Name: בידוד, הרחבה והבחנה של אב פיברו-אדיפוגני ממודל העכבר הקוצני (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-15T12:20:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: למדו לבודד ולהרחיב תאי אב פיברו-אדיפוגניים משרירי שלד ולב בעכבר הקוצני באמצעות עיכול אנזימטי ומיון תאים פלואורסצנטי. שיטה זו מאפשרת מחקר מדויק של תיקון רקמות ורפואה רגנרטיבית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>עיכול לב עכבר ושרירי שלד לתרבית אב פיברו-אדיפוגנית

<ol><li>Gaire, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spiny+mouse+%28Acomys%29%3A+An+emerging+research+organism+for+regenerative+medicine+with+applications+beyond+the+skin%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Spiny mouse (Acomys): An emerging research organism for regenerative medicine with applications beyond the skin.</a> NPJ Regen Med. 6, 1(2021).</li>
<li>Sandoval, A. G. W., Maden, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+in+the+spiny+mouse%2C+Acomys%2C+a+new+mammalian+model%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Genet.+Dev%22%5BJournal%5D)">Regeneration in the spiny mouse, Acomys, a new mammalian model.</a> Curr. Opin. Genet. Dev. 64, 31-36 (2020).</li>
<li>Judson, R. N., Zhang, R. H., Rossi, F. M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-resident+mesenchymal+stem%2Fprogenitor+cells+in+skeletal+muscle%3A+Collaborators+or+saboteurs%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">Tissue-resident mesenchymal stem/progenitor cells in skeletal muscle: Collaborators or saboteurs.</a> FEBS J. 280 (17), 4100-4108 (2013).</li>
<li>Uezumi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrosis+and+adipogenesis+originate+from+a+common+mesenchymal+progenitor+in+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Fibrosis and adipogenesis originate from a common mesenchymal progenitor in skeletal muscle.</a> J Cell Sci. 124, 3654-3664 (2011).</li>
<li>Joe, A. W. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+injury+activates+resident+fibro%2Fadipogenic+progenitors+that+facilitate+myogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Muscle injury activates resident fibro/adipogenic progenitors that facilitate myogenesis.</a> Nat Cell Biol. 12, 153-163 (2010).</li>
<li>Uezumi, A., Fukada, S. I., Yamamoto, N., Takeda, S., Tsuchida, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+progenitors+distinct+from+satellite+cells+contribute+to+ectopic+fat+cell+formation+in+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal progenitors distinct from satellite cells contribute to ectopic fat cell formation in skeletal muscle.</a> Nat Cell Biol. 122 (12), 143-152 (2010).</li>
<li>Soliman, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenic+Potential+of+Hic1-Expressing+Cardiac+Stromal+Progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Pathogenic Potential of Hic1-Expressing Cardiac Stromal Progenitors.</a> Cell Stem Cell. 26 (2), 205-220 (2020).</li>
<li>Hall, C., Gehmlich, K., Denning, C., Pavlovic, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+relationship+between+cardiac+fibroblasts+and+cardiomyocytes+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Heart+Assoc%22%5BJournal%5D)">Complex relationship between cardiac fibroblasts and cardiomyocytes in health and disease.</a> J Am Heart Assoc. 10, 1-15 (2021).</li>
<li>Gawriluk, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+ear-hole+closure+identifies+epimorphic+regeneration+as+a+discrete+trait+in+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of ear-hole closure identifies epimorphic regeneration as a discrete trait in mammals.</a> Nat Commun. 71 (7), 1-16 (2016).</li>
<li>Seifert, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skin+shedding+and+tissue+regeneration+in+African+spiny+mice+%28Acomys%29%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Skin shedding and tissue regeneration in African spiny mice (Acomys).</a> Nature. 489, 561(2012).</li>
