Name: בחירה אין ברירה מבחני לבחינות ההתנגדות של thaliana א חרקים לעיסת (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-05-14T16:15:00.000+00:00
Duration: 8 min 24 s
Description: למדו כיצד להעריך התנגדות של Arabidopsis thaliana לחרקים באמצעות ניסויים בחירה ואין-ברירה. השיטה מאפשרת לחקור את תפקידם של חומצה ג'סמונית וגלוקוזינולטים בהגנת הצמחים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אין ניסוי בחירה: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזהירות להקיף את הצמח ארבידופסיס עניין בכוס פלסטיק. במקרה זה: Col-0 (WT) ו מוטציה לקויה בייצור של JA. ודא שיש לך להגביל את הנזק על העלים. לשם כך אני משתמש האחורי של מכחול זה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במכחול דק לקחת זחלים שבקעו זה עתה מן המושבה על כרוב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזהירות במקום זחל על צמחי ארבידופסיס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משקל זחל על 4 ביממה, 7, 10. טיפ: לגדל צמחים בתנאים שלך יום קצר (8 שעות אור) כדי להגדיל את הצמיחה של צמח (1 הזחל יכול למלא את מחזור החיים המלא על צמח 1). </li></ol> הבחירה ניסוי: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שני צמחים נבחרים, אחד לכל גנוטיפ. הטוב ביותר הוא לגדל צמחים בסיר עם זאת, כדי להגביל גורמים אחרים, כגון אפקטים מגש, וכו &#39; </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את הצמחים בכלוב פרפר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר נקבה פורייה. אני בדרך כלל לתפוס נקבה כי הוא פעיל המטילה ביצי במושבה גידול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שחרר את הנקבה בכלוב עם הבחירה של שני מפעלים למשך 24 שעות. </li></ol> טיפ 1: כדי למנוע להשפיע על למידה, אין שימוש חוזר נשים לבדיקות הבחירה הבאים. טיפ 2: אפשר רק להשוות צמחים בעלי פנוטיפ צמיחה דומה. לחלופין, תוכל לעלות עלה מ גנוטיפ על גבי כל בקבוק Erlenmeyer ולהשוות את האטרקטיביות שלהם נקבה. בקר <a href="http://arjournals.annualreviews.org/doi/abs/10.1146/annurev.arplant.59.032607.092825">ביקורות שנתי של ביולוגיה הצמח</a> לקבלת מידע נוסף על חסינות פרוטוקול צמח זה herbivory חרקים.

בחירה אין ברירה מבחני לבחינות ההתנגדות של thaliana א &#39;חרקים לעיסת

Choice and No-Choice Assays for Testing the Resistance of A. thaliana to Chewing Insects

הזחלים של פרפר כרוב קטן הלבן הם מזיקים במסגרות חקלאיות. זה מין זחל הזנות מצמחים במשפחה כרוב, הכוללים יבולים רבים כגון כרוב, ברוקולי, כרוב ניצנים ועוד לגידול חרקים מתרחשת על צמחים כרוב בחממה. לפחות שני כלובים יש צורך בגידול של פיאריס ראפא. אחת עבור הזחלים והשני להכיל את המבוגרים, את הפרפרים. כדי לחקור את תפקידה של הורמונים צמחיים וכימיקלים רעילים המפעל התנגדות הדברה זה חרק, אנחנו מדגימים שני ניסויים. ראשית, קביעת תפקידה של חומצה jasmonic (JA - הורמון צמחי ציינו לעתים קרובות התנגדות חרקים) ב התנגדות החרק לעיסה פיאריס ראפא. צמיחה קטרפילר ניתן להשוות על צמחי בר, ​​סוג מוטציה לקויי בייצור של JA. ניסוי זה נחשב &quot;אין ברירה&quot;, כי הזחלים נאלצים להתקיים על מפעל בודד אשר מסנתז או חסר JA. שנית, אנו להדגים ניסוי חוקר את תפקידם של glucosinolates, אשר משמשים ההטלה (הטלה) אותות. כאן, אנו משתמשים ארבידופסיס WT ו מוטנטים לקויה בייצור glucosinolate ב ניסוי &quot;בחירה&quot; שבו פרפרים נקבה רשאים לבחור להטיל את ביציהם על צמחים או של גנוטיפ. וידאו זה מדגים את הגדרת הניסוי עבור שני מבחני כמו גם תוצאות נציג.

עמידות הצמח אל אוכלי צמחים חרקים לעיסה ניתן לבדוק בכמה דרכים. כאן, אנו מדגימים כיצד הגדרת בחירה ניסוי אין ברירה עם thaliana הצמח ארבידופסיס מודל לזהות התנגדות המינים הדברה פיאריס ראפא.

