Name: מדידת גואנוזין מונופוספט מחזורי (cGMP) ברקמות מוצקות באמצעות בדיקת אימונוסורבנט תחרותית מקושרת לאנזים (ELISA) (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-03T13:25:00.000+00:00
Duration: 7 min 15 s
Description: למד מדידת cGMP ברקמות מוצקות באמצעות ELISA תחרותי. פרוטוקול זה מספק שיטה פשוטה ואמינה לחקר מטבוליזם חנקן חנקני ומסלולי מסרים שניוניים בביולוגיה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Dierks, E. A., Burstyn, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitric+oxide+%28NO%29%2C+the+only+nitrogen+monoxide+redox+form+capable+of+activating+soluble+guanylyl+cyclase%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Nitric oxide (NO), the only nitrogen monoxide redox form capable of activating soluble guanylyl cyclase.</a> Biochem Pharmacol. 51 (12), 1593-1600 (1996).</li>
<li>Koglin, M., Behrends, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+functional+domain+of+the+alpha1+subunit+of+soluble+guanylyl+cyclase+is+necessary+for+activation+of+the+enzyme+by+nitric+oxide+and+YC-1+but+is+not+involved+in+heme+binding%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">A functional domain of the alpha1 subunit of soluble guanylyl cyclase is necessary for activation of the enzyme by nitric oxide and YC-1 but is not involved in heme binding.</a> J Biol Chem. 278 (14), 12590-12597 (2003).</li>
<li>Olson, L. J., Knych, E. T., Herzig, T. C., Drewett, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+guanylyl+cyclase+inhibitor+reverses+nitric+oxide-induced+vasorelaxation%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Selective guanylyl cyclase inhibitor reverses nitric oxide-induced vasorelaxation.</a> Hypertension. 29 (1), 254-261 (1997).</li>
<li>Bailey, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+nitrate+supplementation+reduces+the+O2+cost+of+low-intensity+exercise+and+enhances+tolerance+to+high-intensity+exercise+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol+%281985%29%22%5BJournal%5D)">Dietary nitrate supplementation reduces the O2 cost of low-intensity exercise and enhances tolerance to high-intensity exercise in humans.</a> J Appl Physiol (1985). 107 (4), 1144-1155 (2009).</li>
<li>Vanhatalo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+and+chronic+effects+of+dietary+nitrate+supplementation+on+blood+pressure+and+the+physiological+responses+to+moderate-intensity+and+incremental+exercise%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Regul+Integr+Comp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Acute and chronic effects of dietary nitrate supplementation on blood pressure and the physiological responses to moderate-intensity and incremental exercise.</a> Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 299 (4), R1121-R1131 (2010).</li>
<li>Qin, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Balancing+role+of+nitric+oxide+in+complement-mediated+activation+of+platelets+from+mcd59a+and+mcd59b+double-knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Hematol%22%5BJournal%5D)">Balancing role of nitric oxide in complement-mediated activation of platelets from mcd59a and mcd59b double-knockout mice.</a> Am J Hematol. 84 (4), 221-227 (2009).</li>
<li>Radomski, M. W., Palmer, R. M., Moncada, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+l-arginine%2Fnitric+oxide+pathway+present+in+human+platelets+regulates+aggregation%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">An l-arginine/nitric oxide pathway present in human platelets regulates aggregation.</a> PNAS. 87 (13), 5193-5197 (1990).</li>
<li>Thomas, D. D., Liu, X., Kantrow, S. P., Lancaster, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biological+lifetime+of+nitric+oxide%3A+Implications+for+the+perivascular+dynamics+of+NO+and+O2%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">The biological lifetime of nitric oxide: Implications for the perivascular dynamics of NO and O2.</a> PNAS. 98 (1), 355-360 (2001).</li>
<li>Park, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+rat+skeletal+muscle+homogenates+for+nitrate+and+nitrite+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Preparation of rat skeletal muscle homogenates for nitrate and nitrite measurements.</a> J Vis Exp. (173), e62427(2021).</li>
<li>Park, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+roles+of+nitrate+and+nitrite+in+nitric+oxide+metabolism+in+the+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Potential roles of nitrate and nitrite in nitric oxide metabolism in the eye.</a> Sci Rep. 10 (1), 13166(2020).</li>
<li>Srihirun, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitrate+uptake+and+metabolism+in+human+skeletal+muscle+cell+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Nitric+Oxide%22%5BJournal%5D)">Nitrate uptake and metabolism in human skeletal muscle cell cultures.</a> Nitric Oxide. 94, 1-8 (2020).</li>
<li>Montoliu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+of+nitric+oxide+and+atrial+natriuretic+peptide+changes+with+altered+cGMP+homeostasis+in+liver+cirrhosis%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Int%22%5BJournal%5D)">Correlation of nitric oxide and atrial natriuretic peptide changes with altered cGMP homeostasis in liver cirrhosis.</a> Liver Int. 25, 787-795 (2005).</li>
<li>Origlia, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+cGMP+inversely+correlates+with+age+in+healthy+subjects%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endocrinol+Invest%22%5BJournal%5D)">Platelet cGMP inversely correlates with age in healthy subjects.</a> J Endocrinol Invest. 27 (2), RC1-RC4 (2004).</li>
<li>Calamera, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fret-based+cyclic+GMP+biosensors+measure+low+cGMP+concentrations+in+cardiomyocytes+and+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">Fret-based cyclic GMP biosensors measure low cGMP concentrations in cardiomyocytes and neurons.</a> Commun Biol. 2, 394(2019).</li>
<li>Rutkowski, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+imaging+of+cGMP+signaling+shows+pronounced+differences+between+glomerular+endothelial+cells+and+podocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Real-time imaging of cGMP signaling shows pronounced differences between glomerular endothelial cells and podocytes.</a> Sci Rep. 14, 26099(2024).</li>
<li>Straub, A. C., Beuve, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+primer+for+measuring+cGMP+signaling+and+cGMP-mediated+vascular+relaxation%5BTitle%5D)+AND+%22Nitric+Oxide%22%5BJournal%5D)">A primer for measuring cGMP signaling and cGMP-mediated vascular relaxation.</a> Nitric Oxide. 117, 40-45 (2021).</li>
<li>Huang, K. T., Lin, T. J., Hsu, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+cyclic+GMP+concentration+using+a+gold+nanoparticle-modified+optical+fiber%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">Determination of cyclic GMP concentration using a gold nanoparticle-modified optical fiber.</a> Biosens Bioelectron. 26 (1), 11-15 (2010).</li>
<li>Cyclic gmp elisa kit. , 
 <a target="_blank" href="https://cdn.caymanchem.com/cdn/seawolf/insert/581021.pdf">https://cdn.caymanchem.com/cdn/seawolf/insert/581021.pdf</a> (2024).</li>
<li>Park, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+nitrate+metabolism+in+porcine+ocular+tissues+determined+using+15N-labeled+sodium+nitrate+supplementation%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Dietary nitrate metabolism in porcine ocular tissues determined using 15N-labeled sodium nitrate supplementation.</a> Nutrients. 16 (8), 1154(2024).</li>
<li>Cgmp enzyme immunoassay kit, direct technical bulletin. , 
 <a target="_blank" href="https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/289/571/cg200bul.pdf?srsltid=AfmBOoqWnOVurQ549ESXk_E7DJoqNs7v268ktTabHHYc6I_6NZkc-j_V">https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/289/571/cg200bul.pdf?srsltid=AfmBOoqWnOVurQ549ESXk_E7DJoqNs7v268ktTabHHYc6I_6NZkc-j_V</a> (2025).</li>
<li>Cyclic gmp competitive elisa lysate and homogenate samples. , 
 <a target="_blank" href="https://assets.thermofisher.com/TFS Assets/LSG/certificate/Certificates%20of%20Analysis/RA229061_EMSCGMPL.pdf">https://assets.thermofisher.com/TFS Assets/LSG/certificate/Certificates%20of%20Analysis/RA229061_EMSCGMPL.pdf</a> (2025).</li>
<li>Hamad, A. M., Range, S., Holland, E., Knox, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+cGMP+by+soluble+and+particulate+guanylyl+cyclases+in+cultured+human+airway+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Regulation of cGMP by soluble and particulate guanylyl cyclases in cultured human airway smooth muscle.</a> Am J Physiol. 273 (4), L807-L813 (1997).</li>
<li>Mo, E., Amin, H., Bianco, I. H., Garthwaite, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetics+of+a+cellular+nitric+oxide%2FcGMP%2Fphosphodiesterase-5+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Kinetics of a cellular nitric oxide/cGMP/phosphodiesterase-5 pathway.</a> J Biol Chem. 279 (25), 26149-26158 (2004).</li>
<li>Corbin, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%5B3h%5Dsildenafil+binding+to+phosphodiesterase-5+is+specific%2C+kinetically+heterogeneous%2C+and+stimulated+by+cGMP%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">[3h]sildenafil binding to phosphodiesterase-5 is specific, kinetically heterogeneous, and stimulated by cGMP.</a> Mol Pharmacol. 63 (6), 1364-1372 (2003).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 מ"ל BD מזרק אוראלי שקוף</td><td>בקטון דיקינסון</td><td>50382903052177</td><td></td></tr><tr><td>מבחנה תחתונה עגולה 14 מ"ל</td><td>בז</td><td>352059</td><td></td></tr><tr><td>2.0 מ"ל מיקרו-צינורות, מגוון</td><td>אולימפוס פלסטיק</td><td>24-283 א</td><td></td></tr><tr><td>30-300 ומיקרו; L פיפטה רב-ערוצית&nbsp;</td><td>אפנדורף</td><td>3125000052</td><td></td></tr><tr><td>אנהידריד אצטי (בערכת cGMP)</td><td>חברת קיימן כימיקלים</td><td>400031</td><td>98% טהור <חזק>סכנה</חזק>: דליק, קורוזיבי: כוויות קשות בעור, נזק לעיניים, רעלן חריף <חזק>טיפול בטוח</חזק>: יש להרחיק ממקורות הצתה, לעבוד באזור מאוורר, ללבוש כפפות</td></tr><tr><td>עוקב אצטילכולין אסטראז cGMP (בערכת cGMP)</td><td>חברת קיימן כימיקלים</td><td>481020</td><td>אשלגן פוספט דו-בסיסי, נתרן כלורי,&nbsp; אשלגן פוספט מונו-בסיסי, אלבומין בקר, נתרן אזיד, EDTA, cGMP AChE tracer <חזק>סכנה</חזק>: סכנה בריאותית: רעילות איברים מחשיפה חוזרת, קורוזיבי: נזק לעיניים, גירוי בעור ובנשימה <חזק>טיפול בטוח</חזק>: עבודה באזור מאוורר, ללבוש כפפות</td></tr><tr><td>cGMP ELISA AntiSerum (בערכת cGMP)</td><td>חברת קיימן כימיקלים</td><td>481022</td><td>אשלגן פוספט דו-בסיסי, נתרן כלורי,&nbsp; אשלגן פוספט מונובסיסי, אלבומין בקר,&nbsp; נתרן אזיד, EDTA, ארנב אנטי-cGMP פוליקלונלי אנטיסרום <חזק>סכנה</חזק>: סכנה בריאותית: רעילות איברים מחשיפה חוזרת, קורוזיבי: נזק