Name: התמרה רטרו-ויראלית יעילה וביות תחרותי לחקירת לוקליזציה של תאי T בתיווך GPCR במיקרו-סביבות רקמה מגוונות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 12 s
Description: חקור התמרה רטרו-ויראלית יעילה וביות תחרותי ללימוד מיקום תאי T בתיווך GPCR במיקרו-סביבות רקמה. שיטה זו מספקת תובנות לגבי מנגנוני תנועת תאים חיסוניים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Cheng, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure%2C+function+and+drug+discovery+of+GPCR+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22MolBiomed%22%5BJournal%5D)">Structure, function and drug discovery of GPCR signaling.</a> MolBiomed. 4 (1), 46(2023).</li>
<li>Lammermann, T., Kastenmuller, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concepts+of+GPCR-controlled+navigation+in+the+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">Concepts of GPCR-controlled navigation in the immune system.</a> Immunol Rev. 289 (1), 205-231 (2019).</li>
<li>Fu, H., Ward, E. J., Marelli-Berg, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+t+cell+organotropism%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of t cell organotropism.</a> Cell Mol Life Sci. 73 (16), 3009-3033 (2016).</li>
<li>Cinalli, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cell+homeostasis+requires+g+protein-coupled+receptor-mediated+access+to+trophic+signals+that+promote+growth+and+inhibit+chemotaxis%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">T cell homeostasis requires g protein-coupled receptor-mediated access to trophic signals that promote growth and inhibit chemotaxis.</a> Eur J Immunol. 35 (3), 786-795 (2005).</li>
<li>Wu, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Illuminating+the+onco-GPCRome%3A+Novel+g+protein-coupled+receptor-driven+oncocrine+networks+and+targets+for+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Illuminating the onco-GPCRome: Novel g protein-coupled receptor-driven oncocrine networks and targets for cancer immunotherapy.</a> J Biol Chem. 294 (29), 11062-11086 (2019).</li>
<li>Wu, V. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+GPCR-alpha%28s%29-pka+signaling+axis+promotes+T-cell+dysfunction+and+cancer+immunotherapy+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">The GPCR-alpha(s)-pka signaling axis promotes T-cell dysfunction and cancer immunotherapy failure.</a> Nat Immunol. 24 (8), 1318-1330 (2023).</li>
<li>Ramezani, A., Hawley, T. S., Hawley, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stable+gammaretroviral+vector+expression+during+embryonic+stem+cell-derived+in+vitro+hematopoietic+development%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Stable gammaretroviral vector expression during embryonic stem cell-derived in vitro hematopoietic development.</a> Mol Ther. 14 (2), 245-254 (2006).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Plat-E+retroviral+packaging+cells+%28RV-101%29+user+manual%22">Plat-E retroviral packaging cells (RV-101) user manual</a>. , Cell Biolabs. https://www.cellbiolabs.com/sites/default/files/RV-101-plat-e-retroviral-packaging-cells.pdf (2024).</li>
<li>Anderson, J., Hope, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+trafficking+of+retroviral+vectors%3A+obstacles+and+advances%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Intracellular trafficking of retroviral vectors: obstacles and advances.</a> Gene Ther. 12, 1667-1678 (2005).</li>
<li>Kim, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+analyses+of+lamina+propria+lymphocytes+from+mouse+intestines%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation and analyses of lamina propria lymphocytes from mouse intestines.</a> STAR Protoc. 3 (2), 101366(2022).</li>
