Name: הקמת מודלים אורתוטופיים של קסנוגרפט שמקורם בחולה לגידולי מוח באמצעות מכשיר סטריאוטקסי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-02T12:50:00.000+00:00
Duration: 7 min 44 s
Description: למד כיצד להקים מודלים אורתוטופיים של קסנוגרפט ממקור חולה לגידולי מוח אגרסיביים בילדים באמצעות מכשיר סטריאוטקסי. שיטה זו מאפשרת חקר התנהגות הגידול ופיתוח טיפולים יעילים יותר.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Mueller, S., Chang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pediatric+brain+tumors%3A+current+treatment+strategies+and+future+therapeutic+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotherapeutics%22%5BJournal%5D)">Pediatric brain tumors: current treatment strategies and future therapeutic approaches.</a> Neurotherapeutics. 6 (3), 570-586 (2009).</li>
<li>Packer, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+tumors+in+children%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Neurol%22%5BJournal%5D)">Brain tumors in children.</a> Arch Neurol. 56 (4), 421-425 (1999).</li>
<li>Paugh, B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+molecular+genetic+profiling+of+pediatric+high-grade+gliomas+reveals+key+differences+with+the+adult+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Integrated molecular genetic profiling of pediatric high-grade gliomas reveals key differences with the adult disease.</a> J Clin Oncol. 28 (18), 3061-3068 (2010).</li>
<li>MacDonald, T. J., Aguilera, D., Kramm, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+high-grade+glioma+in+children+and+adolescents%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro+Oncol%22%5BJournal%5D)">Treatment of high-grade glioma in children and adolescents.</a> Neuro Oncol. 13 (10), 1049-1058 (2011).</li>
<li>Rutka, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Malignant+brain+tumours+in+children+%3A+Present+and+future+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22J+Korean+Neurosurg+Soc%22%5BJournal%5D)">Malignant brain tumours in children : Present and future perspectives.</a> J Korean Neurosurg Soc. 61 (3), 402-406 (2018).</li>
<li>Cho, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrative+genomic+analysis+of+medulloblastoma+identifies+a+molecular+subgroup+that+drives+poor+clinical+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Integrative genomic analysis of medulloblastoma identifies a molecular subgroup that drives poor clinical outcome.</a> J Clin Oncol. 29 (11), 1424-1430 (2011).</li>
<li>Thomas, A., Noel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Medulloblastoma%3A+optimizing+care+with+a+multidisciplinary+approach%5BTitle%5D)+AND+%22J+Multidiscip+Healthc%22%5BJournal%5D)">Medulloblastoma: optimizing care with a multidisciplinary approach.</a> J Multidiscip Healthc. 12, 335-347 (2019).</li>
<li>Pajtler, K. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+classification+of+ependymal+tumors+across+all+CNS+compartments%2C+histopathological+grades%2C+and+age+groups%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Molecular classification of ependymal tumors across all CNS compartments, histopathological grades, and age groups.</a> Cancer Cell. 27 (5), 728-743 (2015).</li>
<li>Thorp, N., Gandola, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+ependymoma+in+children%2C+adolescents+and+young+adults%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Management of ependymoma in children, adolescents and young adults.</a> Clin Oncol. 31 (3), 162-170 (2019).</li>
<li>Upton, D. H., Ziegler, D. S., Tsoli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+orthotopic+patient-derived+xenograft+models+of+pediatric+intracranial+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Development of orthotopic patient-derived xenograft models of pediatric intracranial tumors.</a> Methods Mol Biol. 2806, 75-90 (2024).</li>
<li>Smith, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+orthotopic+xenografts+of+pediatric+brain+tumors%3A+a+St.+Jude+resource%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Patient-derived orthotopic xenografts of pediatric brain tumors: a St. Jude resource.</a> Acta Neuropathol. 140 (2), 209-225 (2020).</li>
<li>Akter, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pre-clinical+tumor+models+of+primary+brain+tumors%3A+Challenges+and+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Pre-clinical tumor models of primary brain tumors: Challenges and opportunities.</a> Biochim Biophys Acta Rev Cancer. 1875 (1), 188458(2021).</li>
<li>Stribbling, S. M., Ryan, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cell-line-derived+subcutaneous+tumor+model+in+preclinical+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">The cell-line-derived subcutaneous tumor model in preclinical cancer research.</a> Nat Protoc. 17 (9), 2108-2128 (2022).</li>
<li>He, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+models+recapitulate+heterogeneity+of+molecular+signatures+and+drug+response+in+pediatric+high-grade+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Patient-derived models recapitulate heterogeneity of molecular signatures and drug response in pediatric high-grade glioma.</a> Nat Commun. 12 (1), 4089(2021).</li>
