Patch-Clamp Techniques for Single Endolysosomal Vesicle Analysis

Hsuan-Ti Wang; Cheng-Chang Chen

doi:10.3791/67519

טכניקות Patch-Clamp לניתוח שלפוחית אנדוליזוזומלית בודדת

JoVE Journal
Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biology

Patch-Clamp Techniques for Single Endolysosomal Vesicle Analysis

טכניקות Patch-Clamp לניתוח שלפוחית אנדוליזוזומלית בודדת

Full Text

1,224 Views

05:47 min

April 4, 2025

DOI: 10.3791/67519-v

Hsuan-Ti Wang¹, Cheng-Chang Chen^1,2

¹Clinical Laboratory Sciences and Medical Biotechnology, College of Medicine,National Taiwan University, ²Department of Laboratory Medicine,National Taiwan University Hospital

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

פרוטוקול זה מפרט שיטה למדידה ישירה של פעילות תעלות יונים על שלפוחיות תוך תאיות באמצעות מערכת מהדק טלאי אנדוליזוזומלי ידנית. אנו מדגימים את השיטה הכוללת הגדלת אנדוליזוזומים ובידוד ידני של שלפוחיות אלה. גישה זו מבטיחה שחוקרים יוכלו לשכפל וליישם במדויק את ההליך.

תאים אנדוליזומליים הם האברונים הקטנים ביותר בתאים. טכניקות אלקטרופיזיולוגיות מסורתיות אינן מסוגלות למדוד ישירות את שינויי המתח והזרם שלהן. טכניקת ה-patch-clamp של אנדוליזוזום מאפשרת הקלטות ישירות, מה שמאפשר לנו לחקור בעבר בתעלות היונים.

האתגר הניסויי העיקרי הוא שלא כל התרכובות מגדילות ביעילות את הליזוזומים. זיהוי תאים מתאימים הוא קשה, ואפילו עם ליזוזומים אידיאליים, הקלטה מוצלחת של תעלות יונים אינה מובטחת. פיתחנו את טכניקת מהדק האנדוליזוזום-טלאי המאפשרת הקלטות אלקטרופיזיולוגיות ישירות מהממברנות האנדוליזוזומליות.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos