Name: ניתוח פעילות תאי T אנושיים במסגרת תרבית משותפת אלוגנית של תאי גידול שטופלו מראש (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-07T13:40:00.000+00:00
Duration: 9 min 4 s
Description: למדו לנתח פעילות תאי T אנושיים במערכת תרבית משותפת אלוגנית עם תאי גידול שטופלו מראש בקרינה ומעכבי קינאז. שיטה זו מאפשרת הערכת התפשטות תאי T ומציגי שטח באמצעות ציטומטריית זרימה לחקר תגובות חיסוניות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Hiam-Galvez, K. J., Allen, B. M., Spitzer, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+immunity+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Systemic immunity in cancer.</a> Nat Rev Cancer. 21 (6), 345-359 (2021).</li>
<li>Mantovani, A., Allavena, P., Marchesi, F., Garlanda, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+as+tools+and+targets+in+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Macrophages as tools and targets in cancer therapy.</a> Nat Rev Drug Discov. 21 (11), 799-820 (2022).</li>
<li>Waldman, A. D., Fritz, J. M., Lenardo, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+guide+to+cancer+immunotherapy%3A+From+t+cell+basic+science+to+clinical+practice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">A guide to cancer immunotherapy: From t cell basic science to clinical practice.</a> Nat Rev Immunol. 20 (11), 651-668 (2020).</li>
<li>Dunn, G. P., Old, L. J., Schreiber, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+immunobiology+of+cancer+immunosurveillance+and+immunoediting%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">The immunobiology of cancer immunosurveillance and immunoediting.</a> Immunity. 21 (2), 137-148 (2004).</li>
<li>Mittal, D., Gubin, M. M., Schreiber, R. D., Smyth, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+into+cancer+immunoediting+and+its+three+component+phases--elimination%2C+equilibrium+and+escape%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Immunol%22%5BJournal%5D)">New insights into cancer immunoediting and its three component phases--elimination, equilibrium and escape.</a> Curr Opin Immunol. 27, 6-25 (2014).</li>
<li>Irianto, T., Gaipl, U. S., Ruckert, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+modulation+during+anti-cancer+radio%28immuno%29therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Rev+Cell+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Immune modulation during anti-cancer radio(immuno)therapy.</a> Int Rev Cell Mol Biol. 382, 239-277 (2024).</li>
<li>Burtness, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pembrolizumab+alone+or+with+chemotherapy+versus+cetuximab+with+chemotherapy+for+recurrent+or+metastatic+squamous+cell+carcinoma+of+the+head+and+neck+%28keynote-048%29%3A+A+randomized%2C+open-label%2C+phase+3+study%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Pembrolizumab alone or with chemotherapy versus cetuximab with chemotherapy for recurrent or metastatic squamous cell carcinoma of the head and neck (keynote-048): A randomized, open-label, phase 3 study.</a> Lancet. 394 (10212), 1915-1928 (2019).</li>
<li>Hecht, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+and+efficacy+of+single+cycle+induction+treatment+with+cisplatin%2Fdocetaxel%2F+durvalumab%2Ftremelimumab+in+locally+advanced+HNSCC%3A+First+results+of+checkered-CD8%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunother+Cancer%22%5BJournal%5D)">Safety and efficacy of single cycle induction treatment with cisplatin/docetaxel/ durvalumab/tremelimumab in locally advanced HNSCC: First results of checkered-CD8.</a> J Immunother Cancer. 8 (2), e001378(2020).</li>
<li>Chen, J. A., Ma, W., Yuan, J., Li, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translational+biomarkers+and+rationale+strategies+to+overcome+resistance+to+immune+checkpoint+inhibitors+in+solid+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Treat+Res%22%5BJournal%5D)">Translational biomarkers and rationale strategies to overcome resistance to immune checkpoint inhibitors in solid tumors.</a> Cancer Treat Res. 180, 251-279 (2020).</li>
<li>Solomon, B., Young, R. J., Rischin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Head+and+neck+squamous+cell+carcinoma%3A+Genomics+and+emerging+biomarkers+for+immunomodulatory+cancer+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cancer+Biol%22%5BJournal%5D)">Head and neck squamous cell carcinoma: Genomics and emerging biomarkers for immunomodulatory cancer treatments.</a> Semin Cancer Biol. 52 (Pt 2), 228-240 (2018).</li>
<li>Meidenbauer, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+atm+or+atr+in+combination+with+hypo-fractionated+radiotherapy+leads+to+a+different+immunophenotype+on+transcript+and+protein+level+in+HNSCC%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">Inhibition of atm or atr in combination with hypo-fractionated radiotherapy leads to a different immunophenotype on transcript and protein level in HNSCC.</a> Front Oncol. 14, 1460150(2024).</li>
<li>Kumari, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunomodulatory+effects+of+radiotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Immunomodulatory effects of radiotherapy.</a> Int J Mol Sci. 21 (21), 8151(2020).</li>
<li>Wimmer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypofractionated+radiotherapy+upregulates+several+immune+checkpoint+molecules+in+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma+cells+independently+of+the+HPV+status+while+icos-l+is+upregulated+only+on+HPV-positive+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Hypofractionated radiotherapy upregulates several immune checkpoint molecules in head and neck squamous cell carcinoma cells independently of the HPV status while icos-l is upregulated only on HPV-positive cells.</a> Int J Mol Sci. 22 (17), 9114(2021).</li>
<li>Derer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemoradiation+increases+pd-l1+expression+in+certain+melanoma+and+glioblastoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Chemoradiation increases pd-l1 expression in certain melanoma and glioblastoma cells.</a> Front Immunol. 7, 610(2016).</li>
<li>Schatz, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normofractionated+irradiation+and+not+temozolomide+modulates+the+immunogenic+and+oncogenic+phenotype+of+human+glioblastoma+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Strahlenther+Onkol%22%5BJournal%5D)">Normofractionated irradiation and not temozolomide modulates the immunogenic and oncogenic phenotype of human glioblastoma cell lines.</a> Strahlenther Onkol. 199 (12), 1140-1151 (2023).</li>
<li>Xu, M. M., Pu, Y., Zhang, Y., Fu, Y. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+adaptive+immunity+in+the+efficacy+of+targeted+cancer+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Immunol%22%5BJournal%5D)">The role of adaptive immunity in the efficacy of targeted cancer therapies.</a> Trends Immunol. 37 (2), 141-153 (2016).</li>
<li>Olivo Pimentel, V., Yaromina, A., Marcus, D., Dubois, L. J., Lambin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+co-culture+assay+to+assess+anti-tumor+cd8%28%2B%29+t+cell+cytotoxicity+via+luminescence+and+multicolor+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">A novel co-culture assay to assess anti-tumor cd8(+) t cell cytotoxicity via luminescence and multicolor flow cytometry.</a> J Immunol Methods. 487, 112899(2020).</li>
<li>Kulp, M., Diehl, L., Bonig, H., Marschalek, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-culture+of+primary+human+t+cells+with+leukemia+cells+to+measure+regulatory+t+cell+expansion%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Co-culture of primary human t cells with leukemia cells to measure regulatory t cell expansion.</a> STAR Protoc. 3 (3), 101661(2022).</li>
<li>Ruckert, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+modulatory+effects+of+radiotherapy+as+basis+for+well-reasoned+radioimmunotherapies%5BTitle%5D)+AND+%22Strahlenther+Onkol%22%5BJournal%5D)">Immune modulatory effects of radiotherapy as basis for well-reasoned radioimmunotherapies.</a> Strahlenther Onkol. 194 (6), 509-519 (2018).</li>
<li>Samstein, R. M., Riaz, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+DNA+damage+response+in+immunotherapy+and+radiation%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Radiat+Oncol%22%5BJournal%5D)">The DNA damage response in immunotherapy and radiation.</a> Adv Radiat Oncol. 3 (4), 527-533 (2018).</li>
