Name: דיסקציה של שחלות יתושים, מעי האמצע ובלוטות הרוק לצורך ניתוח מיקרוביום ברמת האיברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-04T14:25:00.000+00:00
Duration: 3 min 58 s
Description: למדו טכניקות ניתוח מדויקות של שחלות, מעי אמצע ובלוטות רוק ביתושות נקבות לניתוח מיקרוביום ברמת האיברים. שיטה זו מונעת זיהום צולב ומאפשרת חקר סימביונטים באמצעות ניתוח מטגנומי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>בידוד איברי יתושים בדיוק גבוה לניתוח מיקרוביום

<ol><li>Achee, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+strategies+for+mosquito-borne+arbovirus+control%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+Negl+Trop+Dis%22%5BJournal%5D)">Alternative strategies for mosquito-borne arbovirus control.</a> PLOS Negl Trop Dis. 13 (1), e0006822(2019).</li>
<li>Hoffmann, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+establishment+of+Wolbachia+in+Aedes+populations+to+suppress+dengue+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Successful establishment of Wolbachia in Aedes populations to suppress dengue transmission.</a> Nature. 476 (7361), 454-457 (2011).</li>
<li>Porter, J., Sullivan, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cellular+lives+of+Wolbachia%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The cellular lives of Wolbachia.</a> Nat Rev Microbiol. 21 (11), 750-766 (2023).</li>
<li>Coon, K. L., Brown, M. R., Strand, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mosquitoes+host+communities+of+bacteria+that+are+essential+for+development+but+vary+greatly+between+local+habitats%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ecol%22%5BJournal%5D)">Mosquitoes host communities of bacteria that are essential for development but vary greatly between local habitats.</a> Mol Ecol. 25 (22), 5806-5826 (2016).</li>
<li>Didion, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbiome+reduction+prevents+lipid+accumulation+during+early+diapause+in+the+northern+house+mosquito%2C+Culex+pipiens+pipiens%5BTitle%5D)+AND+%22J+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Microbiome reduction prevents lipid accumulation during early diapause in the northern house mosquito, Culex pipiens pipiens.</a> J Insect Physiol. 134, 104295(2021).</li>
<li>Gabrieli, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mosquito+trilogy%3A+Microbiota%2C+immunity+and+pathogens%2C+and+their+implications+for+the+control+of+disease+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Mosquito trilogy: Microbiota, immunity and pathogens, and their implications for the control of disease transmission.</a> Front Microbiol. 12, 630438(2021).</li>
<li>Garrigós, M., Garrido, M., Panisse, G., Veiga, J., Martínez-de La Puente, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+between+West+Nile+Virus+and+the+microbiota+of+Culex+pipiens+vectors%3A+A+literature+review%5BTitle%5D)+AND+%22Pathogens%22%5BJournal%5D)">Interactions between West Nile Virus and the microbiota of Culex pipiens vectors: A literature review.</a> Pathogens. 12 (11), 1287(2023).</li>
<li>Zheng, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Holobiont+perspectives+on+tripartite+interactions+among+microbiota%2C+mosquitoes%2C+and+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22ISME+J%22%5BJournal%5D)">Holobiont perspectives on tripartite interactions among microbiota, mosquitoes, and pathogens.</a> ISME J. 17 (8), 1143-1152 (2023).</li>
<li>Flores, G. A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wolbachia+dominance+influences+the+Culex+quinquefasciatus+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Wolbachia dominance influences the Culex quinquefasciatus microbiota.</a> Sci Rep. 13 (1), 18980(2023).</li>
<li>Hegde, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interkingdom+interactions+shape+the+fungal+microbiome+of+mosquitoes%5BTitle%5D)+AND+%22Anim+Microbiome%22%5BJournal%5D)">Interkingdom interactions shape the fungal microbiome of mosquitoes.</a> Anim Microbiome. 6 (1), 11(2024).</li>
<li>Suo, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seasonal+variation+of+midgut+bacterial+diversity+in+Culex+quinquefasciatus+populations+in+Haikou+city%2C+Hainan+province%2C+China%5BTitle%5D)+AND+%22Biology%22%5BJournal%5D)">Seasonal variation of midgut bacterial diversity in Culex quinquefasciatus populations in Haikou city, Hainan province, China.</a> Biology. 11 (8), 1166(2022).</li>
