Name: בדיקה כמותית מבוססת PCR למדידת איתות קיפוד קולי במודל תאי של Ciliogenesis (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-31T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: למד שיטת PCR כמותית לבדיקת איתות Sonic Hedgehog בתאים בעלי ריסונים ראשוניים. פרוטוקול זה מאפשר הערכה רגישה של שינויים גנטיים ואפיגנטיים הקשורים בתפקוד לקוי של הריסונים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Nigg, E. A., Raff, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Centrioles%2C+centrosomes%2C+and+cilia+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Centrioles, centrosomes, and cilia in health and disease.</a> Cell. 139 (4), 663-678 (2009).</li>
<li>Halder, P., Khatun, S., Majumder, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Freeing+the+brake%3A+Proliferation+needs+primary+cilium+to+disassemble%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biosci%22%5BJournal%5D)">Freeing the brake: Proliferation needs primary cilium to disassemble.</a> J Biosci. 45, 117(2020).</li>
<li>Eguether, T., Cordelieres, F. P., Pazour, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraflagellar+transport+is+deeply+integrated+in+hedgehog+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">Intraflagellar transport is deeply integrated in hedgehog signaling.</a> Mol Biol Cell. 29 (10), 1178-1189 (2018).</li>
<li>Ishikawa, H., Marshall, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraflagellar+transport+and+ciliary+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Biol%22%5BJournal%5D)">Intraflagellar transport and ciliary dynamics.</a> Cold Spring Harb Perspect Biol. 9 (3), a021998(2017).</li>
<li>Hildebrandt, F., Benzing, T., Katsanis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ciliopathies%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Ciliopathies.</a> N Engl J Med. 364 (16), 1533-1543 (2011).</li>
<li>Reiter, J. F., Leroux, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genes+and+molecular+pathways+underpinning+ciliopathies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Genes and molecular pathways underpinning ciliopathies.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 18 (9), 533-547 (2017).</li>
<li>Hilgendorf, K. I., Myers, B. R., Reiter, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+mechanistic+understanding+of+cilia+function+in+cellular+signalling%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Emerging mechanistic understanding of cilia function in cellular signalling.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 25 (7), 555-573 (2024).</li>
<li>Bansal, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hedgehog+pathway+activation+alters+ciliary+signaling+in+primary+hypothalamic+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Hedgehog pathway activation alters ciliary signaling in primary hypothalamic cultures.</a> Front Cell Neurosci. 13, 266(2019).</li>
<li>Gigante, E. D., Caspary, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signaling+in+the+primary+cilium+through+the+lens+of+the+hedgehog+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdiscip+Rev+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Signaling in the primary cilium through the lens of the hedgehog pathway.</a> Wiley Interdiscip Rev Dev Biol. 9 (6), e377(2020).</li>
<li>Anvarian, Z., Mykytyn, K., Mukhopadhyay, S., Pedersen, L. B., Christensen, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+signalling+by+primary+cilia+in+development%2C+organ+function+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Cellular signalling by primary cilia in development, organ function and disease.</a> Nat Rev Nephrol. 15 (4), 199-219 (2019).</li>
<li>Bangs, F., Anderson, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+cilia+and+mammalian+hedgehog+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Biol%22%5BJournal%5D)">Primary cilia and mammalian hedgehog signaling.</a> Cold Spring Harb Perspect Biol. 9 (5), a028175(2017).</li>
<li>Brown, J. M., Witman, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cilia+and+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Bioscience%22%5BJournal%5D)">Cilia and diseases.</a> Bioscience. 64 (12), 1126-1137 (2014).</li>
<li>Hanaki, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alstrom+syndrome%3A+A+review+focusing+on+its+diverse+clinical+manifestations+and+their+etiology+as+a+ciliopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Yonago+Acta+Med%22%5BJournal%5D)">Alstrom syndrome: A review focusing on its diverse clinical manifestations and their etiology as a ciliopathy.</a> Yonago Acta Med. 67 (2), 93-99 (2024).</li>
<li>Merrill, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ciliary+abnormalities+due+to+defects+in+the+retrograde+transport+protein+dync2h1+in+short-rib+polydactyly+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">Ciliary abnormalities due to defects in the retrograde transport protein dync2h1 in short-rib polydactyly syndrome.</a> Am J Hum Genet. 84 (4), 542-549 (2009).</li>
<li>Dagoneau, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dync2h1+mutations+cause+asphyxiating+thoracic+dystrophy+and+short+rib-polydactyly+syndrome%2C+type+iii%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">Dync2h1 mutations cause asphyxiating thoracic dystrophy and short rib-polydactyly syndrome, type iii.</a> Am J Hum Genet. 84 (5), 706-711 (2009).</li>
<li>Majumder, S., Fisk, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vdac3+and+mps1+negatively+regulate+ciliogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Cycle%22%5BJournal%5D)">Vdac3 and mps1 negatively regulate ciliogenesis.</a> Cell Cycle. 12 (5), 849-858 (2013).</li>
<li>Briscoe, J., Therond, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mechanisms+of+hedgehog+signalling+and+its+roles+in+development+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The mechanisms of hedgehog signalling and its roles in development and disease.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 14 (7), 416-429 (2013).</li>