זחלי הפרפר הלבן הקטן של הכרוב מהווים מטרד במסגרות חקלאיות. מין זחלי זה ניזון מצמחים ממשפחת הכרוב, אשר...

זחלי הפרפר הלבן הקטן של הכרוב מהווים מטרד בסביבות חקלאיות. מין זחל זה ניזון מצמחים ממשפחת הכרוניים, הכוללת גידולים רבים כגון כרוב, ברוקולי, נבטי בריסל ורבים אחרים. מעניין לציין כי צמחים יכולים לפתח עמידות לכוחות הרס של צמחייה, כגון bedo tappe, ובסרטון זה נבחן את העמידות של מין צמח המודל rabbit opposite Ana לחרק זה באמצעות שתי שיטות.שלום, אני מרטין נבוס, פוסט-דוקטורנט במעבדה של ג'ורג' ג'נדר במכון בו תומפסון למחקר מתוכנן. היום ארצה להראות לכם כיצד להקים ניסוי בחירה (choice) וניסוי ללא בחירה (no choice) באמצעות *Arabidopsis thaliana* כצמח מודל, למחקר עמידות נגד מזיקים ניזונים.גידול הזחלים מתבצע על צמחי כרוב בחממה. דרושים לפחות שני כלובים לצורך גידול ה-Peter. הקצה אחד עבור הזחלים, והשני יכיל את הפרפרים הבוגרים, וזאת כדי להדגים את המעורבות של הורמונים צמחיים וחומרים רעילים מהצמח.במסגרת בדיקת העמידות לחרק זה, ברצוני להדגים שני ניסויים. הראשון יעסוק בקביעת תפקידו של חומצה ג'סמונית, הורמון צמחי המקושר לעיתים קרובות לעמידות בפני חרקים.בניסוי ללא אפשרות בחירה (no choice experiment), ניתן להשוות את הצמיחה של זחלי הפרפר על צמחים מסוג בר (wild type) ועל צמחים מוטנטיים שבהם ייצור חומצה מונו-אמינית פגום. ההיפותזה היא שהזחלים יעלו יותר במשקל על הצמח המוטנטי. לכן, נתחיל בניסוי הראשון.כעת נבצע ניסוי מסוג "no choice" עם צמחים מסוג Revit opsis elliana כדי למדוד את העלייה במשקל של זחלי purest rapha. לכן, הפעולה הראשונה שעלינו לבצע היא לסגור בזהירות את הצמחים הללו. נשתמש באחד מהכוסות הללו, כאשר חתכנו את תחתיתה של כוס הפלסטיק הזו.לכן, כדי לסגור, אני משתמש בקצה האחורי של מכחול צבע עדין זה. כך, מבלי לפגוע בעלים, נסגור את הצמחים הללו. יש לנו כאן ניסוי של חוסר ברירה (no choice experiment) בין ה-rabbit opss, סוג הבר (wild type), והצמח המוטנטי.המוטנט הוא מוטנט עם ליקוי בחומצה יסמונית (jasmonic acid), וככל הנראה רגיש יותר להזנה. זהו ניסוי ללא ברירה (no choice experiment), מכיוון שזחל אחד יכול לבחור רק מגנוטיפ אחד של צמחים. לכן, נוסיף זחל אחד לכל כוס.חשוב להתחיל עם זחלים שזה עתה בקעו. אלו נקראים זחלי L1. הנה אחד שזה עתה בקע.כעת, אני אמקם בזהירות את הזחל על רצועת הבדיקה. השלב הבא הוא לסגור את הצמחים יחד עם זחל אחד, ואני משתמש ברשת דקה ובסרט דביק כדי לסגור אותם כך שלא יוכלו לזחול החוצה. לאחר מכן נמתין מספר ימים, בדרך כלל שבעה ימים, לפני שנמדוד את העלייה במשקל של הזחל.לאחר שבעה ימי האכלה, אנו מוציאים את הזחלים ושוקלים אותם במאזניים אלו; נשתמש בפינצטה גמישה כדי לאסוף בזהירות את הזחלים ונרשום את משקלם. זחל זה שוקל כמעט 250 milligrams. אשווה את משקל הזחל שהיה על הצמח המוטנטי למשקל הזחל שהיה על צמח ה-wild type.