Name: שימוש במתן תרופות מונחות מיקרופיפטה כשיטה חלופית לגבאג אוראלי במודלים של מכרסמים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-07-26T13:40:00.000+00:00
Duration: 2 min 44 s
Description: למדו את שיטת מתן התרופות המונחית מיקרופיפטה (MDA) כחלופה פחות מלחיצה לגבאג' אוראלי במודלי עכברים. שיטה זו מפחיתה מתח בבעלי חיים ומגבירה את אמינות תוצאות הניסוי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>הפחתת עקה מחקרית של בעלי חיים באמצעות מנהל תרופות מונחות מיקרופיפטה

<ol><li>Vandenberg, L. N., Welshons, W. V., Vom Saal, F. S., Toutain, P. -L., Myers, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Should+oral+gavage+be+abandoned+in+toxicity+testing+of+endocrine+disruptors%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Health%22%5BJournal%5D)">Should oral gavage be abandoned in toxicity testing of endocrine disruptors.</a> Environ Health. 13 (1), 46(2014).</li>
<li>Craig, M. A., Elliott, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mice+fed+radiolabeled+protein+by+gavage+show+sporadic+passage+of+large+quantities+of+intact+material+into+the+blood%2C+an+artifact+not+associated+with+voluntary+feeding%5BTitle%5D)+AND+%22Contemp+Top+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Mice fed radiolabeled protein by gavage show sporadic passage of large quantities of intact material into the blood, an artifact not associated with voluntary feeding.</a> Contemp Top Lab Anim Sci. 38 (5), 18-23 (1999).</li>
<li>Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Administration+of+substances+to+laboratory+animals%3A+routes+of+administration+and+factors+to+consider%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (5), 600-613 (2011).</li>
<li>Gulin, J. E. N., Bisio, M., García-Bournissen, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Refining+drug+administration+in+a+murine+model+of+acute+infection+with+Trypanosoma+cruzi%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim+Res%22%5BJournal%5D)">Refining drug administration in a murine model of acute infection with Trypanosoma cruzi.</a> Lab Anim Res. 36, 37(2020).</li>
<li>Bonnichsen, M., Dragsted, N., Hansen, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+welfare+impact+of+gavaging+laboratory+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Anim+Welf%22%5BJournal%5D)">The welfare impact of gavaging laboratory rats.</a> Anim Welf. 14 (3), 223-227 (2005).</li>
<li>Brown, A. P., Dinger, N., Levine, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress+produced+by+gavage+administration+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Contemp+Top+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Stress produced by gavage administration in the rat.</a> Contemp Top Lab Anim Sci. 39 (1), 17-21 (2000).</li>
<li>Scarborough, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+validation+of+the+micropipette-guided+drug+administration+%28MDA%29+method+in+the+maternal+immune+activation+model+of+neurodevelopmental+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Behav+Immun%22%5BJournal%5D)">Preclinical validation of the micropipette-guided drug administration (MDA) method in the maternal immune activation model of neurodevelopmental disorders.</a> Brain Behav Immun. 88, 461-470 (2020).</li>
<li>Germann, P. G., Ockert, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Granulomatous+inflammation+of+the+oropharyngeal+cavity+as+a+possible+cause+for+unexpected+high+mortality+in+a+Fischer+344+rat+carcinogenicity+study%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Granulomatous inflammation of the oropharyngeal cavity as a possible cause for unexpected high mortality in a Fischer 344 rat carcinogenicity study.</a> Lab Anim Sci. 44 (4), 338-343 (1994).</li>
<li>Martins, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+gelatin+flavors+for+oral+dosing+of+C57BL%2F6J+and+FVB%2FN+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Comparison of gelatin flavors for oral dosing of C57BL/6J and FVB/N mice.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 61 (1), 89-95 (2022).</li>
<li>Huynh, N., Arabian, N., Lieu, D., Asatryan, L., Davies, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Utilizing+an+orally+dissolving+strip+for+pharmacological+and+toxicological+studies%3A+A+simple+and+humane+alternative+to+oral+gavage+for+animals%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Utilizing an orally dissolving strip for pharmacological and toxicological studies: A simple and humane alternative to oral gavage for animals.</a> J Vis Exp. (109), e53770(2016).</li>
