Name: בידוד מהיר של שלפוחיות חוץ-תאיות שמקורן בחלב אם (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-14T12:50:00.000+00:00
Duration: 4 min 35 s
Description: למד שיטת סינון מהירה לבידוד שלפוחיות חוץ-תאיות מחלב אם אנושי. הפרוטוקול מקצר משמעותית את זמן הבידוד בהשוואה לאולטרה-צנטריפוגציה ומאפשר יישומים קליניים פוטנציאליים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Galley, J. D., Besner, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+therapeutic+potential+of+breast+milk-derived+extracellular+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">The therapeutic potential of breast milk-derived extracellular vesicles.</a> Nutrients. 12 (3), 745(2020).</li>
<li>Martin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+breast+milk-derived+exosomes+attenuate+cell+death+in+intestinal+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Innate+Immun%22%5BJournal%5D)">Human breast milk-derived exosomes attenuate cell death in intestinal epithelial cells.</a> Innate Immun. 24 (5), 278-284 (2018).</li>
<li>Hock, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breast+milk-derived+exosomes+promote+intestinal+epithelial+cell+growth%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pediatr+Surg%22%5BJournal%5D)">Breast milk-derived exosomes promote intestinal epithelial cell growth.</a> J Pediatr Surg. 52 (5), 755-759 (2017).</li>
<li>Alexander, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosome-delivered+microRNAs+modulate+the+inflammatory+response+to+endotoxin%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Exosome-delivered microRNAs modulate the inflammatory response to endotoxin.</a> Nat Commun. 6, 7321(2015).</li>
<li>Lasser, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+saliva%2C+plasma%2C+and+breast+milk+exosomes+contain+RNA%3A+Uptake+by+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22J+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Human saliva, plasma, and breast milk exosomes contain RNA: Uptake by macrophages.</a> J Transl Med. 9, 9(2011).</li>
<li>Chan, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+I+interferon+sensing+unlocks+dormant+adipocyte+inflammatory+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Type I interferon sensing unlocks dormant adipocyte inflammatory potential.</a> Nat Commun. 11 (1), 2745(2020).</li>
<li>Miyake, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+breast+milk+exosomes+attenuate+intestinal+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Surg+Int%22%5BJournal%5D)">Human breast milk exosomes attenuate intestinal damage.</a> Pediatr Surg Int. 36 (2), 155-163 (2020).</li>
<li>Gao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+developments+in+isolating+methods+for+exosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Bioeng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Recent developments in isolating methods for exosomes.</a> Front Bioeng Biotechnol. 10, 1100892(2022).</li>
<li>Patel, G. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+exosome+isolation+methods+using+culture+supernatant+for+optimum+yield%2C+purity+and+downstream+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of exosome isolation methods using culture supernatant for optimum yield, purity and downstream applications.</a> Sci Rep. 9 (1), 5335(2019).</li>
<li>Gandhi, J., Naik, M. N., Mishra, D. K., Joseph, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+profiling+of+Aspergillus+flavus+endophthalmitis-derived+extracellular+vesicles+in+an+in+vivo+murine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Mycol%22%5BJournal%5D)">Proteomic profiling of Aspergillus flavus endophthalmitis-derived extracellular vesicles in an in vivo murine model.</a> Med Mycol. 60 (9), myac064(2022).</li>
<li>Palinski, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysosome+purinergic+receptor+p2x4+regulates+neoangiogenesis+induced+by+microvesicles+from+sarcoma+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">Lysosome purinergic receptor p2x4 regulates neoangiogenesis induced by microvesicles from sarcoma patients.</a> Cell Death Dis. 12 (9), 797(2021).</li>
<li>Tantengco, O. aG., Radnaa, E., Shahin, H., Kechichian, T., Menon, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cross+talk%3A+Trafficking+and+functional+impact+of+maternal+exosomes+at+the+feto-maternal+interface+under+normal+and+pathologic+statesdagger%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Cross talk: Trafficking and functional impact of maternal exosomes at the feto-maternal interface under normal and pathologic statesdagger.</a> Biol Reprod. 105 (6), 15621576(2021).</li>
<li>Caruso Bavisotto, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosomal+hsp60%3A+A+potentially+useful+biomarker+for+diagnosis%2C+assessing+prognosis%2C+and+monitoring+response+to+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Mol+Diagn%22%5BJournal%5D)">Exosomal hsp60: A potentially useful biomarker for diagnosis, assessing prognosis, and monitoring response to treatment.</a> Expert Rev Mol Diagn. 17 (9), 815-822 (2017).</li>
<li>Feng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Latest+trend+of+milk-derived+exosomes%3A+Cargos%2C+functions%2C+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Nutr%22%5BJournal%5D)">Latest trend of milk-derived exosomes: Cargos, functions, and applications.</a> Front Nutr. 8, 747294(2021).</li>
<li>Li, P., Kaslan, M., Lee, S. H., Yao, J., Gao, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+in+exosome+isolation+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">Progress in exosome isolation techniques.</a> Theranostics. 7 (3), 789-804 (2017).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>(H+L) HRP-אנטי-עכבר צמוד</td><td>ביו-ראד</td><td>1721011</td><td></td></tr><tr><td>(H+L) HRP-אנטי-ארנב צמוד</td><td>ביו-ראד</td><td>1706515</td><td></td></tr><tr><td>מסנן מזרק 0.20</td><td>פישרברנד</td><td>09-719C</td><td></td></tr><tr><td>מסננת תא 0.70 um</td><td>קורנינג</td><td>431751</td><td></td></tr><tr><td>1.5 מטר טריס HCL</td><td>יוצר בתוך החברה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>צינורות 15 מ"ל</td><td>פלקון</td><td>352096</td><td></td></tr><tr><td>סט הארכת מסננים בגודל 16 אינץ'</td><td>ב-בראון</td><td>FE2012F</td><td></td></tr><tr><td>1M טריס HCL</td><td>טקנובה</td><td>T1068</td><td></td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>גיבקו</td><td>10010-031</td><td></td></tr><tr><td>צינורות 50 מ"ל</td><td>פלקון</td><td>353070</td><td></td></tr><tr><td>בופר דגימה מפחית פי 5</td><td>תרמו-סיינטיפיק</td><td>39000</td><td></td></tr><tr><td>אצילמיד</td><td>פישר סיינטיפיק &nbsp;</td><td>BP1410-1</td><td></td></tr><tr><td>אמפוטריצין B</td><td>גיבקו</td><td>15290-018</td><td></td></tr><tr><td>מצלמת AMT NanoSprint43 Mark-II</td><td>AMT</td><td></td><td></td></tr><tr><td>אנטי-אנטי</td><td>גיבקו</td><td>15240-062</td><td></td></tr><tr><td>אנטי-CD63</td><td>נובוסביו</td><td>NBP2-32830</td><td></td></tr><tr><td>אנטי-CD9</td><td>Invitrogen</td><td>10626D</td><td></td></tr><tr><td>APS</td><td>תרמו-סיינטיפיק</td><td>17874</td><td></td></tr><tr><td>ערכת בדיקת חלבון BCA</td><td>פירס</td><td>23227</td><td></td></tr><tr><td>צינורות בקמן</td><td>בקמן קולטר&nbsp;</td><td>344059</td><td></td></tr><tr><td>BrightStar ECL Chemiluminescent</td><td>אלקלי סיינטי</td><td>XR92</td><td></td></tr><tr><td>FBS מדולדל אקסוזום</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>NC0464480</td><td></td></tr><tr><td>בופר חסימה מהיר</td><td>פירס</td><td>37575</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>טכנולוגיות חיים</td><td>10082147</td><td></td></tr><tr><td>HSP70</td><td>Invitrogen</td><td>MA3-006</td><td></td></tr><tr><td>אינסולין אנושי</td><td>סיגמא-אלדריץ'</td><td>I9278-5ML</td><td></td></tr><tr><td>מי חמצן</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>H325-500</td><td></td></tr><tr><td>IEC-6&nbsp;</td><td>ATCC</td><td>CRL-1592</td><td></td></tr><tr><td>ג'אול 1400 פלאש טם</td><td>JEOL USA Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>סימון נתיב מפחית את בופר הדגימה</td><td>תרמו-סיינטיפיק</td><td>39000</td><td></td></tr><tr><td>אבקת חלב</td><td>עולם ביולוגי</td><td>30620074-1</td><td></td></tr><tr><td>Nanosight NS 300</td><td>מלוורן אינסטרומנטס בע"מ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ממברנת ניטרוצלולוז</td><td>טכנולוגיות חיים</td><td>88018</td><td></td></tr><tr><td>PELCO easi, מכשיר פריקת Glow</td><td>טד פלה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>טבליות מיני מעכבות פרוטאז</td><td>פירס</td><td>A32955</td><td></td></tr><tr><td>בופר RIPA</td><td>פירס</td><td>89901</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>פישר סיינטיפיק &nbsp;</td><td>11875119</td><td></td></tr><tr><td>SDS</td><td>פישר סיינטיפיק &nbsp;</td><td>BP2436-200</td><td></td></tr><tr><td>בקבוק T-25</td><td>תרמו-סיינטיפיק</td><td>156367</td><td></td></tr><tr><td>TBS</td><td>יוצר בתוך החברה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>TEMED</td><td>ביו-ראד</td><td>161-0801</td><td></td></tr><tr><td>טריפסין EDTA</td><td>גיבסו</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>גיל 20</td><td>תרמו-סיינטיפיק</td><td>J20605-AP</td><td></td></tr></tbody></table>