<li>Koopmans, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemic+tolerance+and+cardiac+repair+in+the+spiny+mouse+%28Acomys%29%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Ischemic tolerance and cardiac repair in the spiny mouse (Acomys).</a> NPJ Regen Med. 6, 78(2021).</li>
<li>Peng, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+spiny+mice+%28Acomys%29+exhibit+endogenous+cardiac+recovery+in+response+to+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Adult spiny mice (Acomys) exhibit endogenous cardiac recovery in response to myocardial infarction.</a> NPJ Regen Med. 6, 74(2021).</li>
<li>Maden, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfect+chronic+skeletal+muscle+regeneration+in+adult+spiny+mice%2C+Acomys+cahirinus%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Perfect chronic skeletal muscle regeneration in adult spiny mice, Acomys cahirinus.</a> Sci Rep. 8, 8920(2018).</li>
<li>Riparini, G., Simone, J. M., Sartorelli, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FACS-isolation+and+culture+of+fibro-adipogenic+progenitors+and+muscle+stem+cells+from+unperturbed+and+injured+mouse+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">FACS-isolation and culture of fibro-adipogenic progenitors and muscle stem cells from unperturbed and injured mouse skeletal muscle.</a> J Vis Exp. (184), e63983(2022).</li>
<li>Low, M., Eisner, C., Rossi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibro%2Fadipogenic+progenitors+%28FAPs%29%3A+Isolation+by+FACS+and+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Fibro/adipogenic progenitors (FAPs): Isolation by FACS and culture.</a> Methods Mol Biol. 1556, 179-189 (2017).</li>
<li>Molina, T., Fabre, P., Dumont, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibro-adipogenic+progenitors+in+skeletal+muscle+homeostasis%2C+regeneration+and+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Open+Biol%22%5BJournal%5D)">Fibro-adipogenic progenitors in skeletal muscle homeostasis, regeneration and diseases.</a> Open Biol. 11 (12), 210110(2021).</li>
<li>Contreras, O., Rossi, F. M. V., Theret, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origins%2C+potency%2C+and+heterogeneity+of+skeletal+muscle+fibro-adipogenic+progenitors-time+for+new+definitions%5BTitle%5D)+AND+%22Skelet+Muscle%22%5BJournal%5D)">Origins, potency, and heterogeneity of skeletal muscle fibro-adipogenic progenitors-time for new definitions.</a> Skelet Muscle. 111 (11), 1-25 (2021).</li>
<li>Fitzgerald, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MME%2B+fibro-adipogenic+progenitors+are+the+dominant+adipogenic+population+during+fatty+infiltration+in+human+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">MME+ fibro-adipogenic progenitors are the dominant adipogenic population during fatty infiltration in human skeletal muscle.</a> Commun Biol. 61 (6), 1-21 (2023).</li>
<li>Babaeijandaghi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DPPIV%2B+fibro-adipogenic+progenitors+form+the+niche+of+adult+skeletal+muscle+self-renewing+resident+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">DPPIV+ fibro-adipogenic progenitors form the niche of adult skeletal muscle self-renewing resident macrophages.</a> Nat Commun. 141 (14), 1-10 (2023).</li>
<li>Schutz, P. W., Cheung, S., Yi, L., Rossi, F. M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+activation+patterns+of+CD10%2B+fibro-adipogenic+progenitors+across+acquired+disease+states+in+human+skeletal+muscle+biopsies%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Cellular activation patterns of CD10+ fibro-adipogenic progenitors across acquired disease states in human skeletal muscle biopsies.</a> Free Neuropathol. 