<li>Tsoli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((International+experience+in+the+development+of+patient-derived+xenograft+models+of+diffuse+intrinsic+pontine+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurooncol%22%5BJournal%5D)">International experience in the development of patient-derived xenograft models of diffuse intrinsic pontine glioma.</a> J Neurooncol. 141 (2), 253-263 (2019).</li>
<li>Brabetz, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+biobank+of+patient-derived+pediatric+brain+tumor+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">A biobank of patient-derived pediatric brain tumor models.</a> Nat Med. 24 (11), 1752-1761 (2018).</li>
<li>Khan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual+targeting+of+polyamine+synthesis+and+uptake+in+diffuse+intrinsic+pontine+gliomas%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Dual targeting of polyamine synthesis and uptake in diffuse intrinsic pontine gliomas.</a> Nat Commun. 12 (1), 971(2021).</li>
<li>Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+evaluation+of+protein+synthesis+inhibitor+omacetaxine+in+pediatric+brainstem+gliomas%5BTitle%5D)+AND+%22Neurooncol+Adv%22%5BJournal%5D)">Preclinical evaluation of protein synthesis inhibitor omacetaxine in pediatric brainstem gliomas.</a> Neurooncol Adv. 6 (1), vdae029(2024).</li>
<li>Ung, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Doxorubicin-loaded+gold+nanoarchitectures+as+a+therapeutic+strategy+against+diffuse+intrinsic+pontine+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Doxorubicin-loaded gold nanoarchitectures as a therapeutic strategy against diffuse intrinsic pontine glioma.</a> Cancers (Basel). 13 (6), 1278(2021).</li>
<li>Ehteda, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual+targeting+of+the+epigenome+via+FACT+complex+and+histone+deacetylase+is+a+potent+treatment+strategy+for+DIPG%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Dual targeting of the epigenome via FACT complex and histone deacetylase is a potent treatment strategy for DIPG.</a> Cell Rep. 35 (2), 108994(2021).</li>
<li>Mayoh, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+drug+screening+of+primary+tumor+cells+identifies+therapeutic+strategies+for+treating+children+with+high-risk+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">High-throughput drug screening of primary tumor cells identifies therapeutic strategies for treating children with high-risk cancer.</a> Cancer Res. 83 (16), 2716-2732 (2023).</li>
<li>Lin, G. L., Monje, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Protocol+for+rapid+post-mortem+cell+culture+of+diffuse+intrinsic+pontine+glioma+%28DIPG%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A Protocol for rapid post-mortem cell culture of diffuse intrinsic pontine glioma (DIPG).</a> J Vis Exp. (121), e55360(2017).</li>
<li>Whitehouse, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+loss+of+tumorigenicity+in+a+patient-derived+orthotopic+xenograft+mouse+model+of+ependymoma%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">In vivo loss of tumorigenicity in a patient-derived orthotopic xenograft mouse model of ependymoma.</a> Front Oncol. 13, 1123492(2023).</li>
<li>Hermans, E., Hulleman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+orthotopic+xenograft+models+of+pediatric+brain+tumors%3A+In+a+mature+phase+or+still+in+its+infancy%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">Patient-derived orthotopic xenograft models of pediatric brain tumors: In a mature phase or still in its infancy.</a> Front Oncol. 9, 1418(2019).</li>
<li>Kim, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+orthotopic+and+heterotopic+human+pancreatic+cancer+xenografts+in+immunodeficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Generation of orthotopic and heterotopic human pancreatic cancer xenografts in immunodeficient mice.</a> Nat Protoc. 4 (11), 1670-1680 (2009).</li>
<li>Paxinos, G., Franklin, K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22Paxinos+and+Franklin%27s+the+Mouse+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">Paxinos and Franklin's the Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , 5th edn, Academic Press. (2019).</li>
<li>Tsoli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integration+of+genomics%2C+high+throughput+drug+screening%2C+and+personalized+xenograft+models+as+a+novel+precision+medicine+paradigm+for+high+risk+pediatric+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Biol+Ther%22%5BJournal%5D)">Integration of genomics, high throughput drug screening, and personalized xenograft models as a novel precision medicine paradigm for high risk pediatric cancer.</a> Cancer Biol Ther. 19 (12), 1078-1087 (2018).</li>
<li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+and+interactions+of+tumor+microenvironment+components+in+medulloblastoma+with+implications+for+novel+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Chromosomes+Cancer%22%5BJournal%5D)">Roles and interactions of tumor microenvironment components in medulloblastoma with implications for novel therapeutics.</a> Genes Chromosomes Cancer. 63 (4), e23233(2024).</li>
<li>Kondapaneni, R. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glioblastoma+mechanobiology+at+multiple+length+scales%5BTitle%5D)+AND+%22Biomater+Adv%22%5BJournal%5D)">Glioblastoma mechanobiology at multiple length scales.</a> Biomater Adv. 160, 213860(2024).</li>