<li>Placzek, M., Briscoe, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sonic+hedgehog+in+vertebrate+neural+tube+development%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Sonic hedgehog in vertebrate neural tube development.</a> Int J Dev Biol. 62 (1-2-3), 225-234 (2018).</li>
<li>Wong, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+cilia+can+both+mediate+and+suppress+hedgehog+pathway-dependent+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Primary cilia can both mediate and suppress hedgehog pathway-dependent tumorigenesis.</a> Nat Med. 15 (9), 1055-1061 (2009).</li>
<li>Deshpande, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smoothened+stimulation+by+membrane+sterols+drives+hedgehog+pathway+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Smoothened stimulation by membrane sterols drives hedgehog pathway activity.</a> Nature. 571 (7764), 284-288 (2019).</li>
<li>Mukhopadhyay, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ciliary+g-protein-coupled+receptor+gpr161+negatively+regulates+the+sonic+hedgehog+pathway+via+camp+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The ciliary g-protein-coupled receptor gpr161 negatively regulates the sonic hedgehog pathway via camp signaling.</a> Cell. 152 (1-2), 210-223 (2013).</li>
<li>Niewiadomski, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gli+protein+activity+is+controlled+by+multisite+phosphorylation+in+vertebrate+hedgehog+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Gli protein activity is controlled by multisite phosphorylation in vertebrate hedgehog signaling.</a> Cell Rep. 6 (1), 168-181 (2014).</li>
<li>Kovacs, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beta-arrestin-mediated+localization+of+smoothened+to+the+primary+cilium%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Beta-arrestin-mediated localization of smoothened to the primary cilium.</a> Science. 320 (5884), 1777-1781 (2008).</li>
<li>He, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+kinesin-4+protein+kif7+regulates+mammalian+hedgehog+signalling+by+organizing+the+cilium+tip+compartment%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The kinesin-4 protein kif7 regulates mammalian hedgehog signalling by organizing the cilium tip compartment.</a> Nat Cell Biol. 16 (7), 663-672 (2014).</li>
<li>Wen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetics+of+hedgehog-dependent+full-length+gli3+accumulation+in+primary+cilia+and+subsequent+degradation%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Kinetics of hedgehog-dependent full-length gli3 accumulation in primary cilia and subsequent degradation.</a> Mol Cell Biol. 30 (8), 1910-1922 (2010).</li>
<li>Griffiths, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hedgehog-interacting+protein+is+a+multimodal+antagonist+of+hedgehog+signalling%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Hedgehog-interacting protein is a multimodal antagonist of hedgehog signalling.</a> Nat Commun. 12 (1), 7171(2021).</li>
<li>Gomez, A. E., Christman, A. K., Van De Weghe, J. C., Finn, M., Doherty, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+analysis+of+cilia+characteristics+and+hedgehog+signaling+in+five+immortal+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Systematic analysis of cilia characteristics and hedgehog signaling in five immortal cell lines.</a> PLoS One. 17 (12), e0266433(2022).</li>
<li>Schmidt, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+cilia+and+shh+signaling+impairments+in+human+and+mouse+models+of+parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Primary cilia and shh signaling impairments in human and mouse models of parkinson's disease.</a> Nat Commun. 13 (1), 4819(2022).</li>
<li>Dutta, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increase+in+primary+cilia+number+and+length+upon+vdac1+depletion+contributes+to+attenuated+proliferation+of+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Increase in primary cilia number and length upon vdac1 depletion contributes to attenuated proliferation of cancer cells.</a> Exp Cell Res. 429 (2), 113671(2023).</li>
<li>De, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperphosphorylation+of+cdh1+in+glioblastoma+cancer+stem+cells+attenuates+apc%2Fc%28cdh1%29+activity+and+pharmacologic+inhibition+of+apc%2Fc%28cdh1%2Fcdc20%29+compromises+viability%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Hyperphosphorylation of cdh1 in glioblastoma cancer stem cells attenuates apc/c(cdh1) activity and pharmacologic inhibition of apc/c(cdh1/cdc20) compromises viability.</a> Mol Cancer Res. 17 (7), 1519-1530 (2019).</li>
<li>Yang, S., Zheng, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+immunofluorescence-based+detection+of+hedgehog+pathway+components+in+primary+cilia+of+cultured+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">The immunofluorescence-based detection of hedgehog pathway components in primary cilia of cultured cells.</a> Methods Mol Biol. 2374, 89-94 (2022).</li>
<li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mir-669a-5p%2Fg3bp%2Fhdac6%2Fakap12+axis+regulates+primary+cilia+length%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Sci+%28Weinh%29%22%5BJournal%5D)">The mir-669a-5p/g3bp/hdac6/akap12 axis regulates primary cilia length.</a> Adv Sci (Weinh). 11 (6), e2305068(2024).</li>
<li>Alanazi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identifying+the+roles+of+mir-17+in+ciliogenesis+and+cell+cycle%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Identifying the roles of mir-17 in ciliogenesis and cell cycle.</a> Front Cell Dev Biol. 12, 1397931(2024).</li>
<li>Bustin, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+miqe+guidelines%3A+Minimum+information+for+publication+of+quantitative+real-time+pcr+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chem%22%5BJournal%5D)">The miqe guidelines: Minimum information for publication of quantitative real-time pcr experiments.</a> Clin Chem. 55 (4), 611-622 (2009).</li>
</ol>