<li>Meeren, A. V., Bertho, J. M., Vandamme, M., Gaugler, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ionizing+radiation+enhances+il-6+and+il-8+production+by+human+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mediators+Inflamm%22%5BJournal%5D)">Ionizing radiation enhances il-6 and il-8 production by human endothelial cells.</a> Mediators Inflamm. 6 (3), 185-193 (1997).</li>
<li>Zimmerman, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ifn-gamma+upregulates+survivin+and+ifi202+expression+to+induce+survival+and+proliferation+of+tumor-specific+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Ifn-gamma upregulates survivin and ifi202 expression to induce survival and proliferation of tumor-specific T cells.</a> PLoS One. 5 (11), e14076(2010).</li>
<li>Saraiva, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+HLA-dr+in+cytotoxic+t+lymphocytes%3A+A+validated+predictive+biomarker+and+a+potential+therapeutic+strategy+in+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Expression of HLA-dr in cytotoxic t lymphocytes: A validated predictive biomarker and a potential therapeutic strategy in breast cancer.</a> Cancers (Basel). 13 (15), (2021).</li>
<li>Dillon, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atr+inhibition+potentiates+the+radiation-induced+inflammatory+tumor+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Atr inhibition potentiates the radiation-induced inflammatory tumor microenvironment.</a> Clin Cancer Res. 25 (11), 3392-3403 (2019).</li>
<li>Geiger, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((L-Arginine+modulates+T+cell+metabolism+and+enhances+survival+and+anti-tumor+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">L-Arginine modulates T cell metabolism and enhances survival and anti-tumor activity.</a> Cell. 167 (3), 829-842.e13 (2016).</li>
<li>Rodriguez, P. C., Quiceno, D. G., Ochoa, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((L-Arginine+availability+regulates+t-lymphocyte+cell-cycle+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">L-Arginine availability regulates t-lymphocyte cell-cycle progression.</a> Blood. 109 (4), 1568-1573 (2007).</li>
<li>Lozano-Ojalvo, D., López-Fandiño, R., López-Expósito, I., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLozano-Ojalvo%2C+D+%22The+impact+of+food+bioactives+on+health%3A+In+vitro+and+ex+vivo+models%22">The impact of food bioactives on health: In vitro and ex vivo models</a>. Verhoeckx, K., et al. , Springer International Publishing. Cham. 169-180 (2015).</li>
<li>Gronholm, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+organoids+for+precision+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Patient-derived organoids for precision cancer immunotherapy.</a> Cancer Res. 81 (12), 3149-3155 (2021).</li>
<li>Perez, C., Gruber, I., Arber, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Off-the-shelf+allogeneic+t+cell+therapies+for+cancer%3A+Opportunities+and+challenges+using+naturally+occurring+%26%2334%3Buniversal%26%2334%3B+donor+t+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Off-the-shelf allogeneic t cell therapies for cancer: Opportunities and challenges using naturally occurring &#34;universal&#34; donor t cells.</a> Front Immunol. 11, 583716(2020).</li>
<li>Martinez Bedoya, D., Dutoit, D., Migliorini, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allogeneic+car+t+cells%3A+An+alternative+to+overcome+challenges+of+car+t+cell+therapy+in+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Allogeneic car t cells: An alternative to overcome challenges of car t cell therapy in glioblastoma.</a> Front Immunol. 12, 640082(2021).</li>
<li>Schnellhardt, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+prognostic+value+of+FOXP3%2B+tumor-infiltrating+lymphocytes+in+rectal+cancer+depends+on+immune+phenotypes+defined+by+CD8%2B+cytotoxic+T+cell+density%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">The prognostic value of FOXP3+ tumor-infiltrating lymphocytes in rectal cancer depends on immune phenotypes defined by CD8+ cytotoxic T cell density.</a> Front Immunol. 13, 781222(2022).</li>