<li>Steinert, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+Memory+CD8+T+Cells+Reveals+Regionalization+of+Immunosurveillance%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Quantifying Memory CD8 T Cells Reveals Regionalization of Immunosurveillance.</a> Cell. 161 (4), 737-749 (2015).</li>
<li>Miltenyi Biotec. CD90.1 MicroBeads mouse and rat. , https://static.miltenyibiotec.com/asset/150655405641/document_3ea1u0fdf5423ci3qg8mc8rl4c?content-disposition=inline accessed (2024).</li>
<li>Ocón, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+lymphocyte+chemoaffinity+axis+for+lung%2C+non-intestinal+mucosae+and+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A lymphocyte chemoaffinity axis for lung, non-intestinal mucosae and CNS.</a> Nature. 635, 736-745 (2024).</li>
<li>Sumida, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gpr55+regulates+intraepithelial+lymphocyte+migration+dynamics+and+susceptibility+to+intestinal+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Immunol%22%5BJournal%5D)">Gpr55 regulates intraepithelial lymphocyte migration dynamics and susceptibility to intestinal damage.</a> Sci Immunol. 2 (18), eaao1135(2017).</li>
<li>Foxman, E. F., Campbell, J. J., Butcher, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multistep+navigation+and+the+combinatorial+control+of+leukocyte+chemotaxis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Multistep navigation and the combinatorial control of leukocyte chemotaxis.</a> J. Cell Biol. 139 (5), 1349-1360 (1997).</li>
<li>Alawar, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+solution+for+highly+efficient+electroporation+of+primary+cytotoxic+T+lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A solution for highly efficient electroporation of primary cytotoxic T lymphocytes.</a> BMC Biotechnol. 24 (1), 16(2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>AF647 נגד עכבר CD90.1-Thy1.1 (OX-7)</td><td>ביולג'נד&nbsp;</td><td>202507</td><td></td></tr><tr><td>אנטי-CD31 (DyLight 633, שיבוט 390)</td><td>InvivoMab&nbsp;</td><td>BE0377</td><td></td></tr><tr><td>נגד עכבר CD28 37.51</td><td>eBiosciences&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>נגד עכבר CD3 145-2C11</td><td>eBiosciences&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>APCCy7 נגד עכבר CD3 (145-2c11)</td><td>ביולג'נד&nbsp;</td><td>100329</td><td></td></tr><tr><td>BV421 נגד עכבר CD8b&nbsp; (לי-3)</td><td>ביולג'נד&nbsp;</td><td>126629</td><td></td></tr><tr><td>BV711 נגד עכבר CD4 (RM4-5)&nbsp;</td><td>ביולג'נד&nbsp;</td><td>100549</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו-חרוזים CD90.1&nbsp;</td><td>Miltenyi&nbsp;</td><td>130-121-273</td><td></td></tr><tr><td>CFSE&nbsp;</td><td>תרמו-מדעי&nbsp;</td><td>C34554</td><td></td></tr><tr><td>FITC נגד עכבר CD45.2 (104)</td><td>ב.ד.</td><td>AB_395041</td><td></td></tr><tr><td>עכבר IL2&nbsp;</td><td>פפרוטק&nbsp;</td><td>200-02-50UG</td><td></td></tr><tr><td>עכבר IL7&nbsp;</td><td>פפרוטק&nbsp;</td><td>&nbsp; 217-17-10UG</td><td></td></tr><tr><td>ערכת בידוד עכבר T CD4&nbsp;</td><td>טכנולוגיות תאי גזע&nbsp;</td><td>18000</td><td></td></tr><tr><td>MSCV-IRES- Thy1.1 GPR25</td><td>וקטור בונה&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MSCV-IRES- ממלא Thy1.1</td><td>וקטור בונה&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PE-CD45 (30-F11) נוגדן&nbsp;</td><td>ביולג'נד&nbsp;</td><td>103105</td><td></td></tr><tr><td>PECy7 אנטי עכבר TCRb&nbsp; (H57-597)</td><td>טונבו</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PercpCy5.5 נגד עכבר CD45.1 (A20)</td><td>eBiosciences&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פלטינה-E (Plat-E)&nbsp;</td><td>תא מעבדות ביולוגיות. בע"מ&nbsp;</td><td>RV-101</td><td></td></tr><tr><td>צבע פלואורסצנטי צהוב&nbsp;</td><td>תרמו-מדעי&nbsp;</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

