Name: פיתוח מודל ביופילם של מושבה פולימיקרוביאלית לבדיקת אנטי-מיקרוביאלים בסיסטיק פיברוזיס (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-09-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 16 s
Description: חקור מודל ביופילם פולימיקרוביאלי לבדיקת רגישות לאנטיביוטיקה בחיידקי Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus ו-Candida albicans בסיסטיק פיברוזיס. שיטה זו מאפשרת ניתוח אינטראקציות מיקרוביאליות ופיתוח אסטרטגיות טיפוליות חדשות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>מודל CF ניתן להתאמה לבדיקות אנטי-מיקרוביאליות וניתוח דינמיקה מיקרוביאלית

<ol><li>2021 Cf foundation patient registry highlights report. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://cysticfibrosis.msu.edu/index.php/welcome/news-and-events/39-2021-cf-foundation-patient-registry-highlights-report">https://cysticfibrosis.msu.edu/index.php/welcome/news-and-events/39-2021-cf-foundation-patient-registry-highlights-report</a> (2022).</li>
<li>Guo, J., Garratt, A., Hill, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Worldwide+rates+of+diagnosis+and+effective+treatment+for+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cyst+Fibros%22%5BJournal%5D)">Worldwide rates of diagnosis and effective treatment for cystic fibrosis.</a> J Cyst Fibros. 21 (3), 456-462 (2022).</li>
<li>Mandal, V., Ghosh, N. N., Mitra, P. K., Mandal, S., Mandal, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+and+characterization+of+a+broad-spectrum+antimicrobial+5-butyl-2-pyridine+carboxylic+acid+from+Aspergillus+fumigatus+nhf-01%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Production and characterization of a broad-spectrum antimicrobial 5-butyl-2-pyridine carboxylic acid from Aspergillus fumigatus nhf-01.</a> Sci Rep. 12 (1), 6006(2022).</li>
<li>Françoise, A., Héry-Arnaud, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microbiome+in+cystic+fibrosis+pulmonary+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Genes%22%5BJournal%5D)">The microbiome in cystic fibrosis pulmonary disease.</a> Genes. 11 (5), 536(2020).</li>
<li>Grasemann, H., Ratjen, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22New+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Cystic fibrosis.</a> New Engl J Med. 389 (18), 1693-1707 (2023).</li>
<li>Camus, L., Vandenesch, F., Moreau, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+genotype+to+phenotype%3A+Adaptations+of+pseudomonas+aeruginosa+to+the+cystic+fibrosis+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Microb+Genom%22%5BJournal%5D)">From genotype to phenotype: Adaptations of pseudomonas aeruginosa to the cystic fibrosis environment.</a> Microb Genom. 7 (3), mgen000513(2021).</li>
<li>Rossi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudomonas+aeruginosa+adaptation+and+evolution+in+patients+with+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Pseudomonas aeruginosa adaptation and evolution in patients with cystic fibrosis.</a> Nat Rev Microbiol. 19 (5), 331-342 (2021).</li>
<li>Flemming, H. -C., Wingender, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biofilm+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The biofilm matrix.</a> Nat Rev Microbiol. 8 (9), 623-633 (2010).</li>
<li>Grainha, T., Jorge, P., Alves, D., Lopes, S. P., Pereira, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unraveling+pseudomonas+aeruginosa+and+candida+albicans+communication+in+coinfection+scenarios%3A+Insights+through+network+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Infect+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Unraveling pseudomonas aeruginosa and candida albicans communication in coinfection scenarios: Insights through network analysis.</a> Front Cell Infect Microbiol. 10, 550505(2020).</li>
<li>Flemming, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biofilms%3A+An+emergent+form+of+bacterial+life%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Biofilms: An emergent form of bacterial life.</a> Nat Rev Microbiol. 14 (9), 563-575 (2016).</li>
<li>Høiby, N., Bjarnsholt, T., Givskov, M., Molin, S., Ciofu, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotic+resistance+of+bacterial+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Antimicrob+Agents%22%5BJournal%5D)">Antibiotic resistance of bacterial biofilms.</a> Int J Antimicrob Agents. 35 (4), 322-332 (2010).</li>
<li>Lorusso, A. B., Carrara, J. A., Barroso, C. D. N., Tuon, F. F., Faoro, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+efflux+pumps+on+antimicrobial+resistance+in+Pseudomonas+aeruginosa%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Role of efflux pumps on antimicrobial resistance in Pseudomonas aeruginosa.</a> Int J Mol Sci. 23 (24), 15779(2022).</li>
<li>Michaelis, C., Grohmann, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Horizontal+gene+transfer+of+antibiotic+resistance+genes+in+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22Antibiotics+.%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Horizontal gene transfer of antibiotic resistance genes in biofilms.</a> Antibiotics .(Basel). 12 (2), 328(2023).</li>
<li>Worlitzsch, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+reduced+mucus+oxygen+concentration+in+airway+pseudomonas+infections+of+cystic+fibrosis+patients%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Effects of reduced mucus oxygen concentration in airway pseudomonas infections of cystic fibrosis patients.</a> J Clin Invest. 109 (3), 317-325 (2002).</li>
<li>König, J., Schreiber, R., Voelcker, T., Mall, M., Kunzelmann, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator+%28CFTR%29+inhibits+ENaC+through+an+increase+in+the+intracellular+Cl-+concentration%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Reps%22%5BJournal%5D)">The cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) inhibits ENaC through an increase in the intracellular Cl- concentration.</a> EMBO Reps. 2 (11), 1047-1051 (2001).</li>
<li>Palmer, K. L., Mashburn, L. M., Singh, P. K., Whiteley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cystic+fibrosis+sputum+supports+growth+and+cues+key+aspects+of+Pseudomonas+aeruginosa+physiology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Cystic fibrosis sputum supports growth and cues key aspects of Pseudomonas aeruginosa physiology.</a> J Bacteriol. 187 (15), 5267-5277 (2005).</li>
<li>Valenza, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+and+antimicrobial+susceptibility+of+microorganisms+isolated+from+sputa+of+patients+with+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cyst+Fibros%22%5BJournal%5D)">Prevalence and antimicrobial susceptibility of microorganisms isolated from sputa of patients with cystic fibrosis.</a> J Cyst Fibros. 7 (2), 123-127 (2008).</li>
<li>Alam, F., Catlow, D., Di Maio, A., Blair, J. M. A., Hall, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candida+albicans+enhances+meropenem+tolerance+of+Pseudomonas+aeruginosa+in+a+dual-species+biofilm%5BTitle%5D)+AND+%22J+Antimicrob+Chemother%22%5BJournal%5D)">Candida albicans enhances meropenem tolerance of Pseudomonas aeruginosa in a dual-species biofilm.</a> J Antimicrob Chemother. 75 (4), 925-935 (2020).</li>
<li>Burmølle, M., Ren, D., Bjarnsholt, T., Sørensen, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+in+multispecies+biofilms%3A+Do+they+actually+matter%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Interactions in multispecies biofilms: Do they actually matter.</a> Trends Microbiol. 22 (2), 84-91 (2014).</li>
<li>Lories, B., Belpaire, T. E. R., Smeets, B., Steenackers, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Competition+quenching+strategies+reduce+antibiotic+tolerance+in+polymicrobial+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Biofilms+Microbiomes%22%5BJournal%5D)">Competition quenching strategies reduce antibiotic tolerance in polymicrobial biofilms.</a> NPJ Biofilms Microbiomes. 10 (1), 23(2024).</li>
<li>Nabb, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymicrobial+interactions+induce+multidrug+tolerance+in+Staphylococcus+aureus+through+energy+depletion%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Polymicrobial interactions induce multidrug tolerance in Staphylococcus aureus through energy depletion.</a> Front Microbiol. 10, 2803(2019).</li>
<li>Cornforth, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudomonas+aeruginosa+transcriptome+during+human+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Pseudomonas aeruginosa transcriptome during human infection.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 115 (22), E5125-E5134 (2018).</li>
<li>Wolter, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Staphylococcus+aureus+small-colony+variants+are+independently+associated+with+worse+lung+disease+in+children+with+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Staphylococcus aureus small-colony variants are independently associated with worse lung disease in children with cystic fibrosis.</a> Clin Infect Dis. 57 (3), 384-391 (2013).</li>