<li>Zitvogel, L., Kroemer, G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWang%2C+W+%22Oncoimmunology%3A+A+practical+guide+for+cancer+immunotherapy%22">Oncoimmunology: A practical guide for cancer immunotherapy</a>. , Springer International Publishing. Cham. 23-39 (2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>15 מ"ל צינורות Cellstar</td><td>Greiner Bio-One GmbH</td><td>188271</td><td></td></tr><tr><td>50 מ"ל צינורות Cellstar</td><td>Greiner Bio-One GmbH</td><td>227261</td><td></td></tr><tr><td>6 בארות צלחת תרבית תאים סטרילית, עם מכסה</td><td>Greiner Bio-One GmbH</td><td>657160</td><td></td></tr><tr><td>96 באר צלחת תרבית תאים סטרילית, F-bottom, עם מכסה</td><td>Greiner Bio-One GmbH</td><td>655180</td><td></td></tr><tr><td>AZD0156</td><td>Selleck Chemicals GmbH</td><td>S8375</td><td></td></tr><tr><td>Berzosertib (VE-822)</td><td>Selleck Chemicals GmbH</td><td>S7102</td><td></td></tr><tr><td>CASYcups</td><td>OMNI Life Science GmbH & ק"ג&nbsp;</td><td></td><td></td>5651794</tr><tr><td>CASYton</td><td>OMNI Life Science GmbH & ק"ג&nbsp;</td><td></td><td></td>5651808</tr><tr><td>CD25a, PE-Dazzle594, עכבר IgG1</td><td>Biolegend</td><td>356126</td><td></td></tr><tr><td>CD28-UNLB</td><td>בקמן קולטר, בע"מ</td><td>IM1376</td><td></td></tr><tr><td>CD3a, קרום אורנג', עכבר IgG1</td><td>בקמן קולטר, בע"</td>מ<td>B00068</td><td></td></tr><tr><td>CD3e נוגדן חד שבטי</td><td>Thermo-Fisher Scientific, Inc.</td><td>MA1-10176</td><td></td></tr><tr><td>CD4, APC, עכבר אנטי אנושי IgG1</td><td>BD Pharmingen</td><td>555349</td><td></td></tr><tr><td>CD8 MicroBeads, Human</td><td>Miltenyi Biotec, Inc.</td><td>130-045-201</td><td></td></tr><tr><td>CD8a, PerCP-CY5.5, עכבר IgG1</td><td>Biolegend</td><td>300924</td><td></td></tr><tr><td>CellTracker צבע אדום עמוק</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>C34565</td><td></td></tr><tr><td>CFSE</td><td>&nbsp; Merck KGaA (סיגמא-אולדריץ')</td><td>21888</td><td></td></tr><tr><td>DMEM (Dulbecco&acute; s נשר שונה וחריף; s בינוני)</td> <td>PAN-Biotech GmbH</td><td>P04-02500</td><td></td></tr><tr><td>DxFlex Flow Cytometer (עם מעמיס אוטומטי)</td><td>בקמן קולטר, בע"מ.</td><td>C44326, C02846</td><td></td></tr><tr><td>EDTA דיסודיום מלח דיהידראט</td><td>Carl Roth GmbH + Co. KG</td><td>8043.2</td><td></td></tr><tr><td>FBS superior&nbsp;</td><td>&nbsp; Merck KGaA (סיגמא-אולדריץ')</td><td>S0615-500ML</td><td></td></tr><tr><td>FBS מעולה&nbsp;</td><td>&nbsp; Merck KGaA (סיגמא-אולדריץ')&nbsp;</td><td>S0615-100ML</td><td>לייצור FBS מומת חום. מחממים למשך 30 דקות בטמפרטורה של 56 מעלות; C עם ערבוב כדי לנטרל חלבונים משלימים.</td></tr><tr><td>Graph Pad Prism (גרסה מספר 9)</td><td></td><td>תוכנת</td><td></td> GraphPad-HLA-DR</tr><tr><td>, DP, DQ נוגדן, אנטי אנושי, APC-Vio770</td><td>Miltenyi Biotec, Inc.</td><td>130-123-550</td><td></td></tr><tr><td>Kaluza (מספר גרסה 2.1)</td><td>Beckmann Coulter, Inc.</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>L-ארגינין</td><td>Merck KGaA (סיגמא-אולדריץ')</td> <td>A8094-25G</td><td></td></tr><tr><td>L-ליזין-מונוהידרוכלוריד</td><td>Merck KGaA (סיגמא-אולדריץ')</td> <td>L5626-100G</td><td></td></tr><tr><td>MACS BSA פתרון מלאי</td><td>Miltenyi Biotec, Inc.</td><td>130-091-376</td><td></td></tr><tr><td>עמודי MS</td><td>Miltenyi Biotec, Inc.</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>לשכת הספירה המשופרת של נויבאואר</td><td>Paul Marienfeld GmbH & Co. KG&nbsp;</td><td>640010</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Merck KGaA (סיגמא-אולדריץ')</td> <td>D8537-500 מ"ל</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומיצין</td><td>תרמו-פישר סיינטיפיק, בע"מ</td><td>1514-122</td><td></td></tr><tr><td>ROTISep 1077</td><td>Carl Roth GmbH + Co. KG</td><td>0642.2</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640 Medium</td><td>Merck KGaA (Sigma-Aldrich)</td> <td>R1790</td><td></td></tr><tr><td>SepMate 50 מ"ל צינורות</td><td>Stemcell Technologies</td><td>85450</td><td></td></tr><tr><td>Trypan blue</td><td>Merck KGaA (Sigma-Aldrich)</td> <td>T6146-25G</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>Thermo-Fisher Scientific, Inc.</td><td></td><td></td>15400054</tr></tbody></table>