<li>Hoggatt, A. F., Hoggatt, J., Honerlaw, M., Pelus, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+spoonful+of+sugar+helps+the+medicine+go+down%3A+a+novel+technique+to+improve+oral+gavage+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">A spoonful of sugar helps the medicine go down: a novel technique to improve oral gavage in mice.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 49 (3), 329-334 (2010).</li>
<li>Neto, T., Faustino-Rocha, A. I., Gilda Costa, R. M., Medeiros, R., Oliveira, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quick+and+low-intensity+method+for+oral+administration+to+large+numbers+of+mice%3A+A+possible+alternative+to+oral+gavage%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">A quick and low-intensity method for oral administration to large numbers of mice: A possible alternative to oral gavage.</a> Lab Anim. 56 (2), 185-190 (2022).</li>
<li>Küster, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Voluntary+ingestion+of+antiparasitic+drugs+emulsified+in+honey+represents+an+alternative+to+gavage+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Voluntary ingestion of antiparasitic drugs emulsified in honey represents an alternative to gavage in mice.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 51 (2), 219-223 (2012).</li>
<li>Gonzales, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+method+of+oral+administration+by+peanut+butter+pellet+formulation+results+in+target+engagement+of+BACE1+and+attenuation+of+gavage-induced+stress+responses+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Biochem+Behav%22%5BJournal%5D)">Alternative method of oral administration by peanut butter pellet formulation results in target engagement of BACE1 and attenuation of gavage-induced stress responses in mice.</a> Pharmacol Biochem Behav. 126, 28-35 (2014).</li>
<li>Teixeira-Santos, L., Albino-Teixeira, A., Pinho, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+alternative+method+for+oral+drug+administration+by+voluntary+intake+in+male+and+female+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">An alternative method for oral drug administration by voluntary intake in male and female mice.</a> Lab Anim. 55 (1), 76-80 (2021).</li>
<li>Schalbetter, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+application+of+clozapine-N-oxide+using+the+micropipette-guided+drug+administration+%28MDA%29+method+in+mouse+DREADD+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim+%28NY%29%22%5BJournal%5D)">Oral application of clozapine-N-oxide using the micropipette-guided drug administration (MDA) method in mouse DREADD systems.</a> Lab Anim (NY). 50 (3), 69-75 (2021).</li>
<li>Vanhecke, D., Bugada, V., Buch, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Refined+tamoxifen+administration+in+mice+by+encouraging+voluntary+consumption+of+palatable+formulations%29%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Refined tamoxifen administration in mice by encouraging voluntary consumption of palatable formulations).</a> bioRxiv. , (2023).</li>
<li>Heraudeau, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micropipette-guided+drug+administration+%28MDA%29+as+a+non-invasive+chronic+oral+administration+method+in+male+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Micropipette-guided drug administration (MDA) as a non-invasive chronic oral administration method in male rats.</a> J Neurosci Methods. 398, 109951(2023).</li>
<li>Sfanos, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compositional+differences+in+gastrointestinal+microbiota+in+prostate+cancer+patients+treated+with+androgen+axis-targeted+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Prostate+Cancer+Prostatic+Dis%22%5BJournal%5D)">Compositional differences in gastrointestinal microbiota in prostate cancer patients treated with androgen axis-targeted therapies.</a> Prostate Cancer Prostatic Dis. 21 (4), 539-548 (2018).</li>
<li>Shrestha, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profiling+the+urinary+microbiome+in+men+with+positive+versus+negative+biopsies+for+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Profiling the urinary microbiome in men with positive versus negative biopsies for prostate cancer.</a> J Urol. 199 (1), 161-171 (2018).</li>