בידוד מהיר של שלפוחיות חוץ-תאיות שמקורן בחלב אם

Rapid Isolation of Human Breast Milk-Derived Extracellular Vesicles

Extracellular vesicles (EVs), nanosized particles approximately 20-1000 nm in size, are rapidly garnering attention for their therapeutic potential. ...

rapid-isolation-of-human-breast-milk-derived-extracellular-vesicles

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

מקור: ווטסון, די.סי., et.al. בידוד וטיהור ניתנים להרחבה של שלפוחיות חוץ-תאיות מ-Escherichia coli וחיידקים אחרים. J. Vis. Exp. (2021)סרטון זה מדגים את הבידוד והריכוז של שלפוחיות חוץ-תאיות (EVs) שמקורן בקרום החיצוני של חיידקים מהונדסים גנטית. התהליך כולל גידול החיידקים לשחרור EVs, ואחריו צנטריפוגה עוקבת ושלבי סינון להסרת תאים ופסולת. לבסוף, אולטרה-סינון משמש לריכוז הרכבים החשמליים לניתוח במורד הזרם.

בידוד והעשרה של שלפוחיות חוץ-תאיות שמקורן בקרום החיצוני מחיידקים

Source: DeMarino, C., et al. Purification of High Yield Extracellular Vesicle Preparations Away from Virus. J. Vis. Exp. (2019)The video demonstrates the separation of EVs from virions and other contaminants by density gradient centrifugation, followed by capture and concentration with hydrogel nanoparticles. Washed fractions are then ready for downstream identification of those enriched in EVs.

Separation and Enrichment of Extracellular Vesicles in the Presence of Virions

פרוטוקול זה מפרט שיטה לבודד שלפוחית ​​תאית (EVS), חלקיקים קרומיים קטנים שוחררו מהתאים, מ קטן כמו 10 דגימות סרום μl. גישה זו עוקפת את הצורך בultracentrifugation, דורשת רק כמה דקות של זמן assay, ומאפשרת בידוד של כלי רכב חשמלי מדגימות של כרכים מוגבלים.

מכשירים מבוססי נייר לבידוד ואפיון של תאית שלפוחית

פרוטוקול זה מתאר שיטות לטיהור, quantitating, אפיון שלפוחית ​​תאיים (EVs) / exosomes מ שאינם חסיד / mesenchymal תאים אפיתל החלב ועל השימוש בהם כדי להעביר את בלוטת החלב יוצרי היכולת לתאי אפיתל החלב לומינל. EVS / exosomes נגזר גזע כמו תאי אפיתל החלב יכול להעביר תכונה זו התא לתאים לבלוע EVs / exosomes.