ניתוח פעילות תאי t אנושיים במסגרת תרבית משותפת אלוגנית של תאי גידול שטופלו מראש

Analysis of Human T Cell Activity in an Allogeneic Co-Culture Setting of Pre-Treated Tumor Cells

תאי גידול HSC4 שמקורם ב-HNSCC נזרעו והודגרו בן לילה. לאחר 24 שעות, התאים טופלו במעכב קינאז. לאחר 3 שעות, שתי המנות הראשונות של 5 Gy לכל שבריר הוחלו. לאחר 24 שעות, המנה השנייה הוחלה, והתאים הודגרו שוב למשך הלילה. במקביל, 48 שעות לפני תחילת התרבות המשותפת, בודדו תאי T מדמו של תורם בריא. ראשית, PBMCs בודדו באמצעות צינורות צנטריפוגה בשיפוע צפיפות ומדיום הפרדה סטרילי. PBMCs נספרו באמצעות תא ספירת תאים, ותאי CD8+ T בודדו באמצעות ערכת בידוד תאי CD8+ T. תאי CD8+ T מבודדים נצבעו לאחר מכן ב-CFSE (1 מיקרומטר) ולאחר מכן נספרו. תאי T נזרעו בלוחות באר מצופים מראש CD3 / CD28 בצפיפות של 1.5 x 106 תאים / 3 מ"ל. לאחר 48 שעות של גירוי, תאי ה-T נקצרו, נספרו והושעו מחדש בצפיפות של 10,000 תאים/10 מיקרוליטר. בנוסף, בארות מייצגות של תאי הגידול שנזרעו נקצרו ונספרו, והמדיום הוחלף בכל הבארות הנותרות. תאי T נוספו לתאי הגידול ביחס של 1:1. התרבית המשותפת נקצרה אחרי 96 שעות, הסופרנטנט אוחסן בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס, והתאים נצבעו ונמדדו על-ידי זרימה ציטומטרית (איור 1).
תאי T זוהו על ידי אי הכללת גודל וחיוביות CD3/CD8. CFSE של תאים חיוביים CD3+/CD8+ הראה התפלגות של תאי T שאינם מתרבים (אות CFSE גבוה) ותת-אוכלוסיות מובחנות של תאי T מתרבים (אובדן עוצמת אות CFSE). שיעור תאי ה-T המתרבים נמדד באופן מופתי עבור קו תאי HSC4 HNSCC (איור 4A). כל תאי ה-T שהראו לפחות חלוקה אחת הוגדרו כ"מתרבים". תאי T שהראו יותר מ-3 חלוקות הוגדרו כ"שגשוג גבוה" (איור 4B). עבור קו התאים השלילי ל-HPV HSC4, זוהתה עלייה קלה בקצב ההתפשטות כאשר תאי T טופחו יחד עם תאי גידול מוקרנים. RT ו-RT בתוספת עיכוב ATR הביאו לעלייה משמעותית בשגשוג תאי T רצופים בהשוואה לתרביות משותפות של תאי HSC4 שטופלו בעיכוב ATM עם תאי T. לגבי החלק ה"שגשוג ביותר" של תאי T, טיפול מקדים בתאי HSC4 עם RT בתוספת עיכוב ATR היה היעיל ביותר בגירוי התפשטות תאי T (איור 4B).
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67643/67643fig04v2.jpg"> 
איור 4: התפשטות של תאי T מוכתמים ב-CFSE לניתוחים של שינויים תלויי טיפול ב-HSC4 בשגשוג תאי T. (A) שיעור תאי T מתרבים לאחר 96 שעות של תרבית משותפת עם תאי גידול HSC4 שליליים ל-HPV שטופלו מראש. התפשטות תאי T הייתה נמוכה משמעותית לאחר תרבית משותפת עם RT+ATMi שטיפלה בתאי גידול HSC4 בהשוואה לטיפול ב-RT או RT בתוספת ATRi. (B) RT של תאי גידול HSC4 גרם לחלק גבוה יותר של תאי T מתרבים מאוד (יותר משלוש חלוקות תאים). לאחר תרבית משותפת של תאי גידול HSC4 שטופלו מראש ב-RT+ATRi עם תאי T, אחוז תאי ה-T המתרבים ביותר היה הגבוה ביותר. העמודות מציגות נתונים מארבעה ניסויים בלתי תלויים עם תאי T מארבעה תורמים עצמאיים ובריאים (n = 4; ממוצע ± SD). (*p≤ 0.05, **p≤ 0.01, ***p≤ 0.001, ****p≤ 0.0001; מובהקות סטטיסטית נבדקה על ידי השוואת כל תנאי הניסוי מול כל אחד מהם באמצעות Mann-Whitney-U דו-זנבי עבור נתונים שאינם מפוזרים באופן נורמלי). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67643/67643fig04largev2.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
