Name: יצירת אורגנואידים וסקולריים מתאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים על ידי אדם (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-12-13T13:20:00.000+00:00
Duration: 4 min 41 s
Description: למד שיטה מתקדמת ליצירת אורגנואידים וסקולריים הומוגניים מתאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים באמצעות מעכבי ROCK ומיקרובארים. השיטה משפרת שכפוליות ומאפשרת ניתוח מורפולוגי ומידול מחלות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>אורגנואידים וסקולריים הנגזרים מ-hiPSC לבדיקת תרופות ומידול מחלות

<ol><li>Park, S. E., Georgescu, A., Huh, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids-on-a-chip%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Organoids-on-a-chip.</a> Science. 364 (6444), 960-965 (2019).</li>
<li>Takebe, T., Wells, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids+by+design%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Organoids by design.</a> Science. 364 (6444), 956-959 (2019).</li>
<li>Griffith, L. G., Swartz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capturing+complex+3d+tissue+physiology+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Bio%22%5BJournal%5D)">Capturing complex 3d tissue physiology in vitro.</a> Nat Rev Mol Cell Bio. 7 (3), 211-224 (2006).</li>
<li>Lancaster, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+organoids+model+human+brain+development+and+microcephaly%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cerebral organoids model human brain development and microcephaly.</a> Nature. 501 (7467), 373-379 (2013).</li>
<li>Pasca, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+cortical+neurons+and+astrocytes+from+human+pluripotent+stem+cells+in+3d+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Functional cortical neurons and astrocytes from human pluripotent stem cells in 3d culture.</a> Nat Methods. 12 (7), 671-678 (2015).</li>
<li>Takasato, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kidney+organoids+from+human+iPS+cells+contain+multiple+lineages+and+model+human+nephrogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Kidney organoids from human iPS cells contain multiple lineages and model human nephrogenesis.</a> Nature. 526 (7574), 564-568 (2015).</li>
<li>Koike, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+human+hepato-biliary-pancreatic+organogenesis+from+the+foregut-midgut+boundary%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Modelling human hepato-biliary-pancreatic organogenesis from the foregut-midgut boundary.</a> Nature. 574 (7776), 112-116 (2019).</li>
<li>Takebe, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularized+and+functional+human+liver+from+an+iPSC-derived+organ+bud+transplant%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Vascularized and functional human liver from an iPSC-derived organ bud transplant.</a> Nature. 499 (7459), 481-484 (2013).</li>
<li>Osakada, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+the+generation+of+rod+and+cone+photoreceptors+from+mouse%2C+monkey+and+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Toward the generation of rod and cone photoreceptors from mouse, monkey and human embryonic stem cells.</a> Nat Biotechnol. 26 (2), 215-224 (2008).</li>
<li>Potente, M., Gerhardt, H., Carmeliet, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basic+and+therapeutic+aspects+of+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Basic and therapeutic aspects of angiogenesis.</a> Cell. 146 (6), 873-887 (2011).</li>
<li>Wimmer, R. A., Leopoldi, A., Aichinger, M., Kerjaschki, D., Penninger, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+blood+vessel+organoids+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Generation of blood vessel organoids from human pluripotent stem cells.</a> Nat Protoc. 14 (11), 3082-3100 (2019).</li>
<li>Wimmer, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+blood+vessel+organoids+as+a+model+of+diabetic+vasculopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Human blood vessel organoids as a model of diabetic vasculopathy.</a> Nature. 565 (7740), 505-510 (2019).</li>
<li>He, S., et al. Mapping morphological malformation to genetic dysfunction in blood vessel organoids with 22q11.2 deletion syndrome. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHe%2C+S+%22Biorxiv%22">Biorxiv</a>. , (2021).</li>