<li>Mahmoudian, E., Jahani-Asl, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+brain+tumor+stem+cell+culture+from+patient+brain+tumors+and+imaging+analysis+of+patient-derived+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Establishing brain tumor stem cell culture from patient brain tumors and imaging analysis of patient-derived xenografts.</a> Methods Mol Biol. 2736, 177-192 (2024).</li>
<li>Oudin, A., Moreno-Sanchez, P. M., Baus, V., Niclou, S. P., Golebiewska, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+resonance+imaging-guided+intracranial+resection+of+glioblastoma+tumors+in+patient-derived+orthotopic+xenografts+leads+to+clinically+relevant+tumor+recurrence%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">Magnetic resonance imaging-guided intracranial resection of glioblastoma tumors in patient-derived orthotopic xenografts leads to clinically relevant tumor recurrence.</a> BMC Cancer. 24 (1), 3(2024).</li>
<li>Bauer, S., Wiest, R., Nolte, L. P., Reyes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+survey+of+MRI-based+medical+image+analysis+for+brain+tumor+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Phys+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">A survey of MRI-based medical image analysis for brain tumor studies.</a> Phys Med Biol. 58 (13), R97-R129 (2013).</li>
<li>Lasocki, A., Gaillard, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-contrast-enhancing+tumor%3A+A+new+frontier+in+glioblastoma+research%5BTitle%5D)+AND+%22AJNR+Am+J+Neuroradiol%22%5BJournal%5D)">Non-contrast-enhancing tumor: A new frontier in glioblastoma research.</a> AJNR Am J Neuroradiol. 40 (5), 758-765 (2019).</li>
<li>Nichelli, L., Zaiss, M., Casagranda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((APT+weighted+imaging+in+diffuse+gliomas%5BTitle%5D)+AND+%22BJR+Open%22%5BJournal%5D)">APT weighted imaging in diffuse gliomas.</a> BJR Open. 5 (1), 20230025(2023).</li>
<li>Genovesi, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+orthotopic+xenograft+models+of+medulloblastoma+lack+a+functional+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro+Oncol%22%5BJournal%5D)">Patient-derived orthotopic xenograft models of medulloblastoma lack a functional blood-brain barrier.</a> Neuro Oncol. 23 (5), 732-742 (2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>חומר הרדמה (למשל איזופלורן)</td><td>מרק</td><td>792632</td><td></td></tr><tr><td>100% אתנול</td><td>מרק</td><td>459844</td><td></td></tr><tr><td>70% אתנול</td><td>נה</td><td>נה</td><td>הכינו 70% אתנול מ-100% אתנול ודיללו אותו במים סטריליים</td></tr><tr><td>80% אתנול</td><td>נה</td><td>נה</td><td>הכינו 80% אתנול מ-100% אתנול ודיללו אותו במים סטריליים</td></tr><tr><td>שקופיות מיקרוסקופ דבק</td><td>מרק</td><td>Z681156</td><td></td></tr><tr><td>משכך כאבים (בופרנורפין 0.3 מ"ג/מ"ל)</td><td>ג'ורוקס</td><td>נה</td><td></td></tr><tr><td>מיכל מסנן פחמן</td><td>ציוד וטרינרי</td><td>931401</td><td></td></tr><tr><td>צינורות חרוטיים 15 מ"ל (פלקון)</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>14-959-53א</td><td></td></tr><tr><td>צינורות חרוטיים 50 מ"ל (פלקון)</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>14-432-22</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>מרק</td><td>472301</td><td></td></tr><tr><td>מוטות אוזניים</td><td>קופף</td><td>1921</td><td></td></tr><tr><td>הידרוג'ל ECM (מטריג'ל, קורנינג)</td><td>מרק</td><td>E1270</td><td></td></tr><tr><td>משחת עיניים (Poly Visc)</td><td>כימאי ישיר&nbsp;</td><td>719986</td><td></td></tr><tr><td>סרום עגל עוברי</td><td>מרק</td><td>F0926</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו-מזרק זכוכית</td><td>המילטון</td><td>7002</td><td></td></tr><tr><td>מגבוני איזופרופנול</td><td>מדיסה</td><td>SUL_LWMS-1</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן KI67</td><td>אבקם</td><td>ab209897</td><td></td></tr><tr><td>צינורות מיקרוצנטריפוגה</td><td>אפנדורף</td><td>211-2130</td><td></td></tr><tr><td>מקדחה מיקרו-מקדחת&nbsp; 0.028 אינץ'</td><td>קופף</td><td>8170</td><td></td></tr><tr><td>יחידת מיקרו-הזרקה</td><td>קופף</td><td>5004</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>מרק</td><td>עמ' 4474</td><td></td></tr><tr><td>פיפטה 10 מ"ל</td><td>קורנינג</td><td>CLS4488</td><td></td></tr><tr><td>פיפטה 1 מ"ל&nbsp;</td><td>אפנדורף</td><td>3123000063</td><td></td></tr><tr><td>פיפטה 200uL</td><td>אפנדורף</td><td>3123000055</td><td></td></tr><tr><td>פיפטה 20uL</td><td>אפנדורף</td><td>3123000098</td><td></td></tr><tr><td>פיפטה 25 מ"ל</td><td>קורנינג</td><td>CLS4489</td><td></td></tr><tr><td>קצה פיפטה 1 מ"ל</td><td>קורנינג</td><td>CLS4868</td><td></td></tr><tr><td>קצה פיפטה 200uL</td><td>קורנינג</td><td>CLS4860</td><td></td></tr><tr><td>חומר ניקוי פוליסורבט 20 (F10SC)</td><td>בריאות והיגיינה</td><td>G3070</td><td></td></tr><tr><td>אוקסימטר דופק (MouseSTAT)</td><td>קנט סיינטיפיק</td><td>SPO2-MSE</td><td></td></tr><tr><td>ריודין (פובידון-יוד)</td><td>מרק</td><td>Y0000466</td><td></td></tr><tr><td>אזמל (חד פעמי)</td><td>מדיסה</td><td>SUL_SCALPEL</td><td></td></tr><tr><td>דבק עור Vetbond</td><td>מדיסה</td><td>3M_1469SB</td><td></td></tr><tr><td>מכשיר סטריאוטקטי לחיות קטנות עם קונסולת תצוגה דיגיטלית&nbsp;</td><td>קופף</td><td>940</td><td></td></tr><tr><td>תרגיל סטריאוטקטי &nbsp;</td><td>קופף</td><td>1474</td><td></td></tr><tr><td>מערכת ניטור טמפרטורה&nbsp;</td><td>מנגנון הרווארד</td><td>55-7020</td><td></td></tr><tr><td>טריפאן כחול</td><td>מרק</td><td>93595</td><td></td></tr></tbody></table>