ניתן להשתמש באובדן CFSE מבוסס התפשטות כדי לכמת את קצב התפשטות תאי T. יתר על כן, מספר סמנים על פני התא מתוארים כקשורים לפעילות תאי T, כגון CD25 ו-HLADR. לכן, בוצע ניתוח של CD25 ו-HLA-DR על פני השטח של כל תאי CD3+ ו-CD8+ T על ידי זרימה ציטומטרית (איור 5). ניתן לכמת את הביטויאם ניתן לזהות תת-אוכלוסיותגבוהות CD25 או HLA-DR מובהקות, וניתן להבחין ביניהם על ידי שער התאים החיוביים ביותר הללו (איור 3B). אם לא ניתן לזהות תת-אוכלוסיות מובהקות, ניתן למדוד את עוצמת הקרינה הממוצעת (MFI) של כל האוכלוסייה, ולכמת תזוזות מבוססות מצב של MFI (איור 3C).
לדוגמה, הביטוי שזוהה על ידי MFI של CD25 ו-HLA-DR נותח לאחר 96 שעות של תרבית משותפת עם תאי גידול HSC4 שטופלו מראש (איור 5). לאחר תרבית משותפת של תאי T עם תאי גידול HSC4 שטופלו ב-RT, הביטוי של CD25 על תאי T היה מווסת מאוד. יש לציין כי טיפול מקדים בתאי הגידול עם ATMi בלבד הביא לירידה משמעותית בביטוי של CD25 בהשוואה לטיפול מקדים ב-ATRi. בסביבה המשולבת עם RT, למרות ש-RT הביא לירידה בביטוי של CD25 בתאי T, השילוב של RT עם ATMi הביא לביטוי מוגבר של CD25 בהשוואה ל-RT בתוספת ATRi (איור 5A). לגבי הביטוי של HLA-DR על תאי T, RT הוביל בדרך כלל לוויסות מוגבר של HLA-DR, אך שוב, בשילוב עם ATMi או ATRi, נצפתה התנהגות שונה (איור 5B). תאי T בתרבית משותפת עם תאי HSC4 שטופלו מראש בשילוב של RT+ATRi הגדילו את הביטוי של HLA-DR בהשוואה ל-RT בלבד או RT+ATMi.
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67643/67643fig05v2.jpg"> 
איור 5: ביטוי סמני ההפעלה CD25 ו-HLA-DR על פני תאי T לאחר 96 שעות של תרבית משותפת עם תאי גידול HSC4 שטופלו מראש. הביטוי של CD25 ו-HLA-DR נותח על סמך השינוי של ה-MFI של כל אוכלוסיית תאי ה-T. RT של HSC4 הביא לירידה בביטוי של CD25 בתאי T ולביטוי מוגבר של HLA-DR. השילוב של RT עם ATMi הביא לדפוסי ביטוי שונים באופן משמעותי בהשוואה ל-RT פלוס ATRi. תרשימי הקופסה מציגים נתונים מארבעה ניסויים בלתי תלויים עם תאי T מארבעה תורמים עצמאיים ובריאים (n = 4; ממוצע ± SD). הנתונים נותחו על ידי השוואת כל תנאי הניסוי זה מול זה באמצעות מבחן Mann-Whitney-U דו-זנבי עבור נתונים שאינם מפוזרים באופן נורמלי (*p≤ 0.050). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67643/67643fig05largev2.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
נתונים אלה מצביעים באופן מופתי על כך שהטיפול בתאי גידול, במקרה זה של תאי HSC4 HNSCC, משפיע על האימונוגניות של תאי הגידול. ניתן לנטר זאת על ידי גידול משותף של תאי הגידול עם תאי T מגורים מראש, מה שמוביל להתנהגות התפשטות מגוונת וביטוי של סמני הפעלה על תאי T אנושיים בהתבסס על משטר הטיפול בתאי הגידול המיושם.

