Name: אורגנואידים דו-ממדיים במעי חזיר המשקפים את התכונות הפיזיולוגיות של המעיים הטבעיים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-31T14:10:00.000+00:00
Duration: 9 min 13 s
Description: חקור מודל אורגנואידים דו-ממדיים ממעי חזיר לחקירת תכונות תחבורה במעי הדק והגס. השיטה משלבת מדידות TEER וניסויי תאי אוסינג להערכת תגובות פיזיולוגיות בזמן אמת.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

לצורך פרוטוקול זה, שני חזירים בריאים (חזיר שחור בנטהיים; זכר אחד, נקבה אחת; בן 4.5 חודשים; כ-65 ק"ג) הוקרבו על ידי ירי בריח בשבי ודימום. על פי חוק צער בעלי חיים, הדבר (שחיטה והוצאת רקמות) אינו מוגדר כניסוי בבעלי חיים אלא יש להודיע על כך לפקיד צער בעלי חיים (מס' רישום). TiHo-T-2023-15) של קרן האוניברסיטה לרפואה וטרינרית בהנובר.
1. ציפוי תוספות
הערה: כל השלבים מתבצעים עם חומרים סטריליים מתחת לארון בטיחות. כל שלבי הפרוטוקול מבוצעים על קרח אם לא צוין אחרת.
<ol>
	<li>הפשירו את קרום המרתף הקפוא על קרח למשך שעה לפחות בטמפרטורת החדר או לילה על הקרח בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס. מערבבים את קרום המרתף 1:40 (v/v) עם מי מלח סטריליים קרים כקרח (PBS) בצינור חרוטי.</li>
	<li>הסר את הלוחות הסטריליים עם תוספות מהאריזה. הוסף 200 מיקרוליטר של תערובת קרום הבסיס לתא האפיקלי של כל תוספת.</li>
	<li>החזר את מכסה צלחת הבאר ודגירה למשך שעה וחצי לפחות בחום של 37 מעלות צלזיוס, 5% CO2 בחממה.</li>
	<li>שאפו את התמיסה בזהירות לפני זריעת התאים. ודא שהקצה אינו נוגע בקרום במהלך השאיפה.</li>
</ol>
2. יצירת חד-שכבות אורגנואיד דו-ממדיות
הערה: אורגנואידים של המעי הגס החזירי נוצרים ומעובדים כמתואר עבור אורגנואידים חזיריים25. לאחר יצירת אורגנואידים תלת מימדיים יש לגדל אותם לפחות 3-4 שבועות תוך כדי מעבר שבועי כדי להבטיח צמיחה עקבית. מספר התאים בתוך כל כיפה המכילה אורגנואידים תלת מימדיים, המומסים בשלבים הבאים, מספיק כדי לכסות מסנן טרנסממברני יחיד. לפני היצירה החד-שכבתית, האורגנואידים התלת-ממדיים היו נתונים לבקרת איכות אופטית כדי לבדוק את הגידול הקודם ואת הזיהום האפשרי (איור 1).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67666/67666fig01.jpg"> 
איור 1: אורגנואידים תלת-ממדיים מייצגים. אורגנואידים תלת מימדיים (A) jejunum ו-(B) במעי הגס נבדקים בקפידה תחת המיקרוסקופ לפני יצירת חד-שכבות. תשומת לב מיוחדת ניתנת להערכת דפוסי גידול קודמים, שלמות מבנית ונוכחות של זיהומים או זיהום. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67666/67666fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<ol>
	<li>הסר את המדיום האורגנואיד (טבלה 1) מהבארות עם אורגנואידים קריפטה תלת מימדיים. הוסף 1 מ"ל PBS קר כקרח לבאר וממיס בעדינות את קרום המרתף על ידי צנרת למעלה ולמטה עם קצה p1000.</li>
	<li>אסוף את כל האורגנואידים המומסים בצינור של 15 מ"ל מלא מראש ב-10 מ"ל PBS קר כקרח. צנטריפוגה את הצינור ב-250 x גרם, 10 דקות ב-4 מעלות צלזיוס. שאפו את הסופרנטנט.</li>
	<li>השהה את הגלולה ב-1 מ"ל של טריפסין/EDTA חם (37 מעלות צלזיוס) 0.05% (v/v) (ניתן לאגד 2 צינורות בשלב זה). יש לדגור למשך 5 דקות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס באמבט מים ולהניח ישירות על קרח לאחר מכן כדי לעצור את התגובה.</li>
	<li>תלו על קרח 20x עם קצה p1000, ועוד 15x עם קצה p1000 + קצה p200 למעלה. הוסף 10 מ"ל של DMEM קר כקרח בתוספת 10% (v/v) סרום עגל עוברי (FCS).</li>
	<li>צינור צנטריפוגה ב-1,000 x גרם, 10 דקות ב-4 מעלות צלזיוס. השליכו את ה-supernatant והשעו מחדש את הגלולה ב-1 מ"ל של מדיום חד-שכבתי (טבלה 1).</li>
	<li>קבע את מספר התאים החיים למ"ל באמצעות תא נויבאואר בהתאם להוראות היצרן.</li>
	<li>הסר את תמיסת הציפוי בשלב זה מהתא האפיקלי והחלף אותה ב-500 מיקרוליטר של מדיום חד-שכבתי חם (37 מעלות צלזיוס). הוסף 3 מ"ל של מדיום חד שכבתי לתא הבסיסי.</li>
	<li>קבע את ההתנגדות הריקה (TEER) של כל תוספת Transwell ריקה, כמתואר בפירוט בשלב 3. הזמן שבו אין מדיום בתא האפיקלי צריך להיות קצר ככל האפשר כדי למנוע מהתאים להתייבש.</li>
	<li>הסר את המדיום החד-שכבתי האפיקלי והוסף לתרבית הדו-ממדית של הג'ג'ונל 2 x 105 תאי אפיתל ולתרבית הדו-ממדית של המעי הגס 1.5 x 105 תאי אפיתל ב-500 מיקרוליטר של מדיום חד-שכבתי בתא האפיקלי של כל טרנסוול.</li>
	<li>החלף מדיום ומדוד TEER כל 2-3 ימים. מדוד TEER לפני החלפת המדיום. שאפו בזהירות את המדיום של התא האפיקלי והבזאלי והחליפו אותו ב-500 מיקרוליטר או 3 מ"ל של מדיום טרי וחם (37 מעלות צלזיוס).<ol>
		<li>עבור אורגנואידים של ג'ג'ונום: ביום 16, לאחר הזריעה, שנה ממדיום חד-שכבתי למדיום התמיינות (טבלה 1). עבור אורגנואידים במעי הגס: יש לשנות את המדיום ביום השביעי למדיום התמיינות.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>שנה את מדיום הבידול מדי יום ובצע מדידת TEER במהלך כל שינוי מדיום. ביום ה-18 (עבור אורגנואידים של ג'ג'ונל) או ביום התשיעי (עבור אורגנואידים במעי הגס), לאחר הזריעה, המשיכו בניסויים פונקציונליים.</li>
</ol>
3. מדידת התנגדות חשמלית טרנסאפיתל (TEER)
הערה: כל המדידות מבוצעות מתחת לארון בטיחות כדי למנוע זיהום. לפני זריעת התאים, כל טרנסוול מצופה ריק נמדד כדי לקבל ערכים ריקים בודדים. מד הוולט-אוהם מאחסן ערכים בהתקן USB שהוכנס.
<ol>
	<li>נקו את האלקטרודה עם אתנול 70% (v/v) והניחו לאלקטרודה להתייבש לחלוטין. בינתיים, הוציאו את הצלחת מהחממה והניחו אותה מתחת לארון.</li>
	<li>הכניסו את הזרוע הקצרה של אלקטרודת מקלות האכילה לתא האפיקלי של התוספות ואת הזרוע הארוכה לתא הבסיסי של התוספת. הימנע ממגע של הזרוע הקצרה עם שכבת התא.</li>
	<li>מדוד את ההתנגדות החשמלית הטרנס-אפיתליאלית של כל טרנסוול. אפשר למד הוולט-אוהם להתאזן כדי להבטיח מדידה יציבה. מדוד ערכי TEER על ידי לחיצה על כפתור החנות.</li>
	<li>המשך בשלבים 3.2 ו- 3.3 עם הבארות הנותרות. לאחר שהגיע לבאר האחרונה, מד הוולט-אוהם פותח בקשה לאחסון הנתונים בהתקן USB. לחץ על שמור.</li>
	<li>נקו את האלקטרודה לאחר כל צלחת ובסיום המדידה והניחו לה להתייבש לחלוטין לפני האחסון.</li>
	<li>הפחיתו ערכים ריקים שנקבעו לפני זריעת התאים מהערכים התאיים הנמדדים.</li>
</ol>
4. מחקרי הובלה אלקטרופיזיולוגיים בטכניקת תא אוסינג
הערה: קביעת מחקרי הובלה אלקטרופיזיולוגיים מתבצעת באמצעות תא אוסינג המורכב משני תאים תאיים, המחולקים על ידי האפיתל. תא זה מחובר לכרךtagclamp על ידי אלקטרודות Ag/AgCl. טכניקה זו מאפשרת מעקב אחר תהליכי הובלה אלקטרוגניים פעילים של האפיתל באמצעות השינויים בזרם הקצר (Isc) הנגרמים על ידי מהדק המתח וכן התנגדות הרקמות (Rt) המחושבת על ידי חוק אוהם. Isc ו-Rt נרשמים כל 6 שניות במהלך כל הניסוי. במהלך הניסוי הרקמה הנחקרת מאווררת עם קרבוגן ומודגרת בתמיסות קרבס-הנסלייט מותאמות כדי להבטיח תנאים ברי קיימא. אינדומתצין (10 מיקרומטר) מתווסף לתמיסות חיץ כדי לעכב סינתזת פרוסטגלנדין26.
<ol>
	<li>חימום תמיסות חיץ ריריות וסרוזליות ל-37 מעלות צלזיוס ואוורור עם קרבוגן. הרכיבו את התאים הבודדים באמצעות תוספת ריקה לכל תא בודד. ודא שהצדדים האפיקליים של הטרנסבארים פונים כולם לאותו כיוון.</li>
	<li>מלאו את כל התאים ב-5 מ"ל של תמיסת חיץ רירית מחוממת מראש (טבלה 2). חבר את כל האלקטרודות מהמתח clamp לתאים הבודדים בהתאם להוראות היצרן. ודא שאין בועות גז מפריעות לאלקטרודות כדי להבטיח מדידה נכונה.</li>
	<li>כייל את תוכנת תא ה-Ussing בתנאים אלה על ידי לחיצה על כפתור Rf/dpI בכרךtagמהדק התוכנה. ההתנגדות של כל התוספות הריקות המשומשות צריכה להיות שווה (~ 70 אוהם), והזרם צריך להיות בסביבות 0 mV (± 5 mV). אם זה לא המקרה עבור חדרים מסוימים, בדוק את המיקום הנכון של אלקטרודות או בועות במערכת.</li>
	<li>הסר את כל האלקטרודות והשליך את תמיסת החיץ המשומשת. פתח את כל התאים הבודדים והסר את התוספות הריקות. וודאו כי סדר התאים הבודדים נשמר.</li>
	<li>העבר את צלחת הבאר עם תוספות מהחממה לארון הבטיחות. שאפו בזהירות את המדיום הבסיסי והאפיקלי.</li>
	<li>שטפו את התאים על ידי הוספת 500 מיקרוליטר של מאגר רירי חם (37 מעלות צלזיוס) לתא האפיקלי ו-3 מ"ל של מאגר סרוזלי לתא הבסיסי. שאפו את המאגרים וחזרו על הפעולה פעמיים.</li>
	<li>הסר את התוספות מהצלחת. הסר בעדינות את תומכי התוספות. הנח את התוספות בתאי ה-Ussing, וודא שכיוון התוספות זהה לשלב הכיול. הרכיבו את התאים הבודדים כפי שמוצג באיור 2.</li>
	<li>מלאו את התאים הפונים לצד הבסיסי של התאים ב-5 מ"ל של מאגר סרוזלי (טבלה 2) ואת החדר הפונה לתא האפיקלי ב-5 מ"ל של מאגר רירי.</li>
	<li>חבר את האלקטרודות וצינורות האוורור לכל תא בנפרד. התחל מדידה בתוכנת Uussing. אפשר שיווי משקל למשך 15 דקות.</li>
	<li>שנה את התנאים ממעגל פתוח לתנאי קצר. שיווי משקל למשך 5 דקות עד 10 דקות. הוסף 10 מיקרומטר של פורסקולין לתא הסרוסל. הערה: תוספת של פורסקולין עשויה להיות מוחלפת בסוכן/חומרים אחרים בהתאם לקטעי מעיים בודדים ולשאלות מחקר.</li>
	<li>לאחר 15 דקות, הוסיפו חומרים נוספים באותו אופן כמו פורסקולין או הפסיקו את המדידה. הסר צינורות אוורור ואלקטרודות מתאים בודדים. שופכים את תמיסות החיץ של שני התאים לקערה.</li>
	<li>לפרק את התאים ולהשליך את התוספות או להשתמש בהם לניתוח מעקב (למשל, אימונוהיסטוכימיה או ניתוח ביטוי)</li>
</ol>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67666/67666fig02.jpg"> 
איור 2: מבנה סכמטי של תא האוסינג. מוצגים שני התאים המחולקים על ידי הממברנה עם השכבה הדו-ממדית הגדלה. שני התאים מאווררים עם קרבוגן; מתח וזרם מנוטרים על ידי שתי אלקטרודות לכל תא. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67666/67666fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
5. ניתוח נתונים שנוצרו על ידי מערך תא אוסינג
<ol>
	<li>ייבא את הנתונים שנוצרו על ידי תוכנת מהדק המתח לעורך גיליונות אלקטרוניים מתאים.</li>
	<li>כדי לקבוע ערכי Isc ו-Rt בזאליים, חשב את הממוצע של 10 נקודות נתונים רצופות שצולמו 10 דקות לאחר אתחול תנאי הקצר. כל תא בודד משמש כהעתק טכני, בעוד שכל מעבר של אורגנואידים משמש כשכפול ביולוגי.</li>
	<li>כדי להעריך את ההשפעות של חומרים מיושמים, חשב את הממוצע של 10 נקודות נתונים רצופות מיד לפני הוספת הסוכן. השווה ממוצע זה לערך המקסימלי (או המינימלי) שנצפה לאחר הפעלת הסוכן. הנתונים המתקבלים מוצגים כממוצע ± סטיית תקן (SD).</li>
</ol>

<ol><li>Hornbuckle, W. E., Tennant, B. C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHornbuckle%2C+WE+%22Clinical+Biochemistry+of+Domestic+Animals%22">Clinical Biochemistry of Domestic Animals</a>. , Academic Press. 367-406 (1997).</li>
<li>Peterson, L. W., Artis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+epithelial+cells%3A+regulators+of+barrier+function+and+immune+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Intestinal epithelial cells: regulators of barrier function and immune homeostasis.</a> Nat Rev Immunol. 14 (3), 141-153 (2014).</li>
<li>Pham, T. A., Lawley, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+insights+on+intestinal+dysbiosis+during+bacterial+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Emerging insights on intestinal dysbiosis during bacterial infections.</a> Curr Opin Microbiol. 17 (100), 67-74 (2014).</li>
<li>Garrett, W. S., Gordon, J. I., Glimcher, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homeostasis+and+inflammation+in+the+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Homeostasis and inflammation in the intestine.</a> Cell. 140 (6), 859-870 (2010).</li>
<li>Ternhag, A., Torner, A., Svensson, A., Ekdahl, K., Giesecke, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short-+and+long-term+effects+of+bacterial+gastrointestinal+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Emerg+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Short- and long-term effects of bacterial gastrointestinal infections.</a> Emerg Infect Dis. 14 (1), 143-148 (2008).</li>
<li>Russell, W. M. S., Burch, R. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRussell%2C+WMS+%22The+principles+of+humane+experimental+technique%22">The principles of humane experimental technique</a>. , Methuen & Co. Limited. London. (1959).</li>
<li>Zietek, T., Boomgaarden, W. A. D., Rath, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+screening%2C+oral+bioavailability+and+regulatory+aspects%3A+A+need+for+human+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Drug screening, oral bioavailability and regulatory aspects: A need for human organoids.</a> Pharmaceutics. 13 (8), 1280(2021).</li>
<li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+Lgr5+stem+cells+build+crypt-villus+structures+in+vitro+without+a+mesenchymal+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.</a> Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).</li>
<li>Gonzalez, L. M., Williamson, I., Piedrahita, J. A., Blikslager, A. T., Magness, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+lineage+identification+and+stem+cell+culture+in+a+porcine+model+for+the+study+of+intestinal+epithelial+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Cell lineage identification and stem cell culture in a porcine model for the study of intestinal epithelial regeneration.</a> PLoS One. 8 (6), e66465(2013).</li>
<li>Khalil, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+culture+system+for+adult+porcine+intestinal+crypts%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">A novel culture system for adult porcine intestinal crypts.</a> Cell Tissue Res. 365 (1), 123-134 (2016).</li>
<li>Derricott, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developing+a+3D+intestinal+epithelium+model+for+livestock+species%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Developing a 3D intestinal epithelium model for livestock species.</a> Cell Tissue Res. 375 (2), 409-424 (2019).</li>
<li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porcine+intestinal+enteroids%3A+a+new+model+for+studying+enteric+coronavirus+porcine+epidemic+diarrhea+virus+infection+and+the+host+innate+response%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Porcine intestinal enteroids: a new model for studying enteric coronavirus porcine epidemic diarrhea virus infection and the host innate response.</a> J Virol. 93 (5), e01682-e01718 (2019).</li>
<li>Min, S., Kim, S., Cho, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gastrointestinal+tract+modeling+using+organoids+engineered+with+cellular+and+microbiota+niches%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Gastrointestinal tract modeling using organoids engineered with cellular and microbiota niches.</a> Exp Mol Med. 52 (2), 227-237 (2020).</li>
<li>Yin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aminopeptidase+N+expression%2C+not+interferon+responses%2C+determines+the+intestinal+segmental+tropism+of+porcine+deltacoronavirus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Aminopeptidase N expression, not interferon responses, determines the intestinal segmental tropism of porcine deltacoronavirus.</a> J Virol. 94 (14), e00480-e00520 (2020).</li>
<li>van der Hee, B., Madsen, O., Vervoort, J., Smidt, H., Wells, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Congruence+of+transcription+programs+in+adult+stem+cell-derived+jejunum+organoids+and+original+tissue+during+long-term+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Congruence of transcription programs in adult stem cell-derived jejunum organoids and original tissue during long-term culture.</a> Front Cell Dev Biol. 8, 375(2020).</li>
<li>van der Hee, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+procedures+for+generating+an+enhanced%2C+near+physiological+2D+culture+system+from+porcine+intestinal+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Optimized procedures for generating an enhanced, near physiological 2D culture system from porcine intestinal organoids.</a> Stem Cell Res. 28, 165-171 (2018).</li>
<li>Mussard, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+of+piglet+intestinal+3D+organoids+from+cryopreserved+epithelial+crypts+and+establishment+of+cell+monolayers%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Culture of piglet intestinal 3D organoids from cryopreserved epithelial crypts and establishment of cell monolayers.</a> J Vis Exp. (192), e64917(2023).</li>
<li>Ussing, H. H., Zerahn, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Active+transport+of+sodium+as+the+source+of+electric+current+in+the+short-circuited+isolated+frog+skin%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiologica+Scandinavica%22%5BJournal%5D)">Active transport of sodium as the source of electric current in the short-circuited isolated frog skin.</a> Acta Physiologica Scandinavica. 23 (2-3), 110-127 (1951).</li>
<li>Dengler, F., Kraetzig, A., Gabel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Butyrate+protects+porcine+colon+epithelium+from+hypoxia-induced+damage+on+a+functional+level%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Butyrate protects porcine colon epithelium from hypoxia-induced damage on a functional level.</a> Nutrients. 13 (2), 305(2021).</li>
<li>Guschlbauer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trans-resveratrol+and+epsilon-viniferin+decrease+glucose+absorption+in+porcine+jejunum+and+ileum+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Biochem+Physiol+A+Mol+Integr+Physiol%22%5BJournal%5D)">Trans-resveratrol and epsilon-viniferin decrease glucose absorption in porcine jejunum and ileum in vitro.</a> Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol. 165 (3), 313-318 (2013).</li>
<li>Herrmann, J., Hermes, R., Breves, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transepithelial+transport+and+intraepithelial+metabolism+of+short-chain+fatty+acids+%28SCFA%29+in+the+porcine+proximal+colon+are+influenced+by+SCFA+concentration+and+luminal+pH%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Biochem+Physiol+A+Mol+Integr+Physiol%22%5BJournal%5D)">Transepithelial transport and intraepithelial metabolism of short-chain fatty acids (SCFA) in the porcine proximal colon are influenced by SCFA concentration and luminal pH.</a> Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol. 158 (1), 169-176 (2011).</li>
<li>Klinger, S., Breves, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resveratrol+inhibits+porcine+intestinal+glucose+and+alanine+transport%3A+Potential+roles+of+Na%28%2B%29%2FK%28%2B%29-ATPase+activity%2C+protein+kinase+A%2C+AMP-activated+protein+kinase+and+the+association+of+selected+nutrient+transport+proteins+with+detergent+resistant+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Resveratrol inhibits porcine intestinal glucose and alanine transport: Potential roles of Na(+)/K(+)-ATPase activity, protein kinase A, AMP-activated protein kinase and the association of selected nutrient transport proteins with detergent resistant membranes.</a> Nutrients. 10 (3), 302(2018).</li>
<li>Leonhard-Marek, S., Hempe, J., Schroeder, B., Breves, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+characterization+of+chloride+secretion+across+the+jejunum+and+colon+of+pigs+as+affected+by+age+and+weaning%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Physiol+B%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological characterization of chloride secretion across the jejunum and colon of pigs as affected by age and weaning.</a> J Comp Physiol B. 179 (7), 883-896 (2009).</li>
<li>Schroeder, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preventive+effects+of+the+probiotic+Escherichia+coli+strain+Nissle+1917+on+acute+secretory+diarrhea+in+a+pig+model+of+intestinal+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Dig+Dis+Sci%22%5BJournal%5D)">Preventive effects of the probiotic Escherichia coli strain Nissle 1917 on acute secretory diarrhea in a pig model of intestinal infection.</a> Dig Dis Sci. 51 (4), 724-731 (2006).</li>
<li>Hoffmann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+organoid-based+2D+monolayers+mimic+physiological+and+pathophysiological+properties+of+the+pig+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Intestinal organoid-based 2D monolayers mimic physiological and pathophysiological properties of the pig intestine.</a> PLoS One. 16 (8), e0256143(2021).</li>
<li>Ferreira, S. H., Moncada, S., Vane, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Indomethacin+and+aspirin+abolish+prostaglandin+release+from+the+spleen%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+New+Biol%22%5BJournal%5D)">Indomethacin and aspirin abolish prostaglandin release from the spleen.</a> Nat New Biol. 231 (25), 237-239 (1971).</li>
<li>Dykstra, G. D., Kawasaki, M., Ambrosini, Y. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advancements+in+bovine+organoid+technology+using+small+and+large+intestinal+monolayer+interfaces%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Advancements in bovine organoid technology using small and large intestinal monolayer interfaces.</a> J Vis Exp. (208), e67010(2024).</li>
<li>Srinivasan, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TEER+measurement+techniques+for+in+vitro+barrier+model+systems%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lab+Autom%22%5BJournal%5D)">TEER measurement techniques for in vitro barrier model systems.</a> J Lab Autom. 20 (2), 107-126 (2015).</li>
