Name: ייצור ניתן לשחזור של SPOT כפלטפורמת תרבות מבוססת פיגומים בתפוקה גבוהה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 22 s
Description: למד ייצור פלטפורמת SPOT מבוססת פיגומים בתפוקה גבוהה לתרבות אורגנואידים. הפרוטוקול מדגים שיטות זריעה ידניות ואוטומטיות לסקרינג תרופות ומידול מחלות מתקדם.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Antoni, D., Burckel, H., Josset, E., Noel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-Dimensional+Cell+Culture%3A+A+Breakthrough+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Three-Dimensional Cell Culture: A Breakthrough in vivo.</a> Int J Mol Sci. 16 (3), 5517-5527 (2015).</li>
<li>Pampaloni, F., Reynaud, E. G., Stelzer, E. H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+third+dimension+bridges+the+gap+between+cell+culture+and+live+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The third dimension bridges the gap between cell culture and live tissue.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 8 (10), 839-845 (2007).</li>
<li>Zhao, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Methods+Primers%22%5BJournal%5D)">Organoids.</a> Nat Rev Methods Primers. 2 (1), 1-21 (2022).</li>
<li>Done, A. J., Birkeland, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids+as+a+tool+in+drug+discovery+and+patient-specific+therapy+for+head+and+neck+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22CR+Med%22%5BJournal%5D)">Organoids as a tool in drug discovery and patient-specific therapy for head and neck cancer.</a> CR Med. 4 (6), 101087(2023).</li>
<li>Drost, J., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids+in+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Organoids in cancer research.</a> Nat Rev Cancer. 18 (7), 407-418 (2018).</li>
<li>Schuster, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+microfluidic+platform+for+dynamic+and+combinatorial+drug+screening+of+tumor+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Automated microfluidic platform for dynamic and combinatorial drug screening of tumor organoids.</a> Nat Commun. 11 (1), 5271(2020).</li>
<li>Bozal, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+automated+3D+high+content+cell+screening+platform+for+organoid+phenotyping%5BTitle%5D)+AND+%22SLAS+Disc%22%5BJournal%5D)">Development of an automated 3D high content cell screening platform for organoid phenotyping.</a> SLAS Disc. 29 (7), 100182(2024).</li>
<li>Seiler, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modular+automated+microfluidic+cell+culture+platform+reduces+glycolytic+stress+in+cerebral+cortex+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Modular automated microfluidic cell culture platform reduces glycolytic stress in cerebral cortex organoids.</a> Sci Rep. 12 (1), 20173(2022).</li>
<li>Costa, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+tumor+spheroids%3A+an+overview+on+the+tools+and+techniques+used+for+their+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Adv%22%5BJournal%5D)">3D tumor spheroids: an overview on the tools and techniques used for their analysis.</a> Biotechnol Adv. 34 (8), 1427-1441 (2016).</li>
<li>Pinho, D., Santos, D., Vila, A., Carvalho, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+Colorectal+Cancer+Organoids+in+Microfluidic-Based+System%5BTitle%5D)+AND+%22Micromachines%22%5BJournal%5D)">Establishment of Colorectal Cancer Organoids in Microfluidic-Based System.</a> Micromachines. 12 (5), 497(2021).</li>
<li>Töpfer, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bovine+colon+organoids%3A+From+3D+bioprinting+to+cryopreserved+multi-well+screening+platforms%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+in+Vitro%22%5BJournal%5D)">Bovine colon organoids: From 3D bioprinting to cryopreserved multi-well screening platforms.</a> Toxicol in Vitro. 61, 104606(2019).</li>
<li>Tong, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+a+defined+ECM+and+small+molecule+based+monolayer+culture+system+for+the+expansion+of+mouse+and+human+intestinal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Towards a defined ECM and small molecule based monolayer culture system for the expansion of mouse and human intestinal stem cells.</a> Biomaterials. 154, 60-73 (2018).</li>
<li>Krebs, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carrageenan-Based+Crowding+and+Confinement+Combination+Approach+to+Increase+Collagen+Deposition+for+In+Vitro+Tissue+Development%5BTitle%5D)+AND+%22Gels%22%5BJournal%5D)">Carrageenan-Based Crowding and Confinement Combination Approach to Increase Collagen Deposition for In Vitro Tissue Development.</a> Gels. 9 (9), 705(2023).</li>
<li>Li, N. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+off-the-shelf+multi-well+scaffold-supported+platform+for+tumour+organoid-based+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">An off-the-shelf multi-well scaffold-supported platform for tumour organoid-based tissues.</a> Biomaterials. 291, 121883(2022).</li>
<li>Phan, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+high-throughput+approach+identifies+actionable+drug+sensitivities+in+patient-derived+tumor+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">A simple high-throughput approach identifies actionable drug sensitivities in patient-derived tumor organoids.</a> Commun Biol. 2 (1), 78(2019).</li>
<li>Hofer, M., Lutolf, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mater%22%5BJournal%5D)">Engineering organoids.</a> Nat Rev Mater. 6 (5), 402-420 (2021).</li>
<li>Landon-Brace, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Engineered+Patient-Derived+Tumor+Organoid+Model+That+Can+Be+Disassembled+to+Study+Cellular+Responses+in+a+Graded+3D+Microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Func+Mater%22%5BJournal%5D)">An Engineered Patient-Derived Tumor Organoid Model That Can Be Disassembled to Study Cellular Responses in a Graded 3D Microenvironment.</a> Adv Func Mater. 31 (41), 2105349(2021).</li>
<li>Cao, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Automation+Workflow+for+High-Throughput+Manufacturing+and+Analysis+of+Scaffold-Supported+3D+Tissue+Arrays%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Healthcare+Mater%22%5BJournal%5D)">An Automation Workflow for High-Throughput Manufacturing and Analysis of Scaffold-Supported 3D Tissue Arrays.</a> Adv Healthcare Mater. 12 (19), 2202422(2023).</li>
<li>Rodenhizer, D., Dean, T., Xu, B., Cojocari, D., McGuigan, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+three-dimensional+engineered+heterogeneous+tumor+model+for+assessing+cellular+environment+and+response%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">A three-dimensional engineered heterogeneous tumor model for assessing cellular environment and response.</a> Nat Protoc. 13 (9), 1917-1957 (2018).</li>
<li>Young, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+TRACER+3D+Co-Culture+tumour+model+for+head+and+neck+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">A TRACER 3D Co-Culture tumour model for head and neck cancer.</a> Biomaterials. 164, 54-69 (2018).</li>
<li>Dean, T., Li, N. T., Cadavid, J. L., Ailles, L., McGuigan, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+TRACER+culture+invasion+assay+to+probe+the+impact+of+cancer+associated+fibroblasts+on+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma+cell+invasiveness%5BTitle%5D)+AND+%22Biomater+Sci%22%5BJournal%5D)">A TRACER culture invasion assay to probe the impact of cancer associated fibroblasts on head and neck squamous cell carcinoma cell invasiveness.</a> Biomater Sci. 8 (11), 3078-3094 (2020).</li>
<li>Du, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+miniaturized+3D+organoid+culture+platform+for+ultra-high-throughput+screening%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Development of a miniaturized 3D organoid culture platform for ultra-high-throughput screening.</a> J Mol Cell Biol. 12 (8), 630-643 (2020).</li>
<li>Shing, C. B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aShing%2C+CB+%22Automating+the+Generation+of+a+High-Throughput+Three-+Dimensional+Human+Adipocyte+Model%22">Automating the Generation of a High-Throughput Three- Dimensional Human Adipocyte Model</a>. , University of Toronto. (2009).</li>
</ol>