<li>Peiffer, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Composition+of+gastrointestinal+microbiota+in+association+with+treatment+response+in+individuals+with+metastatic+castrate+resistant+prostate+cancer+progressing+on+enzalutamide+and+initiating+treatment+with+anti-PD-1+%28pembrolizumab%29%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Composition of gastrointestinal microbiota in association with treatment response in individuals with metastatic castrate resistant prostate cancer progressing on enzalutamide and initiating treatment with anti-PD-1 (pembrolizumab).</a> Neoplasia. 32, 100822(2022).</li>
<li>Jones, C. B., Peiffer, L. B., Davis, C. M., Sfanos, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Examining+the+effects+of+4He+exposure+on+the+gut-brain+axis%5BTitle%5D)+AND+%22Radiat+Res%22%5BJournal%5D)">Examining the effects of 4He exposure on the gut-brain axis.</a> Radiat Res. 197 (3), 242-252 (2022).</li>
<li>Walker, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+less+stressful+alternative+to+oral+gavage+for+pharmacological+and+toxicological+studies+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Appl+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">A less stressful alternative to oral gavage for pharmacological and toxicological studies in mice.</a> Toxicol Appl Pharmacol. 260 (1), 65-69 (2012).</li>
<li>Miguelena Chamorro, B., Swaminathan, G., Mundt, E., Paul, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+more+translatable+research%3A+Exploring+alternatives+to+gavage+as+the+oral+administration+route+of+vaccines+in+rodents+for+improved+animal+welfare+and+human+relevance%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim+%28NY%29%22%5BJournal%5D)">Towards more translatable research: Exploring alternatives to gavage as the oral administration route of vaccines in rodents for improved animal welfare and human relevance.</a> Lab Anim (NY). 52 (9), 195-197 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>200 ומיקרו; קצות פיפטה L</td><td>מטלר טולדו</td><td>17005860</td><td></td></tr><tr><td>AB SCIEX Triple QTRAP 5500 גלאי ספקטרומטרי</td><td>מסה Sciex</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Akkermansia muciniphila זן muc גנומי DNA</td><td>אמריקאי אוסף תרביות</td><td>מסוג BAA-835D-5</td><td></td></tr><tr><td>אמוניום אצטט</td><td>סיגמא&ndash; אולדריץ'</td><td>5.43834</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J עכברי</td><td>מעבדות ג'קסון</td><td>זן # 000664</td><td></td></tr><tr><td>C. scindens זן 35704</td><td>אוסף תרבות הסוג האמריקאי</td><td>35704</td><td></td></tr><tr><td>Cefoxitin</td><td>Sagent&nbsp;</td><td>NDC25021-109-10</td><td></td></tr><tr><td>שמן תירס</td><td>MedChemExpress</td><td>HY-Y1888</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>אתנול</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>AC611050040</td><td></td></tr><tr><td>חומצה פורמית</td><td>סיגמא&ndash; אולדריץ'</td><td>5.33002</td><td></td></tr><tr><td>עכברי FVB/NJ</td> מעבדות <td>ג'קסון</td><td>זן # 001800</td><td></td></tr><tr><td>גליצרול</td><td>סיגמא&ndash; אולדריץ'</td><td>G5516</td><td></td></tr><tr><td>הקסאן</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>02-002-996</td><td></td></tr><tr><td>מים בדרגת LC-MS</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>14-650-357</td><td></td></tr><tr><td>מתנול</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>02-003-340</td><td></td></tr><tr><td>צינור מפריד סרום מיקרוטיינר</td><td>בקטון דיקינסון</td><td>02-675-185</td><td></td></tr><tr><td>ביולוגיה מולקולרית כיתה</td><td>מים קורנינג</td><td>46-000-CI</td><td></td></tr><tr><td>עכברי NSG</td><td>Jackson Laboratories</td><td>Strain# 005557</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Corning</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>ערכת Qubit DNA HS</td><td>Invitrogen</td><td>Q32851</td><td></td></tr><tr><td>Racemic&nbsp; equol-d4</td><td>סנטה קרוז ביוטכנולוגיה</td><td>sc-219827</td><td></td></tr><tr><td>אגר קלוסטרידיאלי מחוזק</td><td>Anaerobe Systems</td><td>AS-6061</td><td></td></tr><tr><td>מרק קלוסטרידיאלי מחוזק</td><td>Anaerobe Systems</td><td>AS-606</td><td></td></tr><tr><td>S-equol</td><td>MedChemExpress</td><td>HY-100583</td><td></td></tr><tr><td>תקן ייחוס S-equol עבור LC-MS</td><td>Cayman Chemical</td><td>10010173</td><td></td></tr><tr><td>יחיד פיפטת ערוץ</td><td>Rainin</td><td>17008652</td><td></td></tr><tr><td>Streptococcus salivarius DNA גנומי</td><td>אוסף תרבות מסוג אמריקאי</td><td>BAA-1024D-5</td><td></td></tr><tr><td>חלב מרוכז ממותק</td> חוות <td>קליפורניה</td><td>B09TGQ7WV8</td><td></td></tr><tr><td>VSL#3</td><td>VSL#3 VSL#3</td><td>B07WX1LVHL</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-glucuronidase from Helix pomatia</td><td>Sigma&ndash; אולדריץ'</td><td>G7017</td><td></td></tr></tbody></table>