<table><tbody><tr>DMSO, חמור <td>סיגמא</td><td>D2650</td><td></td> <td>מסונן סטרילי</td></tr><tr><td>, IgG נגד עכבר (H+L) Alexa Fluor 488</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A21202</td><td></td></tr><tr><td>חמור, IgG נגד ארנב (H+L) Alexa Fluor 568</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A10042</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>41965039</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת מלח חוצצת פוספט של Dulbecco (DPBS)</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>14190144</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי (FBS)</td><td>Himedia</td><td>RM1112</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ פלואורסצנטי מצויד ב-60X</td><td>אובייקטיבי Carl Zeiss&nbsp;</td><td></td><td>Axio observer colibri 5</td></tr><tr><td>תאי hTERT-RPE1</td><td>ATCC</td><td>CRL-4000</td><td></td></tr><tr><td>iScript cDNA ערכת סינתזה</td><td>Bio-Rad Laboratories</td><td>1708891</td><td></td></tr><tr><td>עכבר, נוגדן טובולין חד שבטי נגד אצטילציה</td><td>Milipore Sigma-Aldrich</td><td>T7451</td><td>דילול סופי 1:1000</td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומיצין, 100X</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>מכונת PCR Quantitaive, CFX 96</td><td>Bio-Rad Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rabbit, נוגדן Arl13B פוליקלונלי</td><td>ProteinTech</td><td>17711-1-AP</td><td>דילול סופי 1:250</td></tr><tr><td>ארנב, נוגדן Cep135 רב-שבטי</td><td>ProteinTech</td><td>24428-1-AP</td><td>דילול סופי 1:500</td></tr><tr><td>SlowFade זהב נוגדן</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>S36940</td><td></td></tr><tr><td>מוחלק אגוניסט (SAG)&nbsp;</td><td>Abmole</td><td>M4865</td><td>פתרון מלאי: ב-DMSO, 5 מ"מ</td></tr><tr><td>SsoAdvanced אוניברסלי SYBR Green Supermix</td><td>Bio-Rad Laboratories</td><td></td> 1725271-TRIzol <td></td></tr><tr><td>Reagent</td><td>Invitrogen</td><td></td> 15596026-TrypLE <td></td></tr><tr><td></td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>12605028</td><td></td></tr></tbody></table>