למרות ההתקדמות במחקר הביו-רפואי, פיתוח בדיקות מבחנה רלוונטיות מבחינה פיזיולוגית נותר מאתגר. בדיקה אידיאלית צריכה להתאים למגוון רחב של סוגי תאים, פורמולציות טיפול, טווחי זמן, מכשור מסחרי וקריאות אנליטיות כדי לענות על הצרכים של חוקרים בדיסציפלינות שונות. עם זאת, בשל היעדר כלים מתאימים, חוקרים מסתמכים לעתים קרובות על מודלים פשטניים, כגון חד-שכבות דו-ממדיות של קווי תאים אימורטליים, שאינם מצליחים לסכם את המורכבות והרלוונטיות הקלינית, במיוחד בחקר הסרטן 1,2. כדי לטפל בכך, בנקאות ביולוגית בקנה מידה גדול של גידולים ושיתוף פעולה קליני הניעו את הפיתוח של מודלים נאמנות גבוהה במבחנה כגון אורגנואידים של גידול שמקורם בחולה (PDOs), השומרים על פרופילים גנטיים וטיפוליים ספציפיים יותר למטופל בהשוואה לקווי תאים 3,4,5. בינתיים, התקדמות באוטומציה של מעבדות וגילוי תרופות דורשת פלטפורמות המשתלבות בצורה חלקה בתהליכי עבודה בעלי תפוקה גבוהה. בעוד שהפלטפורמות הקיימות מתייחסות לנאמנות ביולוגית או למדרגיות, מעטות הצליחו לפתור את שני האתגרים בו זמנית 6,7,8. פיתוח מודלים אוטומטיים בעלי תפוקה גבוהה המשכפלים תכונות מחלה מרכזיות הוא חיוני לקידום המחקר הביו-רפואי ולהאצת יצירת נתונים עבור יישומים תרגומיים.
מודלים מתפתחים רבים שואפים להתמודד עם האתגרים הקשורים לתרבית סוגי תאים מיוחדים, כגון PDOs, עם תפוקה גבוהה (איור 1). פלטפורמות סטנדרטיות, שבהן אורגנואידים מעורבבים עם הידרוג'ל בצלחות של 96 או 384 בארות, מציגות מספר מגבלות: (i) נפח תאים-ג'ל גבוה מוביל לגישה לא עקבית לחומרים מזינים, (ii) עקמומיות מניסקוס באר יוצרת חפצי הדמיה ושיפועים תאיים, (iii) זריעת הידרוג'ל חסרה אחידות בין קבוצות וכוח אדם, (iv) חוסר תאימות לייצור אוטומטי ומיקרוסקופיה אוטומטית, ו-(v) שימוש במטריצה חוץ-תאית (ECM) שהיא בדרך כלל דגימת סיכונים רכה ושברירית הרס בצפיפות רקמות פיזיולוגיות או שילוב של סוגי תאים מתכווצים 1,9. נכון לעכשיו, רוב מחקרי ה-PDO מבוססי הצלחת נערכים על ידי זריעה ידנית של ג'ל התא לתוך הצלחת10,11, או בשיטת כיסוי ג'ל, שבה ההידרוג'ל מדולל בתווך פחות צמיג, והתאים עוברים צנטריפוגה לתחתית הבאר כדי למקם אותם במישור האופטי המתאים12,13. שתי הגישות אינן מצליחות לספק תמיכה מכנית לתרבות ארוכת טווח. בהתבסס על התצפיות הקודמות שלנו (נתונים שלא פורסמו), הידרוג'ל מסחרי מעורבב עם תאים בצלחות באר סטנדרטיות מתכווץ מפני השטח של הבאר במשך 9 מתוך 12 בארות במשך 12 ימים, בעוד ששיטת כיסוי הג'ל חסרה אינטראקציות פיזיולוגיות בין תא למטריצה. בנוסף, לא ניתן לשמור על התרביות המתקבלות לאורך תקופות ארוכות עקב מגבלות מקום בתוך הבאר ואינן תואמות לבדיקות הדורשות יחס גבוה של מגיב לתא-בינוני 14,15,16. חסמים מעשיים אלה מעכבים את אימוץ מודלים תלת מימדיים ומגבילים את יכולת השחזור הניסויי בשטח.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68405/68405fig1.jpg"> 
איור 1: הערכת מודלים של תרבית המבוססת על מדרגיות ורלוונטיות ביולוגית. המיקום היחסי של מערכות תרבית שונות במבחנה וב-vivo לאורך מדרגיות (ציר y), המוגדרת על ידי תפוקת לוחות, ורלוונטיות ביולוגית (ציר x), תוך הדגשת פשרות בין פוטנציאל תפוקה לנאמנות פיזיולוגית. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68405/68405fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