5, 3-3 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.5 מיליון EDTA</td><td>Invitrogen</td><td>15575&ndash; 038</td><td></td></tr><tr><td>צינורות מיקרוצנטריפוגה 1.7 מ"ל</td><td>VWR</td><td>87003-294</td><td></td></tr><tr><td>15&nbsp; צינור צנטריפוגה מ"ל</td><td>Falcon</td><td>352096</td><td></td></tr><tr><td>1x Dulbecco' s פוספט חוצץ מלח (DPBS)</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>מזרק 20 מ"ל</td><td>BD</td><td>309661</td><td></td></tr><tr><td>4&prime;,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td><td>Invitrogen</td><td>D3571</td><td></td></tr><tr><td>40&nbsp; &mu; מסננת תאים</td><td>m Falcon</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>48 צלחת תרבית רקמות שטוחה</td><td>היטב Falcon</td><td>53078</td><td></td></tr><tr><td>5 מ"ל פוליפרופילן</td><td>פלקון</td><td>352063</td><td></td></tr><tr><td>5 מ"ל צינור פוליסטירן עגול תחתון עם מכסה מסננת תאים</td><td>Falcon</td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>מזרק 5 מ"ל</td><td>BD</td><td>309646</td><td></td></tr><tr><td>50&nbsp; צינור צנטריפוגה מ"ל</td><td>Falcon</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>צלחת פטרי 60 מ"מ</td><td>Falcon</td><td>353002</td><td></td></tr><tr><td>96 באר צלחת תרבית רקמות תחתונה V</td><td>Corning</td><td>3894</td><td></td></tr><tr><td>Acomys dimidiatus עכברים (עכברים קוצניים)</td><td></td><td></td> <td>במתנה של ד"ר אשלי ו. סייפרט (אוניברסיטת קנטקי).</td></tr><tr><td>מאגר אמוניום-כלוריד-אשלגן (ACK)</td><td>Gibco</td><td>A10492-01</td><td></td></tr><tr><td>אנטי-פריליפין (1:100)</td><td>Sigma</td><td>P1873</td><td></td></tr><tr><td>Anti-SMA (1:100)</td><td>Invitrogen</td><td>14-9760-82</td><td></td></tr><tr><td>APC PDGFRa (1:800)</td><td>Abcam</td><td>ab270085</td><td></td></tr><tr><td>BD מחט PrecisionGlide 18 גרם</td><td>BD</td><td>305195</td><td></td></tr><tr><td>BD מחט PrecisionGlide 23 גרם</td><td>BD</td><td>305145</td><td></td></tr><tr><td>אלבומין סרום בקר</td><td>סיגמא</td><td>A7906-100 גרם</td><td></td></tr><tr><td>BV605 CD31 (1:500)</td><td>BD biosciences</td><td>744359</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C4901</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה</td><td>Eppendorf</td><td>5810R</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>Gibco</td><td>11320033</td><td></td></tr><tr><td>חמור נגד עכבר Alexa 555 (1:1000)</td><td>Invitrogen</td><td>A31570</td><td></td></tr><tr><td>חמור נגד ארנב Alexa 647 (1:1000)</td><td>Invitrogen</td><td>A31573</td><td></td></tr><tr><td>סרום חמור</td><td>Sigma</td><td>S30-100ML</td><td></td></tr><tr><td>סדרן FACS - MoFlo Astrios 5 לייזרים</td><td>בקמן קולטר</td><td>B52102</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>תאומים</td><td>100-500</td><td></td></tr><tr><td>מספריים עדינים</td><td>FST</td><td>14058-11</td><td></td></tr><tr><td>Fluoromount-G</td><td>SouthernBiotech</td><td>0100-01</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים</td><td>FST</td><td>11051-10</td><td></td></tr><tr><td>Hemostat</td><td>FST</td><td>91308-12</td><td></td></tr><tr><td>חלבון רקומביננטי בסיסי FGF אנושי (bFGF)</td><td>Gibco</td><td>13256029</td><td></td></tr><tr><td>חלבון רקומביננטי TGF בטא 1 אנושי (TGFb1)</td><td>eBiosciences</td><td>14-8348-62</td><td></td></tr><tr><td>אינקובטור - Heracell 160i CO2</td><td>ThermoFisher</td><td>51033557</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ הפוך - Revolve</td><td>ECHO</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Liberase</td><td>Roche</td><td>5401127001</td><td></td></tr><tr><td>Mouse MesenCult Adipogenic Differentiation 10x Supplement</td><td>STEMCELL technologies</td><td>5507</td><td></td></tr><tr><td>עכבר על עכבר (MOM) חוסם ריאגנטים</td><td>מעבדות</td> <td>וקטורMKB-2213</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Sigma</td><td>P1648-500g</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומיצין</td><td>Gibco</td><td>15140&ndash; 122</td><td></td></tr><tr><td>PicoLab דיאטת עכבר 20</td><td>LabDiet</td><td>3005750-220</td><td></td></tr><tr><td>פרופידיום יודיד (PI)</td> <td>Invitrogen</td><td>P3566</td><td></td></tr><tr><td>בקבוקון הובלה 5 מ"ל צינור</td><td>Caplugs ירוק עד</td><td>222-3005-080</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>9036-19-5</td><td></td></tr></tbody></table>

