Name: העברת גנים יעילה ובטוחה לכליות העכבר באמצעות הזרקת אגן כליה רטרוגרדית איטית של וקטורים של וירוסים הקשורים לאדנו. (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 24 s
Description: למד שיטת הזרקת אגן כליה רטרוגרדית איטית להעברת גנים לכליות עכבר באמצעות וקטורי AAV. שיטה זו מאפשרת שילוב יעיל בנפרונים הפרוקסימליים ללא נזק לרקמה ותומכת במחקר כליות ותרפיית גנים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<table><tbody><tr><td>0.45 &amp;mu;m PVDF syringe filter</td><td>MilliporeSigma</td><td>SLHVR33RS</td><td></td></tr><tr><td>1.5 mL microcentrifuge tube&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>15 mL polypropylene tube</td><td>Corning</td><td>352097</td><td></td></tr><tr><td>16% paraformaldehyde (PFA)</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>250 mL centrifuge bottle</td><td>Fisher Scientific</td><td>055641S24</td><td></td></tr><tr><td>2F Silicone tubing</td><td>Sai Infusion Technologies</td><td>SIL-2-50&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>25G butterfly needle</td><td>Medex Supply</td><td>26708</td><td></td></tr><tr><td>2-methylbutane</td><td>MilliporeSigma</td><td>MX0760</td><td></td></tr><tr><td>2x qPCR reaction buffer</td><td>Fisher Scientific</td><td>43-676-59</td><td>Power SYBR Green PCR Master Mix</td></tr><tr><td>30G needle</td><td>Becton-Dickinson &amp; Co</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>50 mL polypropylene tube</td><td>Corning</td><td>430291</td><td></td></tr><tr><td>5-0 monofilament suture</td><td>Ethicon</td><td>Y463G</td><td></td></tr><tr><td>5 M NaCl</td><td>Lonza</td><td>51202</td><td></td></tr><tr><td>6-0 absorbable suture</td><td>Ethicon</td><td>J489G</td><td></td></tr><tr><td>7.5% Mini-PROTEAN TGX Precast Protein Gels, 10-well, 30 &micro;L</td><td>Bio-Rad</td><td>4561023</td><td></td></tr><tr><td>Amersham ImageQuant 800 Western Blot Imaging System (Cytiva)</td><td>Cytiva</td><td>29459405</td><td></td></tr><tr><td>Amicon 100 kDa MWCO, 15 mL tube</td><td>Millipore Sigma</td><td>UFC910024</td><td></td></tr><tr><td>Anti-aquaporin 2 (AQP2) antibody</td><td>Abcam</td><td>ab199975</td><td>A marker for collecting duct cells</td></tr><tr><td>Anti-Na-K-2Cl cotransporter 2 (NKCC2) antibody</td><td>StressMarq Biosciences</td><td>SPC-401</td><td>A marker for thick ascending limb cells</td></tr><tr><td>Anti-rabbit IgG Alexa Fluor 647 antibody</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>111-605-144</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Wilms Tumor 1 (WT1) antibody</td><td>Abcam</td><td>ab89901</td><td>A marker for podocytes</td></tr><tr><td>Beckman Coulter OptiSeal Tube, Polypropylene, 29.9 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9691210</td><td></td></tr><tr><td>Beckman Coulter OPTISEAL TUBES</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9611575</td><td></td></tr><tr><td>Benzonase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1016970001</td><td></td></tr><tr><td>Bovine serum albumin (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>5470</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugal ultrafiltration tube</td><td>MilliporeSigma</td><td>UFC9100</td><td>Amicon 100 kDa MWCO, 15 mL</td></tr><tr><td>Ceramic bead tube</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-340-154</td><td></td></tr><tr><td>Cesium chloride</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3032-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Clamp applying forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>00071-14</td><td></td></tr><tr><td>Closed-loop heat pad</td><td>Stryker Medical</td><td>8002-062-012</td><td></td></tr><tr><td>Cotton-tipped applicator</td><td>Puritan</td><td>806-WC</td><td></td></tr><tr><td>Cover glass</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-541B</td><td></td></tr><tr><td>Cryostat microtome</td><td>Tanner Scientific</td><td>TN50</td><td></td></tr><tr><td>Curved forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11052-10</td><td></td></tr><tr><td>Curved-type micro vessel clip</td><td>Kleinert-Kutz</td><td>65145</td><td>Clamp for the renal artery and renal vein</td></tr><tr><td>Dialysis cassette</td><td>Fisher Scientific</td><td>PIA52976</td><td></td></tr><tr><td>DNA extraction kit</td><td>Qiagen</td><td>57704</td><td>QIAamp MinElute Virus Spin Kit</td></tr><tr><td>D-Sorbitol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S6021-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium- high glucose</td><td>Corning</td><td>15-013-CV</td><td>DMEM-high glucose (4.5 g/L)</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-575-020</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Decon Laboratories</td><td>2716GEA</td><td></td></tr><tr><td>Fetal bovine serum (FBS)</td><td>VWR</td><td>89510-186</td><td></td></tr><tr><td>Gas-tight glass syringe</td><td>Hamilton</td><td>1710 TLL</td><td></td></tr><tr><td>Glutaraldehyde solution</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G6257</td><td></td></tr><tr><td>Heat therapy pump</td><td>Kent Scientific</td><td>HTP-1500</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H4034-100G</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>Invitrogen</td><td>H3570</td><td></td></tr><tr><td>Homogenizer</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-340-163</td><td></td></tr><tr><td>Human embryonic kidney (HEK) 293 cells</td><td>Agilent</td><td>240073</td><td></td></tr><tr><td>Ice bucket</td><td>Fisher Scientific</td><td>07-210-104</td><td></td></tr><tr><td>Infusion syringe pump</td><td>Harvard Apparatus</td><td>70-4507</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal Critical Care</td><td>NDC 66794-017-10</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>Fisher Scientific</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>Liquid blocker pen</td><td>Ted Pella</td><td>22309</td><td></td></tr><tr><td>Lotus tetragonolobus lectin (LTL)- Fluorescein</td><td>Vector Laboratories</td><td>FL-1321-2</td><td>A marker for proximal tubules</td></tr><tr><td>Magnesium chloride (MgCl2)</td><td>MilliporeSigma</td><td>M1028</td><td></td></tr><tr><td>Meloxicam</td><td>VetOne</td><td>NDC 86136-012-10</td><td>Analgesic</td></tr><tr><td>Microscope glass slide</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>Mounting medium</td><td>SouthernBiotech</td><td>0100-01</td><td></td></tr><tr><td>Needle holder</td><td>Fine Science Tools</td><td>12501-13</td><td></td></tr><tr><td>OCT compound</td><td>Sakura Finetek</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>Ophthalmic ointment</td><td>Bausch &amp; Lomb</td><td>NDC 24208-313-34</td><td></td></tr><tr><td>PE-10 polyethylene tube</td><td>BD</td><td>427401</td><td>Inner diameter: 0.28 mm</td></tr><tr><td>Penicillin &amp; Streptomycin Mix</td><td>Fisher Scientific</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate-buffered saline (PBS)</td><td>Fisher Scientific</td><td>10010-049</td><td></td></tr><tr><td>Plastic cryomold</td><td>Sakura Finetek</td><td>4566</td><td></td></tr><tr><td>Poloxamer 188 Non-ionic Surfactant (10%)</td><td>Fisher Scientific</td><td>24-040-032</td><td></td></tr><tr><td>Polyethylene Glycol 8