שימוש במתן תרופות מונחות מיקרופיפטה כשיטה חלופית לגבאג' אוראלי במודלים של מכרסמים

Use of Micropipette-Guided Drug Administration as an Alternative Method to Oral Gavage in Rodent Models

ניתן להשתמש במד"א בהעברה אוראלית של זני חיידקים במודלים של עכברים. עכברי C57BL/6J טופלו באנטיביוטיקה (צפוקסטין במי השתייה) במשך יומיים כדי לפנות קהילות מיקרוביאליות לפני תחילת ההכשרה של מד"א. תמיסת החלב/מים המרוכזים הממותקת ניתנה פעם ביום ברציפות במשך 3 ימים לפני מתן הטיפול. עכברים רוסנו לזמן קצר על ידי קשקוש עדין במהלך מתן הטיפול במד"א. ביום הרביעי, עכברים טופלו פעם אחת ב-PBS (בקרה שלילית, n = 4) או בתרבית אנאירובית של C. scindens (חיידקי desA+, n = 4) שקודם לכן הושעתה מחדש בתמיסת חלב/מים מרוכזים ממותקים. כל העכברים בדרך כלל לקחו את הטיפולים תוך שניות ושתו את כל המינון (100 μL). כדי לאמת את ההעברה והנוכחות של החיידקים האנאירוביים, השווינו דגימות צואה שנאספו לאחר טיפול אנטיביוטי לדגימות צואה שנאספו 24 שעות לאחר טיפול PBS או C. scindens (איור 1). דנ"א צואתי בודד, כומת ונורמל ל-10 ננוגרם/μL כדי לבצע qPCR באמצעות C. scindens ATCC 35704 desA פריימרים ספציפיים לגן (טבלה 1). ראינו שלעכברים שטופלו באנטיביוטיקה היו חיידקי desA+ מינימליים או ללא חיידקים. כצפוי, ראינו כמות גבוהה משמעותית של חיידקי desA+ בעכברים שטופלו ב-C. scindens, שהייתה שונה באופן משמעותי מאלה שבקבוצת הביקורת של PBS (p = 0.0286, איור 1).
העברת תרכובת ניסויית (S-equol) בשיטת מד"א. עכברי NSG (n = 15) ו- FVB/NJ (n = 18) עברו הכשרה עם תמיסת חלב/מים מרוכזת ממותקת יומיים לפני מתן הטיפול. עכברי NSG עברו טיפול אנטיביוטי (צפוקסטין במי השתייה) כדי לחסל חיידקי מעיים מייצרי אקוול, ומכאן ייצור אקוול אנדוגני. עכברי FVB/NJ קיבלו תזונה נטולת סויה כדי לחסל את ייצור האקוול האנדוגני. כל העכברים רוסנו לזמן קצר על ידי קשקוש עדין על מנת לתת את הטיפולים. קבוצת הביקורת קיבלה את תמיסת החלב/מים המרוכזים הממותקים בשילוב עם שמן תירס, קבוצת DMSO (בקרת רכב עבור S-equol) קיבלה את תמיסת החלב/מים המרוכזים הממותקים ואת DMSO בשמן תירס, וקבוצת האקוול קיבלה תמיסת חלב/מים מרוכזים ממותקים ואקוול בשמן תירס. עכברים טופלו חמישה ימים בשבוע בטכניקת מד"א במשך 43 ימים בסך הכל. עכברים בדרך כלל לקחו את הטיפולים תוך שניות ושתו את כל המינון (100 μL). בסך הכל, כל העכברים צרכו לפחות מחצית מהמינון ביום מסוים (מנה חלקית ביום מסוים, אך מנה מלאה יום קודם או למחרת). אף אחד מהעכברים לא דחה את הטיפול לחלוטין במהלך המחקר. ראינו כי לאחר קשקוש, מיקום העכברים על גבם שיפר את זמן צריכת הטיפול והבטיח כי החיה לקחה את כל המינון.