<li>Hoffmann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caco-2%2FHT29-MTX+co-cultured+cells+as+a+model+for+studying+physiological+properties+and+toxin-induced+effects+on+intestinal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Caco-2/HT29-MTX co-cultured cells as a model for studying physiological properties and toxin-induced effects on intestinal cells.</a> PLoS One. 16 (10), e0257824(2021).</li>
<li>Beduneau, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+tunable+Caco-2%2FHT29-MTX+co-culture+model+mimicking+variable+permeabilities+of+the+human+intestine+obtained+by+an+original+seeding+procedure%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pharm+Biopharm%22%5BJournal%5D)">A tunable Caco-2/HT29-MTX co-culture model mimicking variable permeabilities of the human intestine obtained by an original seeding procedure.</a> Eur J Pharm Biopharm. 87 (2), 290-298 (2014).</li>
<li>Markov, A. G., Veshnyakova, A., Fromm, M., Amasheh, M., Amasheh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segmental+expression+of+claudin+proteins+correlates+with+tight+junction+barrier+properties+in+rat+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Physiol+B%22%5BJournal%5D)">Segmental expression of claudin proteins correlates with tight junction barrier properties in rat intestine.</a> J Comp Physiol B. 180 (4), 591-598 (2010).</li>
<li>Pearce, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marked+differences+in+tight+junction+composition+and+macromolecular+permeability+among+different+intestinal+cell+types%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biology%22%5BJournal%5D)">Marked differences in tight junction composition and macromolecular permeability among different intestinal cell types.</a> BMC Biology. 16 (1), 19(2018).</li>
<li>Legen, I., Salobir, M., Kerc, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+different+intestinal+epithelia+as+models+for+absorption+enhancement+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Pharm%22%5BJournal%5D)">Comparison of different intestinal epithelia as models for absorption enhancement studies.</a> Int J Pharm. 291 (1-2), 183-188 (2005).</li>
<li>Moeser, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress+signaling+pathways+activated+by+weaning+mediate+intestinal+dysfunction+in+the+pig%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Stress signaling pathways activated by weaning mediate intestinal dysfunction in the pig.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 292 (1), G173-G181 (2007).</li>
<li>Moeser, A. J., Ryan, K. A., Nighot, P. K., Blikslager, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gastrointestinal+dysfunction+induced+by+early+weaning+is+attenuated+by+delayed+weaning+and+mast+cell+blockade+in+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Gastrointestinal dysfunction induced by early weaning is attenuated by delayed weaning and mast cell blockade in pigs.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 293 (2), G413-G421 (2007).</li>
<li>Seamon, K. B., Padgett, W., Daly, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Forskolin%3A+unique+diterpene+activator+of+adenylate+cyclase+in+membranes+and+in+intact+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Forskolin: unique diterpene activator of adenylate cyclase in membranes and in intact cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 78 (6), 3363-3367 (1981).</li>
<li>Herrmann, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segmental+diversity+of+electrogenic+glucose+transport+characteristics+in+the+small+intestines+of+weaned+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Biochem+Physiol+A+Mol+Integr+Physiol%22%5BJournal%5D)">Segmental diversity of electrogenic glucose transport characteristics in the small intestines of weaned pigs.</a> Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol. 163 (1), 161-169 (2012).</li>
<li>Wright, E. M., Martin, M. G., Turk, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+absorption+in+health+and+disease--sugars%5BTitle%5D)+AND+%22Best+Pract+Res+Clin+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Intestinal absorption in health and disease--sugars.</a> Best Pract Res Clin Gastroenterol. 17 (6), 943-956 (2003).</li>
<li>Crane, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Na%2B+-dependent+transport+in+the+intestine+and+other+animal+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Fed+Proc%22%5BJournal%5D)">Na+ -dependent transport in the intestine and other animal tissues.</a> Fed Proc. 24 (5), 1000-1006 (1965).</li>
<li>Inagaki, A., Yamaguchi, S., Ishikawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amiloride-sensitive+epithelial+Na%2B+channel+currents+in+surface+cells+of+rat+rectal+colon%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Amiloride-sensitive epithelial Na+ channel currents in surface cells of rat rectal colon.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 286 (2), C380-C390 (2004).