הקמת מודלים אורתוטופיים של קסנוגרפט שמקורם בחולה לגידולי מוח באמצעות מכשיר סטריאוטקסי

Establishment of Orthotopic Patient-derived Xenograft Models for Brain Tumors using a Stereotaxic Device

הזרקות אורתוטופיות באמצעות מכשיר סטריאוטקסי הפכו חיוניות לפיתוח מודלים של גידולי מוח. טכניקה זו מאפשרת מיקום מדויק וניתן לשחזור של תאי גידול, דבר חיוני להפקת נתונים עקביים ואמינים במחקר נוירו-אונקולוגי. היישום המוצלח של הזרקות אורתוטופיות מסתמך במידה רבה על הגדרה מדויקת של ציוד סטריאוטקסי, שכולל בדרך כלל מסגרת סטריאוטקסית, מיקרומניפולטור דיגיטלי לתנועות מדויקות, מזרק הזרקה ומערכת הרדמה כדי לשתק את החיה (איור 1A,B). השימוש במיקרו-מזרק זכוכית מאפשר הזרקה תוך גולגולתית של נפחים קטנים, בדרך כלל בין 2-5 מיקרוליטר. תחזוקה נכונה ושטיפה תכופה חיוניים למניעת הצטברות של חומר ביולוגי, שיכול לחסום את ההזרקה (איור 1C).
ההליך להזרקה תוך גולגולתית של תאי גידול מוח באמצעות ציוד סטריאוטקסי בעכברים כולל מספר שלבים מרכזיים. ראשית, העכבר מורדם כדי להישאר דומם ונוח לאורך כל ההליך. רמזים אופייניים המצביעים על כך שהחיה מורדמת כוללים היעדר תנועה ורפלקסים בעת צביטת הבוהן, כמו גם נוכחות של דפוס נשימה קבוע. לאחר מכן, העכבר ממוקם במסגרת סטריאוטקסית, ומאבטח את ראשו במצב קבוע (איור 2A). באמצעות ציוני דרך על הגולגולת, כגון ברגמה ולמבדה, נקבעות קואורדינטות מדויקות להזרקה. חתך קטן נעשה בקרקפת, וחור קוצים נקדח דרך הגולגולת בקואורדינטות שנבחרו (איור 2B). מחט מיקרו-הזרקה המחוברת לזרוע הסטריאוטקסית מוחדרת דרך חור הבור כדי להעביר את תאי הגידול לאזור המוח הרצוי (קליפת המוח, המוח הקטן או גזע המוח; איור 2C). ניטור והתאמה קפדניים של מיקום המחט מבטיחים מיקוד מדויק. לאחר ההזרקה, המחט נשלפת באיטיות, והחתך נסגר (איור 2D). הפצע האטום צפוי להחלים תוך שבועיים לאחר הזרקה תוך גולגולתית.
לאחר הזרקה תוך גולגולתית, בעלי חיים זקוקים לניטור קפדני לרווחה הכללית ולהתפתחות תסמינים נוירולוגיים, המצביעים לעתים קרובות על התקדמות הגידול (טבלה משלימה 1). בדרך כלל, בעלי חיים עשויים לחוות ירידה קלה במשקל במהלך השבוע הראשון לאחר ההזרקה (עד 10% ממשקלם הגבוה ביותר), אשר בדרך כלל מתייצב לאחר שאתרי ההזרקה אטומים לחלוטין עד סוף השבועהשני . בדרך כלל, בעלי חיים מציגים עלייה מתמדת במשקל ושומרים על בריאות כללית טובה עד להתקדמות הגידול. הביטוי של תסמינים נוירולוגיים משתנה בהתאם לגורמים כמו סוג הגידול במוח, אתר ההזרקה וזן בעלי החיים. לדוגמה, גליומות קליפת המוח עשויות להופיע עם ירידה מתקדמת במשקל והגדלה פוטנציאלית של המוח הקדמי, בעוד שגליומות בגזע המוח ומדולובלסטומה עשויות להפגין תסמינים כמו אטקסיה והטיית ראש, במיוחד בחיות מדוכאות חיסון (איור 3A). בנוסף, ניתן להבחין בהתנהגות מעגלית בבעלי חיים עם גידולים בגזע המוח, במיוחד בזני NSG או NOD/SCID. התקדמות התסמינים הנוירולוגיים עולה בקנה אחד עם ירידה הדרגתית במשקל. אמצעים נאותים לאחר הטיפול, כגון אספקת בקבוקי מים עם חרירים ארוכים או הצעת מזון רך (כדורי מזון רטובים) או זרעים, חיוניים לתמיכה ברווחת בעלי החיים. עם הגעה לנקודת הסיום של הניסוי והמתת החסד ההומאנית של החיות, שינויים פוטנציאליים במוח עשויים להתגלות, כולל הגדלה באתר ההזרקה ו/או נוכחות של אזורים דימומים (איור 3B).