כפי שניתן לראות מיד, נשאר הרבה יותר רקמת צמח מהצמח מסוג ה-wild type. לכן אנו מניחים שהזחל עלה פחות במשקלו. הזחל שעל צמח ה-wild type שוקל רק כ-100 milligrams.אם כן, קיים הבדל עצום הן בכמות הרקמה שנאכלה והן בעליית המשקל של ה larvae. זהו סיכום ניסוי ה-no choice. בואו נעבור לניסוי ה-choice, נכון?מזיקים בעלי מומחיות מזהים ונמשכים לרמזים מהמארח שהם רעילים עבור מזיקים כלליים. במקרה של pi, גלוקוסינולטים מהירים משמשים כאות למיקום יתר. כאן אשתמש בסוג בר ובמוטנט של rabbit opsis הפגום בייצור גלוקוסינולטים.כדי להדגים ניסוי בחירה, לפני תחילת הניסוי, יש להיות מסוגלים להבדיל בין פרפרים זכרים לנקבות. הנה דוגמה: לפרפרים נקבת ה-Bureaus rapid יש שתי נקודות על כל כנף, בעוד שזכרים נושאים רק נקודה אחת; לעיתים ניתן לטעות ולחשוב שזכר הוא נקבה אם יש לו סימון שני, שלעיתים קרובות הוא דהוי. כעת, נכין את ניסוי הבחירה.במקרה זה, יש לנו הן צמח מסוג בר (wild type) והן צמח מוטנטי. הצמח המוטנטי סובל מפגיעה בייצור של גלוקוסינולאטים (glucosinolates). שוב, גלוקוסינולאטים הם רעילים עבור מזיקים כלליים, אך מומחים, כמו ה-pra שעימו אנו עובדים, נמשכים לגלוקוסינולאטים.אלו הם חמשת שלבי הזחלים של *Pieris rapae*, כאשר השלב L1 הוא הקטן ביותר, והם עולים במשקל עד לשלב הזחל החמישי. לאחר מכן הם הופכים לגולם, מתרחש תהליך גization מלא, וזחלים אלו יהפכו לפרפרים בוגרים. לצורך ניסוי בחירה זה, אני משתמש בכלוב זה שבו הנחתי הן את הצמח הפראי והן את הצמח המוטנטי, וכעת אני עומד להוסיף אליו פרפר נקבה אחד.כדי להעריך את ה-acai, אני בדרך כלל תופס נקבות פוריות. כדי לוודא שהן פוריות, אני תופס נקבות המטילות ביצים באופן פעיל, מניח בזהירות את ידי סביבן ומעביר אותן לכלוב הבדיקה. אנו משאירים את הפרפר למשך 24 שעות ולאחר מכן סופרים את מספר הביצים שהוטלו על כל אחד מהגנוטיפים הללו.כמה טיפים מועילים בעת ביצוע סוג זה של ניסויים הם, ראשית, כאשר בוחרים פרפר נקבה, אין להשתמש בה לניסויים הבאים כיוון שעלול להתרחש אפקט של למידה. שנית, ניתן להשוות רק בין צמחים בעלי פנוטיפ גדילה דומה. לכן, אם ישנם צמחים שאינם בעלי פנוטיפ גדילה דומה, ניתן לקחת עלים בגודל דומה ולהניח אותם על גבי בקבוק LMI.אם כן, לאחר שעברו 24 שעות, נוכל להוציא תחילה את הצמחים. כפי שניתן לראות, בצמח מסוג ה-wall ישנם ביצים רבות, ובצמח המוטנטי, המוטנט שחסרים לו glucosinolates, כך שחסר לו גירוי מסוג over position או acai.כפי שניתן לראות, כמעט ואין ביצים או שיש מעט מאוד, לפחות בצמח המוטנטי. בעוד שבצמח הבר ישנן ביצים רבות. כך הצגתי בפניכם כיצד להקים ניסויים לקביעת עמידות נגד חרקים.הניסוי הראשון היה ניסוי ללא בחירה. ניסיונות שבהם השווינו את עליית המשקל של הזחלים על צמחים מוטנטיים לעומת צמחי פרא.השווינו את ה-acla של פרפר נקבה גם על צמח מוטנטי לעומת צמח מסוג בר. תודה רבה. זהו זה.אני מקווה שזה יהיה שימושי עבור הניסויים שלך.