לעיניים, מגרה עור ונשימה, רעילות חריפה <חזק>טיפול בטוח</חזק>: לעבוד באזור מאוורר, ללבוש כפפות</td></tr><tr><td>תקן cGMP ELISA (בערכת cGMP)</td><td>חברת קיימן כימיקלים</td><td>481024</td><td>אשלגן פוספט דו-בסיסי, נתרן כלורי,&nbsp; אשלגן פוספט מונובסיסי, אלבומין בקר,&nbsp; נתרן אזיד, EDTA, cGMP סטנדרטי <חזק>סכנה</חזק>: סכנה בריאותית: רעילות איברים מחשיפה חוזרת, מאכל: נזק לעיניים, גירוי בעור ובנשימה <חזק>טיפול בטוח</חזק>: עבוד באזור מאוורר, ללבוש כפפות</td></tr><tr><td>ערכת GMP ELISA מחזורית</td><td>חברת קיימן כימיקלים</td><td>581021</td><td></td></tr><tr><td>תרכיז בופר ELISA 10X (בערכת cGMP)</td><td>חברת קיימן כימיקלים</td><td>400060</td><td>1 M פוספט, 1% BSA, 4 M נתרן כלורי, 10 מ"מ EDTA, 0.1% נתרן אזיד <חזק>סכנה</חזק>: סכנה בריאותית: רעילות איברים מחשיפה חוזרת, קורוזיבי: נזק לעיניים, גירוי בעור ובנשימה <חזק>טיפול בטוח</חזק>: עבדו באזור מאוורר, אחסן במיכל עם מכסה הניתן לסגירה, ללבוש כפפות</td></tr><tr><td>מאגר ריאגנטים ELISA</td><td>פירס (כיום תרמו פישר סיינטיפיק)</td><td>15075</td><td></td></tr><tr><td>המגיב של אלמן (בערכת cGMP)</td><td>חברת קיימן כימיקלים</td><td>400050</td><td>אשלגן פוספט דו-בסיסי, סודיום כלוריד, אשלגן פוספט מונו-בסיסי, אצטילתיוכולין (יודיד), 5,5'-דיתיוביס (2-חומצה ניטרובנזואית) <חזק>סכנה</חזק>: רעילות חריפה, סכנה בריאותית: רעילות איברים, קורוזיבי: נזק לעיניים, מגרה את העור, מגרה חוזר <חזק>טיפול בטוח</חזק>: יש לעבוד באזור מאוורר, ללבוש כפפות</td></tr><tr><td>חומצה הידרוכלורית</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>320331</td><td><חזק>סכנה</חזק>: קורוזיבי: מאכל מתכת, שורף עור קשות, נזק לעיניים, מגרה בדרכי הנשימה <חזק>טיפול בטוח</חזק>: עבוד באזור מאוורר, ללבוש כפפות</td></tr><tr><td>חנקן נוזלי</td><td>החמצן של רוברט</td><td></td><td>חנקן <חזק>סכנה</חזק>: גז דחוס: סכנת כוויות קריוגניות, פרוסביט, חנק <חזק>טיפול בטוח</חזק>: עבודה באזור מאוורר, ללבוש כפפות</td></tr><tr><td>עכבר נגד ארנב צלחת מצופה IgG (בערכת cGMP)</td><td>חברת קיימן כימיקלים</td><td>400006</td><td> סכנה: אין</td></tr><tr><td>איזון MF קלאסי חדש</td><td>מטלר טולדו</td><td></td><td></td></tr><tr><td>שייקר מסלולי&nbsp;</td><td>סטובל לייף סיינס בע"מ (כיום IBI Scientific)</td><td>15-453-211 (משתנה)</td><td></td></tr><tr><td>פרפילם</td><td>חברת Bemis, Inc.</td><td>3023-4526 (משתנה)</td><td></td></tr><tr><td>פוליסורבט 20 (בערכת cGMP)</td><td>חברת קיימן כימיקלים</td><td>400035</td><td> סכנה: אין</td></tr><tr><td>אשלגן הידרוקסיד (בערכת cGMP)</td><td>חברת קיימן כימיקלים</td><td>400029</td><td>85% טהור <חזק>סכנה</חזק>: קורוזיבי: מאכל מתכות ועור, נזק לעיניים, רעילות חריפה <חזק>טיפול בטוח</חזק>: לעבוד באזור מאוורר, ללבוש כפפות</td></tr><tr><td>Precellys אבולוציה הומוגנייזר</td><td>ברטין טכנולוגיות</td><td>PE000062-PEVO0-A</td><td></td></tr><tr><td>ערכת ליזינג של Precellys הומוגניזציה של רקמות קשות</td><td>ברטין טכנולוגיות</td><td>P000911-ליסק0-א</td><td></td></tr><tr><td>קורא מיקרו-פלטות Sense</td><td>הידקס</td><td>425-301</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה Sorvall Legend Micro 17R</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>75002441</td><td></td></tr><tr><td>מרסק רקמות</td><td>סלקרושר</td><td>ערכת Cellcrusher</td><td></td></tr><tr><td>מערבולת ג'יני 2</td><td>תעשיות מדעיות&nbsp;</td><td>ת"י 0246</td><td></td></tr><tr><td>בקבוק כביסה</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>Z423092</td><td></td></tr><tr><td>תרכיז חוצץ כביסה 400X (בערכת cGMP)</td><td>חברת קיימן כימיקלים</td><td>400062</td><td>אשלגן פוספט דו-בסיסי, אשלגן פוספט מונובסיסי, מים <חזק>סכנה</חזק>: קורוזיבי: נזק לעיניים, רעילות חריפה, מגרה בעור, רעילות איברים <חזק>טיפול בטוח</חזק>: לעבוד באזור מאוורר, ללבוש כפפות</td></tr></tbody></table>