<li>Takagi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mucin+o-glycans+are+natural+inhibitors+of+Candida+albicans+pathogenicity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Mucin o-glycans are natural inhibitors of Candida albicans pathogenicity.</a> Nat Chem Biol. 18 (7), 762-773 (2022).</li>
<li>Cinical and Laboratory Standard Institute. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Methods+for+dilution+susceptibility+tests+for+bacteria+that+grow+aerobically%22">Methods for dilution susceptibility tests for bacteria that grow aerobically</a>. 35 Tenth Edition, (2), (2015).</li>
<li>Roberts, A. E., Kragh, K. N., Bjarnsholt, T., Diggle, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+limitations+of+in+vitro+experimentation+in+understanding+biofilms+and+chronic+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">The limitations of in vitro experimentation in understanding biofilms and chronic infection.</a> J Mol Biol. 427 (23), 3646-3661 (2015).</li>
<li>Macia, M. D., Rojo-Molinero, E., Oliver, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+susceptibility+testing+in+biofilm-growing+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Microbiol+Infect%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial susceptibility testing in biofilm-growing bacteria.</a> Clin Microbiol Infect. 20 (10), 981-990 (2014).</li>
<li>Coenye, T., Goeres, D., Van Bambeke, F., Bjarnsholt, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Should+standardized+susceptibility+testing+for+microbial+biofilms+be+introduced+in+clinical+practice%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Microbiol+Infect%22%5BJournal%5D)">Should standardized susceptibility testing for microbial biofilms be introduced in clinical practice.</a> Clin Microbiol Infect. 24 (6), 570-572 (2018).</li>
<li>Turner, K. H., Wessel, A. K., Palmer, G. C., Murray, J. L., Whiteley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essential+genome+of+Pseudomonas+aeruginosa+in+cystic+fibrosis+sputum%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Essential genome of Pseudomonas aeruginosa in cystic fibrosis sputum.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 112 (13), 4110-4115 (2015).</li>
<li>Miles, A. A., Misra, S. S., Irwin, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+estimation+of+the+bactericidal+power+of+the+blood%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hyg%22%5BJournal%5D)">The estimation of the bactericidal power of the blood.</a> J Hyg. 38 (6), 732-749 (1938).</li>
<li>Robertson, S. N., Romero, M., Fenn, S., Kohler Riedi, P. L., Cámara, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development%2C+characterization%2C+and+evaluation+of+a+simple+polymicrobial+colony+biofilm+model+for+testing+of+antimicrobial+wound+dressings%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Development, characterization, and evaluation of a simple polymicrobial colony biofilm model for testing of antimicrobial wound dressings.</a> J Appl Microbiol. 135 (3), lxae042(2024).</li>
<li>Rumpf, C., Lange, J., Schwartbeck, B., Kahl, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Staphylococcus+aureus+and+cystic+fibrosis-a+close+relationship.+What+can+we+learn+from+sequencing+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Pathogens%22%5BJournal%5D)">Staphylococcus aureus and cystic fibrosis-a close relationship. What can we learn from sequencing studies.</a> Pathogens. 10 (9), 1177(2021).</li>
<li>Tay, W. H., Chong, K. K. L., Kline, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymicrobial-host+interactions+during+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Polymicrobial-host interactions during infection.</a> J Mol Biol. 428 (17), 3355-3371 (2016).</li>
<li>Orazi, G., O'toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%26%2334%3BIt+takes+a+village%26%2334%3B%3A+Mechanisms+underlying+antimicrobial+recalcitrance+of+polymicrobial+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">&#34;It takes a village&#34;: Mechanisms underlying antimicrobial recalcitrance of polymicrobial biofilms.</a> J Bacteriol. 202 (1), e00530-e00519 (2019).</li>
<li>Arjes, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+biofilm+colony+growth+supports+a+mutualism+involving+matrix+and+nutrient+sharing%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional biofilm colony growth supports a mutualism involving matrix and nutrient sharing.</a> eLife. 10, e64145(2021).</li>
<li>Kasza, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ciprofloxacin+poly%28%CE%B2-amino+ester%29+conjugates+enhance+antibiofilm+activity+and+slow+the+development+of+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Appl+Mater+Interf%22%5BJournal%5D)">Ciprofloxacin poly(β-amino ester) conjugates enhance antibiofilm activity and slow the development of resistance.</a> ACS Appl Mater Interf. 16 (5), 5412-5425 (2024).</li>
