסטרון; E2 = אסטרדיול; CG = גונדוטרופין כוריוני; FSH = הורמון מגרה זקיק; hCG = גונדוטרופין כוריוני אנושי; PGF2α = פרוסטגלנדין F2α. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66691/66691fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66691/66691fig03.jpg"> איור 3: קביעת רמת CG לחיזוי התרחשות הביוץ. (A) הקשר האפשרי בין היום הראשון לגילוי CG (ציון &gt; 1) לבין משך הזמן עד הביוץ (ירידה E2). (B) פלסמה בדם יכולה לשמש לבדיקות CG אימונוכרומטוגרפיות. תוצאה מייצגת של כל ציון (למעלה). הניקוד נקבע 10 דקות לאחר טעינת הדגימה. ציון 2 מייצג אף להקה תוך 5 דקות, אלא הופעה של להקה תוך 10 דקות. איסוף הדם בוצע זמן קצר לאחר איסוף השתן. נבדקו ארבעה מרמוסטים (מס' 1, 2, 3, 5 בלוח S4). דוגמאות המשמשות כאן מסומנות ככוכביות כפולות בטבלה 4. פלסמת הדם דוללה ל-50% על ידי חיץ דילול המשמש למדידת E2. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66691/66691fig03large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
טבלה 1: בעלי חיים ששימשו במחקר זה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66691/66691_Table%201v2.xlsx" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד טבלה זו.</a>
טבלה 2: משך השלבים הפוליקולריים והלוטאליים. הפאזה נקבעה על בסיס רמת P4 (פאזה פוליקולרית P4 ≤ 8, פאזה לוטאלית P4 &gt; 8). כאשר נצפה שינוי פאזה בין המדידות, נקודת האמצע בין תאריכי המדידה נקבעה כנקודת השינוי. משך הזמן בין שתי נקודות השינוי נחשב לשלב פוליקולרי או לוטאלי. כדי להבטיח את מדידת משך הזמן של פאזה אחת, הנתונים עם מרווח ארוך (≥7 ימים) או פעמיים של מרווחים של ≥6 ימים באותו שלב, כולל כאשר הם משתרעים על פני שני השלבים, לא שימשו לניתוחים. רק כאשר נערכו שתי מדידות באותו שלב, נעשה שימוש בנתונים. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66691/66691_240320_Table2_rev.zip" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד טבלה זו.</a>
טבלה 3: תוצאות מדידות P4 ו-E2 במשך 38 ימים במרמוסט אחד.<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66691/66691_240320_Table3_rev.zip" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד טבלה זו.</a>
טבלה 4: קביעה וחיזוי של ימי ביוץ. עקבות הביוץ נחשבו נוכחים אם נצפו אתרי דימום או אתרי קרע בשחלות. ביצית/זיגוטה מציינת את שלבי הביצית/זיגוטה המתקבלים מאובידוקט ביום נפילת E2. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66691/66691_Table%204_revv2.xlsx" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד טבלה זו.</a>

Common marmosets are small New World monkeys. Since many of their biological mechanisms are similar to those of humans, marmosets are potentially useful ...

blood-sampling-hormone-measurement-for-determining-stage-ovarian

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

כאן, אנו מתארים כיצד לזהות את השלב של הרבייה העכברית (proestrus, ייחום, metestrus, או diestrus) על ידי אוסף פשוט, לא פולשנית והערכת ציטולוגיה של דגימות למרוח בנרתיק. בנוסף, אנו מתארים כיצד ציטולוגית נרתיק משקפת רמות הורמונים במחזור שעשו את המעבר דרך מחזור הרבייה העכברי.

ביצוע שטיפת נרתיק, כתמים ויולטו קריסטל, והערכת ציטולוגית נרתיק לאחסון זמני מחזור הייחום חולל זיהוי עכבר

הורמונים גונדליים כגון אסטרוגן מווסתים את היווצרות הזיכרון במספר פרדיגמות ניסיוניות, כולל זיכרון הכחדת פחד. פרוטוקול זה מתאר סט של שיטות לחקירת ההשפעה של הורמוני בלוטת המין במיוחד במהלך הכחדה בנקבות רוכבות באופן טבעי, כולל ניטור מחזור אסטרוס ומתן אסטרוגן אקסוגני.