גרפים של קפלן-מאייר משמשים בדרך כלל כדי לתאר את תוצאות ההישרדות של מודלים של בעלי חיים של גידולי מוח. הם מציעים תיאור חזותי של הסתברות ההישרדות לאורך זמן לאחר הזרקה תוך גולגולתית או טיפולים אנטי סרטניים. גרפים אלה משמשים ככלים חיוניים לניתוח והצגה של נתוני הישרדות במסגרות מחקר פרה-קליניות15,27. ביצענו זריקות תוך גולגולתיות של תרבית תאי מדולובלסטומה D425 בצפיפות תאים משתנה במוח הקטן. כל בעלי החיים שהוזרקו תוך גולגולת פיתחו גידולים. התוצאות שלנו הצביעו על כך שצפיפות תאים גבוהה יותר, במיוחד 50,000 ו-100,000 תאים לעכבר, הושתלו מהר יותר מ-10,000 תאים לעכבר (איור 4). יתר על כן, הזרקנו תוך גולגולת תאי גליומה בדרגה גבוהה (HGG) שמקורם בחולה לקליפת המוח ולגזע המוח כדי להשוות את ההישרדות הכוללת ואת דפוס צמיחת הגידול, כמו גם תכונות אימונוהיסטוכימיות, במיקומים שונים אלה. ללא קשר למיקום, לכל בעלי החיים הוזרקו גידולים שפותחו תוך גולגולת. התרבות של תאי HGG בוצעה בהתאם לפרוטוקול המפורט בשלבים 1.1 עד 1.10. הכנת התאים להזרקה תוך גולגולתית בוצעה כמתואר בשלבים 2.1 עד 2.6, בעוד שהליך ההזרקה התוך גולגולתית דבק בשיטה המתוארת בשלבים 4.1 עד 4.1627. כאשר הוזרקו לקליפת המוח, תאי HGG הראו הישרדות חציונית של כ-25 יום לאחר הזרקה תוך גולגולתית (איור 5A). בעלי החיים נוטרו כמתואר בשלבים 5.1 עד 5.4. בעלי חיים אלה לא הראו תסמינים נוירולוגיים כלשהם אך הראו ירידה מתקדמת במשקל. בעלי חיים הומתו באופן הומני עם הגעתם לנקודת הקצה ההומאנית המתוארת בשלב 5.5. המוחות נאספו בהתאם לפרוטוקול המפורט בשלבים 6.1 עד 6.5 ונשלחו לניתוח נוסף27. ניתוח אימונוהיסטוכימי חשף מסת גידול גדולה ובעלת גרעין גבוה עם עדות לכלי דם מוגברים (איור 5B) ותאי Ki67 מתרבים רבים (איור 5C). כאשר הוזרקו לגזע המוח, תאי HGG הראו הישרדות חציונית של כ-26 ימים לאחר ההזרקה התוך גולגולתית (איור 5D). ניתוח אימונוהיסטוכימי הצביע על מסת גידול גדולה באזור החדר הרביעי/פונס העליון, כמו גם חדירת לפטומנינגיאלית לחדר הצדדי (איור 5E). ניתוח אימונוהיסטוכימי נוסף הצביע על תאים מתרבים רבים בגזע המוח ובאזורים אחרים שחדרו אליהם (איור 5F). ניסוי זה מדגיש כי הזרקת אותם תאי גידול למיקומים אנטומיים שונים אינה משפיעה על קצב גדילת הגידול, אם כי נצפים כמה הבדלים בדפוס הגידול.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67349/67349fig1.jpg"> 
איור 1: תמונות מייצגות של המערך הסטריאוטקסי להזרקה תוך גולגולתית של תאי גידול במוח. (A) מנגנון ההרדמה ממוקם בדרך כלל ליד מכסה המנוע של BSC, מה שמחייב מתן כפול של הרדמה הן לתא האינדוקציה והן למנגנון הסטריאוטקסי. (ב) תחנת שטיפת מיקרו-מזרק מזכוכית ומחזיק סטריאוטקסי; המזרק דורש שטיפה במי מלח, אתנול ולאחר מכן מים לאחר כל הזרקה תוך גולגולתית. (C) מערך סטריאוטקסי בתוך מכסה המנוע של BSC, הממחיש את תא ההרדמה, מכונת הקידוח, המכשיר הסטריאוטקסי, קונסולת הקואורדינטות הסטריאוטקסית, קצות הכותנה, אזמל, פינצטה, פיפטה וקצוות. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67349/67349fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67349/67349fig2.jpg"> 