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>צלחת 24 באר</td><td>SARSTEDT AG & Co. KG</td><td>8,33,922</td><td></td></tr><tr><td>A83-01</td><td>MedChemExpress, ניו ג'רזי, ארה"</td>ב <td>חנות HY-10432</td><td>ב -20 & מעלות צלזיוס. להפשיר בעת הצורך</td></tr><tr><td>accujet S</td><td>Brand GmbH + Co KG, ורטהיים, גרמניה</td><td>26351</td><td></td></tr><tr><td>מתקדם DMEM/F12 בינוני</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק, וולת'אם, ארה"ב</td><td>חנות 12634010</td><td>ב-4 מעלות; </td></tr><tr><td>תוסף C B27</td><td>Thermo Fisher Scientific, וולת'אם, ארה"ב</td><td>17504044</td><td>לאחסן בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס. להפשיר בעת הצורך</td></tr><tr><td>CaCl2.2 H2O</td><td>Merck KGaA, דרמשטדט, גרמניה</td><td>C3306</td><td>יש לאחסן בטמפרטורת החדר</td></tr><tr><td>D(+)-גלוקוז (wasserfrei)</td><td>Merck KGaA, דרמשטדט, גרמניה</td><td>1.08337</td><td>לאחסן בטמפרטורת החדר</td></tr><tr><td>DAPT</td><td>MedChemExpress, ניו ג'רזי, ארה"</td>ב <td>HY-13027</td><td>חנות בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס הפשרה בעת הצורך</td></tr><tr><td>D-Mannitol</td><td>Merck KGaA, דרמשטדט, גרמניה</td><td>M4125</td><td>חנות בטמפרטורת החדר</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma-Aldrich, Schnelldorf, Germany</td><td>154938</td><td>אחסן בטמפרטורת החדר</td></tr><tr><td>סט אלקטרודות (AgCl/PtIr/Std.)</td><td>מכשירים מדעיים, סימראת', גרמניה</td><td>#1316</td><td></td></tr><tr><td>מחקר אפנדורף פלוס&nbsp;</td><td>Eppendorf SE, Hamburg, Gemany</td><td>3123000063</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research plus&nbsp;</td><td>Eppendorf SE, Hamburg, Gemany</td><td>3123000047</td><td></td></tr><tr><td>EVOM3 ידני אפיתל וולט אוהם מטר</td><td>מכשירים מדויקים עולמיים, סרסוטה, ארה"ב</td><td>EVM-MT-03-01</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>סיגמא-אולדריץ', שנלדורף, גרמניה</td><td>F7524</td><td>חנות ב -20 &deg;C. הפשרה בעת הצורך</td></tr><tr><td>Forskolin</td><td>Sigma-Aldrich, Schnelldorf, גרמניה</td><td>F6886</td><td>חנות ב -20 &deg;C. הפשרה בעת הצורך</td></tr><tr><td>gasprofi 1 SCS micro</td><td>WLD-TEC GmbH, ארסנהאוזן, גרמניה</td><td>60,04,000</td><td></td></tr><tr><td>Gastrin 1</td><td>MedChemExpress, ניו ג'רזי, ארה"</td>ב חנות <td>HY-P1097</td><td>ב -20 & מעלות צלזיוס להפשיר בעת הצורך</td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>Thermo Fisher Scientific, וולת'אם, ארה"ב</td><td>חנות 35050061</td><td>ב -4 &deg;C.&nbsp;</td></tr><tr><td>HCl</td><td>Sigma-Aldrich, Schnelldorf, גרמניה</td><td>1090571000</td><td>חנות בטמפרטורת החדר</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich, Schnelldorf, גרמניה</td><td>H0887</td><td>חנות ב-4 מעלות; C</td></tr><tr><td>Herasafe 2025 Class II ארון בטיחות ביולוגי</td><td>Thermo Fisher Scientific, וולת'אם, ארה"ב</td><td>חממת 51033316</td><td></td></tr><tr><td>ICO105</td><td>Memmert GmbH + Co.KG, שוואבאך, גרמניה</td><td>62,20,143</td><td></td></tr><tr><td>Indomethacin</td><td>Merck KGaA, דרמשטדט, גרמניה</td><td>I7378</td><td>חנות בטמפרטורת החדר</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Merck KGaA, דרמשטדט, גרמניה</td><td>1.04936</td><td>אחסן בטמפרטורת החדר</td></tr><tr><td>L-Glutamin</td><td>Sigma-Aldrich, שנלדורף, גרמניה</td><td>G7513</td><td>חנות ב -20 & מעלות צלזיוס להפשיר בעת הצורך</td></tr><tr><td>LWRN Supernatant</td><td>תוצרת עצמית&nbsp;</td><td></td><td>יש לאחסן בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס ולהפשיר בעת הצורך. תוסף LWRN מיוצר על פי Miyoshi et al. (2012)</td></tr><tr><td>Matrigel Basement Membrane Matrix, ללא LDEV, 10 מ"ל</td><td>Corning Incorporated - Life Sciences</td><td>354234</td><td>יש לאחסן בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס. להפשיר בזהירות על קרח בעת הצורך</td></tr><tr><td>Megafuge 1.OR</td><td>Heraeus Instruments, Osterode, Germany</td><td>75003060</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2.6 H2O</td><td>Merck KGaA, דרמשטדט, גרמניה</td><td>1.05833</td><td>יש לאחסן בטמפרטורת החדר</td></tr><tr><td>Na2HPO4.2H2O</td><td>Merck KGaA, דרמשטדט, גרמניה</td><td>1.06580</td><td>יש לאחסן בטמפרטורת החדר</td></tr><tr><td>N-Acetyl-L-cysteine</td><td>Sigma-Aldrich, Schnelldorf, גרמניה</td><td>A7250</td><td>לאחסן בטמפרטורה של -20 & deg;C. להפשיר בעת הצורך</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Merck KGaA, דרמשטדט, גרמניה</td><td>1.06404</td><td>יש לאחסן בטמפרטורת החדר</td></tr><tr><td>NaH2PO4. H2O</td><td>Merck KGaA, דרמשטאדט, גרמניה</td><td>1.06346</td><td>אחסן בטמפרטורת החדר</td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Merck KGaA, דרמשטדט, גרמניה</td><td>1.06329</td><td>אחסן בטמפרטורת החדר</td></tr><tr><td>Neubauer תא משופר</td><td>Glaswarenfabrik Karl Hecht, Sondheim vor der Rh&ouml; n, גרמניה</td><td>40442712</td><td></td></tr><tr><td>Olympus IX70 iverted Microscope</td><td>Olympus Corporation, המבורג, גרמניה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pen/Strep</td><td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, USA</td><td>15140122</td><td>חנות ב -20 & deg; C. להפשיר בעת הצורך</td></tr><tr><td>PolymyxinB</td><td>Sigma-Aldrich, Schnelldorf, גרמניה</td><td>P4932-1MU</td><td>חנות ב -20 & deg; C. להפשיר בעת הצורך</td></tr><tr><td>מעמד מיקרוסקופ Primovert עם צינור צילום דו-עיני</td><td>Zeiss</td><td>415510-1101-000</td><td></td></tr><tr><td>rm EGF</td><td>Prepotech, ניו ג'רזי, ארה"ב</td><td>315-09</td><td>חנות ב-20 &deg;C. הפשרה בעת הצורך</td></tr><tr><td>SB202190</td><td>MedChemExpress, ניו ג'רזי, ארה"ב</td><td>חנות HY-10295</td><td>ב-20 &deg;C. הפשרה בעת הצורך</td></tr><tr><td>Snapwell 3801</td><td>Corning Incorporated - Life Sciences</td><td>3801</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin/EDTA</td><td>Thermo Fisher Scientific, וולת'אם, ארה"ב</td><td>25300054</td><td></td></tr><tr>מכשירים מדעיים של<td>מערכת בסיס Ussing</td><td>, סימראת', גרמניה</td> <td>#1317</td><td></td></tr><tr>מכשירים מדעיים<td>של תא דיפוזיה של Ussing</td><td>, סימראת', גרמניה</td><td>מק"ט 1307</td><td></td></tr><tr><td>מהדק מתח/זרם VCC6</td><td>מכשירים מדעיים, סימראת', גרמניה</td><td>מק"ט 1310</td><td></td></tr><tr><td>Y27632</td><td>MedChemExpress, ניו ג'רזיארה"</td>ב <td>HY-10583</td><td>חנות ב -20 & מעלות צלזיוס להפשיר בעת הצורך</td></tr></tbody></table>