<li>Martin, I., Waters, V., Grasemann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Approaches+to+targeting+bacterial+biofilms+in+cystic+fibrosis+airways%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Approaches to targeting bacterial biofilms in cystic fibrosis airways.</a> Int J Mol Sci. 22 (4), 2155(2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 ומיקרו; לולאות חיסון L&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>13 מ"מ 0.2 ומיקרו; דיסקיות פוליקרבונט בגודל נקבוביות M&nbsp;</td><td>איזופור&nbsp;</td><td>GTTP01300</td><td>ניתן להשיג גם דיסקים גדולים יותר&nbsp;</td></tr><tr><td>צינורות מחוזקים 2 מ"ל&nbsp;</td><td>תרמופישר&nbsp;</td><td></td><td></td>15545809</tr><tr><td>2.5 מ"ל חרוזי קרמיקה&nbsp;</td><td>Qiagen</td><td>13114-325</td><td></td></tr><tr><td>500 מ"ל בורוסיליקט זכוכית בקבוק דוראן</td><td>סיגמא אולדריץ'&nbsp;</td><td>Z305197</td><td>בקבוקים גדולים יותר זמינים בנפחים גדולים יותר רצויים</td></tr><tr><td>צלחות תרבית 6 בארות</td><td>גריינר</td><td>657165</td><td></td></tr><tr><td>7 מ"ל Bijou</td><td>Thermofisher&nbsp;</td><td>129B</td><td></td></tr><tr><td>צלחות 96 בארות</td><td>Thermofisher&nbsp;</td><td>167008</td><td>לדילול סדרתי בבדיקת CFU</td></tr><tr><td>לוחות אגר להכנת צלחות של P. aerugnisa, S. aureus, ו-C. albicans</td><td></td><td></td><td>&nbsp;טוחן LB עבור P. aeruginosa ו-S. aureus ו-Sabouraud dextrose agar&nbsp; עבור C. albicans&nbsp; </td></tr><tr><td>מקצף חרוזים - מתאים לצינורות 2 מ"ל</td><td>Fisherbrand&nbsp;</td><td>15515799</td><td>טחנת חרוזים תרמופישר 24</td></tr><tr><td>צנטריפוגה עליונה&nbsp;</td><td></td><td></td><td>חייב להיות מסוגל לפחות 8000 x גרם</td></tr><tr><td>תחתון שחור שקוף 96 צלחות Costar</td><td>&nbsp;</td><td>3603</td><td></td></tr><tr><td>מבער בונסן &nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מכולות לסילוק ציוד וחומרים מזוהמים על פי תקנות הבטיחות והבריאות של המכון.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מים נטולי יונים&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>דנ"א&nbsp;</td><td>סיגמא אולדריץ'&nbsp;</td><td>31149</td><td></td></tr><tr><td>יחידת סינון&nbsp;</td><td>פישרברנד&nbsp;</td><td>FB12566504</td><td>ניתן להחלפה בהתאם למשאבת הוואקום המשמשת אך חייב להיות בגודל נקבוביות של 0.2 ומיקרו; m</td></tr><tr><td>Haemocytometer ו-Cover slip</td><td>Hawksley&nbsp;</td><td>המוציטומטרים HC001</td><td>עשויים להיות שונים בגודל ובנפח. בדוק שוב והתאם את חישובי CFU בהתאם&nbsp;</td></tr><tr><td>מרק LB&nbsp;</td><td>אוקסואיד&nbsp;</td><td>1.46813</td><td></td></tr><tr><td>אגר מלח מניטול&nbsp;</td><td>אוקסואיד&nbsp;</td><td></td><td></td>CM0085B</tr><tr><td>מרופנם</td><td>abcr</td><td>Ab243429</td><td></td></tr><tr><td>מוצין מקיבה חזירית סוג II</td><td>סיגמא אולדריץ'&nbsp;</td><td>M2378</td><td></td></tr><tr><td>ניסטטין</td><td>מיליפור&nbsp;</td><td></td><td></td>1003352658</tr><tr><td>מנות פטרי&nbsp;</td><td>SLS</td><td>SLS2000</td><td></td></tr><tr><td>פוספט מלח חוצץ&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pseudomonas בידוד אגר</td><td>Millipore&nbsp;</td><td>17208</td><td></td></tr><tr><td>מלח נתרן רזזורין&nbsp;</td><td>סיגמא אולדריץ'&nbsp;</td><td></td><td></td>199303</tr><tr><td>אגר דקסטרוז Sabouraud&nbsp;</td><td>אוקסואיד&nbsp;</td><td>בחירת מלקחיים CM0041</td><td></td></tr>;<tr><td></td><td></td><td></td><td>מלקחיים דקים ורקמות עם שיניים להעברת חרוזי קרמיקה</td></tr>, <tr><td>טלטול פיפטות</td><td></td><td></td><td></td>סרולוגיות</tr><tr><td>ואינקובטורים סטטיים&nbsp;</td><td></td><td></td><td>חייב להיות מבוקר טמפרטורה</td></tr><tr><td>קורא צלחות מיקרוטיטר Sparks</td><td>Tecan&nbsp;</td><td></td><td>עבור בדיקת רזזורין, קורא צלחת המיקרוטיטר חייב להיות בעל המסננים המתאימים או להיות מונוכרומטור לזיהוי פלורסנציה.&nbsp;</td></tr><tr><td>ספקטרופוטומטר</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>אגר טכני (אגר טכני מס' 2)</td> <td>אוקסואיד&nbsp;</td><td>LP0012B&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>טטרציקלין</td><td>סיגמא אולדריץ'&nbsp;</td><td>T7660</td><td></td></tr><tr><td>קרוסלינקר UV&nbsp;</td><td>ספקטרולינה&nbsp;</td><td>11-992-89</td><td></td></tr><tr><td>משאבת ואקום/ בקבוק</td><td>פישרברנד&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FB12566504 אמבט מים&nbsp;</td><td></td><td></td><td>חייב להיות מסוגל לשמור על 55 מעלות; מרק</td></tr><tr><td>סי YPD&nbsp;</td><td>מיליפור&nbsp;</td><td>Y1375&nbsp;</td><td>ניתן לקנות מראש או להכין באמצעות מרכיבי הבסיס</td></tr></tbody></table>