choice-no-choice-assays-for-testing-resistance-thaliana-to-chewing

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

בסרטון זה assay הוא הוכיח כי הבדיקות סובלנות של ניקוטין שני סוגים של כנימות אחד פושט צמחי טבק בתחום ואחד לא.

בדיקת סובלנות ניקוטין ב כנימות באמצעות ניסוי דיאט מלאכותית

וידאו זה מסביר מנגנוני עמידות הצמח הפונדקאי herbivory ומדגים מבחן אין ברירה כי הערכות את התרומה היחסית של antibiosis וסובלנות spittlebug...

אפיון מנגנוני ההתנגדות אוכלי עשב: Spittlebugs על Brachiaria Spp. כדוגמה

סרטון זה מתאר את מבחן העדפות הטעם, שיטה התנהגותית המשמשת למדידת משיכה או הימנעות כלפי תמיסות צבעוניות שטעמן שונה על ידי הערכת צבע הבטן של הזבוב לאחר בליעת החומר המועדף. הפרוטוקול המוצג מדגים את ההליך המשמש למדידת העדפת זבובים לתמיסות בריכוזי סוכרוז משתנים.

בדיקת העדפות טעם: שיטה למדידת התנהגות האכלה בדרוזופילה

Olfactometer אנכי, T-מבוך מתואר לassaying התגובה התנהגותית של פרוקי רגליים. Olfactometer מאפשר הנסיין למדוד בחירות שבוצעו על ידי נבדקים, כאשר נתון שני שדות ריח פוטנציאליים. שניהם המשיכה ולדחייה מodorants ניתן למדוד במכשיר זה.

Assay בחירה האנכי T-מבוך לתגובת פרוקי רגליים לodorants

טעם הוא תהליך חושי חשוב המאפשר משיכה לחומרים מועילים והימנעות מחומרים רעילים.  פרוטוקול זה מתאר מבחן בליעה פשוט לקביעת העדפת טעם של דרוזופילה לתרכובת כימית נתונה.

Assay העדפות טעם למבוגרים<em&gt; תסיסנית</em

כאן, אנו מציגים assay Caenorhabditis elegans- Specific שנועד להעריך שינויים התנהגות הנטייה נחושת ואת היכולת לאתר מקור מזון משותף, כמו האורגניזם מתקדמת ממצב תזונה רעב עד כדי רעב.

א<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; מצב תזונתיים מבוססי Assay Assersion

אנו מציגים התנהגות הקלטה הקלטה ופרוטוקול המאפשר ניתוח אוטומטי של נמטודות, Caenorhabditis elegans 'העדפת תרכובות מסיסות באסאי מבוסס האוכלוסייה. מאמר זה מתאר את הבנייה של תא התנהגות, פרוטוקול assay התנהגותי, וניתוח וידאו השימוש בתוכנה.

ניתוח אוטומטי של אוכלוסיה מבוססת נמטודות מבוססי Assay העדפה

כאן, אנו מציגים את פרוטוקול לחקור את ההעדפה להתגלמות של הזחלים בוגרים של Ectropis grisescens בתגובה בקרקע גורמים (למשל, סוג המצע ותוכן לחות) באמצעות בחירה bioassays. אנו מציגים גם פרוטוקול של bioassays לא-הבחירה כדי לקבוע את הגורמים המשפיעים על ההתנהגויות להתגלמות, שאירים של א grisescens.

הבחירה ו- Bioassays לא-הבחירה ללמוד את העדפה להתגלמות והצלחה הופעתה של Ectropis grisescens

השיטה המוצגת יוצרת הרביוור טבעי הנזק רקמת הצמח באמצעות היישום של מנדוקה הזחלים סקסטה להתנתק עלים של תפוחי אדמה. רקמת הצמח הוא הבעה ביטוי של שישה שעתוק גורם הומויומני מעורב בתגובות מוקדמות לחרקים העשב.

מנותקת עלה assays לפשט גנים ביטוי לימודי תפוחי אדמה במהלך התפשטות על ידי לעיסת חרק manduca סקסטה

אנחנו מציגים פרוטוקול לבדיקת האכלה של שתי אפשרויות לזבובים. מבחני האכלה אלה מהירים וקלים להפעלה ומתאימים לא רק למחקר מעבדה בקנה מידה קטן, אלא גם למסכים התנהגותיים בעלי תפוקה גבוהה בזבובים.

מבחני העדפת מזון מהירה בדרוסופילה

פרוטוקול זה מתאר את בדיקת ההזנה המחייבת להעריך את ההשפעה הרעילה, פוטנציאלית, של פיטוכימיקל על זחלי החרקים הלפידופטרניים. זוהי בדיקה ביולוגית של חרקים בעלת יכולת הרחבה גבוהה, שקל לייעל את המינון התת-קטלני והקטלני, את פעילות ההרתעה ואת ההשפעה הפיזיולוגית. זה יכול לשמש להקרנת קוטלי חרקים ידידותיים לסביבה.

פיתוח מערכת בדיקת האכלה להערכת ההשפעה קוטלת החרקים של פיטוכימיקלים על Helicoverpa armigera

למדו כיצד להעריך התנגדות של Arabidopsis thaliana לחרקים באמצעות ניסויים בחירה ואין-ברירה. השיטה מאפשרת לחקור את תפקידם של חומצה ג'סמונית וגלוקוזינולטים בהגנת הצמחים.

בחירה אין ברירה מבחני לבחינות ההתנגדות של thaliana א 'חרקים לעיסת

גלה סרטונים נוספים