ניתוח פעילות תאי T אנושיים במסגרת תרבית משותפת אלוגנית של תאי גידול שטופלו מראש

Cytotoxic T cells play a key role in the elimination of tumor cells and are, therefore, intensively studied in cancer immunology. The frequency and ...

analysis-human-t-cell-activity-an-allogeneic-co-culture-setting-pre

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

אקס הרחבה vivo של גידול תאים T-reactive באמצעות 1/Ionomycin Bryostatin ואת גמא נפוצים שרשרת גיבוש ציטוקינים

מאמר זה מתאר טכניקה פשוטה לגרום alloantigen ספציפי anergy בבני אדם בתאי הדם ההיקפיים mononuclear. הטכניקה ניתן ליישם קלינית כדי ליצור אי - alloreactive תאים התורם. עירוי של תאים אלה יכול לשפר את הכינון מחדש החיסון ולהפחית רעילות לאחר השתלה אלוגנאית גזע hematopoietic התא.

אינדוקציה של Anergy Alloantigen ספציפיים בתוך האדם תאים דם היקפיים mononuclear על ידי גירוי Alloantigen עם המצור Co-גירוי אותות

Assay שחרור הכרום, assay משותף לאיתור פעילות תא T ציטוטוקסי, יש מספר מגבלות. השימוש באנטיגן ספציפי CD8 תאי T וקו האנושי של סרטן שד גידול, SKBR3, במאמר הנוכחי, גישה מבוססת עכבה נבדקה ליכולת של גילוי הרג תא.

קביעת פעילות ציטוטוקסית אופטימלית של CD8 תאי T ספציפי אדם Her2neu על ידי השוואת Assay שחרור Cr51 למערכת xCELLigence

סרטון זה מדגים בדיקת מבחנה לאימות פעילות תאי T של קולטן אנטיגן כימרי (CAR). תאי לימפומה של תאי B המבטאים אנטיגן CD19 ולוציפראז ציטופלזמי מיוצרים בתרבית משותפת עם תאי CAR T ספציפיים ל- CD19. קשירת CAR ל- CD19 על גידול גורמת לתאי CAR T לשחרר ציטוקינים ורעלים הגורמים לציטוטוקסיות של תאי הגידול. פעילות תאי CAR T מוערכת על ידי כימות הציטוקין המשתחרר וירידה ביולומינסנציה בתיווך לוציפראז בתאי הגידול.