פיתוח מודל ביופילם של מושבה פולימיקרוביאלית לבדיקת אנטי-מיקרוביאלים בסיסטיק פיברוזיס

Development of a Polymicrobial Colony Biofilm Model to Test Antimicrobials in Cystic Fibrosis

הפשטות של מודל הביופילם של ממשק אוויר מוצק מאפשרת סריקה של מספר רב של אנטי-מיקרוביאלים בתנאים קליניים שונים בו זמנית. מודל זה מאפשר להעריך את היעילות של אנטיביוטיקה באמצעות ספירות CFU ובדיקות מטבוליות בביופילמים מונו ופולימיקרוביאליים להתבצע בתוך שבוע. בשל אופיו של המודל, הוא מאפשר גם מניפולציה קלה של תנאי הסביבה, כגון שינוי הרכב המדיה והצבת הביופילמים בתנאים מופחתי חמצן ואנאירוביים. באמצעות המודל הזה הראינו שינויים בסבילות לשתי אנטיביוטיקות שנמצאות בשימוש נפוץ ב-pwCF בין P. aeruginosa שגדל בביופילמים חד-מינים וביופילמים רב-מיקרוביאליים (איור 1). לצד זאת, הצלחנו לקבוע כיצד טיפול אנטי-מיקרוביאלי יכול להשפיע על דינמיקת האוכלוסייה בתוך ביופילמים רב-מיקרוביאליים (איור 2).
כדי לבצע ניסויים אלה, החיסון הראשוני הוכן כמפורט בפרוטוקול לעיל, מה שהוביל להיווצרות של מיני מונו יציבים וביופילמים פולימיקרוביאליים עם CFU/mL הניתנים לשחזור וסטיות תקן קטנות כפי שנקבעו על ידי ANOVA בכיוון אחד או דו-כיווני. מודל זה הדגיש גם צמיחה עקבית והתאוששות CFU, כמו גם מאפשר את האפשרות לשלב טכניקות מיקרוביולוגיה קלאסיות אלה עם טכניקות אחרות שלא בוצעו במחקר זה ללא צורך בעיבוד מתוחכם. אלה כוללים הדמיה כגון חיים/מתים, הדמיית מטריצה ואנליזה מולקולרית, שמודלים תלת-ממדיים אחרים אינם מסוגלים להציע באופן כה נגיש (איור 1)31. יש לציין כי סטיית התקן הצפויה עבור CFU/mL עולה כאשר הנתונים מוצגים כאחוז ההישרדות בהשוואה ל-CFU/mL (איור 1). כאשר השוו את יעילות הטיפול האנטיביוטי בין מיני מונו לבין ביופילמים פולימיקרוביאליים, חלה עלייה משמעותית בכל ריכוזי האנטיביוטיקה הדרושים להשגת 50% הריגה. היה צורך בעלייה של 2 לוגים בריכוז האנטיביוטיקה כדי להשיג רמה כזו של הרג עבור מרופנם וטוברמיצין (איור 1). הייתה גם עלייה כללית בהישרדות P . aeruginosa בנוכחות S. aureus ו - C. albicans בביופילם הפולימיקרוביאלי כאשר טופלו בטוברמיצין 64 מיקרוגרם/מ"ל, בעוד שההפך היה נכון עבור מרופנם.
השיטה המשמשת לקביעת הפעילות המטבולית מודדת את הפעילות הכוללת של כל הביופילם הפולימיקרוביאלי מבלי להיות מסוגל להבחין בין התרומה האינדיבידואלית מכל מין. מסיבה זו, רק שינויים מטבוליים חד-מינים מוצגים כדי להדגים את השימוש במבחני פעילות מטבולית עבור מודל זה. עבור ביופילמים של מינים מונו היה קשר חזק בין הישרדות P. aeruginosa לבין פעילות מטבולית הן עבור מרופנם והן עבור טוברמיצין (איור 2). השימוש הן בפעילות מטבולית והן בספירות CFU מאותן דגימות מאפשר זיהוי קל של השפעות בקטריוסטטיות וקוטלי חיידקים. עבור ביופילמים רב-מיקרוביאליים, קביעת הפעילות המטבולית עשויה להצביע על האופן שבו מיקוד של מין אחד עשוי לגרום לעלייה כוללת בפעילות המטבולית של ביופילם, ולכן עשוי להגביר את הצמיחה המיקרוביאלית של מינים אחרים.