איור 2: תמונות מייצגות של הזרקה תוך גולגולתית המבוצעת על עכבר מדוכא חיסון. (A) בעל חיים מורדם הממוקם בקונוס הרדמה. (B) חתך בעור ואחריו אבטחת העור לכל צד באמצעות מוטות אוזניים. (C) מיקרו-מזרק זכוכית הממוקם על גבי החור הקדוח להזרקה. (D) העור יוצר סגנון מוהוק לאחר ההדבקה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67349/67349fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67349/67349fig3.jpg"> 
איור 3: תסמינים נוירולוגיים פוטנציאליים שנצפו לאחר השתלה של תאי גידול במוח. (A) בעל חיים המציג הטיית ראש בעקבות הזרקה תוך גולגולתית של תאי DMG בגזע המוח. (B) הגדלה של ההמיספרה הימנית של קליפת המוח כאשר צד ההזרקה חושף היווצרות גידול. לחיה הוזרקו תאי אפנדימומה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67349/67349fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67349/67349fig4.jpg"> 
איור 4: השתלה של תרבית המדולובלסטומה D425 בצפיפות תאים שונה. תאי מדולובלסטומה הוזרקו תוך גולגולתית באמצעות ציוד סטריאוטקסי בצפיפות של 10,000 תאים ב-2 מיקרוליטר של הידרוג'ל ECM, 50,000 תאים ו-100,000 תאים. בעלי חיים היו במעקב אחר ירידה מתקדמת במשקל והורדמו באופן אנושי ברגע שהגיעו ל-20% מתחת למשקל הגבוה ביותר שתועד שלהם. ההישרדות החציונית של בעלי חיים שהוזרקו עם 10,000 תאים הייתה 29 ימים, בעוד שההישרדות החציונית עבור אלה שהוזרקו עם צפיפות תאים גבוהה יותר של 50,000 ו-100,000 תאים הייתה 17.5 ימים ו-15 ימים, בהתאמה. כל בעלי החיים שהוזרקו במחקר זה פיתחו בהצלחה גידולים. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67349/67349fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67349/67349fig5v2.jpg"> 
איור 5: עקומות הישרדות מייצגות וניתוח היסטולוגי של חיות NSG שהוזרקו תוך גולגולת עם תאי HGG בקליפת המוח ובגזע המוח. כ-100,000 תאי HGG (מעבר 3) הוזרקו ל-2 מיקרוליטר של הידרוג'ל ECM באמצעות ציוד סטריאוטקסי. בעלי חיים היו במעקב אחר ירידה מתקדמת במשקל והורדמו באופן אנושי ברגע שהגיעו ל-20% מתחת למשקל הגבוה ביותר שתועד שלהם. לא נצפו תסמינים נוירולוגיים עבור תת-סוג זה של גידול מוח. (A) ההישרדות החציונית של חיות עם תאי HGG שהוזרקו לקליפת המוח היא כ-25 ימים לאחר ההזרקה (N=2). (B) צביעת H&amp;E של קליפת המוח מראה אזור בעל גרעין גבוה עם כלי דם מוגברים, שמסומן על ידי נוכחות של תאי דם אדומים. (C) האזור המושתל בגידול בקליפת המוח מציג רמה גבוהה של תאים מתרבים, כפי שמוצג על ידי צביעת KI67. (D) ההישרדות החציונית של חיות עם תאי HGG שהוזרקו לגזע המוח היא כ-26 ימים לאחר ההזרקה (N=2). כל בעלי החיים שהוזרקו במחקר זה פיתחו בהצלחה גידולים. (E) צביעת H&amp;E של גזע המוח מראה אזור בעל גרעין גבוה עם חדירת גידול שנצפתה בלפטומנינגים בחדר הצדדי. (F) האזור המושתל בגידול בגזע המוח מציג רמה גבוהה של תאים מתרבים, כפי שמוצג על ידי צביעת KI67. פס קנה המידה השחור בתמונות הראשיות מציין 2 מ"מ, בעוד שהתמונות המוגדלות מציינות 20 מיקרומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67349/67349fig5v2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
טבלה משלימה 1: טופס ניטור המשמש לבדיקת זריקות פוסט-גולגולתיות של בעלי חיים וטיפול פוטנציאלי בתרופות אנטי-סרטניות. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67349/Supplementary%20Table%201_RE.xlsx" target="_blank">אנא לחץ כאן להורדת טבלה זו.</a>