מדידת גואנוזין מונופוספט מחזורי (cgmp) ברקמות מוצקות באמצעות בדיקת אימונוסורבנט תחרותית מקושרת לאנזים (elisa)

Measurement of Cyclic Guanosine Monophosphate (cGMP) in Solid Tissues using Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)

חזירי בית ביורקשייר שטופלו בנתרן כלורי תזונתי (0.15 ממול/ק"ג) או 15ניטראט עם תווית N (0.15 ממול/ק"ג) שניתנו פעם ביום במשך חמישה ימים רצופים כבולוס בצ'או הוחדרו בתמיסת נתרן הפרין (0.9% נתרן כלורי) לפני איסוף הרקמות; כל פרטי האוסף פורסמו בעבר19. ריכוזי cGMP בשרירי העכוז ובכבד של ארבעה חזירי בית ביורקשייר נמדדו בהתאם לפרוטוקול ELISA המתואר. רקמות הכבד דוללו ביחס דילול של 1:5, ושרירי העכוז ביחס דילול של 1:10, עם 0.1 N חומצה הידרוכלורית (HCl) כדי לזרז חלבונים. ההומוגנטים המדוללים ב-HCl עברו אצטילציה ולאחר מכן דוללו עם בופר ELISA ביחס דילול של 1:2 ו-1:3 עבור דגימות שריר הכבד והעכוז. ריכוזי cGMP נמדדו כמתואר לעיל. הספיגה הומרו לפיקומולים של cGMP למיליליטר של דגימה מוכנה ולאחר מכן לננומול של cGMP לגרם רקמה (nmol/g של רקמה) כאמור בפרוטוקול לעיל.
ריכוזי cGMP שנמדדו ברקמות הכבד הניבו תוצאות ניסיוניות מיטביות בתנאים לעיל. ריכוזי ה-cGMP בקבוצת הביקורת ובקבוצה שטופלה בחנקות בכבד חזירי הם 0.0202 ננומול/גרם ±-0.003 ננומול/גרם רקמה ו-0.0364 ננומול/גרם ±-0.011 ננומול/גרם רקמה, בהתאמה (איור 3). מספר ערכים מאשרים את מהימנות התוצאות. הספיגה של בארות B0 עם הפחתת החסר, שנעה בין 0.466 ל-0.475, נופלת בטווח של 0.3 AU עד 1.0 AU, ומאמתת התפתחות מספקת של מיקרו-לוחות עם המגיב של אלמן. האיכות הגבוהה של העקומה הסטנדרטית מוצגת הן על ידי עלייה מצטברת בספיגה מתקן 1 לתקן 8 והן על ידי הליניאריות של העקומה הסטנדרטית, המאומתת על ידי מקדם קביעה של 0.99. האחוז <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/68432/68432eq001.jpg" style="margin: auto;"> עבור כל באר שנמדדה (31.5%-71.2%) הוא בין 20% ל-80%, מה שמאמת שכל הדגימות נופלות על העקומה הסטנדרטית. דוגמאות בעלות המאפיינים המוצהרים מתאימות לפרשנות.
ריכוזי cGMP שנמדדו ברקמות שריר העכוז הניבו תוצאות ניסיוניות לא אופטימליות. התווית התת-אופטימלית מוקצית לתוצאות שרירי העכוז מכיוון שרוב ערכי האחוזים <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/68432/68432eq001.jpg" style="margin: auto;"> של בארות שרירי העכוז (3.69%-27.3%) ירדו מתחת ל-20%, מה שמצביע על כך שנדרשו דגימות מדוללות יותר כדי שהספיגה תיפול על העקומה הסטנדרטית. ריכוזי ה-cGMP בקבוצת הביקורת ובקבוצה שטופלה בחנקות בשריר העכוז החזירי הם 1.22 ננומול/גרם ±-0.49 ננומול/גרם רקמה ו-0.732 ננומול/גרם ±-0.18 ננומול/גרם רקמה, בהתאמה (הגרף לא מוצג). דגימות שריר העכוז חולקות את הספיגה של בארות B0 ותקני דגימות הכבד. שימוש בדגימות תת-אופטימליות אלה עלול להוביל למסקנות שגויות; לכן, יש צורך בהכנת דגימות מדוללות יותר ומדידה מחדש של ריכוזי ה-cGMP.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68432/68432fig3v2.jpg"> 
איור 3: ריכוז cGMP ברקמת הכבד. ריכוז cGMP ממוצע של כבד חזיר שטופל בנתרן כלורי (0.15 ממול/ק"ג) או 15ניטראט עם תווית N (0.15 ממול/ק"ג) ב-nmol/g של רקמה. n = 4; פסי השגיאה מצביעים על סטיית תקן; הנתונים נותחו על ידי מבחן ה-t של וולש; אין משמעות ל-NS. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68432/68432fig3v2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>