בידוד, הרחבה והבחנה של אב פיברו-אדיפוגני ממודל העכבר הקוצני

Fibro-Adipogenic Progenitor Isolation, Expansion, and Differentiation from the Spiny Mouse Model

הסכמה של פרוטוקול זה לבידוד ותרבית של שרירי השלד והלב מסוכמת באיור 1. עבור איסוף רקמות, הכבד משנה את צבעו מאדום כהה לצהוב בהיר בדרך כלל מעיד על זילוח מוצלח. עם טווחי הגילאים שצוינו של עכבר קוצני, משקל הלב הוא בדרך כלל סביב 200 מ"ג, בעוד שריר ארבע ראשי הוא סביב 350 מ"ג.
במהלך כל שינוי בחיץ העיכול בשלבים 3.5-3.7, מאגר העיכול בצינורות העיכול נראה אטום כאשר התאים משתחררים מהרקמה. בסוף העיכול, הפתרון חייב להיות slurry הומוגני יחסית עם כמה חתיכות רקמה נותרו. הקפד לסיים את העיכול לפני שכל הרקמות מתעכלות לחלוטין כדי למנוע עיכול יתר, אשר ישפיע לרעה על הכדאיות של התאים ואת תוצאות התרבית.
תרשימי הזרימה הצפויים עבור FACS מוצגים באיור 2. FAPs צפויים לייצג כ -2% של תאים חיים ותאי LIN. אחוז אירועי PI+ הוא אינדיקטור לאיכות הכנת המדגם וצריך להיות פחות מ -10%. במחקר זה, 150k FAPs לכל לב (חדרים בלבד) ו 100k FAPs משני שרירים ארבע ראשי מתקבלים בדרך כלל.
ברגע שהם נמצאים בצלחת, תאים בדרך כלל נצמדים תוך 72 שעות, מגיעים למפגש של 80% תוך 5 ימים, ומציגים מורפולוגיה פיברובלסטית טיפוסית עם תחזיות (איור 5).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66717/66717fig01.jpg"> איור 1: ייצוג סכמטי של הפרוטוקול והזמן המשוער הדרוש לכל שלב. איסוף רקמות: 10 דקות לעכבר. עיכול רקמות: 1.5-2 שעות. צביעת תאים: 45 דקות-75 דקות מיון תאים המופעלים על ידי פלואורסצנטיות: שעתיים. הרחבת אבות פיברו-אדיפוגניים (FAP): 4 ימים. התמיינות FAP: 48 שעות עבור התמיינות פיברוגנית, 6 ימים עבור התמיינות אדיפוגנית עבור FAPs שרירי השלד, ו -14 ימים עבור FAPs לב. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66717/66717fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66717/66717fig02.jpg"> איור 2: תרשימי FACS מייצגים עבור בידוד FAP של שרירי השלד (למעלה) והלב (למטה). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66717/66717fig02large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66717/66717fig03.jpg"> איור 3: התמיינות FAP של שרירי השלד של עכבר קוצני. (A) בקרת התמיינות פיברוגנית. (B) התמיינות פיברוגנית. (C) בקרת התמיינות אדיפוגנית. (ד) בידול אדיפוגני. Perilipin (ירוק), SMA (מגנטה), DAPI (כחול), סרגל קנה מידה = 100 מיקרומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66717/66717fig03large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66717/66717fig04.jpg"> איור 4: התמיינות FAP של עכבר קוצני. (A) בקרת התמיינות פיברוגנית. (B) התמיינות פיברוגנית. (C) בקרת התמיינות אדיפוגנית. (ד) בידול אדיפוגני. Perilipin (ירוק), SMA (מגנטה), DAPI (כחול), סרגל קנה מידה = 100 מיקרומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66717/66717fig04large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66717/66717fig05.jpg"> איור 5: תמונות ברייטפילד של שרירי השלד של עכבר קוצני (A) והלב (B) FAPs לאחר 5 ימי תרבית, לפני ההתמיינות. סרגל קנה מידה = 360 מיקרומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66717/66717fig05large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>פקדים</td>
			<td>CD31 SC</td>
			<td>PDGFRα SC</td>
			<td>CD31 FMO</td>
			<td>PDGFRα FMO</td>
			<td>לדוגמה</td>
		</tr><tr><td>נוגדן CD31</td>
			<td>+</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>+</td>
			<td>+</td>
		</tr><tr><td>נוגדן PDGFRα</td>
			<td>-</td>
			<td>+</td>
			<td>+</td>
			<td>-</td>
			<td>+</td>
		</tr></tbody></table>טבלה 1: מדריך סכמטי להגדרת קוקטיילים לצביעת נוגדנים לבקרות ולדגימה. SC = בקרת צבע יחיד, FMO = פלואורסצנטיות פחות בקרה אחת, + = עם הנוגדן המתאים, - = ללא הנוגדן המתאים.