בדיקה כמותית מבוססת pcr למדידת איתות קיפוד קולי במודל תאי של ciliogenesis

Quantitative PCR-based Assay to Measure Sonic Hedgehog Signaling in Cellular Model of Ciliogenesis

הפעלת מסלול העברת אותות SHH בתיווך PC היא דרך להבין את התפקוד התקין של PC7. כאן, הביטוי היחסי של גני המטרה של מסלול SHH נמדד באמצעות בדיקת RT-qPCR עם הפעלה מתווכת SAG של מסלול SHH בתאי RPE1 שרובם ריסניים. תפוקות השעתוק הישירות של מסלול SHH GLI1 ו-PTCH1 משמשות לעתים קרובות כדי לאמוד את הפעילות של מסלול זה11. פרוטוקול זה כולל גם את תעתיק HHIP, המווסת על ידי מסלול SHH. מכיוון ש-SMO אינו מטרה ישירה של מסלול SHH, רמת התעתיק של SMO לא אמורה להשתנות עם הפעלת מסלול SHH ולכן משמשת כ...

בדיקה כמותית מבוססת PCR למדידת איתות קיפוד קולי במודל תאי של Ciliogenesis

Ciliopathy refers to a collection of multisystemic and polygenic human diseases and disorders that arise due to aberration of structure or function of ...

quantitative-pcr-based-assay-to-measure-sonic-hedgehog-signaling

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

אנו מתארים את השימוש assay ES תא העכבר מבוסס לזהות חלונות זמן קריטי עבור Wnt / β-catenin והפעלה BMP אות במהלך אינדוקציה קרדיוגני. השיטה מספקת פלטפורמה סטנדרטית אשר מכמת אמין יעילות קרדיוגני, וזה החלים על המחקר של שושלות תאים אחרים.

השתנה עכבר תא גזע עובריים Assay מבוסס על כימות יעילות אינדוקציה קרדיוגני

ניתוח רקמות ספציפית של מודל התחדשות זקיקי שיער באמצעות lentivirus לתווך רווח או פסד--of-פונקציה.

ניתוח גנטי מהיר של איתות אפיתל-mesenchymal במהלך התחדשות שיער

כתב היד כאן מספקת מערכת פשוטה של שיטות לניתוח ההפרשה ודיפוזיה של ligands מתויג fluorescently ב Xenopus. זה מספק הקשר לבדיקת היכולת של חלבונים אחרים לשנות הפצת יגנד ומאפשר ניסויים שעשויות לתת תובנה מנגנוני ויסות הדרגתיים מורפוגן.

באמצעות ניתוח של Confocal<em&gt; Laevis Xenopus</em&gt; לחקירת מאפננים של עירובים מורפוגן Wnt וששש

ריסים ראשוניים משפיעים על מסלולי איתות שונים. שבלול היונקים אידיאלי לבחינת איתות קוטביות תאים מישוריים (PCP). תפקוד לקוי של ריסים משפיע על צמיחת השבלול, דפוס התאים וכיוון תאי השערה, קריאות של PCP. מטרתנו היא לנתח איתות PCP בשבלול עכבר באמצעות ניתוח פנוטיפי, אימונוהיסטוכימיה ומיקרוסקופ אלקטרונים סורק.