<li>He, S., et al. Human vascular organoids with a mosaic akt1 mutation recapitulate proteus syndrome. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHe%2C+S+%22Biorxiv%22">Biorxiv</a>. , (2024).</li>
<li>Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+versatile+polypharmacology+platform+promotes+cytoprotection+and+viability+of+human+pluripotent+and+differentiated+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">A versatile polypharmacology platform promotes cytoprotection and viability of human pluripotent and differentiated cells.</a> Nat Methods. 18 (5), 528-541 (2021).</li>
<li>Ungrin, M. D., Joshi, C., Nica, A., Bauwens, C., Zandstra, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproducible%2C+ultra+high-throughput+formation+of+multicellular+organization+from+single+cell+suspension-derived+human+embryonic+stem+cell+aggregates%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Reproducible, ultra high-throughput formation of multicellular organization from single cell suspension-derived human embryonic stem cell aggregates.</a> PLoS ONE. 3 (2), e1565(2008).</li>
<li>Hwang, Y. -S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microwell-mediated+control+of+embryoid+body+size+regulates+embryonic+stem+cell+fate+via+differential+expression+of+wnt5a+and+wnt11%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Microwell-mediated control of embryoid body size regulates embryonic stem cell fate via differential expression of wnt5a and wnt11.</a> Proc Natl Acad Sci. 106 (40), 16978-16983 (2009).</li>
<li>Antonchuk, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+embryoid+bodies+from+human+pluripotent+stem+cells+using+aggrewell+plates%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Formation of embryoid bodies from human pluripotent stem cells using aggrewell plates.</a> Methods Mol Biol. 946, 523-533 (2013).</li>
<li>Lippmann, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+blood-brain+barrier+endothelial+cells+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Derivation of blood-brain barrier endothelial cells from human pluripotent stem cells.</a> Nat Biotechnol. 30 (8), 783-791 (2012).</li>
<li>Nishihara, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+to+brain+microvascular+endothelial+cell-like+cells+suitable+to+study+immune+cell+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Star+Protoc%22%5BJournal%5D)">Differentiation of human pluripotent stem cells to brain microvascular endothelial cell-like cells suitable to study immune cell interactions.</a> Star Protoc. 2 (2), 100563(2021).</li>
<li>Qian, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+to+blood-brain+barrier+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Directed differentiation of human pluripotent stem cells to blood-brain barrier endothelial cells.</a> Sci Adv. 3 (11), e1701679(2017).</li>
<li>Stebbins, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+pluripotent+stem+cell-derived+brain+pericyte-like+cells+induce+blood-brain+barrier+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Human pluripotent stem cell-derived brain pericyte-like cells induce blood-brain barrier properties.</a> Sci Adv. 5 (3), eaau7375(2019).</li>
<li>Campisi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+self-organized+microvascular+model+of+the+human+blood-brain+barrier+with+endothelial+cells%2C+pericytes+and+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">3D self-organized microvascular model of the human blood-brain barrier with endothelial cells, pericytes and astrocytes.</a> Biomaterials. 180, 117-129 (2018).</li>
<li>Osaki, T., Sivathanu, V., Kamm, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineered+3D+vascular+and+neuronal+networks+in+a+microfluidic+platform%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Engineered 3D vascular and neuronal networks in a microfluidic platform.</a> Sci Rep. 8 (1), 5168(2018).</li>
<li>Osaki, T., Uzel, S. G. M., Kamm, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microphysiological+3D+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis+%28ALS%29+from+human+iPS-derived+muscle+cells+and+optogenetic+motor+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Microphysiological 3D model of amyotrophic lateral sclerosis (ALS) from human iPS-derived muscle cells and optogenetic motor neurons.</a> Sci Adv. 4 (10), eaat5847(2018).</li>