למרות ש-CFUs הם תקן הזהב לבדיקת רגישות מיקרוביאלית, בביופילמים רב-מיקרוביאליים הם מאפשרים גם להעריך את הרכב המינים בתוך הביופילם. על-ידי טיפול ב-P. aeruginosa בביופילמים רב-מיקרוביאליים, אנו לא רק מסוגלים להראות את ה-MBEC50 המוגבר עבור האורגניזם הזה, אלא גם לקבוע את ההשפעה שיש לכך על מינים אחרים שבודדו יחד (איור 3). זה נראה, למשל, עם meropenem (antipseudomonal), שם הירידה של P. aeruginosa מלווה בעלייה ב-S. aureus וב-C. albicans CFU, וכתוצאה מכך S. aureus הופך לאורגניזם הנפוץ ביותר לאחר חשיפה לריכוזים מסוימים של אנטיביוטיקה (איור 3A). זה מדגיש את החשיבות של התחשבות באופי הרב-מיקרוביאלי של הביופילם בשל הגידול הפוטנציאלי בגודל האוכלוסייה של מינים גורמי מחלות אחרים בעת טיפול בפתוגן מסוים.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67213/67213fig01.jpg"> 
איור 1: שונות בסבילות האנטי-מיקרוביאלית של P. aeruginosa למרופנם וטוברמיצין בין ביופילמים מונו-מיקרוביאליים ופולימיקרוביאליים שגדלו במודל ממשק אוויר מוצק. P. aeruginosa PAO1 שגדל בביופילמים מיקרוביאליים מונו או פולי עם S. aureus ו-C. albicans הוקם באמצעות מודלים של ממשק אוויר מוצק במשך 24 שעות על SCFM2. ביופילמים טופלו בטווח של ריכוזי (A) מרופנם או (B) טוברמיצין מ-0.125 מיקרוגרם/מ"ל עד 64 מק"ג/מ"ל יחד עם בקרה ללא אנטיביוטיקה. נקבע ה-CFU/mL של כל ביופילם. פ. ארוגינוסה CFUs נקבעו ב-PIA והומרו לאחוזי הישרדות על ידי שימוש בבקרה השלילית כ-100% הישרדות. קווי שגיאה מציינים סטיית תקן, וכל נקודת נתונים נגזרת מ-3 חזרות ביולוגיות, שבכל אחת מהן שלוש חזרות טכניות. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67213/67213fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67213/67213fig02.jpg"> 
איור 2: שונות בפעילות המטבולית של ביופילמים של P. aeruginosa בנוכחות מרופנם או טוברמיצין שגדלו במודל ממשק האוויר המוצק. פ. ארוגינוסה ביופילמים PAO1 גודלו על SCFM2 במודל ממשק אוויר מוצק, ונוספו טווח של ריכוזי (A) מרופנם או (B) טוברמיצין מ-0.125 מיקרוגרם/מ"ל עד 64 מק"ג/מ"ל יחד עם בקרה ללא אנטיביוטיקה. הצלחת נקראה באופן פלואורסצנטי בעירור של 540 ננומטר ופליטה של 590 ננומטר כל 30 דקות. אחוז הפעילות המטבולית חושב על ידי קביעת אחוז פעילות זו בכל דגימה שטופלה באנטיביוטיקה בהשוואה לבקרה ללא אנטיביוטיקה. קווי שגיאה מציינים סטיית תקן, וכל נקודת נתונים נגזרת מ-3 חזרות ביולוגיות, שבכל אחת מהן שלוש חזרות טכניות. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67213/67213fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67213/67213fig03.jpg"> 
איור 3: השפעה על הספירה הכוללת של CFU של P. aeruginosa, S. aureus ו-C. albicans שהתאוששו ממודל ממשק אוויר מוצק רב-מיקרוביאלי לאחר טיפול אנטי-מיקרוביאלי. S. aureus ו - C. albicans גודלו על SCFM2 בדגם ממשק האוויר המוצק. P. aeruginosa נוסף, וטווח של 0.125 מיקרוגרם/מ"ל עד 64 מיקרוגרם/מ"ל ריכוזים של (A) מרופנם או (B) טוברמיצין נוספו לביופילמים לצד בקרה ללא אנטיביוטיקה. נקבע ה-CFU/mL של כל ביופילם. קווי שגיאה מציינים סטיית תקן, וכל נקודת נתונים נגזרת מ-3 חזרות ביולוגיות, כל אחת עם שלוש חזרות טכניות. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67213/67213fig03large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
תרשים משלים 1: הקמה וזרימת עבודה של מודל ממשק אוויר מוצק. ייצוג גרפי של הקמת מודל ממשק אוויר מוצק, שיבוש ביופילם ותפוקות. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67213/Supplementary%20figure%201.zip" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.</a>