רמות אקוול במחזור מדגימות אספקת תרופות יעילה של מד"א. דגימות דם נלקחו מעכברי NSG לאחר המתת חסד בסוף המחקר כדי לאמת כי העברת השוויון במד"א הובילה לרמות שוויון במחזור בחיות המחקר. לא החזרנו מספיק דם מאחד העכברים שטופלו בקו שוויון כדי לבצע את בדיקת LC/MS/MS. רמות השוויון בסרום נמדדו על ידי LC/MS/MS במשאב המשותף לפרמקולוגיה אנליטית בבית הספר לרפואה של אוניברסיטת ג'ונס הופקינס. לא ראינו אקוול במחזור בקבוצות הבקרה וה-DMSO (רכב משווה), בעוד שלעכברים שטופלו בקו המשווה היה משוואה מחזורית ניתנת לזיהוי (איור 2). חשוב לציין, אנו מצפים לשונות מסוימת ברמות השוויון במחזור בעכברים שטופלו בקו השוויון עקב תאריכים וזמנים שונים של הקרבת בעלי חיים בניסוי זה.
אוכלוסיית חיידקי המעי נותרת ללא שינוי לאחר הטיפול במד"א. ההשפעה של תמיסת חלב MDA (עם ובלי אקוול) על מיקרוביוטת המעיים הוערכה באמצעות עכברי FVB/NJ. כימתנו את ההרכב המיקרוביאלי של דגימות שנלקחו בתחילת הטיפול (ללא טיפולים/ללא מד"א) ודגימות שנלקחו 7 ימים לאחר תחילת הטיפול (9 ימים לאחר התחלת מד"א, כולל ימי הדרכה). לא ראינו שינויים משמעותיים בעומס החיידקים הכולל או בהרכב המיקרוביאלי הכולל של מיקרוביוטת הליבה של המעי (Akkermansia muciniphila, Bifidobacterium spp., Streptococcus salivarius, Lactobacillus spp.) כפי שהוערך על-ידי ניתוח qPCR ספציפי למין (איור 3) כפי שתואר קודם לכן21,22. כלוב אחד הראה הבדל משמעותי בלקטובצילוס בין נקודת ההתחלה לאחרי טיפול במד"א; עם זאת, ממצא זה נצפה בבקרת הרכב של DMSO ולא היה עקבי בכל הכלובים.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66836/66836fig01.jpg"> 
איור 1: מד"א מעביר חיידקים אנאירוביים למעי העכבר שניתן לכמת באמצעות qPCR צואתי. עכברי C57BL/6J טופלו באנטיביוטיקה במשך יומיים רצופים במי השתייה. לאחר מכן טופלו עכברים בחיידק האנאירובי C. scindens בשיטת מד"א. עומס חיידקי צואה C. scindens (desA+) נמדד על ידי qPCR עבור הגן desA הן לאחר טיפול אנטיביוטי והן 24 שעות לאחר טיפול MDA (PBS או C. scindens). (A) C . scindens-specific desA כימות גנים מוצג בין עכברים שטופלו ב-PBS ו-C. scindens לאחר טיפול אנטיביוטי ו-24 שעות לאחר טיפול ב-MDA. (B) אותם נתונים המוצגים במשך 24 שעות לאחר מד"א ב-(A) מוצגים כגרף עמודה. מובהקות סטטיסטית נקבעה באמצעות מבחן מאן-ויטני לא פרמטרי. (*) p = 0.0286, קווי שגיאה = SD. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66836/66836fig01large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66836/66836fig02.jpg"> 
איור 2: ניתוח רמות המשוואה במחזור הדם בעכברי NSG שטופלו באקוול באמצעות טכניקת מד "א. רמות אקוול בסרום כומתו באמצעות LC/MS/MS בקבוצת ביקורת (n = 5), DMSO (רכב, n = 5) ו- equol (n = 4) עכברים שטופלו. לא נמצא מספיק דם מאחד העכברים שטופלו באקוול כדי לבצע LC/MS/MS. טיפולים אלה ניתנו בשיטת מד"א. ניתן היה לזהות אקוול בסרום רק בקבוצה שטופלה במשווה. מגבלת הכימות &lt; 5 ננוגרם/מ"ל. מובהקות סטטיסטית נקבעה באמצעות ANOVA חד-כיווני לא פרמטרי עם השוואות מרובות (תיקון דאן). (**) p = 0.0053, קווי שגיאה = SD. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66836/66836fig02large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66836/66836fig03.jpg"> 