<li>Sakurai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+microengineered+vascularized+bleeding+model+that+integrates+the+principal+components+of+hemostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">A microengineered vascularized bleeding model that integrates the principal components of hemostasis.</a> Nat Commun. 9 (1), 509(2018).</li>
<li>Kim, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+of+a+biomimetic+pericyte-covered+3d+microvascular+network%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Engineering of a biomimetic pericyte-covered 3d microvascular network.</a> PLoS ONE. 10 (7), e0133880(2015).</li>
<li>Kosyakova, N., et al. Differential functional roles of fibroblasts and pericytes in the formation of tissue-engineered microvascular networks in vitro. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKosyakova%2C+N+%22Biorxiv%22">Biorxiv</a>. , (2019).</li>
<li>Whisler, J. A., Chen, M. B., Kamm, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+perfusable+microvascular+network+morphology+using+a+multiculture+microfluidic+system%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+C+Methods%22%5BJournal%5D)">Control of perfusable microvascular network morphology using a multiculture microfluidic system.</a> Tissue Eng Part C Methods. 20 (7), 543-552 (2013).</li>
<li>Haase, K., Kamm, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+on-chip+vascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Advances in on-chip vascularization.</a> Regen Med. 12 (3), 285-302 (2017).</li>
<li>Wong, K. H. K., Chan, J. M., Kamm, R. D., Tien, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+models+of+vascular+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Microfluidic models of vascular functions.</a> Annu Rev Biomed Eng. 14 (1), 205-230 (2012).</li>
<li>Boerckel, J. D., Uhrig, B. A., Willett, N. J., Huebsch, N., Guldberg, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+regulation+of+vascular+growth+and+tissue+regeneration+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Mechanical regulation of vascular growth and tissue regeneration in vivo.</a> Proc Natl Acad Sci. 108 (37), E674-E680 (2011).</li>
<li>Homan, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow-enhanced+vascularization+and+maturation+of+kidney+organoids+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Flow-enhanced vascularization and maturation of kidney organoids in vitro.</a> Nat Methods. 16 (3), 255(2019).</li>
<li>Mansour, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vivo+model+of+functional+and+vascularized+human+brain+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">An in vivo model of functional and vascularized human brain organoids.</a> Nat Biotechnol. 36 (5), 432-441 (2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>2-מרקפטואתנול (1000x)</td><td>Gibco</td><td>21985023</td><td></td></tr><tr><td>Accutase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A6964</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 AffiniPure F(ab')2 שבר חמור נגד ארנב IgG (H+L)</td><td>Jackson Immuno Research Labs</td><td>711-546-152</td><td>להרכיב מחדש עם 0.25 מ"ל 50% גליצרול,&nbsp; לאחסן ב-20 מעלות; C עד שנה, יחס דילול לשימוש: 1:1000</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 AffiniPure F(ab')2 שבר חמור נגד עזים IgG (H+L)&nbsp;</td><td>מעבדות המחקר החיסוני של ג'קסון</td><td>705-606-147</td><td>מרכיבות מחדש עם 0.25 מ"ל 50% גליצרול, &nbsp; יש לאחסן ב-20&deg; C עד שנה, יחס דילול לשימוש: 1:1000</td></tr><tr><td>תוסף B27 פחות ויטמין A (50x)</td> <td>Gibco</td><td></td><td>12587010 להפשיר ב-4 מעלות; C, aliquot ואחסן ב-20 מעלות; ג, הימנע ממחזור הקפאה-הפשרה</td></tr><tr><td>BMP4</td><td>ProSpec</td><td>CYT-081</td><td>להרכיב מחדש עם ddH2O סטרילי בריכוז של 100 ng/&micro; L, aliquot ומאחסנים ב-20 מעלות; </td></tr><tr><td>נוגדן C CD31&nbsp;</td><td>ABCAM</td><td>AB28364</td><td>יחס דילול: 1:400</td></tr><tr><td>צנטריפוגה</td><td>Eppendorf</td><td>022626001</td><td></td></tr><tr><td>CHIR99021</td><td>Tocris Bioscience</td><td>4423/10</td><td>מייצרים את תמיסת המלאי ב-12 מ"מ עם DMSO, ומאחסנים ב-20 מעלות; C עד שנה.</td></tr><tr><td>Chroman 1</td><td>Tocris</td><td>7163/10</td><td>להפוך את תמיסת המלאי ב-100 ומיקרו; M עם DMSO, ואחסן ב-20 מעלות; C עד שנה.