התמרה רטרו-ויראלית יעילה וביות תחרותי לחקירת לוקליזציה של תאי t בתיווך gpcr במיקרו-סביבות רקמה מגוונות

Efficient Retroviral Transduction and Competitive Homing for Investigating GPCR-Mediated T-Cell Localization in Diverse Tissue Microenvironments

במחקר זה, אנו מציגים פרוטוקול מפורט לחקירת יכולתם של קולטנים ספציפיים לכוון לוקליזציה של תאי T in vivo. כהדגמה של פרוטוקול זה, השתמשנו ב-GPR2513. אנו מסוגלים להשיג יעילות התמרה של 30%-40% באמצעות פרוטוקול זה, כפי שהוערך על ידי צביעת Thy1.1 על ידי ציטומטריית זרימה. ביצענו בדיקות כימוטקסיס מבוססות טרנסוול במבחנה באמצעות תאים מותמרים GPR25 לצד בקרות ממלאות, ובדקנו את נדידתם לעבר hCXCL17, mCXCL17 ו-CXCL12 כבקרה חיובית. תאי T מותמרים GPR25 נדדו ביעילות ל-CXCL17 בהשוואה לתאים שעברו התמרת ממולאי...

התמרה רטרו-ויראלית יעילה וביות תחרותי לחקירת לוקליזציה של תאי T בתיווך GPCR במיקרו-סביבות רקמה מגוונות

Understanding how G-protein coupled receptor (GPCR) expression affects cell positioning within diverse tissue microenvironments is essential for ...