<li>Gruber-Vodicka, H. R., Seah, B. K. B., Pruesse, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((phyloFlash%3A+Rapid+small-subunit+rRNA+profiling+and+targeted+assembly+from+metagenomes%5BTitle%5D)+AND+%22mSystems%22%5BJournal%5D)">phyloFlash: Rapid small-subunit rRNA profiling and targeted assembly from metagenomes.</a> mSystems. 5 (5), e00920-e00920 (2020).</li>
<li>Graña-Miraglia, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spirochetes+isolated+from+arthropods+constitute+a+novel+genus+Entomospira+genus+novum+within+the+order+Spirochaetales%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Spirochetes isolated from arthropods constitute a novel genus Entomospira genus novum within the order Spirochaetales.</a> Sci Rep. 10 (1), 17053(2020).</li>
<li>Reveillaud, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Wolbachia+mobilome+in+Culex+pipiens+includes+a+putative+plasmid%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">The Wolbachia mobilome in Culex pipiens includes a putative plasmid.</a> Nat Commun. 10 (1), 1051(2019).</li>
<li>Ghousein, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((pWCP+is+a+widely+distributed+and+highly+conserved+Wolbachia+plasmid+in+Culex+pipiens+and+Culex+quinquefasciatus+mosquitoes+worldwide%5BTitle%5D)+AND+%22ISME+Commun%22%5BJournal%5D)">pWCP is a widely distributed and highly conserved Wolbachia plasmid in Culex pipiens and Culex quinquefasciatus mosquitoes worldwide.</a> ISME Commun. 3 (1), 40(2023).</li>
<li>Juma, E. O., Kim, C. -H., Dunlap, C., Allan, B. F., Stone, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culex+pipiens+and+Culex+restuans+egg+rafts+harbor+diverse+bacterial+communities+compared+to+their+midgut+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Parasit+Vectors%22%5BJournal%5D)">Culex pipiens and Culex restuans egg rafts harbor diverse bacterial communities compared to their midgut tissues.</a> Parasit Vectors. 13 (1), 532(2020).</li>
<li>Lee, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GToTree%3A+a+user-friendly+workflow+for+phylogenomics%5BTitle%5D)+AND+%22Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">GToTree: a user-friendly workflow for phylogenomics.</a> Bioinformatics. 35 (20), 4162-4164 (2019).</li>
<li>Parks, D. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+complete+domain-to-species+taxonomy+for+bacteria+and+Archaea%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">A complete domain-to-species taxonomy for bacteria and Archaea.</a> Nat Biotechnology. 38 (9), 1079-1086 (2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>אלכוהול 96 מעלות;</td><td>פישר 10332562</td><td></td><td></td>מדעי</tr><tr><td>זכוכית מגדלת משקפת&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>אקונומיקה</td><td>RAJA 145517</td><td></td><td>150 טבליות של ערכת הכנת DNA 1.5 גרם</td></tr><tr><td></td><td>Illumina</td><td>מסופקת על ידי פלטפורמת ריצוף MGX</td><td>שנודעה בעבר בשם Nextera DNA Flex</td></tr><tr><td>DNA-RNA Shield (50 מ"ל)מחקר</td> <td>Zymo</td><td>ZR1100-50</td><td>מאגר שימור</td></tr><tr><td>DNeasy דם ורקמות Kit&nbsp;</td><td>Qiagen</td><td>69504</td><td>ערכת מיצוי DNA</td></tr><tr><td>טיפים לסנן 20 ומיקרו; L</td><td>Starlab</td><td>S1120-3810</td><td></td></tr><tr><td>טיפים לסינון 200 ומיקרו; L</td><td>Starlab</td><td>S1120-8710</td><td></td></tr><tr><td>טיפים לסינון 1000 ומיקרו; L</td><td>Starlab</td><td>S1122-1730-C</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים</td><td>FST (כלים מדעיים עדינים)</td><td>11252-20</td><td>מלקחיים של דומונט #5</td></tr><tr><td>ערכת כימות ספרייה</td><td>Roche</td><td>מסופק על ידי פלטפורמת ריצוף MGX</td><td>ערכות קווניטיפיקציה של ספריית KAPA</td></tr><tr><td>מיקרופיפטות 2-20 ומיקרו; L</td><td>Eppendorf</td><td>6.291704</td><td></td></tr><tr><td>מיקרופיפטות 20-200 ומיקרו; L</td><td>Eppendorf</td><td>6.291703</td><td></td></tr><tr><td>מיקרופיפטות 100-1000 ומיקרו; L</td><td>Eppendorf</td><td>7.648488</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ שקופיות&nbsp;</td><td>ממד J1800BMNZ אפרדיה</td><td></td><td>: 75 מ"מ x 50 מ"מ</td></tr><tr><td>מחטים</td><td>ערכת NGS Terumo</td><td>AN*2719R1</td><td></td></tr>&<tr><td>nbsp;</td><td>Agilent</td><td>מסופק על ידי פלטפורמת ריצוף MGX</td><td>Fragment Analyzer Systems HS Genomic DNA 50kb Kit</td></tr><tr><td>NovaSeq 6000</td><td>Illumina</td><td>מסופק על ידי פלטפורמת ריצוף MGX</td><td>Sequencer</td></tr><tr><td>PBS פוספט מאגר מלח (סטרילי)</td> <td>פישר מדעי</td><td>10212990</td><td></td></tr><tr><td>סמן</td><td></td><td></td><td></td>שחור קבוע</tr> סטרילי <tr><td>Eppendorf&nbsp;</td><td>Dutscher</td><td>33871</td><td>1.5 מ"ל</td></tr><tr><td>תמיכה במחטים</td><td>FST (Fine Science Tools)</td><td>26016-12</td><td>Moria MC1 מחזיק פינים 12 ס"מ</td></tr></tbody></table>

דיסקציה של שחלות יתושים, מעי האמצע ובלוטות הרוק לצורך ניתוח מיקרוביום ברמת האיברים

Dissection of Mosquito Ovaries, Midgut, and Salivary Glands for Microbiome Analyses at the Organ Level

x'יתושים נתיחות בהתאם לפרוטוקול, אספנו ובודדנו את השחלות, המעי האמצעי, בלוטות הרוק והפגר משתי דגימות Culex pipiens molestus (כולל נקבה גרבידית) ממושבת מעבדה. אישרנו נתיחות נקיות לאחר תצפית של איברים שלמים (כלומר, לא שבורים) ומבודדים היטב ללא שאריות פסולת מתחת למשקפת. כל הגוף, הראש ובית החזה, בלוטות הרוק המנותחות, השחלות ומרכז המעי של דגימת Culex pipiens molestus מוצגים באיור 2. כצפוי, בלוטות המעי האמצעי והרוק היו קטנות בסדר גודל משחלות היתושים. הביצים של דגימת קולקס גרבידית, יחד עם המעיים האמצעיים והצינוריות המלפיגיות שלה, מוצגות באיור 3. שימו לב, נתיחות מועדות יותר להיכשל כאשר החומר אינו טרי ורקמות צפויות להישבר (איור 4B,C). לכן אנו מציעים לנתח חומר מיד לאחר האיסוף (תוך פחות מ-12 שעות) כאשר הדבר אפשרי, מאחר שהרקמות עדיין אלסטיות (איור 4A). באופן דומה, ניתן לבצע דיסקציה של חומר קפוא אולם קיים סיכון גבוה הרבה יותר לכשל ולזיהום צולב בין איברים כתוצאה מרקמות שבירות (איור 4).
נתוני מיקרוביום בנוסף, אספנו והפרדנו את המעיים האמצעיים והשחלות משלוש דגימות בודדות של Culex quinquefasciatus מנומאה, קלדוניה החדשה, לאחר אותו הליך. חילצנו דנ"א מכל איבר, הכנו דגימות לריצוף גנום שלם וביצענו ניתוח נתוני מיקרוביום כמפורט בקובץ משלים 1. ניתוח מגוון טקסונומי חיידקי על קריאות קצרות מסוננות באיכות לא מפורקת באמצעות PhyloFlash12 הראה טקסה דומיננטית מובהקת במעיים האמצעיים בהשוואה לשחלות (איור 5A). יש לציין כי קהילות חיידקי השחלות נשלטו על ידי וולבכיה, עם נוכחות נוספת של פילוטיפ Spirochaetaceae בשחלות של פרט 3, בעוד שקהילות המעי התיכון הציגו מגוון רחב יותר, כולל Gammaproteobacteria, Spirochaetaceae ו- Firmicutes. מאותם נתוני ריצוף שחזרנו ארבעה גנומים מורכבים מטא-גנום (MAGs) עם השלמה &gt; 80% ויתירות &lt;-5%, השייכים למחלקות ספירוכאטיה, אלפא וגמאפרוטאובקטריה (טבלה 1).
כצפוי, MAGs ששוחזרו כאן לא כיסו את המגוון הטקסונומי המלא שנחזה על ידי תוצאות PhyloFlash בשל החסרונות הספציפיים של שחזור גנום באמצעות קריאות קצרות מטגנומיות. הפצ"ר שהוקצה לוולבכיה (Ref. MAG 3 בטבלה 1) זוהה בכל השחלות ובשתיים מהמעיים האמצעיים, והיה בעל כיסוי גבוה יותר בשחלות (איור 5B). כמו כן, שחזרנו שני מאגים השייכים למשפחת Enterobacteriaceae , כולל הסוג Pantoea (Ref. MAG 1 ו-2 בטבלה 1), במעיים האמצעיים שהתקבלו מפרטים 2 ו-3 של Culex , שלא זוהו בשחלות התואמות (איור 5B). לבסוף, שחזרנו גם גנום חיידקי Spirochaetaceae אחד, Ref. MAG 4 (טבלה 1), שהוקצה לסוג BR149 שבודד בהצלחה מ-Culex pipiens midguts על ידי Graña-Miraglia ועמיתיו13. באופן מעניין, הפצ"ר הזה זוהה במעיים האמצעיים של אנשים 1 ו-3, כמו גם בשחלות של פרט 3 (איור 5B).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67128/67218fig01v2.jpg"> איור 1: סכמה של השיטה המסכמת את השלבים השונים. הכנת חומרים, איסוף יתושים, ניקוי יתושים, נתיחות יתושים ואחסון. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67128/67218fig01largev2.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67128/67218fig02.jpg"> איור 2: נקבת Culex pipiens molestus . (A) גוף שלם. (B) ראש ובית חזה. (C) בלוטות רוק מנותחות. (D) שחלות מנותחות. (E) מעיים מנותחים עם צינוריות מלפיגי. פסי קנה מידה = 500 מיקרומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67128/67218fig02large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67128/67218fig03.jpg"> איור 3: בטן מנותחת של נקבת Culex pipiens molestus גרבידית. המעי הקדמי, המעי האמצעי, המעי האחורי, הצינוריות המלפיגיות והביצים של הדגימה מוצגים. מקפים אדומים מציינים היכן לחתוך כדי להפריד בין המעי הקדמי למעי האחורי. סרגל קנה מידה = 500 מיקרומטר. קיצורים: F = מעי קדמי; M = אמצע המעי; H = מעי אחורי; E = ביצים; MT = צינוריות מלפיגיות. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67128/67218fig03large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67128/67218fig04.jpg"> איור 4: נתיחת דגימות של יתושי קולקס טריים וקפואים. מלבנים לבנים ממחישים (A) רקמות יתושים עם איברים שלמים מדגימה שזה עתה נותחה ו-(B,C) חומר ביולוגי שבור מדגימות שהוקפאו לפני הנתיחה. פסי קנה מידה = 720 מיקרומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67128/67218fig04large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67128/67218fig05.jpg"> איור 5: ניתוח מיקרוביום לדוגמה על שלושה אנשים של Culex quinquefasciatus . (A) הדמיה של מגוון חיידקי המוערך באמצעות מיצוי של SSU rRNA קורא עם PhyloFlash12 באמצע המעי ובשחלות של שלוש הדגימות. (B) כיסוי ממוצע של הפצ"רים המשוחזרים על הדגימות. קיצורים: MAG = גנום מורכב מטה-גנום; Ind = יחיד. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67128/67218fig05large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>מג</td>
			<td>מספר נכס פצ"ר 4</td>
			<td>מספר נכס פצ"ר 2</td>
			<td>מספר נכס פצ"ר 1</td>
			<td>מספר נכס פצ"ר 3</td>
		</tr><tr><td>אורך (bp)</td>
			<td>1,287,790</td>
			<td>4,910,866</td>
			<td>4,751,276</td>
			<td>1,298,266</td>
		</tr><tr><td>מספר contigs</td>
			<td>9</td>
			<td>162</td>
			<td>149</td>
			<td>123</td>
		</tr><tr><td>GC %</td>
			<td>34.05</td>
			<td>55.45</td>
			<td>54.05</td>
			<td>34.15</td>
		</tr><tr><td>השלמה (%)</td>
			<td>84.5</td>
			<td>97.18</td>
			<td>98.59</td>
			<td>91.55</td>
		</tr><tr><td>יתירות (%)</td>
			<td>0</td>
			<td>2.82</td>
			<td>4.22</td>
			<td>0</td>
		</tr><tr><td>תחום</td>
			<td>חיידקים</td>
			<td>חיידקים</td>
			<td>חיידקים</td>
			<td>חיידקים</td>
		</tr><tr><td>פילום</td>
			<td>ספירוצ'אטוטה</td>
			<td>פרוטאובקטריה</td>
			<td>פרוטאובקטריה</td>
			<td>פרוטאובקטריה</td>
		</tr><tr><td>מחלקה</td>
			<td>ספירוצ'טיה</td>
			<td>גמאפרוטאובקטריה</td>
			<td>גמאפרוטאובקטריה</td>
			<td>אלפאפרוטאובקטריה</td>
		</tr><tr><td>הזמנה</td>
			<td>WRBN01</td>
			<td>Enterobacterales</td>
			<td>Enterobacterales</td>
			<td>ריקטסיאלס</td>
		</tr><tr><td>משפחה</td>
			<td>WRBN01</td>
			<td>Enterobacteriaceae</td>
			<td>Enterobacteriaceae</td>
			<td>Anaplasmataceae</td>
		</tr><tr><td>סוג</td>
			<td>BR149</td>
			<td>פנטואה</td>
			<td>-</td>
			<td>וולבכיה</td>
		</tr></tbody></table>טבלה 1: מאגים משוחזרים משלושת הפרטים של Culex quinquefasciatus . גודל הגנום, מספר הקונטיגים, שיעור ה-GC, אומדני ההשלמה והיתירות בהתבסס על אוסף גני הליבה בעותק יחיד הזמין ב-Anvi'o17 וטקסונומיה המתקבלת באמצעות GTDB18.
קובץ משלים 1: הליך מפורט לדוגמה לניתוח נתוני מיקרוביום החל מאיסוף דגימות, מיצוי DNA וריצוף גנום שלם ואחריו זרימת העבודה הביואינפורמטית לשחזור גנום והערכת פרופורציות קריאה פרוקריוטיות ואיקריוטיות <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67128/67128_SupplementaryMaterial_15.07.2024_JR_fin.zip" target="_blank">אנא לחץ כאן להורדת קובץ זה.</a>