איור 3: חיידקי הליבה במעיים ורמות עומס החיידקים הכולל נותרו ללא שינוי בעכברי FVB/NJ לאחר טיפול במד"א. לא נצפו שינויים משמעותיים בערכי qPCR Cq עבור קהילות החיידקים הממוקדות לפני ואחרי מתן הטיפול בשיטת מד"א. לקטובצילוס הראה הבדל משמעותי (*, p = 0.0321) רק בכלוב 3 בין נקודת ההתחלה לטיפול במד"א. ממצא זה לא היה עקבי בין הכלובים. מספרי הכלוב מסומנים כ-C1-C4. מובהקות סטטיסטית נקבעה באמצעות ANOVA חד-כיווני עם השוואות מרובות (תיקון Tukey). קווי שגיאה = SD. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66836/66836fig03large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>שם פריימר</td>
			<td>רצפי פריימר</td>
			<td>תנאי PCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DesA_CS_F</td>
			<td>5'-GGACAGGGTGTCGGCTTTATG-3'</td>
			<td rowspan="2">93°C 3 דקות, 34 מחזורים (95°C 30 שניות, 54°C 30 שניות)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DesA_CS_R</td>
			<td>5'-TTACTTCACCTTCGCCAGTTTCTG-3'</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
טבלה 1: פריימרים ותנאי qPCR עבור חיידקי desA+ (C. scindens).
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>שם פריימר</td>
			<td>רצפי פריימר</td>
			<td>תנאי PCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>V6_F V6_R</td>
			<td>5'-CAACGCGWRGAACCTTACC-3' 5'-CRACACGAGCTGACGAC-3'</td>
			<td>95°C, 3 דקות 36 מחזורים 95 °C, 30 שניות 53°C, 30 שניות</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A.muc_F A.muc_R</td>
			<td>5'-CAGCACGTGAAGGTGGGGAC-3' 5'-CCTTGCGGTTGGCTTCAGAT-3'</td>
			<td>50°C, 5 דקות 95°C, 10 דקות 40 מחזורים 95°C, 15 שניות 60 °C, 1 דקות</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bifido_F Bifido_R</td>
			<td>5'-CGGGTGAGTAATGCGTGACC-3' 5'-TGATAGGACGCGACCCCA-3'</td>
			<td>95°C, 3 דקות 36 מחזורים 95 °C, 30 שניות 53°C, 30 שניות</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ס. salivarius_F ס. salivarius_R</td>
			<td>5'-CACGCCATGCTGGAAGTG-3' 5'-GCGATGAGCCAAGCTGAAG-3'</td>
			<td>95°C, 10 דקות 44 מחזורים 95°C, 15 שניות 60 °C, 1 דקות</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lacto_F Lacto_R</td>
			<td>5'-TGGAAACAGRTGCTAATACCG-3' 5'-GTCCATTGTGGAAGATTCCC-3'</td>
			<td>50 °C, 2 דקות 95°C, 10 דקות 40 מחזורים 95°C, 15 שניות 62°C, 1 דקות</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
טבלה 2: פריימרים ותנאי qPCR המשמשים למדידת ההשפעה של MDA על מיקרוביוטת הליבה של המעי.