מונעים על ידי אתגרים אלה, הנקבוביות הגבוהה והחיזוק המכני של פיגום תאית דק מונפו לפיתוח הפלטפורמה הנתמכת בפיגומים לרקמות מבוססות אורגנואיד (SPOT), הזמינה בפורמטים של 96 ו-384 בארות. SPOT משלב פיגום פולימרי מעוצב מראש בשיטת חדירהשפותחה בעבר 17 התואמת את פריסת הצלחת, מאפשרת מיקום מדויק של טיפות ג'ל תאים ומספקת תמיכה מבנית לשלב ההידרוג'ל (איור 2A). נידוף נימי לתוך הפיגום מנחה את תמיסת ג'ל התא, ויוצרת רשת ביו-מרוכבת הנאכפת מכנית (איור 2B). בשל המבנה הנקבובי של הפיגום, ג'ל התא חודר ויוצר שכבה דקה (בעובי של כ-70 מיקרומטר), הדורשת פי עשרה פחות ג'ל תאים כדי לכסות את קרקעית הבאר14. התאימות של SPOT עם זרעי PDOs של אדנוקרצינומה של הלבלב (PDAC) הודגמה גם על ידי הערכת צמיחתם באמצעות מבחנים מטבוליים ומדידות מבוססות תמונה. מאז פיתוחו, SPOT הוכיח צדדיות ושימושיות משמעותית עבור חוקרים העוסקים בתרבית אורגנואידים. בנוסף, העיצוב של SPOT מתאים למדרגיות ידידותית למשתמש, עם נפחי ריאגנטים מופחתים ויכולות הדמיה משופרות באמצעות גיאומטריית המיקרוג'ל השטוחה ונטולת המניסקוס, מה שמבטיח חדירת אור אחידה והדמיה מדויקת בתוכן גבוה14 (איור 2C,D). SPOT תומך גם בתרבית משותפת עם סוגי תאים רלוונטיים אחרים, כגון פיברובלסטים, כדי לסכם טוב יותר את המיקרו-סביבה של הגידול18.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68405/68405fig2.jpg"> 
איור 2: סקירה כללית של התקן 96-SPOT וזרימת העבודה של ניתוח תמונה. (A) ייצוג סכמטי של ייצור לוחות SPOT: ההתקן מורכב על ידי איסוף לוחית באר מסחרית ללא תחתית (למעלה), פיגום בדוגמת PMMA (מוצג בכחול) וסרט פוליקרבונט (למטה) באמצעות שכבות של דבק פוליאקרילי דו-צדדי (מוצג בצהוב). (B) זריעת תאים לתוך באר פיגום: תאים תלויים בהידרוג'ל לא מפולימר (מוצג בוורוד) ומוזרמים לתוך כל באר שבה הוא חודר לפיגום. לאחר מכן נותנים להידרוג'ל לג'ל כדי לעטוף את התאים בתוך ההידרוג'ל הנתמך על ידי פיגומים. (C) מיקרוסקופיה: ניתן לדמות את המיקרו-רקמה המתקבלת באמצעות מיקרוסקופיה אוטומטית של שדה רחב. (ד) ניתוח מבוסס תמונה: ניתן לנתח תמונות נרכשות של תאים פלואורסצנטיים (ירוקים) תלויים בג'ל באמצעות צינורות ניתוח תמונה סטנדרטיים. תמונת מיקרוסקופיה אפיפלואורסצנטית מייצגת של תאי KP4 המבטאים GFP בבאר אחת של 96 נקודות. סרגל קנה המידה הוא 500 מיקרומטר. נתון זה שונהמ-14. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68405/68405fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
יתרון נוסף של SPOT הוא שניתן לשלב את המערכת עם מטפל בנוזלים בקוד פתוח, מה שמקל על ייצור אוטומטי וניתן לשחזור של תרביות PDO. התקדמות זו מפחיתה את השונות של המשתמש ותומכת בעיצובים ניסויים מורכבים, כולל סינון תרופות בתפוקה גבוהה וגישות רפואה מותאמת אישית18. SPOT הוכח בעבר גם כתואם לאפיון מרובה מבוסס תא יחיד של פנוטיפים תאיים בסביבות גידול הטרוגניות ואחזור התאים לפי דרישה מ-SPOT על ידי עיכול18. תכונות אלה ממקמות את SPOT ככלי רב-תכליתי לסינון יישומים, כאשר נתונים אורכיים ברזולוציה גבוהה חיוניים להערכת יעילות התרופות וההתנהגות התאית בתנאים רלוונטיים מבחינה פיזיולוגית14,18. על ידי שילוב החידושים הטכניים הללו, SPOT מטפלת במגבלות קריטיות במערכות תרבות תלת מימד מסורתיות.
פרוטוקול זה מספק מדריך מקיף לייצור רכיבי SPOT, הרכבת לוחות ושיטות זריעה עבור תרביות אורגנואידים תלת מימדיות חזקות וניתנות לשחזור. הוא כולל הוראות מפורטות לזריעת צלחות ידנית באמצעות מיקרופיפטה ותהליכי זריעה אוטומטיים עם מטפל בנוזלים, התומך בפורמטים של 96 ו-384 בארות. בנוסף, פרוטוקול זה מתאר אמצעי בקרת איכות חיוניים, כגון אימות פיזור ג'ל אחיד ותקינות פיגומים, כדי לשמור על סטנדרטים ניסיוניים גבוהים. אסטרטגיות פתרון בעיות ניתנות גם כדי לטפל בבעיות נפוצות, כגון חדירת ג'ל לא שלמה, אידוי במהלך הזריעה וניתוק פיגומים, מה שמצייד את החוקרים בפתרונות מעשיים כדי לייעל את זרימות העבודה שלהם ולהשיג תוצאות אמינות.
SPOT נועד למלא את הפערים העומדים בפני בדיקות אורגנואידים מסורתיות, כולל אתגרים הקשורים לביצוע בדיקות ושינוי מדיה תוך שמירה על שלמות הג'ל 10,11,12,13. המטרה הכוללת של שיטה זו היא לייצר פלטפורמה הנתמכת בפיגומים התומכת בתרבית אורגנואידים לאורך תקופה של 12 יום. בנוסף, שיטה זו מכסה גם יצירת מערכי רקמות ב-SPOT באמצעות זריעה ידנית או בעזרת מטפל בנוזל כדי לאפשר למשתמשים לבצע כל הפרעה במורד הזרם, כולל בדיקות תרופות IC50 וסינון מולקולות קטנות.