The development of clinically relevant and reliable models for central nervous system (CNS) tumors has been pivotal in advancing the field of ...

establishment-orthotopic-patient-derived-xenograft-models-for-brain

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

בלוציפראז, שונה אדם xenografts גידול במוח ניתן לקבוע intracranially בעכברים athymic, עם ניטור הבאים של הגידול ואת התגובה לטיפול באמצעות הדמיה פליטת אור. בשילוב עם ניתוח הישרדות, ניטור פליטת אור הוא כלי מחקר הכרחי לצורך בדיקות טרום קליניים של טיפולים נשקלת לטיפול בגידולים במוח.

הקמת גידול תוך גולגולתי xenografts המוח עם ניתוח בדיעבד של הגידול ואת התגובה לטיפול באמצעות הדמיה פליטת אור

מטרת מאמר זה היא לתאר את השימוש במודל גליובלסטומה orthotopic ללימודי chemoradiation. מאמר זה יהיה ללכת על פי עיבוד בתא, השתלה, והקרנות של העכבר באמצעות המודל תוך גולגולתי.

שילוב הקרנות של מודל העכבר Orthotopic המוח גידול

אנו מתארים שיטה משולבת להשתלה המדויקת, stereotactic של תאי multiforme glioblastoma אדם לתוך המוח של עכברים בעירום וסידורי...