Oral gavage (OG) with the use of a cannula attached to a syringe is one of the most common methods used to deliver precise dosing of compounds to the ...

use-micropipette-guided-drug-administration-as-an-alternative-method

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

בדיקות פרה יסודית של תרופות הפועלות על מערכת העצבים המרכזית כרוך לעתים קרובות בהערכת השוואת biodistribution התרופה בשיתוף עם מסלולים ספציפיים של הממשל. הנה שלוש שיטות נפוצות של משלוח מערכתית (תוך ורידי, intraperitoneal, ובעל פה), כמו גם שיטה למסירה מקומית (הסעה משופרת משלוח) הם הוכיחו בעכברים.

תרופות משלוח מערכתית מקומי לטיפול במחלות של מערכת העצבים המרכזית מודלים מכרסמים

עבודה בצורה בטוחה ואנושית עם מכרסמי מחקר דורשת מיומנות ליבה בשיטות טיפול ובאיפוק. מאמר זה יציג את העקרונות הבסיסיים הנדרשים לטיפול בצורה בטוחה ויעילים לנהל תרכובות לעכברים וחולדות.

איפוק ידני ומסלולי מנהל מתחם נפוצים בעכברים וחולדות

ניהול עצמי הפרדיגמה תוך הוורידים (IVSA) נחשבת לסטנדרט זהב בבוחן את מאפייני החיזוק של תרופות של התעללות במכרסמים. כתב יד זה מתאר הפרוצדורות וטכניקות כירורגיות הדרושות כדי להשיג נתוני IVSA אמינים. בפרט, השתלת צנתר מוקפדת ותחזוקה מודגשות.

שיטות לניהול עצמי תוך ורידים במודל של עכברים

מקור: Poland, R. et al. מיקרו-הזרקת מוח מכרסם לחקר מצעים מולקולריים של התנהגות מונעת. J. Vis. Exp. (2015)בסרטון זה, מערך מיקרו-הזרקה מלא במים המורכב ממזרק וצינורות מיקרו-מזרק משמש לאספקת תרופות מדויקת. חולדה עם צינורית הנחיה מושתלת מראש עוברת מיקרו-הזרקה ממוקדת למוח, המאפשרת מתן מדויק של חומרים טיפוליים בבעלי חיים ערים עם נזק מינימלי לרקמות.