<table><tbody><tr><td>צינורות PCR של 0.2 מ"ל (רצועות של 8)&nbsp;</td><td>סרשטדט</td><td>72.985.002</td><td></td></tr><tr><td>צינור צנטריפוגה 1.5 מ"ל</td><td>פרוגה ביו</td><td>LMCT1.7B</td><td></td></tr><tr><td>1000-&mu; קצות פיפטה L</td><td>ליקוי מאורות</td><td>4-1019-260-000</td><td></td></tr><tr><td>פיפטות סרולוגיות של 10 מ"ל</td><td>פרוגה ביו</td><td>394010</td><td></td></tr><tr><td>מזרק 10 מ"ל</td><td>BD, קנדה</td><td>302995</td><td></td></tr><tr><td>10x בינוני חיוני מינימלי (MEM 10x)</td><td>ג'יבקו</td><td>11430030</td><td></td></tr><tr><td>צלחת 150 מ"מ</td><td>קורנינג</td><td>430599</td><td></td></tr><tr><td>טיפים לחלוקה בגודל 16 עם חיבור מנעול Luer</td><td>מקמאסטר-קאר, אילינוי, ארה"ב</td><td>6699א2</td><td></td></tr><tr><td>20 ומיקרו; L מתלים לקצוות סינון</td><td>אופנטרון</td><td>999-00099</td><td></td></tr><tr><td>200 ומיקרו; L מתלים לקצוות סינון</td><td>אופנטרון</td><td>999-00081</td><td></td></tr><tr><td>200-&mu; קצות פיפטה L</td><td>ליקוי מאורות</td><td>4-1030-260-000</td><td></td></tr><tr><td>טיפים לחלוקה בגודל 20 עם חיבור מנעול Luer</td><td>מקמאסטר-קאר, אילינוי, ארה"ב</td><td>6699א4</td><td></td></tr><tr><td>צלחת באר ללא תחתית 384 בארות (שחור)</td><td>גריינר</td><td>82051-544</td><td></td></tr><tr><td>מזרק 3 מ"ל&nbsp;</td><td>BD, קנדה</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>צינור צנטריפוגה חרוטי מפוליפרופילן 50 מ"ל</td><td>VWR</td><td>CA21008-940</td><td></td></tr><tr><td>צינור צנטריפוגה חרוטי מפוליפרופילן 50 מ"ל</td><td>VWR</td><td>CA21008-940</td><td></td></tr><tr><td>צלחת באר 96 באר ללא תחתית (שחור)</td><td>גריינר</td><td>82050-714</td><td></td></tr><tr><td>אצטון</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>א18-1</td><td></td></tr><tr><td>איזון אנליטי</td><td>לא ישים</td><td>לא ישים</td><td></td></tr><tr><td>הרחבת AxiDraw עבור Inkscape (https://wiki.evilmadscientist.com/Axidraw_Software_Installation)</td><td>לא ישים</td><td>לא ישים</td><td></td></tr><tr><td>AxiDraw Python API (https://axidraw.com/doc/py_api/#installation)&nbsp;</td><td>לא ישים</td><td>לא ישים</td><td></td></tr><tr><td>AxiDraw V3 מכונת כתיבה וציור אישית בעלת ביצועים גבוהים</td><td>מדענים מטורפים מרושעים, ארה"ב</td><td>לא ישים</td><td></td></tr><tr><td>קולגן בקר (PureCol 3 מ"ג/מ"ל)</td><td>ביומטריקס מתקדם</td><td>5005</td><td></td></tr><tr><td>קו תאים לבחירה</td><td>לא ישים</td><td>לא ישים</td><td></td></tr><tr><td>כן ציור קליפ (כלול בחבילת AxiDraw V3)</td><td>מדענים מטורפים מרושעים, ארה"ב</td><td>לא ישים</td><td></td></tr><tr><td>מדיה תרבותית לבחירה</td><td>לא ישים</td><td>לא ישים</td><td></td></tr><tr><td>סרט הגנה מפני לכידת לכלוך</td><td>3 דקות</td><td>6851 PN36851</td><td></td></tr><tr><td>סרט דבק פוליאקרילי דו צדדי (800 מ"מ x 1200 מ"מ)</td><td>מחקר דבק, ARcare</td><td>ברקוד 90106NB</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי (FBS)</td><td>ג'יבקו</td><td>12483-020</td><td></td></tr><tr><td>מסנני תה פינום XL&nbsp;</td><td>ריינש & Held GmbH & Co. KG, המבורג, גרמניה</td><td>420.69.00</td><td></td></tr><tr><td>מכסים שטוחים לצינורות PCR של 0.2 מ"ל (רצועות של 8)</td><td>סרשטדט</td><td>65.989.002</td><td></td></tr><tr><td>מהדקי