העברת גנים יעילה ובטוחה לכליות העכבר באמצעות הזרקת אגן כליה רטרוגרדית איטית של וקטורים של וירוסים הקשורים לאדנו.

Effective and Safe Gene Delivery to the Mouse Kidney via Slow Retrograde Renal Pelvis Injection of Adeno-Associated Virus Vectors

The development of effective in vivo tools and methods for gene delivery to the kidney is crucial for advancing basic kidney research and gene therapy for ...

effective-safe-gene-delivery-to-mouse-kidney-via-slow-retrograde

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

בסרטון זה, אנו מדגימים העברת גנים רקומביננטיים מבוססי וירוס הקשורים לאדנו בגור העכבר. שיטה זו מסייעת בחקר ביטוי גנים בתאי היעד.

Recombinant Adeno Associated Virus Based Gene Delivery: טכניקה להעברת טרנסגנים וביטוי ספציפי ללב במודל מכרסם

מקור:Pourshafie, N., et al. אספקה מערכתית של מיקרו-רנ"א באמצעות סרוטיפ 9 של נגיף רקומביננטי הקשור לאדנו, לטיפול במחלות עצב-שריר במכרסמים. J. Vis. Exp. (2018).בסרטון זה, ניוון שרירים בעמוד השדרה והבולבר או עכבר המושפע מ-SBMA עובר הזרקת וריד זנב של וקטורים רקומביננטיים AAV (וקטורים הקשורים לאדנו) הנושאים פלסמיד המקודד מיקרו-RNA טיפולי. הווקטור מייצר מיקרו-RNA שנקשר למוטציה AR (קולטן אנדרוגן)-mRNA (חומצה ריבונוקלאית שליח), מה שמפעיל את פירוקו. זה מפחית הצטברות חלבון רעיל ועוזר לשפר את התפקוד...