A range of bacteria biofilm models exist for the testing of antibiotics. However, many of these are limited to a single experimental output, such as ...

development-polymicrobial-colony-biofilm-model-to-test-antimicrobials

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

זרימת עבודה זו יכולה לשמש לביצוע בדיקות רגישות לאנטיביוטיקה באמצעות מודל ex vivo הוקמה של ביופילם חיידקי בריאות של אנשים עם סיסטיק פיברוזיס. שימוש במודל זה יכול לשפר את התוקף הקליני של MBEC (ריכוז מיגור ביופילם מינימלי) מבחנים.

בדיקות יעילות אנטיביוטית במודל אקס ויוו של פסאודומונס aeruginosa ו Staphylococcus aureus Biofilms בריאה סיסטיק פיברוזיס

פרוטוקול זה מתאר מודל ביופילם פולימיקרוביאלי רלוונטי לארבעה מינים של סיסטיק פיברוזיס (CF), שניתן להשתמש בו כדי לחקור את ההשפעה של אינטראקציות בין מינים חיידקיים.

גידול ביופילם פולימיקרוביאלי רלוונטי לסיסטיק פיברוזיס כדי לחקור פנוטיפים קהילתיים

מחקר זה מתאר מסגרת לפיתוח מודל ביופילם פולימיקרוביאלי מצטבר ואופטימיזציה של פרוטוקול מיצוי RNA כדי להעריך את ביטוי הגן Pseudomonas aeruginosa המשקף את סביבת הריאות של סיסטיק פיברוזיס. היישומים כוללים הערכת השפעות אנטי-מיקרוביאליות וחקר חלופות אנטיביוטיות בתנאים הרלוונטיים לסיסטיק פיברוזיס.