קפיצי פלסטיק כבדים</td><td>בנצ'מרק</td><td>1024-554</td><td></td></tr><tr><td>מודול HEPA &ndash; דגם 110-130V 60Hz</td><td>אופנטרון</td><td>999-00109</td><td></td></tr><tr><td>שקית קרח (קפואה, 1400 מ"מ x 1800 מ"מ)</td><td>לא ישים</td><td>לא ישים</td><td></td></tr><tr><td>תוכנת Inkscape</td><td>לא ישים</td><td>לא ישים</td><td></td></tr><tr><td>חותך לייזר</td><td>מערכת לייזר אוניברסלית</td><td>VLS3.75</td><td></td></tr><tr><td>צינורות אתיל ויניל אצטט מיניאטוריים (EVA) בקוטר חיצוני של 0.07 אינץ'</td><td>מקמאסטר-קאר, אילינוי, ארה"ב</td><td>1883ט3</td><td></td></tr><tr><td>פיפטה אלקטרונית רב ערוצית P20 (Gen2)</td><td>אופנטרון</td><td>999-00005</td><td></td></tr><tr><td>פיפטה אלקטרונית רב-ערוצית P300 (Gen2)</td><td>אופנטרון</td><td>999-00006</td><td></td></tr><tr><td>לק</td><td>סאלי הנסן</td><td>SBS-006861</td><td>אופציונלי, לפיגמנטציה של דיו PMMA</td></tr><tr><td>Opentrons OT-2</td><td>אופנטרון</td><td>999-00111</td><td></td></tr><tr><td>פיפטה P1000</td><td>גילסון</td><td>FA10006M</td><td></td></tr><tr><td>P200 פיפטה 8 ערוצים</td><td>גילסון</td><td>F144072</td><td></td></tr><tr><td>פיפטה P200</td><td>גילסון</td><td>FA10005M</td><td></td></tr><tr><td>מגבות נייר</td><td>לא ישים</td><td>לא ישים</td><td></td></tr><tr><td>פרפילם</td><td>חברת Bemis, Inc.</td><td>52859-079</td><td></td></tr><tr><td>נייר אפייה&nbsp; &nbsp;</td><td>לא ישים</td><td>לא ישים</td><td></td></tr><tr><td>פיפטות פסטר</td><td>VWR</td><td>14672-380</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומיצין (P/S)</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>עמ' 4333</td><td></td></tr><tr><td>פולי (מתיל מתקרילט) (PMMA)</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>182230</td><td></td></tr><tr><td>סרט פוליקרבונט (760 מ"מ x 1300 מ"מ)</td><td>מקמאסטר-קאר</td><td>ברקוד 85585K102</td><td></td></tr><tr><td>מונומר פולידימתילסילוקסן ומקשר צולב (PDMS, 1500 מ"מ x 2700 מ"מ)</td><td>דבקים של אלסוורת'</td><td>4019862</td><td></td></tr><tr><td>סכין דיוק</td><td>לא ישים</td><td>לא ישים</td><td></td></tr><tr><td>תמיכה אקרילית קשיחה (גודל מותאם לתחתית צלחת הבאר)</td><td>מקמאסטר-קאר</td><td>ברקוד 8560K239</td><td></td></tr><tr><td>תמיכה בקרטון קשיח</td><td>לא ישים</td><td>לא ישים</td><td></td></tr><tr><td>סרגל</td><td>לא ישים</td><td>לא ישים</td><td></td></tr><tr><td>מספריים&nbsp;</td><td>לא ישים</td><td>לא ישים</td><td></td></tr><tr><td>נתרן ביקרבונט (0.8M במים מזוקקים)</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>S6014</td><td></td></tr><tr><td>סיפון טמפרטורה עם בלוקים מאלומיניום (Gen2)</td><td>אופנטרון</td><td>999-00097</td><td></td></tr><tr><td>גלגל מעקב&nbsp;</td><td>HEEPDD (אמזון)</td><td>B07YQWB284</td><td></td></tr><tr><td>סרט שקוף&nbsp;</td><td>לא ישים</td><td>לא ישים</td><td></td></tr><tr><td>טריפן כחול</td><td>ג'יבקו</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>טריפסין</td><td>ג'יבקו</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>פינצטה</td><td>לא ישים</td><td>לא ישים</td><td></td></tr><tr><td>מערבל וורטקס&nbsp;</td><td>לא ישים</td><td>לא ישים</td><td></td></tr></tbody></table>