המחקר שלנו בוחן כיצד GPCRs משפיעים על סחר בתאי חיסון ומיקומם על פני מיקרו-סביבות רקמה שונות. באמצעות פרוטוקול זה ופרוטוקולים משלימים אחרים, המעבדה שלנו זיהתה ציר כימו-אטרקטיבי ספציפי לאיבר ברקמות הריריות שאינן במעי. אז עכשיו, גילינו כיצד לימפוציטים, ביתם של הקיבה, הריאות, קנה הנשימה ומערכת העיכול. אני מציג שיטה יעילה ומשופרת לבדיקת האופן שבו GPCRs בודדים משפיעים על תנועת תאי T in vivo. פיתחנו דרך אמינה להחדיר את הקולטנים הללו לתאי T, המאפשרים כעת השוואה ישירה זה לצד זה במבחני ביות תחרותיים. כעת, כשאנחנו יודעים כיצד GPCRs מנחים תאי T in vivo, חוקרים יכולים לקשר טוב יותר בין ביטוי קולטנים לתפקוד חיסוני. זה יעזור לחוקרים באימונולוגיה בסיסית, כמו גם במחקר טיפולי. בגישה זו, אנו יכולים כעת לשאול כיצד GPCRs פחות מוכרים או לא מאופיינים מעורבים בהנחיית תאי T לרקמות ספציפיות. אנו יכולים ללמוד כיצד ניתן לכוונן את איתות GPCR לטיפול בסרטן או באוטואימוניות. אנו יכולים לעזור לתאי ה-T להגיע למקום הנכון בזמן הנכון לגישות טיפוליות.[קריין] כדי להתחיל, ביום הראשון, מצפים צלחות תרבית רקמות של 10 סנטימטר בחמישה מיליליטר של 50 מיקרוגרם למיליליטר תמיסת פולי-D-ליזין שהוכנה במים סטריליים. דגרו את הצלחות בטמפרטורת החדר למשך 45 דקות, ואז שטפו את הצלחות פעמיים עם PBS סטרילי ללא סידן ומגנזיום כדי להבטיח שלא יישארו שאריות. לאחר מכן, נתק תאי Plat-E באמצעות שני מיליליטר של 0.05% טריפסין ו-0.5 מילי-מולרי EDTA ב-37 מעלות צלזיוס למשך שלוש דקות. כדי להבטיח את כדאיות התא באמצעות מבחן אי הכללת הטריפן הכחול, מערבבים נפח שווה של תרחיף התא עם תמיסת טריפן כחולה. לאחר מכן, זרעו 3 מיליון תאים חיים בצלחת פטרי של תרבית רקמה בגודל 10 סנטימטר עם מדיום Plat-E ללא אנטיביוטיקה. ביום השני, החלף את המדיום בתרביות תאים Plat-E ב-6.5 מיליליטר של חומר מופחת בסרום. מכינים את תערובת הטרנספקציה לפי הוראות היצרן. עבור כל צלחת, מערבבים 45 מיקרוליטר של Lipofectamine 2000 עם 210 מיקרוליטר של מדיום סרום מופחת בצינור אחד ו-15 מיקרוגרם של DNA עם 235 מיקרוליטר של מדיום סרום מופחת בצינור אחר. שלב את תכולת הצינורות על ידי פיפטינג שלוש עד ארבע פעמים ודגר במשך 20 דקות בטמפרטורת החדר כדי להקל על היווצרות מורכבת. כעת, מוסיפים את התערובת טיפתית לצלחות ודוגרים למשך 16 שעות בחום של 37 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, מצפים צלחות של 24 בארות להפעלת תאי T עם CD28 ו-CD3 נגד עכבר ב-375 מיקרוליטר לבאר PBS. דגרו את הצלחות למשך הלילה בארבע מעלות צלזיוס או במשך שלוש עד ארבע שעות באינקובטור המוגדר על ארבע מעלות צלזיוס. ביום השלישי, השתמש בבוכנת מזרק כדי לרסק בעדינות את הטחול של העכברים המבודדים על מסננת תאי רשת ניילון בגודל 100 מיקרומטר המונחת בצלחת של שש בארות המכילה מדיום RPMI. העבירו את מתלה התאים דרך מסננת תאי רשת ניילון בגודל 40 מיקרומטר לתוך צינור חרוטי של 50 מיליליטר כדי לקבל מתלה תא בודד. צנטריפוגה את התמיסה ב-450 גרם למשך חמש דקות בארבע מעלות צלזיוס. לאחר