העברת בלוטת החלב ביצירת יכולת בין תאי אפיתל בסל החלב תאים לומיני החלב באמצעות שלפוחיות תאיים / אקסוסומות

כאן, אנו מתארים שני שלפוחית חוץ-תאית בידוד םילוקוטורפ אולטראפילטרציה צנטריפוגה, ultracentrifugation עם צפיפות צנטריפוגה הדרגתיות, לבודד שלפוחית חוץ-תאית מדגימות נוזלים שטיפה bronchoalveolar מאתר. השלפוחיות המוגלתיות חוץ-תאית נגזר נוזל שטיפת מאתר bronchoalveolar על ידי שתי השיטות לכמת, מאופיין.

בידוד של שלפוחית חוץ-תאי של נוזל שטיפה Bronchoalveolar מאתר באמצעות טכניקת צנטריפוגה אולטראפילטרציה

הליך צעד-אחר-צעד מתואר עבור השתק ללא תווית של אקסוזומים ושלפוחיות מעיים מדגימות נוזל והדמיה שלהם באמצעות מיקרוסקופ כוח אטומי (AFM). התמונות AFM משמשות כדי להעריך את הגודל של השלפוחיות בפתרון ולאפיין מאפיינים ביופיזיים אחרים.

הדמיה של שלפוחיות ומסחטות על ידי מיקרוסקופ כוח אטומי

פרוטוקול זה מבודד ושלפוחיות שלפוחית (EVs) הרחק מריטונים עם יעילות גבוהה ותשואה על ידי שילוב משקעים EV, צפיפות הדרגתי מעבר הצבע, ולכידת חלקיקים כדי לאפשר זרימת עבודה יעילה והפחתה של התחלת דרישות נפח, וכתוצאה מכך ההכנות לשימוש בכל מחקר EV.

טיהור של תשואה גבוהה לחילוץ ההכנות הרחק וירוס

הפרוטוקול כאן מדגים כי ניתן להפריד כראוי שלפוחיות חוץ-תאיות ממדיה מותנית של תרביות תאים באמצעות כרומטוגרפיה של הרחקת גודל.

כרומטוגרפיה של אי הכללת גודל להפרדת שלפוחיות חוץ-תאיות ממדיית תרבית תאים מותנית

פרוטוקול זה מדגים כיצד לבודד שלפוחיות חוץ-תאיות קטנות של תאי גזע מזנכימליים שמקורם בחבל הטבור האנושי (hUC-MSC-sEVs) באמצעות הגדרה פשוטה בקנה מידה של מעבדה. התפלגות הגודל, ריכוז החלבונים, סמני sEVs והמורפולוגיה של hUC-MSC-sEV מבודדים מאופיינים בניתוח מעקב אחר ננו-חלקיקים, בדיקת חלבון BCA, כתם מערבי ומיקרוסקופ אלקטרונים תמסורת, בהתאמה.

שיטת סינון פשוטה לבידוד בועיות חוץ-תאיות קטנות מתאי גזע מזנכימליים אנושיים

מחקר זה מתאר שיטה לבידוד וטיהור שלפוחיות חוץ-תאיות חיידקיות (BEVs) המועשרות מצואת אדם באמצעות צנטריפוגת שיפוע צפיפות (DGC), מזהה את המאפיינים הפיזיים של BEV ממורפולוגיה, גודל חלקיקים וריכוז, ודן ביישומים האפשריים של גישת DGC במחקר קליני ומדעי.

בידוד וטיהור שלפוחיות חוץ-תאיות חיידקיות מצואת אדם באמצעות צנטריפוגת שיפוע צפיפות

למד שיטת סינון מהירה לבידוד שלפוחיות חוץ-תאיות מחלב אם אנושי. הפרוטוקול מקצר משמעותית את זמן הבידוד בהשוואה לאולטרה-צנטריפוגציה ומאפשר יישומים קליניים פוטנציאליים.

בידוד מהיר של שלפוחיות חוץ-תאיות שמקורן בחלב אם

גלה סרטונים נוספים