ייצור ניתן לשחזור של spot כפלטפורמת תרבות מבוססת פיגומים בתפוקה גבוהה

Reproducible Manufacturing of SPOT as a High-throughput Scaffold-based Culture Platform

דפוס PMMA של פיגום הנייר משמש כמחסום פיזי למניעת חילופי תוכן בין בארות. תכנון זה הוא קריטי להבטחת בידוד כימי וביולוגי של בארות סמוכות, ומניעת דיפוזיה לא מכוונת של מדיה, תרופות, גורמים מופרשים או אפילו תאים14. השילוב של PMMA מאפשר מידור מדויק, מה שהופך את SPOT לפלטפורמה אמינה למחקרי סינון בתפוקה גבוהה ומחקרי תרבות משותפת שבהם יש למזער זיהום צולב14,18. ניסויי אבטחת איכות ובקרת איכות מומלצים מתוארים בטבלה 3 ובטבלה 4<...

ייצור ניתן לשחזור של SPOT כפלטפורמת תרבות מבוססת פיגומים בתפוקה גבוהה

Patient-derived organoids (PDOs) are becoming increasingly used in the field of cancer research to model tumors. They combine the benefits of in vivo and ...

reproducible-manufacturing-spot-as-high-throughput-scaffold-based

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

ב רבים בעבר במערכות חוץ גופית תרבות - בעיקר בתרבויות monolayer - סבלו לעתים קרובות החיסרון כי תאים ראשוניים הבדיל היה קצר יחסית אורך חיים ו-de הבדיל במהלך התרבות. כתוצאה מכך, את רוב הפונקציות איבר ספציפי שלהם אבדו במהירות. לפיכך, על מנת לשחזר תנאים טובים יותר עבור תאים אלה במבחנה, שינויים והתאמות שנעשו בתרבויות monolayer קונבנציונאלי.

ראיון: bioreactors ועלו-Modified-3D פיגומים למחקר בתאי גזע

תפוקה גבוהה, פלטפורמה אוטומטית של פיתוח וייצור קו התא לייצור חלבונים ותרופות מתואר. יישום סדרן BD Cell Aria FACS, CloneSelect Imager וטקאן חופש מערכת EVO טיפול הנוזל הוכיחה יכולת עיבוד גדל באופן משמעותי בפיתוח קו התא עם איכות הקו השתפרה התא reproducibility גבוהה.

פלטפורמה תפוקה גבוהה אוטומטיות לפיתוח קווי ייצור עבור Cell Therapeutics חלבון

הפרוטוקולים המתוארים מאפשרים למעבדות לבצע תרבית תאי גזע ניתנת להרחבה בתפוקה גבוהה עם עלות השקעה מינימלית של עבודה, ניסיון וציוד באמצעות רובוט טיפול בנוזלים הניתן לתכנות וצלחות של 96 בארות.  iPSCs שעברו יותר מ-20 פעמים במערכת זו שמרו על פלוריפוטנטיות, קריוטיפים נורמליים והתמיינו לקרדיומיוציטים.