מדידת גואנוזין מונופוספט מחזורי (cGMP) ברקמות מוצקות באמצעות בדיקת אימונוסורבנט תחרותית מקושרת לאנזים (ELISA)

A major pathway that produces cyclic guanosine monophosphate (cGMP) is the nitric oxide (NO)-cGMP pathway. In this pathway, NO stimulates the catalytic ...

measurement-cyclic-guanosine-monophosphate-cgmp-solid-tissues-using

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

מנסה לאמוד בתפקוד β-תאי מבחנה באמצעות עכבר איים מבודדים לנגרהנס הוא מרכיב חשוב במחקר של הפתופיזיולוגיה סוכרת ותרופות. בעוד רבים יישומים במורד הזרם זמינים, פרוטוקול זה מתאר במפורש המדידה של monophosphate אדנוזין המחזורי תאיים (cAMP) כפרמטר חיוני קביעת פונקצית β-תאים.

שיטה לבידוד עכבר הלבלב איילט וקביעת תאית cAMP

אנחנו גנטיים מקודדים את חומצת אמינו לא טבעית, p-azido-L-פנילאלנין בעמדות ממוקדות שונות בGPCRs ולהראות את הרבגוניות של קבוצת azido ביישומים שונים. אלה כוללים טכנולוגיה ממוקדת photocrosslinking לזהות שאריות בכיס מחייב ליגנד של GPCR, ושינוי bioorthogonal אתר ספציפי של GPCRs עם תג פפטיד epitope או בדיקה ניאון.

בדיקות מולקולריות גנטי מקודדות לחקר רצפטורים מצמידים חלבון G

סמנים ביולוגיים למדידה בדגימות ביולוגיות מורכבות יותר ויותר מנחים את קבלת החלטות קליניות. אנו מתארים שיטה רגישה ביותר למדידה בו זמנית לב שרירן מחייב חלבון-C, מגה קריאטין קינאז, וטרופונין לבי בדגימות סרום מנבדקים עם אוטם שריר הלב ונבדקים בריאים.

