Name: בדיקת מולקולות קטנות ובדיקת רעילות בזחלי דגי זברה בשלב מוקדם (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-07T14:10:00.000+00:00
Duration: 2 min 52 s
Description: למד פרוטוקול לסקרינג תרופות בזחלי דגי זברה בגיל 3-7 ימים לאחר הפריה. השיטה כוללת הערכה מורפולוגית באמצעות מיקרוסקופ סטריאו לאיתור תופעות לוואי ועיכובים בהתפתחות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Teame, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+zebrafish+%28Danio+rerio%29+as+biomedical+models%5BTitle%5D)+AND+%22Anim+Front%22%5BJournal%5D)">The use of zebrafish (Danio rerio) as biomedical models.</a> Anim Front. 9 (3), 68-77 (2019).</li>
<li>Howe, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+reference+genome+sequence+and+its+relationship+to+the+human+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The zebrafish reference genome sequence and its relationship to the human genome.</a> Nature. 496 (7446), 498-503 (2013).</li>
<li>Patton, E. E., Zon, L. I., Langenau, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+disease+models+in+drug+discovery%3A+From+preclinical+modelling+to+clinical+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Zebrafish disease models in drug discovery: From preclinical modelling to clinical trials.</a> Nat Rev Drug Discov. 20 (8), 611-628 (2021).</li>
<li>Clift, D., Richendrfer, H., Thorn, R. J., Colwill, R. M., Creton, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+analysis+of+behavior+in+zebrafish+larvae%3A+Effects+of+feeding%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">High-throughput analysis of behavior in zebrafish larvae: Effects of feeding.</a> Zebrafish. 11 (5), 455-461 (2014).</li>
<li>Keenan, S. R., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+developmental+phases+of+zebrafish+myogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">The developmental phases of zebrafish myogenesis.</a> J Dev Biol. 7 (2), 12(2019).</li>
<li>Tonelli, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+A+resourceful+vertebrate+model+to+investigate+skeletal+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Endocrinol+%28Lausanne%29%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: A resourceful vertebrate model to investigate skeletal disorders.</a> Front Endocrinol (Lausanne). 11, 489(2020).</li>
<li>OECD. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Test+no.+236%3A+Fish+embryo+acute+toxicity+%28FET%29%22">Test no. 236: Fish embryo acute toxicity (FET)</a>. , (2013).</li>
<li>Chen, J. R., Lai, Y. H., Tsai, J. J., Hsiao, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+fluorescent+staining+platform+for+drug-screening+and+mechanism-analysis+in+zebrafish+for+bone+mineralization%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Live fluorescent staining platform for drug-screening and mechanism-analysis in zebrafish for bone mineralization.</a> Molecules. 22 (12), 2068(2017).</li>
<li>He, H., Wang, C., Tang, Q., Yang, F., Xu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Possible+mechanisms+of+prednisolone-induced+osteoporosis+in+zebrafish+larva%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Possible mechanisms of prednisolone-induced osteoporosis in zebrafish larva.</a> Biomed Pharmacother. 101, 981-987 (2018).</li>
<li>Huang, H. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+bone+transgenic+zebrafish+in+anti-osteoporosis+chemical+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Model+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Application of bone transgenic zebrafish in anti-osteoporosis chemical screening.</a> Animal Model Exp Med. 1 (1), 53-61 (2018).</li>
<li>Haney, M. G., Moore, L. H., Blackburn, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+screening+of+primary+patient+derived+tumor+xenografts+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Drug screening of primary patient derived tumor xenografts in zebrafish.</a> J Vis Exp. (158), e60996(2020).</li>