מכן שטפו את התאים עם PBS ללא סידן ומגנזיום. לאחר מכן, בצע בחירה שלילית מגנטית באמצעות ערכת הבידוד CD4 של תא ה-T של העכבר בהתאם להוראות היצרן. ספרו את תא ה-T המבודד באמצעות מונה תאים. צלח את תאי ה-T בבארות ההפעלה המצופות של תאי T בצפיפות של 1 עד 1.5 מיליון תאים לבאר במיליליטר אחד של מדיום RPMI 10. דגרו על התאים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם 5% פחמן דו חמצני באינקובטור לח למשך 24 עד 48 שעות. ביום הרביעי, אספו כ-12 מיליליטר של סופרנטנט ויראלי מלוחות 10 סנטימטרים לתוך צינור חרוטי. החלף את המדיום בלוחות התרבית Plat-E ב-10 מיליליטר של מדיום Plat-E נטול אנטיביוטיקה כדי לייצר יותר סופרנטנט ויראלי להתמרה שנייה למחרת. כדי לסנן את הסופרנטנט הנגיפי שנאסף, העבירו אותו דרך מסנן מזרק של 0.45 מיקרומטר. הוסף שמונה מיקרוגרם למיליליטר פוליברן ודילול אחד עד 100 של מאגר HEPES לסופרנטנט המסונן. סובב את צלחת תאי ה- T בת 24 הבארות למשך שבע דקות במשקל של 950 גרם. לאחר מכן, אסוף בזהירות ושמור את הסופרנטנט מבלי לעקור את תאי ה-T. כדי לבצע זיהום, הוסף מיליליטר אחד של סופרנטנט ויראלי לכל באר. אוטמים את הצלחות בניילון נצמד וסובבים את הצלחות ב-1,150 גרם למשך ארבע שעות בחום של 32 מעלות צלזיוס. לאחר חיטום, החלף בזהירות את המדיה בכל באר בסופרנטנט תאי T שנשמר בעבר. ביום השישי, אספו תאי T מהצלחת לתוך צינור חרוטי וצנטריפוגה. שוטפים את הגלולה עם PBS המכיל סידן ומגנזיום. העבירו את התאים ללוחית תרבית חדשה המכילה 130 יחידות למיליליטר של אינטרלוקין-2 של עכבר ו-10 ננוגרם למיליליטר של אינטרלוקין-7 של עכבר. לדגור על התאים למשך יומיים לפחות או עד שהם מגיעים לרמת ההתפשטות הרצויה על סמך מספר התאים הדרושים להזרקה. ביום השמיני, צנטריפוגה ב-450 גרם למשך חמש דקות בארבע מעלות צלזיוס כדי לגלול את התאים. הוסף חמישה מיליליטר של Histopaque-1077 בצינור של 15 מיליליטר. השעו מחדש את גלולת תאי ה-T בחמישה מיליליטר PBS המכילים סידן ומגנזיום. שכב בזהירות את תרחיף התא על גבי חמישה מיליליטר של Histopaque-1077 בצינור הצנטריפוגה. צנטריפוגה את הדגימה ב-400 עד 500 גרם למשך 20 דקות בטמפרטורת החדר, מה שמבטיח ששבירת הצנטריפוגה או התאוצה מוגדרת ל-0. לאחר צנטריפוגה, שימו לב להיווצרות שכבות תאים נפרדות. אסוף בזהירות את שכבת הממשק המכילה את התאים הרצויים באמצעות פיפטה, הימנע מזיהום בשכבות אחרות. תאי T מתמרים GPR25 הראו הגירה משופרת לכיוון hCXCL17 ו-mCXCL17 ביחס לבקרות מתומרות ממלאות, ואימתו את ביטוי הקולטן הפונקציונלי. GPR25 התמיר תאים הממוקמים באופן מועדף לרקמות ריריות שאינן מעיים, כגון דרכי המין, הקיבה וקנה הנשימה, עם העשרה משמעותית שנצפתה לאחר שבעה שבועות, אך לא שבוע לאחר ההזרקה. מבחני ביות לטווח קצר הראו כי GPR25 התמיר תאי T המועדפים על איברים עשירים ב-Cxcl17, כגון קנה הנשימה, הקיבה, הלשון, כיס המרה ורירית הרחם, בעוד שלא הצליח להצטבר בעכברים חסרי Cxcl17. GPR25 התמיר תאים בעיקר בסמפונות, בעוד שתאי ביקורת נמצאו בתדירות גבוהה יותר ליד ורידים.