אורגנואידים דו-ממדיים במעי חזיר המשקפים את התכונות הפיזיולוגיות של המעיים הטבעיים

Two-dimensional Porcine Intestinal Organoids Reflecting the Physiological Properties of Native Gut

פרוטוקול זה מקל על יצירה אמינה של חד-שכבות דו-ממדיות חזיריות על ידי פירוק אורגנואידים תלת-ממדיים שמקורם בג'ג'ונום ובמעי הגס של חזירים. במהלך תקופת טיפוח של 16 יום לאורגנואידים של ג'ג'ונום ו-9 ימים לאורגנואידים במעי הגס, נוצרות חד-שכבות שלמות. לאחר מכן ניתן להשתמש בשכבות חד-שכבתיות אלה כדי להעריך תכונות הובלה אלקטרוגניות ופיזיולוגיות באמצעות טכניקת תא אוסינג.
לאחר פירוק האורגנואידים התלת-ממדיים, תאים בודדים נזרעים על גבי תוספות מצופות. צמיחת התאים מנוטרת על ידי מדידת ערכי התנגדות חשמלית טרנסאפי...

The gastrointestinal tract (GIT) serves both in the digestion of food and the uptake of nutrients but also as a protective barrier against pathogens. ...

two-dimensional-porcine-intestinal-organoids-reflecting-physiological

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

פרוטוקול זה מאפשר התמיינות של תאים פלוריפוטנטיים אנושיים לאורגנואידי מעיים. הפרוטוקול מחקה התפתחות אנושית תקינה על ידי התמיינות תאים לאוכלוסייה של אנדודרם סופי, אנדודרם של המעי האחורי ולאחר מכן אפיתל מעיים. זה הופך את הפרוטוקול למתאים לחקר התפתחות מעיים כמו גם יישומי מידול מחלות.