<li>Nishimura, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+zebrafish+in+systems+toxicology+for+developmental+toxicity+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Congenit+Anom+%28Kyoto%29%22%5BJournal%5D)">Using zebrafish in systems toxicology for developmental toxicity testing.</a> Congenit Anom (Kyoto). 56 (1), 18-27 (2016).</li>
<li>Hayot, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+toxicity+of+chemicals+using+a+zebrafish+vibration+startle+response+screening+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Evaluating toxicity of chemicals using a zebrafish vibration startle response screening system.</a> J Vis Exp. (203), e66153(2024).</li>
<li>Hoyberghs, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DMSO+concentrations+up+to+1%25+are+safe+to+be+used+in+the+zebrafish+embryo+developmental+toxicity+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Toxicol%22%5BJournal%5D)">DMSO concentrations up to 1% are safe to be used in the zebrafish embryo developmental toxicity assay.</a> Front Toxicol. 3, 804033(2021).</li>
<li>Lipton, J. H., Brümmendorf, T. H., Sweet, K., Apperley, J. F., Cortes, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Practical+considerations+in+the+management+of+patients+treated+with+bosutinib+for+chronic+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Hematol%22%5BJournal%5D)">Practical considerations in the management of patients treated with bosutinib for chronic myeloid leukemia.</a> Ann Hematol. 103 (9), 3429-3442 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>צינור מיקרוצנטריפוגה 1.5 מ"ל</td><td>Starlab</td><td>E1415-1510</td><td></td></tr><tr><td>10 ומיקרו; מיקרופיפטה L (P10)</td><td>גילסון</td><td>F144802&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>10/20 ומיקרו; קצות פיפטה L</td><td>Starlab</td><td>S1110-3810</td><td></td></tr><tr><td>1000 ומיקרו; מיקרופיפטה L (P1000)</td><td>גילסון</td><td>F123602&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>1000 ומיקרו; קצות פיפטה L</td><td>Starlab</td><td>S1111-6001</td><td></td></tr><tr><td>צלחת 12 בארות</td><td>Starlab</td><td>CC7672-7512</td><td>סטרילי, עטוף יחיד, לא מטופל, עם מכסה</td></tr><tr><td>20 ומיקרו; מיקרופיפטה L (P20)</td><td>גילסון</td><td>F123600&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>200 ומיקרו; מיקרופיפטה L (P200)</td><td>גילסון</td><td>F123601&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>200 ומיקרו; L פיפטה רב ערוצית&nbsp;</td><td>גילסון</td><td>F81024</td><td></td></tr><tr><td>200 ומיקרו; קצות פיפטה</td><td>L Starlab</td><td>S1113-1006</td><td></td></tr><tr><td>צלחת 96 בארות</td><td>Starlab</td><td>CC7672-7596</td><td>סטרילי, עטוף יחיד, תחתית שטוחה, לא מטופל, עם מכסה</td></tr><tr><td>מיכלי גידול עם תחתית משופעת ברשת פנימית, מחיצות מיכל ומכסים</td><td>Tecniplast</td><td>ZB17BTISLOP, ZB17BTE,&nbsp; ZB17BTL, ZB17BTD</td><td>מיכל פנימי משופע</td></tr><tr><td>מסננת רשת</td><td>/</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>כפפות ניטריל</td><td>Mercator</td><td>/</td><td>/</td></tr><tr><td>Petri-dish&nbsp;</td><td>Starlab</td><td>CC7672-3394/CC7672-3359</td><td>100 x 20 מ"מ או 60 x 15 מ"מ</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Leica M205 FCA מיקרוסקופ סטריאו פלואורסצנטי</td><td>Leica</td><td>10450826</td><td></td></tr><tr><td>אינקובטור מקורר פלטייר כולל 2 מדפים עם מודול אור לבן קר</td><td>Memmert</td><td>IPP110ecoplus, T8</td><td>מצויד במחזור</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr> יום/לילה <tr><td>דימתיל סולפוקסיד</td><td>ביוכימיה כימופארמה</td><td>504341000</td><td>להכנת תמיסה של 1% ב-E3</td></tr><tr><td>סידן כלוריד דיהידרט</td><td>ביוכימיה כימופארמה</td><td>303080500</td><td>להכנת E3</td></tr><tr><td>מגנזיום גופרתי הפטהידרט</td><td>ביוכימיה כימופארמה</td><td>313060500</td><td>להכנת E3</td></tr><tr><td>אשלגן כלורי</td><td>ביוכימיה כימופארמה</td><td>316030500</td><td>להכנת E3</td></tr><tr><td>SCREEN-WELL&nbsp; ספריית Wnt Pathway (Bosutinib)</td><td>Enzo</td><td>BML-2838-0500</td><td></td></tr><tr><td>נתרן כלורי</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>S/3161/53</td><td>להכנת E3</td></tr></tbody></table>