מודל ביופילם מצטבר של סיסטיק פיברוזיס לחקר ביטוי גנים רלוונטי לזיהום

קולון Ascendens סטנט דלקת הצפק (CASP) הוא מודל סטנדרטי ביותר עבור אלח דם בטן polymicrobial במכרסמים. מאמר זה מתאר את הליך כירורגי של CASP. המודל CASP גירסאותיה, לאפשר חקירה שיטתית של בעיות שונות לגבי הנושא של אלח דם.

קולון Ascendens סטנט דלקת הצפק (CASP) - מודל סטנדרטי עבור אלח דם בטן Polymicrobial

בדיקות אבחון רגישות מיקרוביאלית הנוכחי מסתמך על צמיחה של planktonic מבודד ב מזין, עשיר תנאים אירוביים. כאן, אנו מעסיקים בינוני חלופה כיח מלאכותית ללמוד הרגישות מיקרוביאלית של Pseudomonas aeruginosa biofilms תחת שני תנאים אירוביים ו microaerophilic נציג נוסף של הריאה סיסטיק פיברוזיס.

שימוש בינוני כיח מלאכותית לבדיקת יעילות אנטיביוטי נגד<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; בתנאי רלוונטיים יותר ריאות סיסטיק פיברוזיס

אנו מתארים את השיטה אגר חרוזים להקים זיהום מתמשך לטווח ארוך כרוני Pseudomonas aeruginosa בדרכי אוויר במודל העכבר.

כרוני לטווח ארוך<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; זיהום דרכי הנשימה בעכברים

כאן, אנו מציגים פרוטוקולים לסינון ואפיון מהיר של אנזימים לפעילות אנטי-מיקרוביאלית. בדיקת דיפוזיה של מיקרו-שקופיות ובדיקת שחרור הצבע משתמשות במצעי חיידקי מטרה להערכת פעילות אנזימטית איכותית וכמותית.

מבחנים איכותיים וכמוני עבור זיהוי ואפיון של antimicrobials החלבון

פרוטוקול זה מתאר את ההדמיה של התפתחות הביופילם לאחר חשיפה לגורמי מארח באמצעות מודל תא שקופיות. מודל זה מאפשר הדמיה ישירה של התפתחות ביופילם וכן ניתוח פרמטרים של ביופילם באמצעות תוכנות מחשב.

לדמיין את ההשפעות של כיח על פיתוח biofilm באמצעות מודל תאיים coverglass

השיטה המתוארת כאן מאפשרת הדמיה של IL- 8 האמרגן תלוי דלקת ההפעלה הריאות של עכברים באמצעות הדמיה פליטת אור לא פולשני (BLI). אותו בעל חיים יכול להיות נתון BLI מספר פעמים במשך עד חודשיים מזמן המסירה של הכתב לוציפראז לבנות.

דגם IL-8 עכבר transgenized חולף עבור<em&gt; בויבו</emמעקב ארוך טווח אחר תגובות דלקתיות

כאן נתאר מודל מאתר סוכרתית הרומן ניצול עכברים שיער ניטור בזמן אמת, לא פולשנית, זיהומים בפצע biofilm של ביולומנאסן Pseudomonas aeruginosa. בשיטה זו ניתן להתאים כדי להעריך את זיהום של אחרים חיידקים ומיקרואורגניזמים מהונדסים, כולל biofilms מינים רב, ולבדוק את היעילות של אסטרטגיות antibiofilm.

לצידו. אור: בויוו ניטור של דלקות Biofilm Pseudomonas aeruginosa לפצעים כרוניים במודל מאתר של שיער סוכרתית

חקור מודל ביופילם פולימיקרוביאלי לבדיקת רגישות לאנטיביוטיקה בחיידקי Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus ו-Candida albicans בסיסטיק פיברוזיס. שיטה זו מאפשרת ניתוח אינטראקציות מיקרוביאליות ופיתוח אסטרטגיות טיפוליות חדשות.

פיתוח מודל ביופילם של מושבה פולימיקרוביאלית לבדיקת אנטי-מיקרוביאלים בסיסטיק פיברוזיס

גלה סרטונים נוספים