הזרקה מבוססת מיקרו-הזרקה של חומר טיפולי למוח מכרסם ער

מקור: Kanazawa, T., et al. שיטות חדשניות למתן תוך-אף בהרדמה באינהלציה להערכת מתן תרופות מהאף למוח. J. Vis. Exp. (2018)סרטון זה מדגים מתן תוך-אף של תרופות עם תווית רדיו בעכבר מורדם כדי להשיג העברת תרופות מהאף למוח. הוא מסביר כיצד תרופות חוצות את אפיתל האף ונעות דרך מסלולים עצביים כדי להגיע למוח, כמו גם כיצד תנועת הריסים משפיעה על שימור ופינוי תרופות. בנוסף, הסרטון מתאר שיטת קנולציה הפוכה חלופית, הכוללת החדרת צינורית דרך הוושט כדי להעביר תרופות כנגד תנועת הריסים, שיפור השמירה ושיפור יעילות ההובלה.

מתן תרופות תוך-אף בעכברים באמצעות פיפטה וקנולציה הפוכה להעברת תרופות מאף למוח

אנו מתארים שיטה למקד תרופות למערכת העצבים המרכזית או על ידי השתלת קטטר או ביצוע הזרקת בולוס לתוך החדר לרוחב הנכון בעכברים. אנו מתמקדים באופן ספציפי על המשלוח של אנטיסנס. טכניקה זו היא להתאמה בקלות לתרופות אחרות ולחולדות.

משלוח תוך חדרי ישיר של תרופות למערכת העצבים המרכזית מכרסם

מכרסמים הם מודל מתאים לחקירת המצעים המולקולריים של התנהגות והפרעות פסיכיאטריות מורכבות. ניתן להשתמש במיקרו-הזרקת מוח במכרסמים ערים כדי להבהיר מצעי מחלה. מוצגת שיטת מיקרו-הזרקה יעילה וניתנת להתאמה אישית למוח כמו גם ביצוע פרדיגמה אופרנטית המכמתת מוטיבציה.

מכרסמים מוח Microinjection לחקר מולקולריים מצעים של התנהגות מוטיבציה

הפרוטוקול הבא מתאר שיטה חדשנית לניהול תרופה אוראלית כרוני באמצעות רצועת המסה דרך פה (ODS) במקום שיטת gavage יותר הנפוצה האוראלית. אנו מראים כי משלוח סמים פרה-קליני, אוראלי בשיטת ODS מייצג אלטרנטיבה בטוחה, נוחה, ואנושית כדי gavage פה.

ניצול רצועת מסה בעל פה ללימודים תרופתיים ו טוקסיקולוגי: חלופה פשוטה הומניטרית Gavage האוראלי עבור בעלי חיים

המטרה הכוללת של הליך זה היא לתאר שיטה לניהול עצמי של תרופות שניתן להשתמש בה במודלים עכבר של האכלה והשמנת יתר.

ניהול עצמי של תרופות במודלים עכבר של האכלה והשמנת יתר

מתן דרך הפה באמצעות גבאז' במכרסמים יכול לגרום למצוקה הקשורה לאיפוק. חקרנו מתן אורומוקוזלי/בוקאלי של תמצית קנאביס מועשרת ב-CBD, שם טופלו חולדות במשך 15 יום עם התמצית ב-3 מ"ג/ק"ג/יום. הטיפולים ניתנו דרך הפה עם מיקרופיפטה, תוך שימוש בטכניקת מגע חיבה כדי לטפל בבעלי החיים.

אורומוקוסל כשיטה חלופית למתן מוצרי קנאביס במכרסמים

למדו את שיטת מתן התרופות המונחית מיקרופיפטה (MDA) כחלופה פחות מלחיצה לגבאג' אוראלי במודלי עכברים. שיטה זו מפחיתה מתח בבעלי חיים ומגבירה את אמינות תוצאות הניסוי.

שימוש במתן תרופות מונחות מיקרופיפטה כשיטה חלופית לגבאג' אוראלי במודלים של מכרסמים

גלה סרטונים נוספים