efficient-retroviral-transduction-competitive-homing-for

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

אנו מציגים פרוטוקול לייצר אנטיגן ספציפי עכבר מתאי T באמצעות התמרה...

התמרה retroviral של T-cell קולטנים עכבר מתאי T

ניסויים ביות תחרותי לאפשר ישירות להעריך את מאפייני הנדידה של שתי אוכלוסיות תאים שונות עכבר אחת. כאן אנו מדגימים הליך זה על ידי השוואת ההגירה לשעבר טרופי-vivo הבטן שנוצר לעומת אי - טי בטן תאים טרופי.

מבחני ביות תחרותי לחקר נדידת גוט-טרופי T Cell

העברת גני adenoviral לתוך CD4 נאיבי תאי T מהונדס עם ביטוי של הקולטן אדנווירוס Coxsackie מאפשרת ניתוח המולקולרי של התמיינות תאי T...

התמרה adenoviral של CD4 תמימים תאי T ללמוד בידול Treg

אנו מתארים פרוטוקול לניטור ניידות רדיאלית של תאים חיסוניים שאינם נצמדים במבחנה באמצעות מנגנון סעפת/החלקה של שקיעת תאים. נדידת תאים עוקבת אחר חד-שכבות של תאי גידול או על חלבוני מטריצה חוץ-תאיים. בדיקה במיקרוסקופ אור ופלואורסצנטי מאפשרת התבוננות בניידות התא ובתפקוד הציטוטוקסי.

מחוגי ניידות ותפקוד ציטוטוקסיות של retroviral מעתיקה וקטור transduced, שאינם חסיד Alloresponsive T לימפוציטים

אנו מציגים פרוטוקול מהיר וגמיש למערכת ביטוי רטרו-ויראלית מבוססת קולטן תאי T יחיד (TCR).  וקטורים רטרו-ויראלים משמשים להתמרת תאי אב של מח עצם כדי לחקור את התפתחות תאי T ותפקודם של TCR יחיד in vivo כחלופה לעכברים טרנסגניים TCR.

Retroviral התמרה של ובתאים מח עצם כדי ליצור תאי T קולטן Retrogenic עכברים

מערכות ניסיוניות רבות כבר נוצלו כדי להבין את המנגנונים המסדירים פיתוח תאי T ולתפקד תגובה חיסונית. הנה גישה גנטית באמצעות תמרת retroviral מתוארת, אשר היא כלכלי, זמן יעיל, והכי חשוב, מאוד אינפורמטיבי בזיהוי מסלולים רגולטוריים.

Retroviral תמרה של Helper T תאים כגישה גנטית לחקר מנגנוני בקרת הבידול והתפקוד שלהם

המשלב בפרוטוקול הנוכחי לתא בודד לזווג אדם TCR אלפא, ביתא שרשרת רצף עם אווירודינמית דור תואם במבחנה ויוו TCR והביטוי retroviral וקטורים.

יעיל בידוד TCR תא בודד, דור של וקטורים Retroviral עבור במבחנה In Vivo הביטוי של האדם TCRs

פרוטוקול זה מתאר זיהוי מיקרוסקופיה confocal של G הקולטן חלבון בשילוב (GPCR) ההפנמה בתאי יונקים. הוא כולל את התרבות התא הבסיסי, transfection, ואת הליך מיקרוסקופיה confocal מספק שיטה יעילה ובקלות לפירוש לזהות את לוקליזציה subcellular והפנמה של GPCR פיוז'ן-הביעו.

איתור של הפנמת קולטן מצמיד חלבון G-מופעל ליגנד ידי מיקרוסקופי Confocal

כאן אנו מתארים שיטה של הבעה overexpression והעברה המאמצת של תאים מורנין ב-1a כדי לבחון ב vivo B-1a תא הגירה ולוקליזציה. פרוטוקול זה ניתן להארכה עבור שונים הזרם התפקודי של המטה אומר כולל כימות של לוקליזציה של התורם B-1a או ניתוח של הגורמים הנגזרים לתא התורם הנגזר לאחר העברה המאמצת.

Retroviral ביטוי יתר של CXCR4 על מורנה ב-1a תאים והעברה המאמצת עבור B-1a תא הגירה במח העצם ו IgM הפקה

אנו מציגים פרוטוקול להתמרה רטרו-ויראלית של RNA מנחה לתאי T ראשוניים מעכברים טרנסגניים Cas9, המספקים חלופה יעילה לעריכת גנים בחקר התמיינות Th17.

מיקוד גנים רטרו-ויראלי בתיווך CRISPR/Cas9 לחקר התמיינות Th17 במבחנה

חקור התמרה רטרו-ויראלית יעילה וביות תחרותי ללימוד מיקום תאי T בתיווך GPCR במיקרו-סביבות רקמה. שיטה זו מספקת תובנות לגבי מנגנוני תנועת תאים חיסוניים.

התמרה רטרו-ויראלית יעילה וביות תחרותי לחקירת לוקליזציה של תאי T בתיווך GPCR במיקרו-סביבות רקמה מגוונות

גלה סרטונים נוספים