</td></tr><tr><td>קולגן I&nbsp;</td><td>קורנינג</td><td>40236</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ קונפוקלי</td><td>ניקון</td><td>AXRMP/Ti2</td><td></td></tr><tr><td>קורנינג צלחות אלפלזיה</td><td>קורנינג</td><td>4441</td><td></td></tr><tr><td>רוזנת II FL דלפק תאים אוטומטי</td><td>תרמו פישר</td><td>AMQAF1000</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12, תוסף GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>10565018</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12, אבקת</td><td>Gibco</td><td>12500062</td><td>הכינו תמיסת מלאי פי 10 עם ddH2O ביוגראד ועקרו אותו עם 0.2 ומיקרו; מסנן M. יש לאחסן בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס.</td></tr><tr><td>Edi042A</td><td>Cedars Sinai</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Emricasan</td><td>Medchemexpress LLC</td><td>HY1039610MG</td><td>מייצרים את פתרון המלאי ב-1 מ"מ עם DMSO, ומאחסנים ב-20 מעלות; C עד שנה.</td></tr><tr><td>נוגדן ERG</td><td>Cell Singali Technology</td><td>97249</td><td>יחס דילול: 1:400</td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי - פרימיום</td><td>אטלנטה ביולוגית</td><td>S11150</td><td>הפשרה ב-4 מעלות; C&nbsp; ו-aliquot, חנות ב-&nbsp; -20 מעלות; C עד חמש שנים, או לאחסן בטמפרטורה של 4 מעלות; C למשך עד חודש</td></tr><tr><td>FGF2</td><td>ProSpec</td><td>CYT557</td><td>מורכב מחדש עם ddH2O סטרילי בריכוז של 100 ng/&micro; L, aliquot ומאחסנים ב-20 מעלות; C</td></tr><tr><td>Fluorodish Cell Dish Dish Precision</td><td>Instruments</td><td>FD35-100</td><td></td></tr><tr><td>Forskolin</td><td>Tocris Bioscience</td><td>1099</td><td>להרכיב מחדש עם DMSO בריכוז של 12 מ"מ, לאחסן ב-20 מעלות; C</td></tr><tr><td>ג'נטמיצין (50 מ"ג/מ"ל)</td><td>תוסף Gibco</td><td>15710064</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX (100x)</td><td>Gibco</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>Heparin, 100 kU</td><td>MilliporeSigma</td><td>375095100KU</td><td>להרכיב מחדש עם ddH2O סטרילי בריכוז של 4 kU/mL</td></tr><tr><td>HEPES (1 M)</td><td>Gibco</td><td>15630080</td><td></td></tr><tr><td>Incubator</td><td>Thermo Scientific</td><td>13998123</td><td></td></tr><tr><td>החלפת סרום נוקאאוט</td><td>Gibco</td><td>10828028</td><td>הפשרה ב-4 מעלות; C, aliquot ואחסון ב-20&deg; C, הימנע ממחזור הקפאה-הפשרה</td></tr><tr><td>Matrigel, GFR Basement Membrane Matrix</td><td>Corning</td><td>356230</td><td>הפשרה ב-4 מעלות; C, aliquot ואחסון ב-80&deg; ג, הימנע ממחזור הקפאה-הפשרה</td></tr><tr><td>MEM תמיסת חומצות אמינו לא חיוניות (NEAA, 100x)</td> <td>Gibco</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>ביולוגיה מולקולרית כיתה</td><td>קורנינג</td><td>מים 46000CV</td><td></td></tr><tr><td>mTeSR פלוס ערכת</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>1001130</td><td>להפשיר ב-4 מעלות; C, aliquot ואחסון ב-20&deg; ג, הימנע ממחזור הקפאה-הפשרה</td></tr><tr><td>תוסף N2 (פי 100)</td><td>Gibco</td><td>17502048</td><td>להפשיר ב-4 מעלות; C, aliquot ואחסון ב-20&deg; ג, הימנע ממחזור הקפאה-הפשרה</td></tr><tr><td>תמיסת NaOH (1 M)</td><td>Cytiva&nbsp; HyClone</td><td>SH31088.01</td><td></td></tr><tr><td>מדיום נוירו-בזאלי</td><td>Gibco</td><td>21103049</td><td></td></tr><tr><td>NIS-Elements, ver 5.42</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Normal Donkey Serum</td><td>Jackson Immuno Research Labs</td><td>17000121</td><td>להרכיב מחדש עם 10 מ"ל סטרילי ddH2O, לאחסן ב-4 מעלות; C למשך עד שבועיים</td></tr><tr><td>paraformaldehyde, 20%</td> <td>Electron Microscopy Sciences</td><td>15713S</td><td>מדולל עם</td></tr><tr><td>PBS PBST, 20x</td><td>Thermofisher</td><td>28352</td><td></td></tr><tr><td>PDGFR&beta; נוגדן</td><td>R& יחס</td> דילול D <td>AF385</td><td>: 1:400</td></tr><tr><td>תוסף פוליאמין (1000x)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>P8483</td><td></td></tr><tr><td>Rapiclear Reagent Reagent, 1.49</td><td>SUNJIN LAB</td><td>RC149001</td><td></td></tr><tr><td>נתרן ביקרבונט (7.5%)</td><td>Gibco</td><td>25080094</td><td></td></tr><tr><td>נתרן דאוקסיכולאט מונוהידראט</td><td>Thermofisher</td><td>J6228822</td><td>להמיס עם ddH2O לתמיסת מלאי של 1% (wt/v)</td></tr><tr><td>TBST, 20x</td><td>Thermofisher</td><td>28360</td><td></td></tr><tr><td>trans-ISRIB</td><td>Tocris Bioscience</td><td>5284/10</td><td>מייצרים את תמיסת המלאי ב-1 מ"מ עם DMSO, ומאחסנים ב-20&deg; C עד שנה.</td></tr><tr><td>Tritin X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787-50 מ"ל</td><td></td></tr><tr><td>כתם כחול טריפן (0.4%)</td><td>Thermo Fisher</td><td>15250061</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7949-100ML</td><td></td></tr><tr><td>VEGF-A</td><td>ProSpec</td><td>CYT-116</td><td>מרכיב מחדש עם ddH2O סטרילי בריכוז של 100 ng/&micro; L, aliquot ואחסון ב-20&deg; ג</td></tr></tbody></table>