השרשה ותוך גולגולת Stereotactic<em&gt; בחי</em&gt; הדמית bioluminescent של xenografts גידול במערכת מודל עכבר של multiforme glioblastoma

סרטון זה מדגים השתלה של תאי גידול במוח העכבר על ידי ביצוע הזרקה תוך גולגולתית.

מודל אורתוטופי תוך גולגולתי: הליך להשתלת תאים סרטניים במוח עכבר

גליומות ממאירות מהוות קבוצה הטרוגנית של ניאופלסמות גליה מסתננות מאוד עם תכונות קליניות ומולקולריות מובהקות. קסנוגרפטים אורתוטופיים ראשוניים מסכמים מחדש את התכונות ההיסטופתולוגיות והמולקולריות של תת-סוגים ממאירים של גליומה במודלים פרה-קוליניים של בעלי חיים.

גליומה אורתוטופית ראשונית קסנוגרפטים recapitulate צמיחה הסתננות איזוציטראט דהידרוגנאז אני מוטציה

הקמנו מודל גליובלסטומה orthotopic קליפת המוח בעכברים לשני הפוטונים במיקרוסקופ intravital שמשחזר אילוצי biophysical בדרך כלל במשחק במהלך הצמיחה של הגידול. חלון זכוכית כרוני החלפת הגולגולת מעל לגידול מאפשר המעקב של התקדמות הגידול לאורך זמן על ידי שני פוטונים במיקרוסקופ.

Glioblastoma עכבר דגם orthotopic שמירה על אילוצי המוח של רקמת ריאה, פיסיים ומתאים לשני פוטונים במיקרוסקופ Intravital

המוח הוא אתר ייחודי עם איכויות שאינם מיוצגות היטב על ידי במבחנה או ניתוחים מחוץ לרחם. מודלים עכבר orthotopic עם מאפייני מיקום וצמיחה לשחזור ניתן ליצור באופן אמין עם זריקות תוך גולגולתי באמצעות מכשיר קיבוע stereotaxic ומשאבת מזרק בלחץ נמוך.

יצירה אנטומית מדויק והשחזור תוך גולגולת xenografts של גידולים במוח אדם

כאן, אנו מציגים את פרוטוקול על ההכנה ועל המינהל stereotaxic של לימפוציטים אנושיים allogeneic בעכברים immunodeficient נושאת גידולים במוח העיקרי אנושי orthotopic. מחקר זה מספק הוכחה-של-קונספט הכדאיות והן את היעילות antitumor של המועבר intrabrain immunotherapies הסלולר.

העברת סטיאוטטי המאמצת של תאים חיסוניים ציטוטוקסיות במודלים מאתר של האדם Orthotopic גליובלסטומה Xenografts

גרורות במערכת העצבים המרכזית מודלים PDX מייצגים את המאפיינים הפנוטיפיים והמולקולריים של גרורות אנושיות, מה שהופך אותם למודלים מצוינים למחקרים פרה-קליניים. מתואר כאן כיצד לבסס מודלים PDX ואת מסלולי החיסון המשמשים בצורה הטובה ביותר למחקרים פרה-קליניים.

הקמה וניצול של מודלים Xenograft נגזר המטופל של גרורות במערכת העצבים המרכזית

במאמר זה אנו מתארים מודל עכבר אורתוטופי פרה-קליני עבור GBM, שהוקם על ידי הזרקה תוך-גולגולתית של תאים שמקורם בגידולי מודל עכבר מהונדסים גנטית. מודל זה מציג את סימני ההיכר של המחלה של GBM אנושי. עבור מחקרים תרגומיים, הגידול במוח העכבר נמצא במעקב על ידי MRI in vivo והיסטופתולוגיה.

מודלים אורתוטופיים תרגומיים של גליובלסטומה מולטיפורמה

מטרת פרוטוקול זה היא לספק לחוקרים טכניקה שניתנת לשחזור גבוה להשתלות תוך-גולגולתיות.

השתלה תוך-גולגולתית סטריאוטקטית של גליובלסטומה קווי תאי זנוגרפט שמקורם בחולה בעכברים

למד כיצד להקים מודלים אורתוטופיים של קסנוגרפט ממקור חולה לגידולי מוח אגרסיביים בילדים באמצעות מכשיר סטריאוטקסי. שיטה זו מאפשרת חקר התנהגות הגידול ופיתוח טיפולים יעילים יותר.

הקמת מודלים אורתוטופיים של קסנוגרפט שמקורם בחולה לגידולי מוח באמצעות מכשיר סטריאוטקסי

גלה סרטונים נוספים