בדיקת מולקולות קטנות ובדיקת רעילות בזחלי דגי זברה בשלב מוקדם

Small Molecule Screening and Toxicity Testing in Early-stage Zebrafish Larvae

ניתן להסתכל על החריגות בנפרד או במצטבר על ציר הזמן של הניסוי עד 7 dpf. ניתן להשתמש בציון המורפולוגיה המרבי לכל חריגה כדי לחשב חריגות מורפולוגיות כאחוז ממספר הזחלים המשמשים. לדוגמה, אם ביום 7 ציוני המורפולוגיה של בצקת קרום הלב הם 19 ו-20 עבור ציונים 1 ו-2, בהתאמה, מתוך ציון אפשרי של 24, כלומר 19 או 20 זחלים מתוך 24 מציגים בצקת קרום הלב, ניתן לחשב את ציון האחוזים כך:
<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67759/67759eq1.jpg">
טבלה משלימה S1 מציגה את תוצאות הניקוד המורפולוגיה (של שני הניקודים) ב-4 dpf לאחר בדיקת רעילות לתרכובת Bosutinib, מעכב טירוזין קינאז המיועד לטיפול בלוקמיה מיאלואידית כרונית15. אותו ניקוד מורפולוגי חוזר על עצמו עבור דגים חשופים בגילאי 5 dpf עד 7 dpf. התרכובת נבדקה בטווח ריכוזים שבין 100 מיקרומטר ל-6.25 מיקרומטר. שלושה שכפולים טכניים נערכו בנקודות זמן שונות, ושיעור התמותה המצטבר הממוצע של 7 dpf שימש לקביעת LC50, הריכוז שבו 50% מהזחלים שורדים. ניתן לקבוע את LC50 בכל נקודת זמן חשיפה. עם זאת, אנו ממליצים לחשב זאת ב- 7 dpf.
התמותה הממוצעת המצטברת של 7 dpf שימשה ליצירת עקומת LC50 , שניתן לראות באיור 3. עבור Bosutinib, ריכוז LC50 הוערך להיות 37.95 מיקרומטר.
הערה: ריכוז LC50 משוער זה חל אך ורק על מערכת מודל זו ולאחר מכן ניתן להשתמש בו לבדיקות פנוטיפ נוספות במורד הזרם.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67759/67759fig1.jpg"> 
איור 1: סכמטי של בדיקת התרופה המוצעת בזחלים ב-3-7 dpf. לוחות הבדיקה של 96 בארות ערוכים לחקירה של חמישה ריכוזים הנעים בין 100 מיקרומטר ל -6.25 מיקרומטר עבור התרכובת בוסוטיניב. קיצור: dpf = ימים לאחר ההפריה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67759/67759fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67759/67759fig2.jpg"> 
איור 2: פגמים מורפולוגיים מייצגים שנצפו בזחלי דגי זברה בריכוז כימי של 5 dpf שנחשפו לריכוזים כימיים שונים (יומיים לאחר החשיפה). (A) דגי זברה (לא מושפעים), (B) זחלי זברה המראים בצקת קרום הלב קלה, (C) דגי זברה עם בצקת חמורה של קרום הלב ודימום חלמון, (D) דגי זברה עם עיכוב התפתחותי, פיגמנטציה מופחתת, שלפוחית שחייה קטנה, (E) דגי זברה עם חלמון נפוח וסנפיר קאודלי מעוקם, (F) דגי זברה עם היעדר סנפיר קאודלי, (G) דגי זברה עם נוטוכורד מעוקל, (H) דגי זברה עם זנב קטוע, ו-(I) דגי זברה מתים עם נמק. פגמים מצוינים עם ראשי חץ אדומים. פסי קנה מידה = 1 מ"מ. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67759/67759fig2large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67759/67759fig3.jpg"> 