Due to its exceptional repair program, the spiny mouse is an emerging research model for regenerative medicine. Fibro-adipogenic progenitors are ...

fibro-adipogenic-progenitor-isolation-expansion-differentiation-from

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

כאן אנו מדווחים על שיטה לבידוד של אוכלוסיות תאי אב (APC) של אדיפוציטים (APC) מתוך רקמת אדיפוס (Perivascular Adipose Tissue) (PVAT) תוך שימוש במיון תאים מגנטיים המופעל (MCS). שיטה זו מאפשרת בידוד מוגבר של APC לכל גרם של רקמת השומן בהשוואה לפלואורסצנטי המופעל תא מיון (FACS).

הרחבת אדיפוגנזה השראה של אבות אדיפוציטים מ רקמות אדיבוס perivascular מבודדים על ידי מיון מגנטי המופעל תא

פרוטוקול זה מתאר את הגישה הטכנית לבידוד תת-אוכלוסיות תאי סטרומה אדיפוגניים ופיברו-דלקתיים ממחסני רקמת שומן לבן תוך בטני (WAT) על ידי מיון תאים המופעלים על ידי פלואורסצנטיות או הפרדת חרוזים אימונומגנטית.

בידוד תת-אוכלוסיות תאי סטרומה אדיפוגניים ופיברו-דלקתיים ממחסני שומן תוך-בטניים של מורין

אנו מציגים שיטה פשוטה לבודד תאי אב שומן קיימא מאוד מרפידות שומן אפידיליות עכבר באמצעות מיון תאים המופעלים פלואורסצנטיות.

הכנת תאי אדיפוס אבות מרקמות שומן אפידימליות עכבר

דו"ח זה מתאר פרוטוקול לבידוד בו זמנית של preadipocytes חום ולבן ראשוני מעכברים שזה עתה נולדו. תאים מבודדים ניתן לגדל בתרבות המושרה להבדיל לתוך adipocytes לבן וחום בוגר לחלוטין. השיטה מאפשרת אפיון גנטי, מולקולרי ותפקודי של תאי שומן ראשוניים בתרבות.