The global burden of mosquito-transmitted diseases, including malaria, dengue, West Nile, Zika, Usutu, and yellow fever, continues to increase, posing a ...

dissection-mosquito-ovaries-midgut-salivary-glands-for-microbiome

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

ברגע גן מזוהה עקשן פוטנציאלי עבור מלריה, זה חייב להיות מוערך על תפקידה במניעת זיהומים Plasmodium בתוך היתוש. פרוטוקול זה מדגים כיצד מידת זיהומים Plasmodium של יתושים יכול להיות assayed. טכניקות להכנת תרבות gametocyte, האכלה קרום יתושים דם האדם, assaying titers ויראלי midgut היתושים הם הפגינו.

פרוטוקול זיהומים Plasmodium falciparum בקביעת הפנוטיפ יתושים זיהום

Midgut יתושים בלוטות הרוק הם מפתח כניסה ויציאה עבור וקטור פתוגנים כמו Plasmodium falciparum ואת וירוס דנגה. וידאו זה מדגים את הטכניקות לנתיחה עבור הסרת בלוטות הרוק midgut ו מ Aedes aegypti יתושים.

Dissection של בלוטות הרוק midgut ו מ AE. aegypti יתושים

זמן ומרחב ביטוי ניתוח גנטי תפקיד מכריע גנומיקה תפקודית. כל...

הכלאה<em&gt; באתרו</em&gt; של בלוטות הרוק, השחלות, ועוברים של וקטור יתושים

מקור: ליו, X. ואחרים. בדיקת האכלה חיידקית דרך הפה עם יתושים שטופלו באנטיביוטיקה. J. Vis. Exp. (2020)הסרטון הזה מדגים את ניתוח המעי האמצעי של היתושים כדי לבודד חיידקי מעיים. המעי האמצעי מופק ממערכת העיכול, עובר הומוגני לשחרור החיידקים, ומוצף על אגר נוטריינט לתרבית מושבות חיידקים.