איור 3: עקומת LC50 המראה ריכוז כנגד % תמותה. חמשת הריכוזים שנבדקו היו 100 μM, 50 μM, 25 μM, 12.5 μM ו-6.25 μM, כאשר אחוז התמותה היה 100%, 100%, 29.2%, 12.5% ו-12.5%, בהתאמה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67759/67759fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>פגמים מורפולוגיים</td>
			<td>תיאור</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>בצקת קרום הלב</td>
			<td>הצטברות נוזלים סביב הלב עם לב מתוח ותקלה במחזור הדם</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>פעימות לב (לדקה)</td>
			<td>מספר מופחת של פעימות לדקה</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>חלמון</td>
			<td>נוכחות או היעדר בצקת חלמון או דימום שיכול להתרחש בו זמנית עם מומים לבביים</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>סיומת חלמון</td>
			<td>חלמון נפוח, דק או נעדר</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>נוטוכורד מעוקל</td>
			<td>נוכחות של נוטוכורד מעוקם או גלי, ו / או זנב מעוקל</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>שלפוחית שחייה</td>
			<td>נוכחות, היעדר או התפתחות חלקית של שלפוחית השחייה</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>פיגמנטציה</td>
			<td>פחות או ללא מלנוציטים בהשוואה לדגים לא מטופלים באותו גיל</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>נקרוזה</td>
			<td>נוכחות (קלה או חמורה) או היעדר נמק בכל חלק של הגוף</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>עיכוב בפיתוח</td>
			<td>התפתחות מאוחרת או מעוכבת בהשוואה לבקרות מסוג בר באותו גיל.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>תגובה למגע</td>
			<td>תגובה מאוחרת או ללא תגובה בעקבות בהלה (למשל, שימוש בקצה פיפטה)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>חיתוך</td>
			<td>היעדר גוף דג זברה אחורי (כלומר היווצרות הזנב)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>סנפירים</td>
			<td>נוכחות או היעדר סנפיר קאודלי שעשוי להיות מלווה בהארכת חלמון דק</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ציר גוף מופחת</td>
			<td>דגים שנראים רגילים אך כאשר נמדדים הם קצרים יותר באורכם</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
טבלה 1: רשימת פגמים מורפולוגיים חזותיים שניתן להבחין בהם בעקבות מחקרי חשיפה לתרופות.
טבלה משלימה S1: תוצאות מורפולוגיות מייצגות עבור Bosutinib ב 4 dpf (1 יום לאחר החשיפה). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67759/SupplementalTable_1.xlsx" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד טבלה זו.</a>