שיטת Quantitation רגישה וספציפית לקביעת חלבון-C שרירן לב סרום הכבילה ידי Immunoassay Electrochemiluminescence

הפעלה מתמדת של תוצאות מעכבות G-חלבון בשילוב קולטנים ברגישות של איתות cyclase adenylyl. כדי לזהות את המסלולים מולקולריים החיוניים, גישות nonbiased נחוצות, עם זאת, אסטרטגיה זו מחייבת הפיתוח של assay רגישות cAMP מבוסס תאים ניתן להרחבה. בזאת, אנו מתארים assay רגישות למולקולה קטנה והקרנת siRNA.

רגישות סמים של adenylyl cyclase: התייעלות Assay ומזעור למולקולה קטנה ויישומים הקרנת siRNA

השליח השני c-di-GMP הנפוץ בכל מקום שולט בגדילה ובהתנהגות של חיידקים רבים. פיתחנו טכנולוגיה חדשה המבוססת על ספקטרומטריית מסה של תרכובת לכידה לזיהוי ואפיון ביוכימי של חלבונים קושרים c-di-GMP כמעט בכל מין חיידקים.

ספקטרומטריית מתחם מיסת לכידה - כלי רב עוצמה לזיהוי הרומן ג-di-GMP חלבונים מפעיל

S1P מפעיל את ההשפעות הפיזיולוגיות המגוונות שלו באמצעות תת-משפחת קולטני S1P (S1PRs). כאן, צינור מתואר כדי להרחיב על המבנים והתפקוד של S1PRs.

צינור לחקר המבנים ומסלולי האיתות של קולטני ספינגוזין 1-פוספט

נתונים שפורסמו בנוגע לריכוזי פפטיד הקשור לגן קלציטונין (CGRP) בפלזמה אנושית אינם עקביים. חוסר עקביות זה עשוי לנבוע מהיעדר מתודולוגיה מתוקננת ומתוקפת לכימות נוירופפטיד זה. במאמר זה אנו מתארים פרוטוקול מאומת של בדיקת אימונוסורבנט מקושרת אנזימים (ELISA) לטיהור וכימות CGRP בפלזמה אנושית.

זיהוי וכימות של פפטיד הקשור לגן קלציטונין (CGRP) בפלזמה אנושית באמצעות בדיקת אימונוסורבנט מקושרת אנזים שונה

הפרוטוקול המוצג במחקר זה ממחיש את יעילותו של cAMP Difference Detector In Situ  במדידת cAMP בשתי שיטות. שיטה אחת משתמשת בספקטרופוטומטר קריאת לוחות 96 בארות עם תאי HEK-293. השיטה השנייה מדגימה תאי HASM בודדים תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

דינמיקת cAMP בזמן אמת בתאים חיים באמצעות גלאי ההבדל cAMP פלואורסצנטי באתרו

אנו מציגים בדיקת ELISA מאומתת של סנדוויץ' באמצעות נוגדנים חד שבטיים חדשים נגד HER2. בדיקה זו מאפשרת כימות מדויק של חלבון HER2 הקשור לתאים ומשתחרר מתאים מתורבתים במבחנה ודגימות אחרות, כולל דם ורקמות.

בדיקה אימונוכימית מאומתת לקביעה מקיפה של קולטן גורם הגדילה האפידרמלי האנושי 2 המשתחרר מהתאים וקשור אליהם

הוא הבין נרחב כי כוחות מכניים בגוף יכול להשפיע על התמיינות תאים ושגשוגם. כאן אנו מציגים פרוטוקול וידאו הממחיש את השימוש bioreactor שהותקן עבור אספקת המתח uniaxial מתיחה מחזורית לתאי גזע בתרבית על מצעים גמישים micropatterned.

גירוי מכני של גזע תאים באמצעות מסננים uniaxial מחזורי

למד מדידת cGMP ברקמות מוצקות באמצעות ELISA תחרותי. פרוטוקול זה מספק שיטה פשוטה ואמינה לחקר מטבוליזם חנקן חנקני ומסלולי מסרים שניוניים בביולוגיה.

מדידת גואנוזין מונופוספט מחזורי (cGMP) ברקמות מוצקות באמצעות בדיקת אימונוסורבנט תחרותית מקושרת לאנזים (ELISA)

גלה סרטונים נוספים