בידוד חיידקים מהמעי הבינוני של היתוש

פרוטוקול ריבוזומלי רנ"א (rRNA) דלדול פותח כדי להעשיר RNA שליח (mRNA) לRNA-seq של metatranscriptome בטן היתוש. בדיקות דגימה ספציפיות rRNA, ששמשו להסרת rRNA דרך חיסור, נוצרו מהיתושים וחיידקי המעיים שלה. ביצועים של הפרוטוקול יכולים להוביל להסרה של כ 90-99% מrRNA.

דלדול של רנ&quot;א ריבוזומלי לMetagenomic גוט יתוש RNA-seq

בשל הדמיון הבולט של מחזור החיים ביולוגיה של טפילים מלריה מכרסמים לטפילים מלריה אדם, מודלים מלריה מכרסם הפכו חיוניים למחקר מלריה. בזאת, אנו מתוקננת כמה מן הטכניקות החשובות ביותר בשימוש בניתוח פנוטיפ של פראי סוג ומלריה מכרסם הטרנסגניים.

ניתוח פנוטימית של מלריה מכרסם טפיל מינית ושלבי דם מיניים ושלבי יתוש

מאמר זה מציג פרוטוקול כדי לחקור את ההשפעה של חיידקים בודדים מעיים יתוש, כולל בידוד וזיהוי של חיידקים midgut יתושים, דלדול אנטיביוטיקה של חיידקים מעיים יתוש, ולהחזן מחדש מין אחד חיידקים ספציפיים.

תסכולת הזנה דרך הפה חיידקית עם יתושים שטופלו באנטיביוטיקה

חקירות מפורטות על שלבי יתושים של טפילי מלריה הם קריטיים לתכנון אסטרטגיות חסימת שידור יעילות. פרוטוקול זה מדגים כיצד לתרבות ביעילות gametocytes זיהומיות ולאחר מכן להאכיל את המשחקים האלה יתושים כדי ליצור שלבי יתושים של P. falciparum.

פלסמודיום פאלציפארום תרבות המשחק וזיהום יתושים באמצעות האכלה מלאכותית של ממברנה

פרוטוקול זה מתאר מתודולוגיות מאחורי בדיקת רמזי, מיקרואלקטרודים סלקטיביים יונים, סריקת טכניקת אלקטרודה סלקטיבית יון (SIET) ובדיקות התכווצות במבחנה, המיושמים לחקר מערכת הפרשת היתושים הבוגרת, המורכבת מצינורות Malpighian והינדגוט, כדי למדוד באופן קולקטיבי שיעורי הפרשת יונים ונוזלים, פעילות התכווצות והובלת יונים טרנס-אפיתל.

חקר הפעילות של נוירופפטידים ורגולטורים אחרים של מערכת ההפרשה יתוש למבוגרים

בלוטת הרוק של היתושים הבוגרים (SG) נדרשת להעברת כל הפתוגנים המועברים על ידי יתושים למארחים האנושיים שלהם, כולל וירוסים וטפילים. וידאו זה מדגים בידוד יעיל של SGs מן הזחל (L4) שלב אנופלס גמביה יתושים והכנת L4 SGs לניתוח נוסף.

ניתוח וחיסון של בלוטות הרוק של Larval מ אנופלס גמביה יתושים

מתודולוגיה זו, שכללה הזנה דרך הפה וזיהום בהזרקה תוך חזה, יכולה להעריך ביעילות את ההשפעה של מחסומי המעי התיכון ו / או בלוטת הרוק על זיהום arbovirus.

זיהום ויראלי ניסיוני ביתושים בוגרים על ידי האכלה אוראלית ומיקרו-הזרקה

למדו טכניקות ניתוח מדויקות של שחלות, מעי אמצע ובלוטות רוק ביתושות נקבות לניתוח מיקרוביום ברמת האיברים. שיטה זו מונעת זיהום צולב ומאפשרת חקר סימביונטים באמצעות ניתוח מטגנומי.

דיסקציה של שחלות יתושים, מעי האמצע ובלוטות הרוק לצורך ניתוח מיקרוביום ברמת האיברים

גלה סרטונים נוספים