פלייט מדרגי 96-גם בהתבסס iPSC תרבות וייצור באמצעות מערכת רובוטית טיפול נוזל

מאמר זה מתאר את המתודולוגיה מפורט כדי להכין מערך מרובב מלאכותי תאית MicroEnvironment (MACME) עבור תפוקה גבוהה מניפולציה גופנית, כימית רמזים היה שווה ויוו הסלולר microenvironments וכדי זיהוי הסביבה התאית אופטימלית עבור תאי גזע pluripotent אנושי (hPSCs) עם פרופיל תא בודד.

ייצור של מערך מרובבת MicroEnvironment הסלולר מלאכותי

פרוטוקול זה משמש כמדריך מקיף לערבוב סטנדרטי וניתן לשחזור של חומרים צמיגים עם טכנולוגיית אוטומציה חדשנית בקוד פתוח. הוראות מפורטות ניתנות על פעולתה של תחנת עבודה בקוד פתוח שפותחה לאחרונה, על השימוש במעצב פרוטוקול קוד פתוח ועל האימות והאימות לזיהוי תערובות הניתנות לשחזור.

פלטפורמת טכנולוגיית קוד פתוח לייצור דגמי תרבות תלת-ממדית מבוססי הידרוג'ל באופן אוטומטי ומתוקנן

רקמות לב תלת-ממדיות שהונדסו ביולוגית באמצעות קרדיומיוציטים שמקורם בתאי גזע התגלו כמודלים מבטיחים לחקר שריר הלב האנושי הבריא והחולה במבחנה תוך שחזור היבטים מרכזיים של נישת הלב הטבעית. כתב יד זה מתאר פרוטוקול לייצור וניתוח רקמות לב מהונדסות בעלות תוכן גבוה שנוצרו מקרדיומיוציטים פלוריפוטנטיים המושרים על ידי תאי גזע המושרים על ידי בני אדם.

תכנון ביוריאקטור לשיפור איסוף הנתונים והפקת מודלים של רקמות לב מהונדסות

מאמר זה מציג פרוטוקול ייצור לסוג חדש של מצע תרבית עם מאות מיקרו-מיכלים למ"מ2, שבו ניתן לגדל אורגנואידים בתרבית ולצפות בהם באמצעות מיקרוסקופיה ברזולוציה גבוהה. פרוטוקולי זריעת התאים ומערכת החיסון מפורטים גם הם.

פלטפורמה בעלת תפוקה גבוהה לתרבית והדמיה תלת-ממדית של אורגנואידים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול למערכת תרבית תאים אוטומטית. מערכת תרבית אוטומטית זו מפחיתה את העבודה ומועילה למשתמשים, כולל חוקרים שאינם בקיאים בטיפול בתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים (iPS), החל מתחזוקה של תאי iPS ועד התמיינות לסוגים שונים של תאים.

מערכת תרבית אוטומטית לשמירה והתמיינות של תאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים על ידי בני אדם

פרוטוקול זה מציג תהליך סינון סטנדרטי עם תפוקה גבוהה עבור מיקרואורגניזמים תעשייתיים. הוא כולל בניית ספריית מוטנטים באמצעות מוטגנזה של ARTP, ביצוע סקר חיובי לטיפות באמצעות מיקרופלואידיקה אוטומטית, ולאחר מכן אימות התוצאות. אמינות זרימת העבודה אושרה על ידי סינון זני B. coagulans בעלי תפוקה גבוהה.

סקר מהיר של מוטנטים של חיידקים קואגולנס המופרזים בחומצה L-לקטית באמצעות פלטפורמה מיקרופלואידית אוטומטית של טיפות

מסורתית, שני ממדי התרבות טכניקות תא לעיתים לגרום מאפיינים שינו לגבי סמנים בידול, ציטוקינים וגורמי גדילה. תלת ממדי התרבות תאים במערכת מסתובבת תרבית תאים (RCCS) reestablishes הביטוי של רבים מהגורמים הללו כפי שמוצג כאן עם קו trophoblast extravillous התא.

סיבוב תרבית תאים מערכות התרבות תאים אנושיים: תאים Trophoblast האדם כמודל

למד ייצור פלטפורמת SPOT מבוססת פיגומים בתפוקה גבוהה לתרבות אורגנואידים. הפרוטוקול מדגים שיטות זריעה ידניות ואוטומטיות לסקרינג תרופות ומידול מחלות מתקדם.

ייצור ניתן לשחזור של SPOT כפלטפורמת תרבות מבוססת פיגומים בתפוקה גבוהה

גלה סרטונים נוספים