פרוטוקול עבור לימוד ההכחדה של פחד אוויר באופן טבעי רכיבה על אופני חולדות נקבות

כאן אנו מציגים פרוטוקול דגימה דם הזנב-טיפ לאיסוף הדגימה תכופים בעכברים ערככם. שיטה זו שימושית עבור להערכת דפוסי הפרשת הורמון מחלמן פועמת, יכול להיות מותאם ניתוח גורמים אחרים במחזור.

תכופות לקיחת דמים קצה הזנב בעכברים להערכה של הפרשת הורמון מחלמן פועמת

אנו מתארים את התפתחות מודל העכבר PCOS דמוי רזה עם גלולה דיהידרוטסטוסטרון ללמוד הפתופיזיולוגיה של PCOS, הצאצא של סכרים PCOS דמוי אלה.

מודל Hyperandrogenic העכבר ללמוד תסמונת השחלות הפוליציסטיות

המחקר של ביולוגיה אמפיבי מספק מידע רב ערך על תהליכים הרבייה, פיסיולוגיים, embryological והתפתחותיים הנוהגים אורגניזמים של קבוצות מטקתיות רבות. כאן, אנו מציגים מדריך מקיף על מתודולוגיות שונות, כי ניתן להשתמש כדי ללמוד שליטה בשחלות וניטור דו-חיים.

טכניקות הרבייה ניטור ובקרה של השחלות

מחקר זה מפרט את הגורמים המכריעים שיש לקחת בחשבון בתכנון ניסיוני המערב חולדות נקבות. במובן רחב יותר, נתונים אלה משמשים להפחתת הסטיגמה ומסייעים בפיתוח כלי אבחון והתערבות כוללניים יותר.

ניטור מחזור אסטרוס מכרסמים תוך שימוש בשטיפה נרתיקית: אין דבר כזה מחזור רגיל

כאן אנו מתארים שיטת גידול ידנית לגידול מרמוסטים לתינוקות באינקובטור לבעלי חיים. שיטה זו מגדילה מאוד את שיעור ההישרדות של תינוקות מרמוסט, מה שמספק הזדמנות לחקור את התפתחותם של תינוקות מרמוסט עם רקע גנטי דומה שגדל בסביבות שונות לאחר הלידה.

שיטת גידול יד למרמוסטים לתינוקות

פעימות הורמון luteinizing (LH) הוא סימן היכר של תפקוד הרבייה. אנו מתארים פרוטוקול להפעלה מרחוק של אוכלוסיות נוירונים ספציפיות הקשורות לאיסוף דם אוטומטי סדרתי. טכניקה זו מאפשרת אפנון הורמונלי מתוזמן, ריבוב ומזעור השפעות מניפולציה על רמות LH בבעלי חיים הנעים בחופשיות מודעת, וללא הפרעה.

הפעלה עצבית מרחוק יחד עם דגימת דם אוטומטית כדי לגרום ולמדוד הורמון luteinizing במחזור בעכברים

כאן, אנו מתארים את שיטות הטיפול שהשתנו לבזבוז תסמונת מרמוסט (WMS, הידועה גם בשם מחלת מעי דלקתית (IBD) כמו מחלה) עם חומצה טרנקסמית. כמו כן, אנו מציגים כיצד לתת את הסוכנים הטיפוליים דרך הפה, תת עורית ותוך ורידית.

שינוי שיטות הטיפול לבזבוז תסמונת מרמוסט עם חומצה טרנקסמית ואמצעים תומכים

שינויים בזרימת הדם בשחלות בתקופה שלפני הביוץ חיוניים לביוץ. אולטרסאונד דופלר שימש בבני אדם ובבעלי חיים גדולים כדי להעריך המודינמיקה של השחלות וזלוף. מוצג פרוטוקול ליישום אולטרסאונד דופלר להערכת המודינמיקה של השחלות במהלך השלבים הקדם-ביוציים והפרי-ביוץ בעכברים.

אולטרסאונד דופלר להדמיה חיה וכימות של תפקוד כלי הדם בשחלות בעכברים

למד שיטת דגימת דם לניבוי ביוץ במרמוסטים באמצעות מדידת רמות הורמונים. פרוטוקול זה משפר דיוק בקביעת מועד הביוץ ותומך ביצירת מרמוסטים מגוונים גנטית למחקר תאי גרם זכריים.

דגימת דם ומדידת הורמונים לקביעת השלב במחזור השחלה במרמוסטים

גלה סרטונים נוספים