Zebrafish have become a prominent model organism for human translational research, toxicity testing of small molecules and environmental pollutants, ...

small-molecule-screening-toxicity-testing-early-stage-zebrafish

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

בקנה מידה גדול דג הזברה מבוסס ב-vivo מולקולה קטנה מסך

כאן אנו מתארים assay הרומן גבוהה תוכן דלקת הנגרמת כימית מכוון לזיהוי modulatory החיסון bioactives. יש לנו שילוב בהצלחה מיקרוסקופ עם אוטומטיות מותאמות אישית סקריפטים תוכנה שפותחו המאפשרים כימות אוטומטי של התגובה הדלקתית כמו גם עוד עיבוד נתונים, ניתוח, כרייה, ואחסון.

גילוי תרופות בהנחיית: Assay אוטומטי גבוהים תוכן דלקת דג הזברה

במאמר זה, עוברים של דגי זברה משמשים לבדיקת רעילות כימית. רעילות כימית מתואמת עם קריאות פנוטיפ. פרוטוקול הדגימה מציג גישה מתודולוגית לביצוע בדיקת רעילות כימית.

מסך רעילות כימית מבוסס עוברים: הערכת השפעות על התפתחות עוברים של דגי זברה

מאמר זה מתאר את התגובה ההתנהגותית של דגי זברה לתרכובות רעילות על ידי ניטור תנועת הזחל. הפרוטוקול בוחן גם דוגמה לתגובת זחלי הזברה למזהמים סביבתיים.

בדיקת תנועת זחלים: שיטה בעלת תפוקה גבוהה לחקר רעילות נוירו-התנהגותית של תרכובת בזחלי דגי זברה

דג הזברה הוא אורגניזם ניסיוני מצוין ללמוד תהליכים התפתחותיים חוליות ומחלות של בני אדם מודל. כאן, אנו מתארים פרוטוקול על אופן ביצוע מסך כימי תפוקה גבוהה מדריך לעוברי דג הזברה עם כל הר באתר הכלאה (רוצה) לקריאה החוצה.

מסך ידני מולקולה קטנה מתקרב תפוקה גבוהה באמצעות עוברי דג הזברה

עוברי דג משמשים להערכת הרעילות של תרכובות כימיות. הם מפתחים מבחוץ ורגישים לכימיקלים, ומאפשרים זיהוי של שינויי פנופאיות עדינים. הניסוי דורש רק כמות קטנה של תרכובת, אשר מתווסף ישירות לצלחת המכילה עוברים, מה שהופך את מערכת הבדיקה יעילה וחסכונית.

הערכה מהירה של רעילות של תרכובות כימיות באמצעות עוברי הדגים Zebrafish

פרוטוקול ניסיוני מפורט מוצג במאמר זה להערכת רעילות נוירוהתנהגותית של מזהמים סביבתיים באמצעות מודל הזחלים דג זברה, כולל תהליך החשיפה ובדיקות אינדיקטורים נוירוהתנהגותית.

לימוד השפעות נוירוהתנהגותית של מזהמים סביבתיים על הזחלים של דגי הזאב

Zebrafish מודלים מבע לאפשר סינון תפוקה גבוהה ההקרנה והדמיה פלורסנט של תאים סרטניים אנושיים ב vivo microenvironment. פיתחנו זרימת עבודה עבור קנה מידה גדול, הקרנת תרופות אוטומטיות על החולה הנגזרת דגימות לוקמיה ב דג זברה באמצעות מיקרוסקופ אוטומטי מצויד במיקרוסקופ הדמיה יחידה.

הקרנת התרופה של החולה העיקרי הנגזר גידול Xenografts ב Zebrafish

דג הזברה נוצל לאחרונה כמודל לאימות משנים פוטנציאליים של קרינה. הפרוטוקול הנוכחי מתאר את השלבים המפורטים לשימוש בעוברים של דגי זברה לניסויי סינון מבוססי קרינה וכמה גישות תצפיתיות להערכת ההשפעה של טיפולים וקרינה שונים.

זחלי דגי זברה כמודל להערכת רדיוסנסיטיזרים או מגינים פוטנציאליים

אנו מתארים את זרימת העבודה וניתוח הנתונים של מערכת סינון להערכת רעילות של תרכובות כימיות בהתבסס על תגובת הבהלה של רטט עובר דג הזברה. המערכת מתעדת את תנועותיהם של עוברי דגי זברה בחשיפה לגירוי רטט ומאפשרת הערכה משולבת של רעילות/קטלניות כללית ורעילות עצבית-שרירית.

הערכת רעילות של כימיקלים באמצעות מערכת סינון תגובת בהלה לרטט של דגי זברה

למד פרוטוקול לסקרינג תרופות בזחלי דגי זברה בגיל 3-7 ימים לאחר הפריה. השיטה כוללת הערכה מורפולוגית באמצעות מיקרוסקופ סטריאו לאיתור תופעות לוואי ועיכובים בהתפתחות.

בדיקת מולקולות קטנות ובדיקת רעילות בזחלי דגי זברה בשלב מוקדם

גלה סרטונים נוספים