בידוד ובידול של Preadipocytes לבן וחום ראשוני מעכברים שזה עתה נולדו

פרוטוקול זה מתאר את הבידוד של קדם-אדיפוציטים של עכברים משומן תת-עורי, התמיינותם לאדיפוציטים בוגרים והשראת תנגודת לאינסולין. פעולת האינסולין מוערכת על ידי זרחון / הפעלה של חברי מסלול איתות האינסולין דרך כתם מערבי. שיטה זו מאפשרת קביעה ישירה של תנגודת/רגישות לאינסולין באדיפוציטים ראשוניים.

אדיפוציטים מובחנים של עכברים בתרבית ראשונית: מודל של תנגודת לאינסולין

הזיהוי המדויק של תאי אב פיברו-אדיפוגניים (FAPs) ותאי גזע של שרירים (MuSCs) הוא קריטי לחקר תפקודם הביולוגי בתנאים פיזיולוגיים ופתולוגיים. פרוטוקול זה מספק הנחיות לבידוד, לטיהור ולתרבות של FAPs ו-MuSCs משרירי עכברים בוגרים.

בידוד ותרבית FACS של אבות פיברו-אדיפוגניים ותאי גזע של שרירים משרירי שלד עכברים לא מופרעות ופצועים

פרדיפוציטים מבודדים מהמקטע הווסקולרי של רקמת השומן החום הבין-סקפולרי מעכברים שזה עתה נולדו ומתמיינים לתאים שצוברים טיפות שומנים, מבטאים סמנים מולקולריים ומראים את המורפולוגיה המיטוכונדריאלית של אדיפוציטים חומים בוגרים. תאים אלה מנותחים עוד יותר על ידי immunofluorescence ומיקרוסקופ אלקטרונים הולכה.

התמיינות והדמיה של אדיפוציטים חומים מהמקטע הווסקולרי של רקמת השומן הבין-סקפולרית מעכברים שזה עתה נולדו

פרוטוקול זה מתאר את הבידוד החצי-אוטומטי של מקטע כלי הדם סטרומה (SVF) מרקמת השומן של מורין כדי להשיג קדם-אדיפוציטים ולהשיג התמיינות אדיפוציט במבחנה. שימוש בדיסוציאטור רקמות לעיכול קולגנאז מפחית את השונות הניסיונית ומגביר את יכולת הרבייה.

בידוד חצי אוטומטי של מקטע כלי הדם הסטרומלי מרקמת השומן הלבנה באמצעות דיסוציאטור רקמות

במאמר זה אנו מתארים את הבידוד, התרבית והאינדוקציה האידיפוגנית של קדם-אדיפוציטים שמקורם בשברי כלי דם סטרומה מרקמת השומן הפריאו-אורטית של עכבר, מה שמאפשר לחקור את תפקוד רקמת השומן הפריווסקולרית ואת הקשר שלה עם תאי כלי הדם.

בידוד, תרבית ואינדוקציה אדיפוגנית של פרדיפוציטים שמקורם בשבר כלי דם סטרומה מרקמת שומן פריאורטית של עכבר

הגודל והשבריריות של אדיפוציטים בוגרים הגבילו את הטכניקות והכלים הזמינים למחקר ולבידוד שלהם. כאן, מתואר פרוטוקול לבידוד של אדיפוציטים עכברים בוגרים, שניתן להתאים בקלות למחסני שומן שונים ולדיאטות עכברים.

בידוד ותרבות של אדיפוציטים עכבריים ראשוניים מעכברים רזים והשמנים

למדו לבודד ולהרחיב תאי אב פיברו-אדיפוגניים משרירי שלד ולב בעכבר הקוצני באמצעות עיכול אנזימטי ומיון תאים פלואורסצנטי. שיטה זו מאפשרת מחקר מדויק של תיקון רקמות ורפואה רגנרטיבית.

בידוד, הרחבה והבחנה של אב פיברו-אדיפוגני ממודל העכבר הקוצני

גלה סרטונים נוספים