הערכת פנוטיפים מישורים-Cell-קוטביות ב Ciliopathy עכבר Mutant שבלול

במאמר זה וידאו מפרט פשוטה במתודולוגיה vivo, שניתן להשתמש בהם כדי בשיטתיות וביעילות לאפיין מרכיבי מסלולי איתות מורכבות ורשתות רגולטוריות בעוברים חסרי חוליות רבים.

כוחה של פשטות: עובר קיפוד ים כמו<em&gt; ב Vivo</em&gt; מודלים התפתחותי לימוד Cell ל-תא קומפלקס אינטראקציות רשת איתות

יש לנו בהצלחה שנוצר שני מבחני המצע ספציפיים γ-secretase. שני מבחני מבוססת תא המובאת כאן נועדו לכמת פעילויות אנזימטיות γ-secretase דרך הפלט של גחלילית לוציפראז כתבים.

מדידה כמותית של חלבונים וγ Secretase-בתיווך קודמן עמילואיד, המחשוף דרגה ב מבוססת תא לוציפראז כתב Assay פלטפורמות

פרוטוקול לתרבות ומניפולציה של רקמת עובר עכבר על שבב microfluidic מסופק. על ידי החלת פולסים של אפננים מסלול, מערכת זו יכולה לשמש כדי לשלוט חיצונית תנודות איתות לחקירה פונקציונלית של סמיטוגנזה עכבר.

גישה מיקרופלואידיקה לחקירה פונקציונלית של איתות תנודות השולטות בסמיטוגנזה

אנו מציגים פרוטוקולים מפורטים ליצירה ואפיון של תאים גזע פלוריפוטנטיים דו-ממדיים ותלת-ממדיים המושרים על ידי בני אדם (hIPSC) מודלים מבוססי התפתחות ניאוקורטית, כמו גם מתודולוגיות משלימות המאפשרות ניתוח איכותי וכמותי של ביוגניזיס סיליום ראשוני (PC) ותפקוד.

מודלים מבוססי תאי גזע פלוריפוטנטיים דו-ממדיים ותלת-ממדיים אנושיים לניתוח מעורבות סיליום ראשוני במהלך התפתחות ניאוקורטיקלית

כאן, אנו מציגים פרוטוקול אלקטרופורציה במבחנה לשחזור עבור מניפולציה גנטית של מבשרי תאי גרגר המוח הקטן העיקרי (GCPs) כי הוא חסכוני, יעיל, קיימא. יתר על כן, פרוטוקול זה מדגים גם שיטה פשוטה למחקר מולקולרי של מסלולי איתות קיפוד תלויי ציליום ראשוניים בתאי GCP ראשוניים.

שיטת אלקטרופורמציה יעילה וחסכונית לחקר מסלולי איתות ראשוניים תלויי סיליום במבשר תאי הגרגיר

בתגובה חוטם הארכה או PER היא התנהגות טעם assay כי נעשה שימוש זבובים וכן דבורי דבש. כאשר חוטם הופך במגע עם חומר אטרקטיבי, לטוס מרחיב חוטם שלה לצרוך את החומר. פתרונות של סוכרים שונים הם אטרקטיביים מאוד לטוס.

תגובת חוטם הרחבה (PER) Assay ב תסיסנית

למד שיטת PCR כמותית לבדיקת איתות Sonic Hedgehog בתאים בעלי ריסונים ראשוניים. פרוטוקול זה מאפשר הערכה רגישה של שינויים גנטיים ואפיגנטיים הקשורים בתפקוד לקוי של הריסונים.

בדיקה כמותית מבוססת PCR למדידת איתות קיפוד קולי במודל תאי של Ciliogenesis

גלה סרטונים נוספים