יצירת אורגנואידי מעיים שמקורם ב-hiPSC עבור יישומים התפתחותיים ומידול מחלות

אורגנואידים במעיים שמקורם בביופסיה וטכנולוגיות של איברים על שבבים משולבים בפלטפורמה מיקרופיזיולוגית כדי לשחזר את פונקציונליות המעי הספציפית לאזור.

שילוב של אורגנואידים אנושיים וטכנולוגיית איברים על שבב כדי ליצור מודל של פונקציונליות ספציפית לאזורי מעיים

פרוטוקול זה מתאר מודל אנטרוקוליטיס נמקית (NEC)-בצלחת המשתמש באנטרוואידים של המעי הדק עם קוטביות הפוכה, ומאפשר גישה למשטח האפיקלי. אנו מספקים פרוטוקול צביעה אימונופלואורסצנטי לזיהוי הפרעה אפיתליאלית הקשורה ל- NEC ושיטה לקביעת הכדאיות של אנטרואידים אפיקליים הנתונים לפרוטוקול NEC-in-a-dish.

במבחנה מודל אנטרואיד אפיקלי-אאוט של אנטרוקוליטיס נמקית

הפרוטוקול הנוכחי מתאר הקמת מערכת אורגנואידית של המעי הגס כדי לחקור את הפעילות והתפקוד של תאי גזע המעי הגס במודל נוקאאוט של קלודין-7.

תרבית תלת-ממדית של קריפטות המעי הגס של מורין לחקר תפקוד תאי גזע במעיים ex vivo

כאן, אנו מתארים פרוטוקול לתרבית אורגנואידים תלת-ממדיים במעי חזיר מקריפטים אפיתליאליים שמורים בהקפאה. אנו מתארים גם שיטה להקמת חד-שכבות תאים הנגזרות מאורגנואידים תלת-ממדיים, המאפשרים גישה לצד האפי של תאי אפיתל.

תרבית אורגנואידים תלת-ממדיים במעי חזרזיר מקריפטים אפיתליאליים שמורים בהקפאה והקמת חד-שכבות תאים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול ליצירת אורגנואידים במעיים של חולדות ומשתמשים בהם במספר יישומים במורד הזרם. חולדות הן לעתים קרובות מודל פרה-קליני מועדף, ומערכת אורגנואיד המעי החזקה ממלאת את הצורך במערכת חוץ גופית שתלווה מחקרי vivo .

יצירה ומניפולציה של אורגנואידים במעיים של חולדות

שילוב של אורגנואידים במעי הכלבי ומערכת מיקרופלואידית של מעיים על שבב מציע מודלים תרגומיים רלוונטיים למחלות מעיים אנושיות. הפרוטוקולים שהוצגו מאפשרים מורפוגנזה תלת-ממדית ומידול דינמי במבחנה של המעי, ומסייעים בפיתוח טיפולים יעילים למחלות מעיים בכלבים ובבני אדם עם One Health.

מורפוגנזה תלת ממדית במעי על שבב של כלבים באמצעות אורגנואידים במעי שמקורם במחלות מעי דלקתיות

אנטרואידים מתגלים כמודל חדשני לחקר פיזיולוגיה ופתופיזיולוגיה של רקמות, פיתוח תרופות ורפואה רגנרטיבית. כאן, אנו מתארים מערכת תרבית דו-ממדית ממקור אנטרואידים של תאים ראשוניים בקר, המאפשרת תרבית משותפת עם סוגי תאי רקמה רלוונטיים. מודל זה מציע יתרון תרגומי למודלים של מחקר במערכת העיכול.

יצירת מערכת תרבית חד-שכבתית דו-ממדית ראשונית שמקורה באנטרואיד בקר ליישומים במחקר ביו-רפואי תרגומי

מחקר זה מציג פרוטוקול ליצירת חד-שכבות דו-ממדיות של מעי בקר מאורגנואידים, ומציע גישה משופרת לחקר אינטראקציות בין פונדקאי לפתוגן. הוא כולל שיטות להערכת שלמות ותפקוד הממברנה, קידום מודלים במבחנה המחקים את הפיזיולוגיה של מערכת העיכול של הבקר. גישה זו מבטיחה יתרונות ביו-רפואיים וחקלאיים משמעותיים, כולל אסטרטגיות טיפול משופרות.

התקדמות בטכנולוגיית אורגנואיד בקר באמצעות ממשקים חד-שכבתיים של מעי קטן וגדול

וידאו זה מדגים את הטכניקה להפקת DNA של זנים של חיידקים במעי האחורי תושב טרמיטים. ההכנה של שקופית הר רטוב, אשר הוא שימושי עבור לדמיין את הקהילה חיידקים במעיים מודגם גם, סיור דרך הסביבה, מינים עשיר הבטן הוא נתון.

חילוץ ה-DNA של חיידקים במעיים של טרמיטים (Zootermopsis Angusticollis) באופן חזותי חיידקים גוט

חקור מודל אורגנואידים דו-ממדיים ממעי חזיר לחקירת תכונות תחבורה במעי הדק והגס. השיטה משלבת מדידות TEER וניסויי תאי אוסינג להערכת תגובות פיזיולוגיות בזמן אמת.

אורגנואידים דו-ממדיים במעי חזיר המשקפים את התכונות הפיזיולוגיות של המעיים הטבעיים

גלה סרטונים נוספים