יצירת אורגנואידים וסקולריים מתאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים על ידי אדם

Vascular Organoid Generation from Human-Induced Pluripotent Stem Cells

איור 1A מציג את התוכנית של פרוטוקול זה, כולל מרכיבי המפתח שבהם נעשה שימוש בכל שלב. ההבחנה החלה עם היווצרות EB, ואחריה אינדוקציה מזודרם ומפרט שושלת כלי דם (איור 1B-D). האגרגטים גדלו והפכו פחות כדוריים עם הזמן. אורגנואידים החלו להראות קצוות מחוספסים ביום 5. לאחר שהוטמעו בתערובת מטריצת קרום הקולגן I-basement, תאי אנדותל של כלי דם ופריציטים נבטו ויצאו החוצה ליצירת רשתות כלי דם מורכבות כבר ביום השביעי (איור 1E). מאחר שהמטרה העיקרית של שיטה מותאמת זו היא למזער את השונות בין אצוות דור שונות, מדדנו את גודל EB משתי אצוות בלתי תלויות, וגם מדידות הגודל וגם הניתוח הסטטיסטי אישרו את העקביות והאחידות בשיטה זו (איור 1F).
כדי לאמת את התמיינות כלי הדם, אורגנואידים נאספו ביום 5 לפני הטבעה ומוכתמים בסמנים וסקולריים, כולל CD31, ERG1 ו- PDGFRβ. האורגנואידים ביטאו CD31, ERG1 ו-PDGFRβ (איור 2), מה שמצביע על נוכחות של תאי אנדותל וסקולריים ופריציטים.
לאחר ניקוי הרקמות, רשתות כלי הדם נותחו במיקרוסקופ אימונופלואורסצנטי בהרכבה שלמה (איור 3A). אורגנואידים בוגרים הוכתמו ב-CD31, ERG1 ו-PDGFRβ ביום ה-17 (איור 3B, דגימה בבלוק הג'ל) וביום ה-28 (איור 3C, הדגימה נלקחה מבלוק הג'ל והתרבית בנפרד בצלחת של 96 בארות; שימו לב שרשת כלי הדם בקצוות עטפה את הספרואידים במקום להתרחב רדיאלית לאחר שנלקחה מבלוק הג'ל).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67125/67125fig01.jpg"> איור 1: יצירת אורגנואידים וסקולריים. (A) סכימת השלבים וציר הזמן ליצירת אורגנואידים וסקולריים. (ב-ה) תמונות שדה בהירות מייצגות של אורגנואידים וסקולריים בשלבים שונים. פסי קנה מידה: 100 מיקרומטר. (F) ניתוח סטטיסטי בגודל EB משתי אצוות שונות מדור EB בשיטת microwell המוצגת בעבודה זו. עבור יצירת EB, 1,000 תאים לכל מיקרו-באר שימשו, ועבור אצוות 1 ו -2, n = 42 ו- n = 40, בהתאמה. המשמעות מוצגת כ-ns, לא משמעותית. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67125/67125fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67125/67125fig02.jpg"> איור 2: צביעה חיסונית של אורגנואידים וסקולריים לפני הטבעה בג'ל. תמונות פלואורסצנטיות מייצגות של אורגנואידים מוכתמים בסמני האנדותל (A) CD31 (ירוק) ו-(B) ERG1 (ירוק), כמו גם (C) סמן הפריציטים, PDGFRβ (ירוק), בהתאמה. גרעינים הוכתמו ב-DAPI (כחול). פסי קנה מידה: 50 מיקרומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67125/67125fig02large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67125/67125fig03.jpg"> איור 3: אפיונים אימונופלואורסצנטיים של רשת כלי הדם באורגנואידים של כלי הדם. (A) תמונה מייצגת מראה אורגנואידים וסקולריים משובצים בג'ל בכלי הזכוכית לאחר ניקוי הרקמות. האורגנואידים היו שקופים אך נראו תחת אור UV של 385 ננומטר. (B) תמונה תלת-ממדית מייצגת של אורגנואיד כלי דם ביום ה-17. אורגנואיד כלי הדם הוכתם ב- DAPI (כחול), סמן תאי אנדותל כלי הדם, CD31 (ירוק) וסמן הפריציטים, PDGFRβ (מגנטה). (C) הדמיה תלת-ממדית מייצגת של אורגנואיד כלי דם שנלקח ביום ה-28, מוכתמת בסמני האנדותל CD31 (אדום) ו-ERG1 (ירוק). פסי קנה מידה: 150 מיקרומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67125/67125fig03large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>בינוני הרחבה hiPSC</td>
			<td>500 מ"ל</td>
		</tr><tr><td>mTeSR Plus בינוני בסיסי</td>
			<td>400 מ"ל</td>
		</tr><tr><td>תוספת mTeSR Plus</td>
			<td>100 מ"ל</td>
		</tr><tr><td>גנטמיצין (50 מ"ג/מ"ל)</td>
			<td>1 מ"ל</td>
		</tr></tbody></table>טבלה 1: הרכב מדיום הרחבת hiPSC.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>מדיום זריעה hiPSC</td>
			<td>20 מ"ל</td>
		</tr><tr><td>בינוני הרחבת PSC</td>
			<td>20 מ"ל</td>
		</tr><tr><td>כרומן 1 (100 מיקרומטר)</td>
			<td>10 מיקרוליטר</td>
		</tr><tr><td>אמריקסאן (1 מ"מ)</td>
			<td>30 מיקרוליטר</td>
		</tr><tr><td>תוסף פוליאמין (1000x)</td>
			<td>20 מיקרוליטר</td>
		</tr><tr><td>טרנס-איסריב (1 mM)</td>
			<td>14 מיקרוליטר</td>
		</tr></tbody></table>טבלה 2: הרכב מדיום הזריעה hiPSC.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>N2B27 בינוני</td>
			<td>100 מ"ל</td>
		</tr><tr><td>DMEM/F-12, תוסף GlutaMAX</td>
			<td>48.6 מ"ל</td>
		</tr><tr><td>מדיום נוירובזאלי</td>
			<td>48.6 מ"ל</td>
		</tr><tr><td>תוסף GlutaMAX (100x)</td>
			<td>0.5 מ"ל</td>
		</tr><tr><td>תמיסת חומצות אמינו לא חיוניות MEM (NEAA, 100x)</td>
			<td>0.5 מ"ל</td>
		</tr><tr><td>2-מרקפטואתנול (1000x)</td>
			<td>0.1 מ"ל</td>
		</tr><tr><td>גנטמיצין (50 מ"ג/מ"ל)</td>
			<td>0.1 מ"ל</td>
		</tr><tr><td>תוסף N2 (100x)</td>
			<td>0.5 מ"ל</td>
		</tr><tr><td>תוסף B27 פחות ויטמין A (50x)</td>
			<td>1 מ"ל</td>
		</tr><tr><td>הפרין, 4 kU/מ"ל</td>
			<td>0.1 מ"ל</td>
		</tr></tbody></table>טבלה 3: הרכב מדיום N2B27.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>מדיום אינדוקציה מזודרם (MIM)</td>
			<td>3 מ"ל</td>
		</tr><tr><td>N2B27 בינוני</td>
			<td>3 מ"ל</td>
		</tr><tr><td>BMP4 (100 נ"ג/מיקרוליטר)</td>
			<td>0.9 מיקרוליטר</td>
		</tr><tr><td>CHIR99021 (12 מ"מ)</td>
			<td>3 מיקרוליטר</td>
