הקמה ואימות של מודל חולדה של יתר לחץ דם עורקי ריאתי הקשור לפיברוזיס ריאתי

מחקר זה חוקר את הפתוגנזה של יתר לחץ דם ריאתי מקבוצה 3, תוך התמקדות במנגנונים מולקולריים במקרה הקשור לפיברוזיס ריאתי. בניגוד ליתר לחץ דם עורקי ריאתי, המנגנונים העומדים בבסיס יתר לחץ דם ריאתי הקשור למחלת ריאות אינטרסטיציאלית עדיין אינם מובנים היטב. ההתפתחויות האחרונות בתחום זה כוללות יעילות בהיפוך שיפוץ כלי הדם. גילוי פנוטיפים של אנדותל דמוי סרטן וממצאים מטבוליים, המקשרים בין חומצות אמינו וחוסר ויסות שומנים לפתוגנזה של יתר לחץ דם ריאתי. מטבולימיקה ובדיקות פונקציונליות של ריצוף I-A בתפזורת ותאים בודדים, כגון בדיקת עמידות למקרים מעצבנים הן טכנולוגיות מרכזיות למיפוי יתר לחץ דם ריאתי, הטרוגניות וזיהוי מטרות טיפוליות.

[מדריך] כדי להתחיל, יש להחדיר את קנה הנשימה של החולדה באמצעות צינור PE-50, המוחדר לעומק של שלושה סנטימטרים, שהוא המרחק מהגלוטיס לקצה הצינור. בעזרת מזרק מיליליטר אחד עם מחט בגודל 26, שאב 0.2 מיליליטר של בלאומיצין והזריק אותו לדרכי הנשימה דרך צינורית כמנה אחת. הנח את החולדה במצב שכיבה כדי להבטיח פיזור אחיד של בלאומיצין. החזק בעדינות וסובב לאט את החולדה, לסירוגין בזווית של 30 מעלות עד 45 מעלות. שמרו על כל סיבוב למשך 10 עד 15 שניות וחזרו על הפעולה שלוש עד ארבע פעמים. פתח את תוכנת PFT ובדוק שהמכשיר מזוהה. כעת הפעל את מתג מכשיר הבקרה הראשי וודא שכל אות ampמתג מגבר כבוי. כדי להגדיר את זרימת האוויר, הפעל את אום ויסות זרימת אוויר היניקה והגדר את ההשראה לחמש. לאחר מכן הפעל את אום ויסות זרימת האוויר הנשיפה והגדר את התפוגה האיטית למינוס ארבע. הגדר את ערך הלחץ ל-60. כייל את המכשיר בסדר זרימת FRC, זרימה, זרימה גבוהה ולחץ ריאות עם שגיאה של פחות מ-5%. לאחר הרדמת החולדה, חותכים את העור לאורך מרכז הצוואר. הפרד את השרירים שכבה אחר שכבה כדי לחשוף את החלק העליון של קנה הנשימה הצווארי. בצע חתך אופקי בין טבעות הסחוס של קנה הנשימה. הכנס במהירות את צינורית המתכת לחתך קנה הנשימה, הבטח מיקום נכון ואבטח עם ארבעה תפרי חוט משי אפס. הנח את החולדה בתא החיות PFT וחבר את צינורית קנה הנשימה לממשק תעלת זרימת האוויר מחוץ למכשיר. לחץ על כפתור ההתחלה ובדוק את הקיבולת החיונית הכפויה או FVC ותאימות ריאות דינמית. לזיהוי לחץ סיסטולי בחדר ימין, או RVSP, קבע את בטן החולדה המורדמת כלפי מעלה על ספסל הניסוי. בצע חתך באורך של כארבעה סנטימטרים בצד ימין של הצוואר, באמצעות מספריים כירורגיים. הפרד את וריד הצוואר החיצוני בעדינות בעזרת מלקחיים מיקרו-כירורגיים, תוך הקפדה על בידוד אורך של כסנטימטר אחד. הכנס שני קווים כירורגיים בקצה הדיסטלי והפרוקסימלי של הווריד המופרד. קשרו את הקצה הדיסטלי של וריד הצוואר החיצוני, באמצעות ארבעה חוטי משי אפס. הרם בעדינות את קו הניתוח הפרוקסימלי והנח אותו על דופן הווריד הדיסטלי. בצע חתך קטן של כ- 0.3 מילימטרים בעזרת מספריים קטנים. לאחר החדרת צינור PE-50 לווריד הצוואר החיצוני, קשרו את צינור ה-PE-50 והווריד יחד באמצעות ארבעה חוטי משי אפס כדי למנוע דליפת דם. התבונן בצורת גל הלחץ הוורידי על המקליט. דחוף את הצנתר באיטיות לתוך הפרוזדור הימני, וקדם אותו לחדר הימני כדי להציג את צורת הגל של לחץ החדר הימני. כאשר הלחץ יציב, רשום את לחץ החדר הימני למשך דקה אחת ושמור את הנתונים לניתוח. לאחר כריתת בית החזה, הסר את הלב השלם של החולדה באמצעות פינצטה. חתכו את האורקל ואת רקמת החיבור ליד הלב במספריים. חותכים את הקיר החופשי של החדר הימני לאורך עורק הריאה. רקמה זו היא החדר הימני והרקמות הנותרות הן החדר השמאלי בתוספת המחיצה התוך חדרית. לאחר ההפרדה, יש לנקז את פני החדר הימני והחדר השמאלי בתוספת המחיצה התוך חדרית, בעזרת נייר פילטר. שקלו את החדר הימני והחדר השמאלי בתוספת מחיצת החדר בנפרד עם איזון אנליטי לפני חישוב יחס המשקל שלהם. איור זה ממחיש את השינויים ההמודינמיים, שיפוץ כלי הדם הריאתיים ותפקוד הריאות הלקוי שנצפו במודל החולדות PF PH המושרה על ידי בלאומיצין. הלחץ הסיסטולי של החדר הימני והיחס בין החדר הימני לחדר השמאלי בתוספת מחיצה עלו באופן משמעותי בקבוצת המודל בהשוואה לקבוצת הביקורת. צביעה היסטולוגית חשפה יותר אזורים מוכתמים בכחול סביב עורקי הריאה בקבוצת המודל, מה שמעיד על הצטברות קולגן גדולה יותר. הקיבולת החיונית הכפויה והיענות הריאות הדינמית הופחתו משמעותית בקבוצת המודל בהשוואה לקבוצת הביקורת. היחסים בין זמן האצת עורק הריאה לזמן הפליטה, הסטייה הסיסטולית של המישור הטבעתי התלת-שפתי, שינוי שטח השבר של החדר הימני ותפוקת הלב הופחתו משמעותית בקבוצת המודל. ריכוז הידרוקסיפרולין היה גבוה משמעותית בקבוצת המודל, מה שמעיד על תכולת קולגן מוגברת ברקמת הריאה. משקל הכבד והכליות לא היה שונה באופן משמעותי בין קבוצת הביקורת לקבוצת המודל.