בדיקת מבחנה להערכת הפעילות האנטי-סרטנית של תאי CAR T ספציפיים לגידול

מאמר זה מתאר שיטה ליצירה והתפשטות של שיבוטי תאי T אנושיים המגיבים באופן ספציפי לאלואנטיגן מוגדר. ניתן להתאים פרוטוקול זה לשיבוט תאי T אנושיים ספציפיים למגוון ליגנדים של פפטיד-MHC.

דור של תאי T האנושי Alloantigen ספציפיים מהדם היקפי

מאמר זה מתאר שיטה למדידת alloreactivity באוכלוסייה מעורבת של תאי T באמצעות זרימת הדמית cytometry.

מדידת T Cell Alloreactivity שימוש cytometry זרימה הדמיה

. הנה, עבור בידוד ואפיון של CD4 פרוטוקול+ T-cell קבוצות משנה של דם היקפיים אדם מתואר. לטהר CD4+ תאי-T הם נותחו על ידי cytometry זרימה כדי לקבוע את הפרופורציות של T-הזקיקים תא מסייע קבוצות משנה.

בידוד של CD4+ תאי-T וניתוח של מחזורי Helper T-הזקיקים (cTfh) קבוצות משנה תא מ באמצעות דם היקפיים של Cytometry זרימה 6-צבע

נתאר כאן פרוטוקול לחקור cytotoxicity של טרום הופעל CD8+ T תאים נגד תאים סרטניים על ידי גילוי אפופטוטיים להיפגע סרטן תאים באמצעות בזמן אמת מיקרוסקופ. פרוטוקול זה יכול לחקור מנגנונים מאחורי מיאלואידית הנוצרות על-ידי תאי T cell דיכוי והערכת תרכובות שמטרתה חידוש תאי T באמצעות המצור של תאים חיסוניים מיאלואידית מדכאים.

זיהוי בזמן אמת של הגידול Vitro תאים אפופטוזיס שנגזרות CD8+ T תאים ללמוד פונקציות החיסונית מדכא גידולים הסתננות התאים מיאלואידית

כאן נתאר שיטת הפריה תרבות משותפת כדי באופן רקורסיבי אתגר, ממוקדות גידול תאי T, המאפשר ניתוח פנוטיפי ופונקציונליים של פעילות antitumor תא T...

ב- Rechallenge תא הגידול חוץ גופית להערכה חזוי של Chimeric אנטיגן קולטן תא T פונקציה Antitumor

פרוטוקול זה מתאר את הדור כירורגי של גידולים הלבלב אורתודפית ואת העיכול המהיר של גידולים מבודדים מבודד מורטין הלבלב. לאחר העיכול, אוכלוסיות קיימא תאים החיסונית יכול לשמש ניתוח נוסף במורד הזרם, כולל לשעבר גירוי vivo של תאים T לאיתור ציטוקינים תאיים ידי הזרימה cy, try.

הדור של הלבלב אורתוטואט גידולים ואפיון Vivo Ex של תאים הסתננות של הגידול תא T

כאן, אנו מפרטים פרוטוקול פשוט, מהיר ואמין של זרימה רב-פרמטרית בסיוע ציטומטריה וגידול על שבב כדי לנטר ולאפיין את השלבים המרכיבים את מחזור החיסון לסרטן. ואכן, הבנה מעמיקה של יחסי הגומלין בין סרטן לתאי מערכת החיסון מספקת תובנות קריטיות כדי להערים על גידולים ולהנחות את הטיפול הקליני.

תרבות משותפת במערכות מבחנה כדי לשחזר את מחזור החיסון לסרטן

למדו לנתח פעילות תאי T אנושיים במערכת תרבית משותפת אלוגנית עם תאי גידול שטופלו מראש בקרינה ומעכבי קינאז. שיטה זו מאפשרת הערכת התפשטות תאי T ומציגי שטח באמצעות ציטומטריית זרימה לחקר תגובות חיסוניות.

ניתוח פעילות תאי T אנושיים במסגרת תרבית משותפת אלוגנית של תאי גידול שטופלו מראש

גלה סרטונים נוספים