הזרקת וקטורים רקומביננטיים הקשורים לאדנו במודל עכבר ניוון שרירים בעמוד השדרה והבולברי

השתלה של תאים סרטניים לתוך האיבר ממוצא יכולה לשמש מודל פרה שימושי כדי להעריך את הטיפולים חדשניים. ניתן לגדל תאי קרצינומה של שלפוחית ​​השתן MB49 בתוך שלפוחית ​​השתן בעקבות החדרת שלפוחית. פרוטוקול זה מדגים צנתור של שלפוחית ​​השתן בעכבר לצורך השתלת גידול ואספקת adenoviral.

סרטן שלפוחית ​​השתן לדגם orthotopic ג&#39;ין משלוח לימודים

הגישה הכירורגית הפוסט-אפרכסת המתוארת מאפשרת אספקה מהירה וישירה לשבלול העכבר scala tympani תוך מזעור אובדן דם ותמותת בעלי חיים. ניתן להשתמש בשיטה זו לטיפול בשבלול באמצעות העברה מולקולרית, פרמקולוגית וויראלית לעכברים לאחר לידה דרך קרום החלון העגול.

שיטה ניתוחית למשלוח באופן ויראלי המתווכת Gene לאוזן הפנימית באמצעות עכבר העגול חלון ממברנה

בכתב יד זה, מתוארת שיטה להכנת וקטורים רקומביננטיים של נגיף 9 הקשור לאדנו-9 (rAAV9) למניפולציה של ביטוי גנים בלב העכבר.

גני הכנת rAAV9 כדי overexpress או מציאת עכבר לבבות

כאן נתאר את המסירה של microRNA באמצעות serotype של וירוס רקומביננטי adeno-הקשורים 9 במודל של עכברים של מחלה עצב-שריר. ניהול היקפיים יחידה בעכברים כתוצאה miRNA מתמשכת ביטוי שריר, מוטורי לגלוקוז, מתן הזדמנות טיפולית פוטנציאל vivo בתוךותפקוד miRNA של המחקר.

משלוח מערכתית של MicroRNA באמצעות וירוס רקומביננטי Adeno-הקשורים Serotype 9 לטיפול מחלות נוירומוסקולריות אצל מכרסמים

מטרת המחקר הנוכחי הייתה לפתח ולאמת את העוצמה והבטיחות של נגיף השד הקשור ל- Adeno-9 (AAV9), באמצעות שימוש בטכניקה חדשה של מתן גנים תת-גנטי בעכברים בוגרים.

Subnial Adeno הקשורים וירוסים 9 (AAV9) וקטור משלוח ב עכברים למבוגרים

פרוטוקול זה מתאר שיטה להחדיר פלסמיד DNA לתוך הכליה העכבר באמצעות אגן הכליה כדי לייצר transgene ביטוי במיוחד בתוך הכליה.

הזרקת hydrodynamic אגן הכליה נגיפי ביטוי של חלבונים בתוך הכליה.

אנו מתארים שיטה למסירה של הדנ א פלסמיד לתאים urothelial של העכבר שלפוחית השתן ויוו דרך השופכה צנתור אלקטרופורציה. הוא מציע דרך נוחה ומהירה ליצירת מודלים העכבר autochthonous של מחלות שלפוחית השתן.

הרומן שיטת המסירה דנ א פלסמיד העכבר Urothelium שלפוחית השתן על ידי אלקטרופורציה

כאן אנו מפרטים פרוטוקול אופטימלי להזרקת וריד זנב רוחבי של עכבר לניהול מערכתי של וירוס הקשור לאדנו (AAV) בעכברים בוגרים. בנוסף, אנו מתארים פרוטוקולים של בדיקות נפוצות להערכת התמרה AAV.

אספקה עקבית של וירוס הקשור לאדנו באמצעות הזרקת וריד זנב לרוחב בעכברים בוגרים

פרוטוקול זה מתאר כיצד הזרקה תוך-טחולית של RNA סיכת ראש קטנה המועברת על ידי AAV8 משיגה את אותה יעילות הפלת גנים בכבד כמו הזרקת וריד פורטלי, המייצגת הליך פשוט יותר עם תמותה וסיבוכים נמוכים בהרבה סביב הניתוח ואחרי הניתוח.

הפלת גנים יעילה בכבד באמצעות הזרקה תוך-טחולית של RNA סיכת ראש קטנה המסופקת על ידי נגיף הקשור לאדנו Serotype 8 (AAV8)

למד שיטת הזרקת אגן כליה רטרוגרדית איטית להעברת גנים לכליות עכבר באמצעות וקטורי AAV. שיטה זו מאפשרת שילוב יעיל בנפרונים הפרוקסימליים ללא נזק לרקמה ותומכת במחקר כליות ותרפיית גנים.

העברת גנים יעילה ובטוחה לכליות העכבר באמצעות הזרקת אגן כליה רטרוגרדית איטית של וקטורים של וירוסים הקשורים לאדנו.

גלה סרטונים נוספים