		</tr></tbody></table>טבלה 4: הרכב מדיום אינדוקציה מזודרם (MIM).
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>התמיינות כלי דם בינונית 1 (VDM1)</td>
			<td>3 מ"ל</td>
		</tr><tr><td>N2B27 בינוני</td>
			<td>3 מ"ל</td>
		</tr><tr><td>פורסקלין (12 מ"מ)</td>
			<td>0.5 מיקרוליטר</td>
		</tr><tr><td>VEGFA (100 ננוגרם/מיקרוליטר)</td>
			<td>3 מיקרוליטר</td>
		</tr></tbody></table>טבלה 5: הרכב מדיום התמיינות כלי דם 1 (VDM1).
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>תערובת קולגן I</td>
			<td>5 מ"ל</td>
		</tr><tr><td>קולגן I (3.61 גרם/מ"ל)</td>
			<td>2.77 מ"ל</td>
		</tr><tr><td>10x DMEM/F12 בינוני</td>
			<td>0.5 מ"ל</td>
		</tr><tr><td>סודיום ביקרבונט, 7.5%</td>
			<td>0.5 מ"ל</td>
		</tr><tr><td>HEPES, 1 מטר</td>
			<td>0.5 מ"ל</td>
		</tr><tr><td>H2O</td>
			<td>0.73 מ"ל</td>
		</tr><tr><td>נאו, 1 מ'</td>
			<td>75 מיקרוליטר</td>
		</tr></tbody></table>טבלה 6: הרכב תערובת קולגן I.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>קולגן I - תערובת מטריצת קרום מרתף</td>
			<td>6.5 מ"ל</td>
		</tr><tr><td>קולאז' I מערבב</td>
			<td>5 מ"ל</td>
		</tr><tr><td>מטריג'ל (10 מ"ג/מ"ל)</td>
			<td>1.5 מ"ל</td>
		</tr></tbody></table>טבלה 7: הרכב תערובת מטריצת קרום קולגן I-מרתף.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>התמיינות כלי דם בינונית 2 (VDM2)</td>
			<td>5 מ"ל</td>
		</tr><tr><td>DMEM/F-12, תוסף GlutaMAX™</td>
			<td>3.67 מ"ל</td>
		</tr><tr><td>גנטמיצין (50 מ"ג/מ"ל)</td>
			<td>5 מיקרוליטר</td>
		</tr><tr><td>תמיסת חומצות אמינו לא חיוניות MEM (NEAA, 100X)</td>
			<td>50 מיקרוליטר</td>
		</tr><tr><td>2-מרקפטואתנול (1000x)</td>
			<td>5 מיקרוליטר</td>
		</tr><tr><td>הפרין, 4 kU/מ"ל</td>
			<td>5 מיקרוליטר</td>
		</tr><tr><td>תחליף סרום נוקאאוט</td>
			<td>0.75 מ"ל</td>
		</tr><tr><td>פ.ב.ס.</td>
			<td>0.5 מ"ל</td>
		</tr><tr><td>VEGFA (100 ננוגרם/מיקרוליטר)</td>
			<td>5 מיקרוליטר</td>
		</tr><tr><td>FGF2 (100 ננוגרם/מיקרוליטר)</td>
			<td>5 מיקרוליטר</td>
		</tr></tbody></table>טבלה 8: הרכב מדיום התמיינות כלי דם 2 (VDM2).
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>מאגר חוסם</td>
			<td>50 מ"ל</td>
		</tr><tr><td>נסיוב חמורים</td>
			<td>2.5 מ"ל</td>
		</tr><tr><td>טווין 20</td>
			<td>0.25 מ"ל</td>
		</tr><tr><td>טריטון X-100</td>
			<td>0.25 מ"ל</td>
		</tr><tr><td>תמיסת נתרן דאוקסיכולאט (1%, wt/v)</td>
			<td>0.5 מ"ל</td>
		</tr><tr><td>PBS</td>
			<td>46.5 מ"ל</td>
		</tr></tbody></table>טבלה 9: הרכב חיץ חוסם לצביעת חיסון.

Vascular organoids derived from human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) recapitulate the cell type diversity and complex architecture of human ...

vascular-organoid-generation-from-human-induced-pluripotent-stem-cells

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

הסרטון מדגים שיטה ליצירת אורגנואידים במוח אנושי מתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים. זה מראה כיצד הנוירוספירה יוצרת שכבה neuroectodermal, אשר מדכא את היווצרות של שכבות נבט אחרות. הנוירוספרות משובצות במטריצת ג'ל תלת ממדית ויוצרות ניצנים נוירואפיתליאליים. כאשר מודגרים עם מדיה אורגנואידים, ניצנים נוירואפיתליאליים אלה מתמיינים לאזורי מוח ספציפיים, וכתוצאה מכך נוצרים אורגנואידים בוגרים במוח.

שיטת מבחנה ליצירת אורגנואידים אנושיים במוח

סרטון זה מתאר את היצירה של אורגנואידים מסוג המוח הקדמי מתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים אנושיים (iPSCs), ומדגים את ההתקדמות מצברי תאי גזע למבנים מורכבים המחקים את קליפת המוח ומתמיינים לסוגי נוירונים שונים.

יצירת אורגנואידים מוחיים מסוג המוח הקדמי מתאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים על ידי אדם

Organoids מוחי לייצג מערכת מודל חדש לחקור מוקדם המוח האנושי לפיתוח במבחנה. מאמר זה מספק את המתודולוגיה מפורט לייצר ביעילות organoids הומוגנית מסוג הקדמי הגבי מתאי גזע pluripotent המושרה האנושי כולל שלבים קריטיים איפיון ואימות.

דור של Organoids מוחי סטנדרטית ו לשחזור הקדמי-סוג של האדם המושרה בתאי גזע Pluripotent

פרוטוקול זה נוצר כאמצעי לייצר אורגנואידים המוח באופן פשוט, עלות נמוכה ללא גורמי צמיחה אקסוגני או מטריקס קרום המרתף תוך שמירה על מגוון של סוגי תאי המוח ותכונות רבות של ארגון הסלולר.

שיטת בימוי עצמי סטטי ליצירת אורגנואידים המוח מתאי גזע האדם העובריים

כאן אנו מתארים פרוטוקול ליצירת אורגנוידים במוח מתאי גזע פלוריפוטנטיים הנגרמים על ידי בני אדם (IPSCs). כדי להשיג אורגנוידים במוח בכמויות גדולות ובאיכות גבוהה, אנו משתמשים ביו-רה-קטרים מיני תוצרת בית.

דור אורגנויד במוח מתאי גזע פלוריפוטנטים מושרים במיני ביו-רהקטורים תוצרת בית

כאן, אנו מתארים פרוטוקול ליצירת אורגנוידים לב אנושי רלוונטיים להתפתחות (hHOs) ביעילות באמצעות תאי גזע פלוריפוטנטים אנושיים על ידי ארגון עצמי. הפרוטוקול מסתמך על הפעלה רציפה של רמזים התפתחותיים ומייצר רקמות לב אנושיות מורכבות ורלוונטיות מאוד מבחינה תפקודית.

יצירת אורגנוידים של לב אנושי המורכבים בעצמם המופקים מתאי גזע פלוריפוטנטיים

פרוטוקול זה מתאר את היצירה של כלי דם המארגנים את עצמם מתאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים ומושרים פלוריפוטנטים. רשתות כלי דם אלה מציגות רשת אנדותל נרחבת ומחוברת המוקפת בפריציטים, אקטין שריר חלק וקרום מרתף רציף.

יצירת אורגנואידים של כלי דם אנושיים מתאי גזע פלוריפוטנטיים

פרוטוקול זה מתאר את היצירה של אורגנואידים אנדודרמליים בכבד (eHEPOs) מהירים וניתנים לשחזור. בעזרת פרוטוקול זה, ניתן לייצר eHEPOs תוך שבועיים ולהתרחב לטווח ארוך (יותר משנה) מבלי לאבד את הבידול והפונקציונליות שלהם.

יצירת אורגנואידים פונקציונאליים בכבד אנדודרמלי

פרוטוקול זה מציג שיטה מקיפה ויעילה לייצור אורגנואידים בכליות מתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים (iPSCs) באמצעות תנאי תרבית תרחיף. הדגש העיקרי של מחקר זה טמון בקביעת צפיפות התאים הראשונית וריכוז האגוניסט WNT, ובכך לטובת חוקרים המעוניינים במחקר אורגנואידים בכליות.

יצירת אורגנואידים בכליות בתרחיף מתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים

פרוטוקול זה מתאר את הפיתוח, הרחבה, ובתחום ההדמיה vivo של תאי NK הנגזרים מhESCs וiPSCs.

פיתוח, הרחבה, ו<em&gt; בvivo</emתאי גזע pluripotent&gt; ניטור של תאי NK אדם מתאי גזע עובריים אנושיים (hESCs) ומושרה (iPSCs)

למד שיטה מתקדמת ליצירת אורגנואידים וסקולריים הומוגניים מתאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים באמצעות מעכבי ROCK ומיקרובארים. השיטה משפרת שכפוליות ומאפשרת ניתוח מורפולוגי ומידול מחלות.

יצירת אורגנואידים וסקולריים מתאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים על ידי אדם

גלה סרטונים נוספים